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一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法與流程

文檔序號:12454010閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:將口蹄疫合成肽疫苗破乳,將破乳后的抗原樣品采用競爭ELISA方法進行定性定量檢測;

所述破乳方法為:將油佐劑疫苗與正丁醇混合,然后加入競爭劑混勻后,離心,即得抗原樣品。

2.根據(jù)權利要求1所述的油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,所述競爭劑為氨基酸及其衍生物中的至少一種。

3.根據(jù)權利要求2所述的油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,所述競爭劑為賴氨酸、精氨酸、組氨酸和脯氨酸中的一種。

4.根據(jù)權利要求1所述的油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,所述競爭劑的加入量為:每1ml油佐劑疫苗中加入1-40mg競爭劑。

5.根據(jù)權利要求1所述的油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,所述競爭ELISA方法采用的步驟如下:

抗原包被:將已知濃度人工合成的口蹄疫抗原固相化吸附到ELISA板子上;

稀釋抗體:將已知效價的抗體進行稀釋,抗體稀釋后效價為1:250000-1:1100000;

抗原稀釋:在血清稀釋板上,用稀釋液將待檢抗原樣品稀釋,標準抗原進行不同比例稀釋形成不同濃度的標準抗原稀釋液;

抗原標準曲線繪制及待檢抗原樣品的定量檢測:將稀釋好的待檢抗原樣品和不同濃度的標準抗原稀釋液分別與稀釋好的抗體在稀釋板中進行完全反應,然后將各完全反應后的反應液分別加入到固相化抗原的ELISA板子中繼續(xù)反應;反應結束后,各加入酶標記物、底物依次反應,再各加入終止液終止,測定OD值,采用不同濃度的標準抗原的OD值繪制抗原標準曲線,然后將待檢抗原樣品的OD值對應到所述抗原標準曲線中計算得待測抗原樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),除以破乳效率,即為待測抗原樣品中抗原實際含量。

6.根據(jù)權利要求5油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,抗原包被步驟中,所述人工合成的口蹄疫抗原濃度為0.5μg/mL-5μg/mL。

7.根據(jù)權利要求5油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,抗原標準曲線繪制及待檢抗原樣品的定量檢測步驟中,所述完全反應的時間大于等于60min,反應溫度為37℃。

8.根據(jù)權利要求5油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,抗原標準曲線繪制及待檢抗原樣品的定量檢測步驟中,所述各完全反應后的反應液分別加入到固相化抗原的ELISA板子中繼續(xù)反應大于等于30min,反應溫度為37℃。

9.根據(jù)權利要求5油佐劑疫苗的快速定性定量檢測方法,其特征在于,抗原標準曲線繪制及待檢抗原樣品的定量檢測步驟中,所述酶標記物為SPA-HRP,或者為羊抗豬生物素-IgG和親和素-HRP。

10.根據(jù)權利要求1所述的口蹄疫合成肽疫苗破乳后的競爭ELISA定量方法,其特征在于,所述稀釋后酶標記物的用量為100μL,稀釋比例為1:5000-1:10000。

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