本發(fā)明涉及藥品的檢測檢驗
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種克林霉素磷酸脂凝膠中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
：克林霉素磷酸酯凝膠主要用于尋常痤瘡的治療?？肆置顾赜?966年由magerlerin等以氯取代林可霉素分子中第7位的羥基首次合成?？肆置顾亓姿狨ナ前牒铣傻目肆置顾氐难苌?，在體外沒有抗菌活性，但具有脂溶性，較克林霉素易于透皮吸收，進(jìn)入體內(nèi)迅速水解為克林霉素而顯示抗菌活性，其作用機(jī)理是通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)早期合成，從而抑制了痤瘡棒狀桿菌，并消除了炎癥。目前，《中國藥典》中對于克林霉素磷酸酯凝膠僅有克林霉素含量的測定方法，由于克林霉素磷酸脂凝膠是由主藥克林霉素磷酸酯及卵磷脂、羥丙基纖維素等輔料組成，其中輔料、雜質(zhì)等影響著克林霉素磷酸酯凝膠的質(zhì)量，故而，這種單純的含量測定方法并不能對克林霉素磷酸脂凝膠的質(zhì)量進(jìn)行有效控制。因此，為保證克林霉素磷酸脂凝膠的有效性、安全性，使克林霉素磷酸脂凝膠生產(chǎn)過程的質(zhì)量得到有效控制，需要對克林霉素磷酸脂凝膠中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測，這也是質(zhì)量控制的非常必要的一種技術(shù)手段。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的就在于提供一種克林霉素磷酸脂凝膠中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，這種限量的檢測方法有利于控制制劑的質(zhì)量，保證制劑的有效性。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)：一種克林霉素磷酸酯凝膠中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于包括如下步驟：a制備供試品溶液：將克林霉素磷酸酯凝膠用體積比為80:20的磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液溶解并制成每1ml中含克林霉素磷酸酯2～4mg的溶液，搖勻，滴入3～5滴飽和的雷氏銨鹽水溶液，振搖、取上清液濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；b制備對照溶液：精密量取上述供試品溶液適量，用體積比為80:20的磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液溶解并制成每1ml中含克林霉素磷酸酯70～110ug的溶液，作為對照溶液；c制備對照品溶液：分別精密稱取克林霉素對照品和林可霉素對照品各適量，加上述b)過程制得的對照溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含克林霉素20～40ug與林可霉素4～8ug的混合溶液，作為對照品溶液；采用高效液相色譜法對上述供試品溶液、對照溶液和對照品溶液進(jìn)行檢測，其中高效液相色譜條件為：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相a：體積比為92：8的磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液，流動相b：體積比為52：48的磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液，檢測波長：210nm，柱溫：40℃，流速為每分鐘1.2ml，以線性梯度洗脫方式洗脫。所述磷酸緩沖液ph為3.9±0.05；所述磷酸緩沖液是采用磷酸3.5ml，加水1000ml和濃氨溶液2.5ml制成。所述線性梯度洗脫方式如下表：時間(分鐘)流動相a(％)流動相b(％)0955405954195546955本發(fā)明的克林霉素磷酸酯凝膠中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，通過供試品溶液制備條件的篩選、凝膠劑前處理的凈化、色譜條件的篩選，建立了克林霉素磷酸酯凝膠中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，通過方法學(xué)驗證研究表明：所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性良好、耐用性良好。本發(fā)明通過對克林霉素磷酸酯凝膠中有關(guān)物質(zhì)的控制，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量。附圖說明圖1為本發(fā)明提供的供試品溶液色譜圖；圖2為本發(fā)明提供的對照品色譜圖；圖3為克林霉素線形圖；圖4為林可霉素線性圖。具體實施方式下面用實例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。下述實施例中克林霉素磷酸酯凝膠來源于寧夏多維藥業(yè)有限公司。一、檢測方法1、供試品溶液的制備：精密量取克林霉素磷酸酯凝膠適量，置10ml量瓶中，用磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液(體積比80:20)溶解并稀釋至刻度，制成每1ml中含克林霉素磷酸酯凝膠2～4mg的溶液，搖勻，滴加3～5滴飽和的雷氏銨鹽水溶液，振搖，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；其中磷酸緩沖液是采用磷酸3.5ml，加水1000ml和濃氨溶液2.5ml制成，必要時用濃氨溶液調(diào)節(jié)ph值至3.9±0.05。2、對照溶液的制備：精密量取適量過程1制備的供試品溶液，用稀釋劑(磷酸緩沖液-90％乙腈甲醇溶液(體積比80:20))定量稀釋制成每1ml中含克林霉素磷酸酯70～110ug的溶液，作為對照溶液。3、對照品溶液的制備：分別精密稱取克林霉素對照品和林可霉素對照品各適量，加上述過程2制得的對照溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含克林霉素20～40ug與林可霉素4～8ug的混合溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法(通則0512)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6mm×250mm，5um或效能相當(dāng)?shù)纳V柱)；流動相a為磷酸緩沖液(ph3.9)-90％乙腈甲醇溶液(92：8)，流動相b為磷酸緩沖液(ph3.9)-90％乙腈甲醇溶液(52：48)；檢測波長為210nm；柱溫為40℃；流速為每分鐘1.2ml，按表1進(jìn)行線性梯度洗脫。精密量取供試品溶液、對照品溶液與對照溶液各50ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。表1：線性梯度洗脫方式：時間(分鐘)流動相a(％)流動相b(％)0955405954195546955供試品溶液色譜圖中如有與林可霉素和克林霉素保留時間一致的色譜峰，其含量按照外標(biāo)法以峰面積計算，分別不得過標(biāo)示量的0.5％與2.0％；其他單個雜質(zhì)(除相對保留時間小于0.2的峰外)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2/3倍(2.0％)，其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2倍(6.0％)。供試品溶液色譜圖中小于對照溶液主峰面積0.02倍的峰忽略不計。將批號為160411、160412批克林霉素磷酸酯凝膠按照上述方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測，結(jié)果統(tǒng)計如下表2：二、供試品溶液的前處理——滴加雷氏銨鹽水溶液的影響因素驗證在供試品溶液的前處理過程中增加滴飽和的雷氏銨鹽水溶液凈化過程，將無此過程的供試品溶液與有此過程的供試品溶液進(jìn)行過濾時間對比、有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果對比，統(tǒng)計如下表3：從上述結(jié)果可知，加飽和雷氏鹽水溶液凈化對有關(guān)物質(zhì)的檢測結(jié)果無影響，并且能夠大幅度提高過濾的速度，由原來的2min/2ml縮短為5s/2ml，可知滴加飽和雷氏鹽凈化此步驟可行。三、方法驗證數(shù)據(jù)1、專屬性驗證將空白溶劑(按照供試品溶液制備過程，稀釋劑+雷氏鹽的混合溶液)、空白對照溶液(除有效成分克林霉素磷酸酯外的其他輔料制成的凝膠，按照供試品溶液制備方法制成的溶液)、混合對照品溶液(克林霉素磷酸酯、克林霉素、林可霉素對照品混合溶液)、克林霉素磷酸酯凝膠供試品溶液分別注液相色譜儀進(jìn)行檢測，結(jié)果空白溶劑、空白對照溶液、混合對照品溶液對雜質(zhì)的測定無干擾，專屬性良好；雜質(zhì)分離度良好，峰形對稱，檢測方法可行，符合檢測要求。2、線性驗證精密稱取克林霉素、林可霉素對照品適量，用稀釋劑制成濃度分別為克林霉素100ug/ml、林可霉素20ug/ml的混合對照品儲備溶液。將混合對照品儲備液分別稀釋成5個濃度級，依法進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，計算回歸方程，克林霉素回歸方程為y＝2e+06x-2693.7r2＝0.999，林可霉素回歸方程為y＝2e+07x+5256.3r2＝0.9997。試驗結(jié)果表明，克林霉素在0.0992～0.1050mg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，林可霉素在0.0011～0.0198mg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。表4克林霉素有關(guān)物質(zhì)測定線性范圍表5林可霉素有關(guān)物質(zhì)測定線性范圍3、重復(fù)性取同一批號供試品(批號160416)6份，按照有關(guān)物質(zhì)測定方法測定。結(jié)果平均含量分別為：克林霉素0.0406％，rsd為1.21％，林可霉素0.0102％，rsd為1.39％，最大單雜平均峰面積為27278，rsd為1.75％，總雜平均峰面積為73145.rsd為1.40％，重復(fù)性良好。表6克林霉素、林可霉素有關(guān)物質(zhì)測定復(fù)性試驗結(jié)果表編號123456平均rsd％克林霉素含量(％)0.04010.04070.04090.04000.04060.04130.04061.21林可霉素含量(％)0.01020.01010.010.01020.01040.01030.01021.39表7其他未知最大單雜峰面積及總雜峰面積編號123456平均rsd％最大單雜峰面積278422743626954276632722426547272781.75總雜峰面積743017345874887725427341572145731451.404、溶液穩(wěn)定性取同一份供試品溶液，自制備后，按有關(guān)物質(zhì)測定方法，分別在0、2、4、6、8、12小時進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積平均值為：克林霉素平均值為336003.097，rsd為：0.95％；林可霉素峰面積平均值為154539.517，rsd為1.37％；最大單雜峰面積平均值為：27537.333，rsd為1.65％，總雜峰面積平均值為：72913.524，rsd為0.76％。表明供試品溶液自制備后12小時內(nèi)測定基本穩(wěn)定。表8克林霉素穩(wěn)定性試驗結(jié)果表9林可霉素穩(wěn)定性試驗結(jié)果表10最大單雜穩(wěn)定性試驗結(jié)果表11總面積穩(wěn)定性試驗結(jié)果當(dāng)前第1頁12