技術特征：

1.一種越橘提取物的鑒別及其中原花青素含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)供試樣品的制備：稱取100mg～150mg供試越橘提取物原料于25mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超聲處理20min～30min，冷卻至室溫后，加甲醇定容至刻度，搖勻，以4000r/min離心20～30min后，取上清液備用；

(2)經(jīng)水解供試品溶液的制備：將正丁醇與鹽酸按95∶5的體積比混合后，制得正丁醇與鹽酸的混合溶液，取出18mL正丁醇與鹽酸的混合溶液置于具塞錐瓶中，再加入0.6mL硫酸亞鐵銨溶液和3mL步驟(1)中制備的試樣溶液，混勻，置98℃～100℃沸水浴回流，加熱1h后立即置2℃～10℃冷水中冷卻，再用10％磷酸水溶液定容至25mL容量瓶中，經(jīng)微孔濾膜過濾后，即得經(jīng)水解處理的供試品溶液A；

(3)未經(jīng)水解供試品溶液的制備：取18mL步驟(2)制得的正丁醇與鹽酸混合溶液于25mL容量瓶中，加入0.6mL硫酸亞鐵銨溶液和3mL步驟(1)中制備的試樣溶液，用10％磷酸水溶液定容至刻度，經(jīng)微孔濾膜過濾后，即得未經(jīng)水解處理的供試品溶液B；

(4)花青素標準品溶液的制備：精確稱取10mg矢車菊素標準品于25mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，搖勻。從中移取2mL于100mL容量瓶中，用10％磷酸水溶液定容至刻度，經(jīng)微孔濾膜過濾后，即得花青素標準品溶液C；

(5)HPLC分析檢測：精密吸取步驟(2)制得的經(jīng)水解處理的供試品溶液A、步驟(3)制得的未經(jīng)水解處理的供試品溶液B、步驟(4)制得的花青素標準品溶液C各15μL，依次注入高效液相色譜儀，得到高效液相色譜圖；

(6)越橘提取物真假的鑒別：

將步驟(5)所得的未經(jīng)水解處理的供試品溶液B的高效液相色譜圖與國際商務標準SW/T2-2013中的越橘提取物標準品液相色譜圖進行對比，如供試品為假的越橘提取物，則色譜圖與越橘提取物標準品色譜圖會有明顯不同。

(7)供試樣品中花青素含量的計算：

將步驟(5)所得的經(jīng)水解處理的供試品溶液A、未經(jīng)水解處理的供試品溶液B及花青素標準品溶液C的高效液相色譜圖，按外標法分別計算未經(jīng)水解處理的供試品和經(jīng)水解處理的供試品中花青素的含量，二者的差值即為試樣中由原花青素水解為花青素的量，從而得出試樣中原花青素的含量。

供試品中游離花青素含量以質量分數(shù)w₁計，數(shù)值以％表示，按下述公式計算：

$w_j=\frac{A_j\×C_{std}\×V_1\×P\×{\mathrm{MW}}_j}{A_{std}\×m_1\×{\mathrm{MW}}_{std}}\×100\%$

w₁＝∑w_j

式中：

w_j——供試品中各游離花青素組分的質量分數(shù)，％；

A_j——供試品溶液中各游離花青素組分的峰面積，越橘提取物標準品液相色譜圖中峰9，16，18，19，20；

A_std——花青素標準品溶液C中矢車菊素的峰面積；

C_std——花青素標準品溶液C中矢車菊素的濃度，單位為mg/mL；

m₁——供試品的稱樣量，單位為mg；

V₁——供試品的定容體積，單位為mL；

P——花青素標準品溶液C中矢車菊素的純度，％；

MW_j——供試品溶液中相應的游離花青素組分的分子量；

MW_std——矢車菊素的分子量。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種越橘提取物的鑒別及其中原花青素含量的測定方法，其特征在于，所述步驟(5)HPLC色譜條件如下：

a)色譜柱：Agilent C18，4.6×250mm，5μm；

b)流動相A∶水∶甲酸＝91.5∶8.5，(V/V)；流動相B∶水∶乙腈∶甲醇∶甲酸＝41.5∶22.5∶22.5∶8.5，(V/V/V/V)；

梯度條件為0～35min：7～25％B；35～45min：25～65％B；45～46min：65～100％B；46～50min：100％B；50～51min：100～7％B；51～60min：7％B；

c)檢測波長：535nm；

d)流速：1.0mL/min。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種越橘提取物的鑒別及其中原花青素含量的測定方法，其特征在于，步驟(2)、步驟(3)、步驟(4)所述微孔濾膜孔徑為0.45μm。