本發(fā)明涉及一種通過不同提取方法檢測烤煙致香物巨豆三烯酮含量的方法。
背景技術(shù)：
巨豆三烯酮Megastigmatrienone，化學(xué)名稱4-(2-亞丁基)-3,5,5-三甲基-2-環(huán)己烯-1-酮，分子式：C13H18O；分子量:190.28。結(jié)構(gòu)式：
其有四種同分異構(gòu)體。巨豆三烯酮為烤煙煙葉內(nèi)重要的中性香氣成分，具有甘甜香氣。煙絲調(diào)制中添加巨豆三烯酮對于改善煙香，促使煙氣柔和豐滿，掩蓋雜味，增進(jìn)吃味。在烤煙煙葉中通常是四種同分異構(gòu)體的混合物存在，是煙草重要的揮發(fā)性成份。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，就是提出一種通過不同提取方法檢測烤煙致香物巨豆三烯酮含量的方法，采用同時蒸餾萃取法、甲醇索氏提取法和模擬煙氣提取法獲得各種烤煙樣品的揮發(fā)性精油、索氏提取物與煙氣溶解物，分析不同生態(tài)環(huán)境，不同煙草品種與不同部位和土壤因子對煙草代謝巨豆三烯酮的影響。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
一種通過不同提取方法檢測烤煙致香物巨豆三烯酮含量的方法，包括以下步驟：
(1)烤煙樣品準(zhǔn)備
收集不同煙站來源的樣品待用，
(2)樣品的不同提取方法處理
a.烤煙水蒸餾提取法
稱取50.00g烤煙葉，剪成小片入2000mL的圓底燒瓶內(nèi)，加入1000mL水，電熱套加熱；在另一250mL燒瓶中加入50mL石油醚，水浴加熱，同時蒸餾萃取1.5-2h后，保留石油醚萃取液，加無水硫酸鈉干燥24h以上，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50-55℃水浴中將其濃縮至3mL，即得香氣濃縮物，供GC/MS分析；
b.烤煙煙氣提取法
將每種煙葉于烘箱內(nèi)55℃下分別烘干后，研磨成40目以下煙末，干燥條件下儲存?zhèn)溆?；每種煙葉稱取8.0g粉末裝入頂端潔凈的玻璃“煙斗”中，在相同條件下，用石油醚-熱解燃燒裝置進(jìn)行燃燒提取煙氣，于25mL容量瓶中定容，密封置于-4℃下保存；樣品中各組分含量利用在線的GC/MS分析測定；
c.烤煙索氏提取法
稱取50.00g粉碎好的烤煙煙葉置于濾紙筒內(nèi)，然后裝入索氏提取器中，索氏提取器上面連接冷凝管，下面連接500mL的圓底燒瓶，燒瓶中加入300ml甲醇，在70度水浴鍋中連續(xù)加熱提取72h，至濾紙筒中甲醇溶劑顏色很淡為準(zhǔn)，濃縮甲醇提取液得煙葉成分浸膏，供GC/MS分析；
(3)結(jié)果分析
將三種提取方法獲得的GC/MS分析結(jié)果使用Wiley譜庫進(jìn)行圖譜檢索，進(jìn)而得到不同提取方法檢測到的巨豆三烯酮含量。
本發(fā)明中，C/MS分析的GC條件：Ultra-2毛細(xì)管柱的規(guī)格為50m×0.2mm×0.33μm，載氣為N2，柱頭壓170kPa，檢測器FID，進(jìn)樣口溫度280℃，檢測器溫度280℃，程序升溫：80℃(1min)2℃/min280℃(30min)，進(jìn)樣量2μL，分流比10：1；GC/MS測定時GC條件同上，電離電壓70ev，離子源溫度200℃，傳輸線溫度220℃
本發(fā)明中，烤煙煙氣提取法用到的石油醚-熱解燃燒裝置包括依次連接的煙斗、串聯(lián)的四個裝有石油醚的抽濾瓶、調(diào)壓裝置和真空泵，煙氣在0.03MPa的低壓條件下多重提取。
本發(fā)明中，石油醚采用30-60度沸點(diǎn)石油醚。
本發(fā)明中，烤煙樣品為不同品種的煙葉或者同一煙葉的不同部位。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為：通過比較三種提取方法的檢測效果，獲得較好的檢測方法，從而比較不同地區(qū)、不同品種和不同部位的巨豆三烯酮存在的差異，為行業(yè)內(nèi)巨豆三烯酮的檢測提供標(biāo)準(zhǔn)。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
1、材料和方法
烤煙樣品：
烤煙來源于各煙站提供的樣品,主要收集了廣東南雄烤煙5個,五華2個,梅州大埔5個,清遠(yuǎn)連州2個和樂昌4個樣品。選擇清香型烤煙云南、貴州8個樣品，濃香型河南烤煙3個樣。選擇了津巴布韋進(jìn)口煙葉2個烤煙來源見表1。
表1：烤煙產(chǎn)地、品種和等級
*:去脈葉碎片
2、樣品提取方法
a.烤煙水蒸餾提取法
稱取50.00g烤煙葉,剪成小片(約0.5-1×15,-1cm大小)入2000mL的圓底燒瓶內(nèi),加入1000mL水,電熱套加熱；在另一250ML燒瓶中加入50mL石油醚,水浴加熱,同時蒸餾萃取2h后,保留石油醚萃取液,加無水硫酸鈉干燥24h,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50℃水浴中將其濃縮至3ML,即得香氣濃縮物,供GC/MS分析。
b.烤煙煙氣提取法
將每種煙葉于烘箱內(nèi)55℃下分別烘干后,研磨成40目以下煙末,干燥條件下儲存?zhèn)溆谩Ｃ糠N煙葉稱取8.0g粉末,裝入頂端潔凈的玻璃“煙斗”中,在相同條件下,用自制熱解燃燒裝置進(jìn)行燃燒,各抽濾瓶中裝入少量石油醚,在壓強(qiáng)0.03MPa時進(jìn)行減壓多重提??；合并各抽濾瓶中的石油醚相煙氣提取樣品,于25ml容量瓶中定容,密封,置于-4℃下保存；樣品中各組分含量利用在線的GC/MS分析測定。
c.烤煙索氏提取法
稱取50.00g粉碎好的烤煙煙葉,置于自制的濾紙筒內(nèi),然后裝入索氏提取器中,索氏提取器上面連接冷凝管,下面連接500ml的圓底燒瓶,燒瓶中加入300ml甲醇(分析純),在70度水浴鍋中連續(xù)加熱提取72h(濾紙筒中甲醇溶劑顏色很淡為準(zhǔn)),濃縮甲醇提取液得煙葉成分浸膏,供GC/MS分析。
3、GC/MS分析
GC條件：Ultra－2毛細(xì)管柱(50m×0.2mm×0.33μm),載氣為N2,柱頭壓170kPa,檢測器FID,進(jìn)樣口溫度280℃,檢測器溫度280℃,程序升溫:80℃(1min)2℃/min280℃(30min),進(jìn)樣量2μl,分流比10∶1。GC/MS測定時GC條件同上,電離電壓70ev,離子源溫度200℃,傳輸線溫度220℃,使用Wiley譜庫進(jìn)行圖譜檢索。
4、結(jié)果與分析
不同提取方法各煙區(qū)烤煙巨豆三烯酮含量
分析結(jié)果見表2。通過三種提取方法比較分析表明；烤煙中的巨豆三烯酮主要以水蒸餾的方式提取,以水蒸餾的方式提取表現(xiàn)出不同產(chǎn)地,不同品種和不同部位的烤煙中巨豆三烯酮含量也不盡相同,相對含量有的高達(dá)18.44％,有的僅2.14％。采用煙氣和甲醇索氏提取,檢測的含量低,或檢測不到巨豆三烯酮的含量,25個烤煙樣品中,煙氣中可檢測到19個樣品含巨豆三烯酮,占檢出率的76％,最高相對含量為2.27％.甲醇索氏提取檢出率為48％,最高相對含量為0.43％。
表2：不同煙區(qū)不同提取方法烤煙巨豆三烯酮含量的比較
不同品種不同部位巨豆三烯酮含量比較
表3可以看出，烤煙不同品種不同部位巨豆三烯酮含量存在一定的差異,其中粵煙97 C3F在幾個被檢測的樣品中含量最高，達(dá)11.95％。而K326和NC89 C3F含量較低,分別為3.75％和4.80％,而四個品種的B2F巨豆三烯酮含量則在7.83％-10.70％之間,相互之間的差異不大。
表3：烤煙不同品種不同部位巨豆三烯酮含量比較*
*：表中的數(shù)據(jù)為所測樣品的平均值
廣東不同煙區(qū)與其它煙區(qū)烤煙巨豆三烯酮含量比較
從表4可以看出，廣東主產(chǎn)煙區(qū)南雄粵煙97品種和梅州大埔云煙87品種的巨豆三烯酮含量較高,相對含量分別為10.08％和10.54％,與貴州云煙87品種巨豆三烯酮含量10.64％相當(dāng)；而廣東五華K326品種為6.13％、廣東連州粵煙97品種為6.85％、廣東樂昌K326品種8.32％,與云南云煙87品種的7.03％和津巴布韋L20A,LJ0T2的7.06％相當(dāng)。
表4：廣東不同煙區(qū)與其它煙區(qū)烤煙巨豆三烯酮含量比較
注：“/“無樣品檢測
通過比較三種提取方法,經(jīng)檢測分析水蒸餾法為其較好的提取方法,甲醇索氏提取和煙氣收集物,基本檢測不到巨豆三烯酮。比較不同地區(qū)、不同品種和不同部位的巨豆三烯酮存在明顯的差異,其中南雄產(chǎn)的粵煙97烤煙巨豆三烯酮含量與其它產(chǎn)區(qū)和其它品種偏高。這是南雄地區(qū)環(huán)境因素，土壤因素等形成的烤煙的一個特點(diǎn)。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。