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液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法及結(jié)直腸癌診斷試劑盒與流程

文檔序號:12713476閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法,其特征在于:包括以下步驟:

1)將50~110mg組織樣本在液氮中研磨成粉,將研磨得到的組織粉末用含有0.1%2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的冰甲醇均質(zhì)后進(jìn)行離心,取離心得到的上清液;

2)向15~20μL上清液中加入亞油酸同位素內(nèi)標(biāo),放置25~35min后離心,將離心得到的上清液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊笥?0~60μL正丁醇于60~65℃衍生處理20~30min,然后氮?dú)獯蹈?,?00~150μL流動相重新分散溶解,得到待上樣檢測樣品;

3)對待上樣檢測樣品利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析,得到組織樣本中亞油酸的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法,其特征在于:所述組織樣本由腸道活檢得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法,其特征在于:所述冰甲醇是指0~4℃預(yù)冷的甲醇。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法,其特征在于:所述液相色譜的工作條件包括:流動相是將0.6~1mL 50%的乙酸水溶液與1000mL乙腈水溶液混合而制成的,所述乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為(7~8):(2~3);流動相采用梯度流速,且初始流速為240μL/min;進(jìn)樣量為18~25μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測組織亞油酸含量的方法,其特征在于:所述質(zhì)譜的工作條件包括:離子源溫度為350~370℃;每次轉(zhuǎn)變駐留時間為200~220ms;霧化氣為0.3MPa,輔助氣為0.4MPa,氣簾氣為0.25MPa;分析模式為母離子掃描,目標(biāo)物亞油酸的母離子掃描范圍為350~500m/z,子離子為85.1m/z。

6.一種結(jié)直腸癌診斷試劑盒,其特征在于:該試劑盒包括用于提取組織液的試劑以及用于制備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法所需樣品的預(yù)處理試劑和流動相,所述用于提取組織液的試劑包括2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚以及甲醇,所述預(yù)處理試劑包括亞油酸同位素內(nèi)標(biāo)以及衍生試劑正丁醇。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種結(jié)直腸癌診斷試劑盒,其特征在于:所述流動相是將0.6~1mL 50%的乙酸水溶液與1000mL乙腈水溶液混合而制成的,所述乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為(7~8):(2~3)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種結(jié)直腸癌診斷試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括用于實時定量PCR檢測組織樣本中FADS1、FADS2、ELOVL2或ELOVL5基因表達(dá)量的對應(yīng)引物對P1、P2、P3或P4。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述一種結(jié)直腸癌診斷試劑盒,其特征在于:

所述引物對P1為:

上游引物FADS1F:5`-GTCCGCTTCTTCCTCACTTATG-3`

下游引物FADS1R:5`-GCTTTCCAGGAACCTGACTATG-3`;

所述引物對P2為:

上游引物FADS2F:5`-CATGACCATGATCGTCCATAAGA-3`

下游引物FADS2R:5`-GATGCCGTAGAAAGGGATGTAG-3`;

所述引物對P3為:

上游引物ELOVL2F:5`-CCCTTCGGTTGTCTCATCTTC-3`

下游引物ELOVL2R:5`-CAGGTGGCTCTTGCATATCTT-3`;

所述引物對P4為:

上游引物ELOVL5F:5`-TCCCTCTTGGTTGGTTGTATTT-3`

下游引物ELOVL5R:5`-CCTTCAGGTGGTCTTTCCTTC-3`。

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