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多表位測(cè)定的制作方法

文檔序號(hào):12454098閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種在親和力測(cè)定中檢測(cè)生物學(xué)靶標(biāo)的體外方法,所述方法包括以下步驟

a)提供包含所述生物學(xué)靶標(biāo)的生物學(xué)樣品體積,其中所述生物學(xué)靶標(biāo)可以是蛋白、肽、抗體、毒性物質(zhì)、脂質(zhì)、氨基酸、胺、信使、小分子或核酸;

b)將第一捕獲部分加入包含所述生物學(xué)靶標(biāo)的生物學(xué)樣品體積,其中所述第一捕獲部分粘附至顆粒;

c)將捕獲的生物學(xué)靶標(biāo)濃縮為小于步驟a)中的生物學(xué)樣品體積的洗脫體積;

d)從所述顆粒切割所述第一捕獲部分;

e)以?shī)A心或競(jìng)爭(zhēng)性親和力測(cè)定形式直接或間接檢測(cè)和/或定量所述生物學(xué)靶標(biāo),其中生物學(xué)靶標(biāo)上的三個(gè)結(jié)合位點(diǎn)被三種捕獲部分占據(jù),并且其中一種捕獲部分是與生物學(xué)靶標(biāo)一起從顆粒切割的第一捕獲部分,一種捕獲部分與檢測(cè)表面直接或間接結(jié)合,一種捕獲部分使得能在這種表面上檢測(cè)。

2.權(quán)利要求1所述的方法,其中在步驟e)中,所述生物學(xué)靶標(biāo)與進(jìn)一步的捕獲部分結(jié)合。

3.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟e)中,試劑與至少一種捕獲部分結(jié)合,或者在競(jìng)爭(zhēng)性親和力測(cè)定形式的情況下,與所述生物學(xué)靶標(biāo)的類(lèi)似物結(jié)合。

4.權(quán)利要求3所述的方法,其中所述試劑選自:

放射性同位素;和/或

固相,例如磁珠或乳膠珠或檢測(cè)表面;和/或

熒光、磷光和/或化學(xué)發(fā)光染料;和/或

酶和/或酶底物;和/或

核酸序列、肽;和/或

膠體或納米顆粒;和/或

聚合物或大分子,例如樹(shù)狀聚體或脂質(zhì)體。

5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中通過(guò)磁性分離或重力將所述捕獲的生物學(xué)靶標(biāo)濃縮為小于步驟a)中的生物學(xué)樣品體積的洗脫體積。

6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述顆粒為磁性顆粒。

7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中通過(guò)酶促、熱和/或光化學(xué)切割從所述顆粒切割所述第一捕獲部分或所述生物學(xué)靶標(biāo)。

8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述檢測(cè)和/或定量方法選自:

-光學(xué)檢測(cè),例如熒光、磷光、化學(xué)發(fā)光、吸收、散射、成像、瞬逝場(chǎng)技術(shù)、FTIR、表面等離子共振、拉曼、光譜學(xué);和/或

-酶反應(yīng);和/或

-核酸擴(kuò)增技術(shù),例如免疫-PCR、滾環(huán)擴(kuò)增;和/或

-磁性檢測(cè),例如通過(guò)磁致電阻、霍爾效應(yīng)、線(xiàn)圈;和/或

-聲波檢測(cè),例如表面聲波、體聲波、懸臂、石英晶體;和/或

-電檢測(cè),例如電導(dǎo)、阻抗、電流、氧化還原循環(huán)、電荷。

9.權(quán)利要求2-8中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述切割是酶促的,所述試劑為磁珠,并且所述生物學(xué)靶標(biāo)與進(jìn)一步的捕獲部分結(jié)合。

10.一種生物學(xué)靶標(biāo)的檢測(cè)組件根據(jù)權(quán)利要求1的用途,所述檢測(cè)組件包括生物學(xué)靶標(biāo),第一、第二和第三捕獲部分,其中試劑與第二或第三捕獲部分結(jié)合,并且其中所述第二或第三捕獲部分允許與檢測(cè)表面直接或間接結(jié)合,并且所述生物學(xué)靶標(biāo)直接結(jié)合至所有三個(gè)捕獲部分,從而使得能夠檢測(cè),其中所述第一捕獲部分包含用于附著至顆粒的實(shí)體以及允許從所述顆粒分離的接頭。

11.權(quán)利要求10所述的檢測(cè)組件的用途,其中所述生物學(xué)靶標(biāo)通過(guò)表位結(jié)合至所有捕獲部分。

12.捕獲部分在權(quán)利要求1-9所述的方法中的用途,所述捕獲部分包含

a)第一實(shí)體(404),用于附著至顆粒,

b)第二實(shí)體(406),包含接頭,用于使顆粒的附著發(fā)生切割,以及

c)第三實(shí)體(407),用于附著至檢測(cè)表面。

13.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法,其中加入所述生物學(xué)樣品體積的第一捕獲部分包含

a)第一實(shí)體(404),用于附著至顆粒,

b)第二實(shí)體(406),包含接頭,用于使顆粒的附著發(fā)生切割,以及

c)第三實(shí)體(407),用于附著至檢測(cè)表面。

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