本發(fā)明涉及化學(xué)藥物分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種阿昔替尼原料及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的分析方法。
背景技術(shù)：
：阿昔替尼(axitinib)，化學(xué)名為n-甲基-2-({3-[(1e)-2-(吡啶-2-基)乙烯-1-基]-1h-吲唑-6-基}硫烷基)苯甲酰胺，其分子式為c22h18n4os，分子量為386.47，cas號為319460-85-0，其結(jié)構(gòu)式如下：阿昔替尼是新的口服酪氨酸激酶抑制劑(tki)，能有效并選擇性抑制血管內(nèi)皮生長因子受體vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3，抑制血管和淋巴管的新生，抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，發(fā)揮抗腫瘤活性。阿昔替尼片原研廠家是美國輝瑞公司，首先于2012年1月在美國獲得fda的上市批準(zhǔn)，批準(zhǔn)的制劑為阿昔替尼片，規(guī)格為1mg和5mg，商品名為inlyta，同年6月，輝瑞日本分公司生產(chǎn)的阿昔替尼片在日本批準(zhǔn)上市。該藥是自2005年來fda批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移或晚期腎細(xì)胞癌的第7種藥物。該藥為口服藥丸，一日2次服用。通過阻斷腫瘤生長過程中的蛋白激酶起到抑制腫塊生長和癌癥進(jìn)展的作用。多項臨床試驗研究表明，阿昔替尼對接受過多種藥物治療無效的arcc患者顯示出了臨床活性。一項隨機(jī)、開放、國際多中心的ⅲ期臨床試驗中，對于既往接受過治療的晚期腎細(xì)胞癌患者，阿昔替尼與索拉非尼相比，顯著延長無進(jìn)展生存期，且顯示出總的良好的安全性。為了保證藥物的安全有效，需要對藥物原料及其制劑中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行研究、檢測和監(jiān)控。由于藥品的合成工藝不同，藥品的雜質(zhì)譜也會發(fā)生變化，因此需要根據(jù)不同的合成工藝建立合適的分析方法，達(dá)到對阿昔替尼有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)確、有效的檢測和監(jiān)控。技術(shù)實現(xiàn)要素：基本
背景技術(shù)：
存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出了一種阿昔替尼原料及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的分析方法，本發(fā)明通過加校正因子的主成分自身對照法能快速、有效、準(zhǔn)確監(jiān)控阿昔替尼中的有關(guān)物質(zhì)。本發(fā)明提出的一種阿昔替尼原料及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的分析方法，采用高效液相色譜法，其色譜條件包括：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以磷酸鹽緩沖水溶液和乙腈的體積比為88-92：8-12為流動相a，以磷酸鹽緩沖水溶液和乙腈的體積比為8-12：88-92為流動相b，檢測波長為218-222nm，進(jìn)行梯度洗脫；所述梯度洗脫過程為：0.01-10min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為80：20；10-40min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比從80：20勻速漸變至30：70；40-50min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為30：70；50-50.01min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比從30：70勻速漸變至80：20；50.01-60min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為80：20。優(yōu)選地，色譜柱的長度為250mm，直徑為4.6mm，填料粒徑為5μm。優(yōu)選地，在流動相a中，磷酸鹽緩沖水溶液和乙腈的體積比可以為88.5：11.5、89:11、89.5：10.5、90：10、90.5：9.5、91：9或91.5：8.5。優(yōu)選地，在流動相b中，磷酸鹽緩沖水溶液和乙腈的體積比可以為8.5：91.5、9：91、9.5：90.5、10：90、10.5：89.5、11：89或11.5：88.5。優(yōu)選地，磷酸鹽緩沖水溶液的ph＝3.2-3.4。優(yōu)選地，磷酸鹽緩沖水溶液的ph可以為3.21、3.22、3.23、3.24、3.25、3.26、3.27、3.28、3.29、3.3、3.31、3.32、3.33、3.34、3.35、3.36、3.37、3.38或3.39。優(yōu)選地，在磷酸鹽緩沖水溶液中，用磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.2-3.4。優(yōu)選地，在磷酸鹽緩沖水溶液中，磷酸鹽的濃度為0.003-0.007mol/l。優(yōu)選地，在磷酸鹽緩沖水溶液中，磷酸鹽的濃度可以為0.004、0.0045、0.005、0.0055、0.006或0.0065mol/l。優(yōu)選地，在磷酸鹽緩沖水溶液中，磷酸鹽為磷酸二氫銨。優(yōu)選地，流速為0.95-1.05ml/min。優(yōu)選地，流速可以為0.96、0.97、0.98、0.99、1.0、1.01、1.02、1.03或1.04ml/min。優(yōu)選地，柱溫為25-33℃。優(yōu)選地，柱溫為26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30.5、31、31.5、32或32.5。優(yōu)選地，進(jìn)樣量為5-50μl。優(yōu)選地，進(jìn)樣量為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49μl。優(yōu)選地，所述有關(guān)物質(zhì)為：上述雜質(zhì)中，雜質(zhì)4為起始原料，雜質(zhì)7和雜質(zhì)8為中間體，雜質(zhì)1為工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)，雜質(zhì)2為工藝雜質(zhì)，雜質(zhì)3、5、6為降解雜質(zhì)。本發(fā)明的具體步驟為：分別配制系統(tǒng)適用性溶液、對照溶液和供試品溶液并進(jìn)樣，通過加校正因子的主成分自身對照法計算供試品中各雜質(zhì)的含量。上述系統(tǒng)適用性溶液為：分別取雜質(zhì)1、2、3、4、5、6、7對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)對照品貯備液一；另取雜質(zhì)8對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加dmf適量使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，作為雜質(zhì)對照品貯備液二；另取阿昔替尼對照品約25mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解，精密量取雜質(zhì)對照品貯備液一、雜質(zhì)對照品貯備液二各0.5ml，置同一量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。上述供試品溶液為：取阿昔替尼供試品適量，精密稱定，用甲醇溶解并定容得到含阿昔替尼濃度為0.5mg/ml的供試品溶液。上述對照溶液為：精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻得到對照溶液。本發(fā)明人對阿昔替尼、雜質(zhì)1-8分別進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，結(jié)果見表1：表1阿昔替尼和各雜質(zhì)的紫外吸收波長由表1可以看出，阿昔替尼及各雜質(zhì)在220nm波長處雖然不是最大吸收，但是均有較大紫外吸收，綜合比較后選擇220nm波長作為本品有關(guān)物質(zhì)檢查波長。本發(fā)明人通過篩選合適流動性組分并優(yōu)化各組分比例，以及篩選合適的其他色譜條件，對阿昔替尼以及上述8個雜質(zhì)進(jìn)行色譜分析，確定了本發(fā)明分析方法，通過對起始原料、反應(yīng)中間體、工藝雜質(zhì)、降解雜質(zhì)、阿昔替尼的峰定位試驗，干擾性試驗和阿昔替尼的降解試驗對本發(fā)明進(jìn)行專屬性驗證，結(jié)果見表2和圖1：表2專屬性驗證結(jié)果由表2和圖1可以看出，各雜質(zhì)峰之間、阿昔替尼主峰及其相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5，阿昔替尼主峰的理論板數(shù)大于3000，本發(fā)明的專屬性好。本發(fā)明人還選用市場上常用的制備阿昔替尼制劑的藥用輔料和空白溶劑對本發(fā)明進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)常用的藥用輔料和空白溶劑對本發(fā)明沒有干擾。本發(fā)明人對阿昔替尼和各雜質(zhì)的檢測限、定量限、線性、校正因子進(jìn)行檢測，結(jié)果見表3：表3阿昔替尼和各雜質(zhì)的檢測限、定量限、線性、校正因子試驗結(jié)果上述報告限度是指超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報告中報告，并應(yīng)報告具體的檢測數(shù)據(jù)。由表3可以看出，本發(fā)明阿昔替尼和各雜質(zhì)檢測靈敏度均較高，其檢測限均小于報告限度，并且各雜質(zhì)在較低濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。本發(fā)明人配制供試品溶液，分別于配制后的0、2、4、8h進(jìn)樣并記錄圖譜，統(tǒng)計并計算供試品中阿昔替尼和各雜質(zhì)的含量，計算得到供試品中雜質(zhì)3、5和阿昔替尼的含量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd分別為8.61％，3.85％，0.49％，其它已知雜質(zhì)均未檢出，并統(tǒng)計新生雜質(zhì)個數(shù)為0。結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。本發(fā)明人對各雜質(zhì)進(jìn)行回收率試驗，對雜質(zhì)3和雜質(zhì)5進(jìn)行重復(fù)性、中間精密度試驗，結(jié)果見表4和表5：表4各雜質(zhì)的回收率驗證結(jié)果試驗回收率80-120％回收率rsd≤10％雜質(zhì)1106.755.20雜質(zhì)2105.004.61雜質(zhì)3103.763.44雜質(zhì)4107.685.40雜質(zhì)5101.054.32雜質(zhì)6101.923.78雜質(zhì)7108.555.66雜質(zhì)892.473.42表5雜質(zhì)3和雜質(zhì)5的重復(fù)性、中間精密度試驗結(jié)果試驗重復(fù)性-峰面積rsd≤15％中間精密度-含量rsd≤20％雜質(zhì)37.9814.91雜質(zhì)512.2812.04由表4和表5可以看出，本發(fā)明的回收率試驗結(jié)果均符合要求，本發(fā)明回收率高，雜質(zhì)3和雜質(zhì)5的重復(fù)性、中間精密度均符合要求，雜質(zhì)3、雜質(zhì)5的重復(fù)性、中間精密度均良好。本發(fā)明人取阿昔替尼配制供試品溶液，進(jìn)樣并記錄圖譜，按加校正因子的主成分自身對照法計算供試品中雜質(zhì)1-8的含量，結(jié)果見表6和圖2。表6阿昔替尼中各雜質(zhì)的含量測定結(jié)果名稱雜質(zhì)1雜質(zhì)2雜質(zhì)3雜質(zhì)4含量％未檢出未檢出0.032未檢出名稱雜質(zhì)5雜質(zhì)6雜質(zhì)7雜質(zhì)8含量％0.026未檢出未檢出未檢出由表6和圖2可以看出，阿昔替尼供試品中雜質(zhì)3和5含量分別為0.032％和0.026％，其它已知雜質(zhì)均未檢出。本發(fā)明能快速、有效、準(zhǔn)確監(jiān)控阿昔替尼中的有關(guān)物質(zhì)；本發(fā)明具有良好的專屬性，各雜質(zhì)峰之間、阿昔替尼主成分峰及其相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5，阿昔替尼主峰的理論板數(shù)大于3000，雜質(zhì)峰和主峰可以有效分離；本發(fā)明檢測限、定量限均較小，本發(fā)明的靈敏度好；本發(fā)明的重復(fù)性好，中間精密度高好，回收率高，可以準(zhǔn)確測量阿昔替尼原料和制劑中的有關(guān)物質(zhì)；本發(fā)明通過加校正因子自身對照法對上述8個雜質(zhì)進(jìn)行定量分析，增加本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)檢測的準(zhǔn)確性。附圖說明圖1為系統(tǒng)適用性溶液色譜圖。圖2為阿昔替尼原料有關(guān)物質(zhì)色譜圖。圖3為阿昔替尼制劑有關(guān)物質(zhì)色譜圖。具體實施方式下面，通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1高效液相色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.3的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為90：10為流動相a，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.3的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為10：90為流動相b，檢測波長為220nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，其中，磷酸二氫銨緩沖水溶液中磷酸二氫銨的濃度為0.005mol/l，進(jìn)行梯度洗脫；所述梯度洗脫過程為：0.01-10min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為80：20；10-40min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比從80：20勻速漸變至30：70；40-50min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為30：70；50-50.01min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比從30：70勻速漸變至80：20；50.01-60min內(nèi)，流動相a和流動相b的體積比為80：20。樣品配制：系統(tǒng)適用性溶液：分別取雜質(zhì)1、2、3、4、5、6、7對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)對照品貯備液一；另取雜質(zhì)8對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加dmf適量使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，作為雜質(zhì)對照品貯備液二；另取阿昔替尼對照品約25mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇適量使溶解，精密量取雜質(zhì)對照品貯備液一、雜質(zhì)對照品貯備液二各0.5ml，置同一量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。試驗操作：取系統(tǒng)適用性溶液10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。典型色譜圖見圖1。實施例2高效液相色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.2的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為92：8為流動相a，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.4的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為8：92為流動相b，檢測波長為218nm，流速為1.05ml/min，柱溫為25℃，其中，磷酸二氫銨緩沖水溶液中磷酸二氫銨的濃度為0.007mol/l，進(jìn)行梯度洗脫；所述梯度洗脫過程同實施例1。樣品配制：系統(tǒng)適用性溶液：同實施例1。供試品溶液：取阿昔替尼供試品適量，精密稱定，用甲醇溶解并定容得到含阿昔替尼濃度為0.5mg/ml的供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻得到對照溶液。試驗操作：取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、對照溶液各50μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。實施例3高效液相色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.4的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為88：12為流動相a，以磷酸調(diào)節(jié)ph＝3.2的磷酸二氫銨緩沖水溶液和乙腈的體積比為12：88為流動相b，檢測波長為222nm，流速為0.95ml/min，柱溫為33℃，其中，磷酸二氫銨緩沖水溶液中磷酸二氫銨的濃度為0.003mol/l，進(jìn)行梯度洗脫；所述梯度洗脫過程同實施例1。樣品配制：系統(tǒng)適用性溶液：同實施例1。供試品溶液：同實施例2。對照溶液：同實施例2。試驗操作：取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、對照溶液各5μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。實施例4高效液相色譜條件：同實施例1。樣品配制：系統(tǒng)適用性溶液：同實施例1。供試品溶液：同實施例2。對照溶液：同實施例2。試驗操作：取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、對照溶液各10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。典型色譜圖見圖2。實施例5高效液相色譜條件：同實施例1。樣品配制：系統(tǒng)適用性溶液：同實施例1。供試品溶液：取規(guī)格為5mg的阿昔替尼片10片，研碎混勻，取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于含阿昔替尼25mg)，精密稱定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，過濾得到供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻得到對照溶液。試驗操作：取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、對照溶液各10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。典型色譜圖見圖3。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12