本發(fā)明涉及一種與堿性磷酸酶發(fā)生催化反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物，屬于化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)的
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景化學(xué)發(fā)光酶疫分析包含了免疫化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光反應(yīng)兩個(gè)部分。免疫分析系統(tǒng)是將酶標(biāo)記在抗原或抗體上，經(jīng)過(guò)抗原與抗體特異性反應(yīng)形成抗原－抗體免疫復(fù)合物?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入酶的發(fā)光底物，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)酶催化后，形成一個(gè)處于激發(fā)態(tài)的中間體，會(huì)發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài)，發(fā)光強(qiáng)度可以利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行檢測(cè)。待測(cè)物質(zhì)濃度因?yàn)榕c發(fā)光強(qiáng)度成一定的關(guān)系而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)目的。堿性磷酸酶在化學(xué)發(fā)光酶疫分析應(yīng)用比較廣泛，目前使用最多的發(fā)光底物是1，2－二氧環(huán)己烷，主要是AMPPD及其衍生物。此類(lèi)物質(zhì)大多為國(guó)外專(zhuān)利產(chǎn)品，價(jià)格昂貴、不易購(gòu)買(mǎi)，且一般到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間長(zhǎng)（＞10分鐘）。堿性磷酸酶能催化二氫吖啶磷酸酯類(lèi)化合物反應(yīng)并產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，此種反應(yīng)速度快，發(fā)光到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間短，但是靈敏度較低（≤10-6moL）。因此，亟待開(kāi)發(fā)出一種配方簡(jiǎn)單、價(jià)格比國(guó)外產(chǎn)品便宜、到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間短、靈敏度高的化學(xué)發(fā)光底物，以提高臨床免疫檢測(cè)速度，縮短檢測(cè)時(shí)間。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明公開(kāi)了一種配方簡(jiǎn)單、價(jià)格比國(guó)外產(chǎn)品便宜、到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間短、靈敏度高的堿性磷酸酶的化學(xué)發(fā)光底物。本發(fā)明涉及的發(fā)光底物在和堿性磷酸酶混合后，被堿性磷酸酶催化產(chǎn)生不穩(wěn)定的中間態(tài)化合物，此中間態(tài)化合物回歸到基態(tài)時(shí)會(huì)發(fā)出450nm的光，發(fā)光底物中添加的表面活性劑，在中間態(tài)化合物周?chē)纬赡z束增加發(fā)光率，金屬離子保持堿性磷酸酶的活性，提高催化效率，還原劑可維持發(fā)光底物的穩(wěn)定。這些方式可以提高發(fā)光底物的靈敏度和穩(wěn)定性。一種堿性磷酸酶催化的化學(xué)發(fā)光底物，其特征在于：它含有化合物Ⅰ：3,6-(二甲胺基)吖啶，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：進(jìn)一步的，它還含有化合物Ⅱ：9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫化吖啶二鉀鹽，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：進(jìn)一步的，它還含有表面活性劑，所述表面活性劑優(yōu)選TritonX-100、TritonX-405、吐溫-80中的一種或多種，所述表面活性劑最優(yōu)選的為T(mén)ritonX-100。進(jìn)一步的，它還含有還原劑，所述還原劑優(yōu)選二硫蘇糖醇（DTT）、β-巰基乙醇、亞硫酸鈉、抗壞血酸中的一種或多種，所述還原劑最優(yōu)選的為二硫蘇糖醇（DTT）。進(jìn)一步的，它還含有緩沖體系，所述緩沖體系優(yōu)選Tris-鹽酸緩沖體系或2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖體系，所述緩沖體系最優(yōu)選的為T(mén)ris-鹽酸緩沖體系。進(jìn)一步的，它還含有金屬離子以維持堿性磷酸的活性，優(yōu)選的鋅離子、鎂離子。進(jìn)一步的，所述化合物Ⅰ的濃度為10mg/L～100mg/L，優(yōu)選的濃度為25mg/L～50mg/L。進(jìn)一步的，所述化合物Ⅱ的濃度為100mg/L～1g/L，優(yōu)選的濃度為200mg/L～500mg/L。進(jìn)一步的，所述表面活性劑的濃度為0.01%～0.1%，優(yōu)選的濃度為0.01%～0.05%。進(jìn)一步的，所述還原劑劑的濃度為0.1%～1%，優(yōu)選的濃度為0.1%～0.5%。進(jìn)一步的，所述緩沖體系的濃度為10mM/L～500mM/L，PH值為7.0～9.0，優(yōu)選的濃度為50mM/L～200mM/L，PH值為8.0～8.5。進(jìn)一步的，所述金屬離子的濃度為1mM/L～10mM/L，優(yōu)選的濃度為1mM/L～5mM/L。本發(fā)明一種與堿性磷酸酶發(fā)生催化反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物，含有3,6-(二甲胺基)吖啶、9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫化吖啶二鉀鹽、堿性藍(lán)54、表面活性劑、還原劑等，本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光底物液配方簡(jiǎn)單、價(jià)格比國(guó)外產(chǎn)品便宜、到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間短（＜2sec）、靈敏度高（≥10-19moL）。附圖說(shuō)明圖1為4種不同發(fā)光底物到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間對(duì)比圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將被描述的更清楚。但是，應(yīng)該可以理解，本實(shí)例僅僅是本發(fā)明的一種范例，并不會(huì)對(duì)本發(fā)明的范圍做任何限制。實(shí)施例1YJAPS的配方1（PH8.0），具體見(jiàn)表1：表1物料濃度Tris50mM/L化合物Ⅰ25mg/L化合物Ⅱ200mg/LTritonX-1000.01%DTT0.1%氯化鎂1mM/L實(shí)施例2YJAPS的配方2（PH8.5），具體見(jiàn)表2：表2物料濃度Tris200mM/L化合物Ⅰ50mg/L化合物Ⅱ500mg/LTritonX-1000.05%DTT0.5%氯化鎂5mM/L實(shí)施例3YJAPS的配方3（PH8.0），具體見(jiàn)表3：表3物料濃度Tris50mM/L化合物Ⅰ25mg/L化合物Ⅱ200mg/LTritonX-1000.05%DTT0.5%氯化鎂5mM/L實(shí)施例4YJAPS的配方4（PH8.5），具體見(jiàn)表4：表4物料濃度Tris200mM/L化合物Ⅰ50mg/L化合物Ⅱ500mg/LTritonX-1000.01%DTT0.1%氯化鎂1mM/L按照上述表格中不同配方進(jìn)行化學(xué)發(fā)光底物（YJAPS）的制備，分別按照各表中物料的量進(jìn)行稱(chēng)量，溶解在純化水中，充分?jǐn)嚢枞芙夂笳{(diào)節(jié)PH，定容。靈敏度測(cè)試：配制不同濃度梯度的堿性磷酸酶（10-15moL～10-19moL），分別取20uL加入檢測(cè)反應(yīng)管中，然后加入200uL配方1化學(xué)發(fā)光底物（YJAPS-1），在化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀上測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度（RLU）,記錄測(cè)試結(jié)果。配方2、3、4操作同上。結(jié)果見(jiàn)表5。表5靈敏度測(cè)試結(jié)果到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間測(cè)試：取4只檢測(cè)反應(yīng)管，各取20uL濃度為10-15moL的堿性磷酸酶加入檢測(cè)反應(yīng)管中，然后分別加入不同配方的200uL化學(xué)發(fā)光底物，分別隔2s、15s、25s、35s、1min在化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀上測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度（RLU）,測(cè)試結(jié)果見(jiàn)圖1和表6。表6到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間測(cè)試結(jié)果時(shí)間YJAPS-1YJAPS-2YJAPS-3YJAPS-41(2s)363801133704760533361752299716892(15s)351661393794673932670946298205503(25s)351702643731416332470332282676104(35s)362443143785394632365233298349835(1min)36094126388501183376512429725517當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3