本發(fā)明涉及一種可實現(xiàn)牛ɑ_s1-酪蛋白鑒定及絕對定量的檢測試劑盒及測定方法，屬于檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

α_s1-酪蛋白(α_s1-casein)是牛奶蛋白中含磷蛋白質(zhì)之一，由214個氨基酸殘基組成，分子量為24.5kDa，含有幾乎全部的必需氨基酸，也是α-酪蛋白中一個重要組分，占牛奶中總蛋白量的39％～46％。防治骨質(zhì)疏松與佝僂病，促進動物體外受精，調(diào)節(jié)血壓，治療缺鐵性貧血、缺鎂性神經(jīng)炎等多種生理功效，尤其是其促進常量元素(Ca、Mg)與微量元素(Fe、Zn、Cu、Cr、Ni、Co、Mn、Se)高效吸收的功能特性使其具有“礦物質(zhì)載體”的美譽，它可以和金屬離子，特別是鈣離子結(jié)合形成可溶性復合物，一方面有效避免了鈣在小腸中性或微堿性環(huán)境中形成沉淀，另一方面還可在沒有V_D參與的條件下使鈣被腸壁細胞吸收，是最有效的促鈣吸收因子之一。

目前，國內(nèi)外檢測牛ɑ_s1-酪蛋白的主要方法有ELISA法、凱氏定氮法、雙縮尿法、Folin-酚試劑法、紫外吸收法、考馬斯亮藍法、熒光光度法、共振光散射法、電化學法、高效液相色譜法和毛細管電泳法。其中ELISA試劑盒具有檢測特異性高的優(yōu)點，但由于檢測方法易污染、背景值高的缺點，常使檢測靈敏度降低。凱氏定氮法、雙縮尿法、Folin-酚試劑法和考馬斯亮藍法均是采用分光光度法測定，與紫外吸收法、熒光光度法、共振光散射法、電化學法相同，均具有檢測專屬性、靈敏度和準確度低的缺點。高效液相色譜法和毛細管電泳法雖有較高準確度，但常易受到分子量大小接近的蛋白干擾，使檢測特異性、靈敏度降低，并且檢測時間較長，不適合痕/微量牛ɑ_s1-酪蛋白的檢測。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

技術(shù)問題：本發(fā)明的目的是提供一種牛ɑ_s1-酪蛋白檢測試劑盒，給出一種采用本試劑盒可以克服現(xiàn)有技術(shù)缺點的牛ɑ_s1-酪蛋白的鑒定和含量測定的方法。該試劑盒給出了檢測牛ɑ_s1-酪蛋白的標準物質(zhì)和對含ɑ_s1-酪蛋白樣品進行酶解反應的反應試劑。可將標準物質(zhì)和/或酶解反應產(chǎn)物(或含內(nèi)標物質(zhì))注入(超)高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀中進行牛ɑ_s1-酪蛋白含量測定。本發(fā)明提供了一種專屬性強、精密度高、結(jié)果準確可靠、操作簡便，可用于樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白含量測定的一種檢測試劑盒及檢測方法。

技術(shù)方案：

一種可實現(xiàn)牛ɑ_s1-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒，其特征在于：包括標準物質(zhì)：

標準物質(zhì)包括特征肽段及其內(nèi)標肽段，肽段序列為：

上述物質(zhì)的選擇有如下的方式：

(1)、所述標準物質(zhì)的特征肽段單獨使用或者與其他特征肽段配成兩種混合特征肽段使用；

(2)、所述標準物質(zhì)的內(nèi)標肽段單獨使用或者與其他特征肽段配成兩種混合內(nèi)標肽段使用；

(3)、所述標準物質(zhì)的特征肽段與內(nèi)標肽段配成的混合內(nèi)標物質(zhì)，單獨使用或與另外一種混合內(nèi)標物質(zhì)同時使用；

(4)、內(nèi)標肽段與其他內(nèi)標肽段混合使用。

該試劑盒還包括反應試劑：

反應試劑，由以下成分組成：

所述標準物質(zhì)配成單劑或雙劑。

所述胰蛋白酶為序列級胰蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一種。

所述反應試劑配成單劑。

1)標準物質(zhì)

①用以實現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的標準物質(zhì)是標準特征肽段，是單一標準物質(zhì)，或配成多混合標準物質(zhì)，使用其中的一種或多種；

單一標準物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一標準物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合標準物質(zhì)

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

②用以實現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的內(nèi)標肽段，是單一內(nèi)標肽段，或配成雙混合內(nèi)標肽段，使用其中的一種或多種；

單一內(nèi)標肽段I

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標肽段II

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合內(nèi)標肽段

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

③將上述特征肽段與其內(nèi)標肽段聯(lián)合使用，是單一內(nèi)標物質(zhì)，或配成雙混合內(nèi)標物質(zhì)，使用其中的一種或多種；

單一內(nèi)標物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

單一內(nèi)標物質(zhì)III

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標物質(zhì)IV

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合內(nèi)標物質(zhì)

④標準物質(zhì)是單劑、或是雙劑，根據(jù)上述方法自由組合或選擇其中的一種或兩種。

利用上述的可實現(xiàn)牛ɑ_s1-酪蛋白鑒定及絕對定量的試劑盒所實施的牛ɑ_s1-酪蛋白含量測定方法，其特征在于：該方法步驟如下：

(1)將待測樣品加入碳酸氫銨，渦旋，加入二硫蘇糖醇，溫育振蕩，再加入碘乙酰胺，溫育振蕩，放置至室溫后，再加入胰蛋白酶，溫育振蕩，最后加入甲酸終止反應；

(2)將標準物質(zhì)和(1)步驟中最終酶解產(chǎn)物分別注入高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀中檢測或?qū)⒒旌蟽?nèi)標物質(zhì)和(1)步驟中含內(nèi)標肽段的最終酶解產(chǎn)物分別注入高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，檢測后通過m/z進行定性，色譜峰峰面積變化測算出牛ɑ_s1-酪蛋白的絕對含量；

溫度控制在25～60℃范圍，溫育時間控制在0.5～12h，振蕩頻率控制在800～2500rmp，渦旋時間控制在2～10min，室溫控制在18-22℃范圍；

胰蛋白酶與被測樣品總蛋白量比例控制在1/1到1/100。

所述步驟(2)為：將一種或兩種特征肽段和(1)步驟中最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀中檢測，或?qū)⒁环N或兩種混合內(nèi)標物質(zhì)和(1)步驟中含一種或兩種內(nèi)標肽段的最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，通過m/z和t_R進行定性，色譜峰峰面積變化測算出牛ɑ_s1-酪蛋白的含量。

有益效果：本發(fā)明提供的檢測試劑盒及檢測方法能對樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白進行準確靈敏的定性和絕對定量，具有特異性強、靈敏度高、結(jié)果準確、操作簡便等優(yōu)點。

本發(fā)明包括標準物質(zhì)(由特征肽段及其內(nèi)標肽段組成)和酶解反應試劑；采用(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀進行檢測，能快速、精確、靈敏的對微/痕量的牛ɑ_s1-酪蛋白進行絕對定量。該方法具有操作簡便、特異性強、靈敏度和準確度高的特點，檢測時間在7min之內(nèi)完成。

目前，尚未開發(fā)出測定牛ɑ_s1-酪蛋白含量的特征肽段及其內(nèi)標肽段和酶解反應試劑的試劑盒。本發(fā)明成功的彌補了生物/化學檢測領(lǐng)域的不足，能準確地對含微/痕量牛ɑ_s1-酪蛋白的樣品進行定性鑒別和絕對定量，具有特異性強、操作簡便、靈敏度和準確度高的優(yōu)點。

附圖說明

圖1為特征肽段1的二級質(zhì)譜圖(m/z＝880.4)；

圖2為特征肽段2的二級質(zhì)譜圖(m/z＝1158.5)；

具體實施方式

通過以下實施例進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的權(quán)利要求不僅限于實施例。

本發(fā)明包括牛ɑ_s1-酪蛋白檢測試劑盒和含量測定方法兩部分。

牛ɑ_s1-酪蛋白檢測試劑盒由標準物質(zhì)和反應試劑兩部分組成：

1)標準物質(zhì)

①用以實現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的標準物質(zhì)是標準特征肽段，可以是單一標準物質(zhì)，或配成雙混合標準物質(zhì)，可使用其中的一種或兩種。

單一標準物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一標準物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合標準物質(zhì)

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

②用以實現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的內(nèi)標肽段(任一或多個氨基酸上的C、H、O或/和N被同位素標記)，可以是單一內(nèi)標肽段，或配成雙混合內(nèi)標肽段，可使用其中的一種或兩種。

單一內(nèi)標肽段I

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標肽段II

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合內(nèi)標肽段

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

③將上述特征肽段與其內(nèi)標肽段聯(lián)合使用，以下簡稱“內(nèi)標物質(zhì)”，更有利于牛ɑ_s1-酪蛋白的定量檢測。可以是單一內(nèi)標物質(zhì)，或配成雙混合內(nèi)標物質(zhì)，可使用其中的一種或兩種。

單一內(nèi)標物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

單一內(nèi)標物質(zhì)III

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標物質(zhì)IV

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合內(nèi)標物質(zhì)

④用以實現(xiàn)本發(fā)明方法的牛ɑ_s1-酪蛋白檢測試劑盒中的標準物質(zhì)可以是單劑、也可以是雙劑，可根據(jù)上述方法自由組合或選擇其中的一種或兩種。

2)反應試劑，用以實現(xiàn)本發(fā)明方法的反應試劑是單劑，包括：

本發(fā)明測定牛ɑ_s1-酪蛋白含量的步驟如下：

(1)將樣品加入碳酸氫銨，振蕩混勻，加入二硫蘇糖醇，溫育振蕩，再加入碘乙酰胺，溫育振蕩，放置至室溫后，再加入胰蛋白酶，溫育振蕩，最后加入甲酸終止反應。

(2)將標準物質(zhì)(或內(nèi)標物質(zhì))和最終酶解產(chǎn)物(或含內(nèi)標肽段)分別注入(超)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中檢測，通過m/z進行定性鑒別，色譜峰峰面積變化測算出樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白的含量。

通常步驟(1)溫度控制在25～60℃范圍，溫育時間控制在0.5～12h，振蕩頻率控制在800～2500rmp。胰蛋白酶與被測牛ɑ_s1-酪蛋白樣品總蛋白量比例控制在1/1到1/100，渦旋時間控制在2～10min。

所述步驟(2)將特征肽段(一種或兩種)和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-串三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，或?qū)⒒旌蟽?nèi)標物質(zhì)(一種或兩種)和最終酶解產(chǎn)物(含一種或兩種內(nèi)標肽段)分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，通過m/z進行定性鑒別，色譜峰峰面積變化，采用內(nèi)標法或外標法測算出樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白的含量。

實施例1：

樣品：市售牛奶

雙混合內(nèi)標物質(zhì)

雙混合內(nèi)標肽段

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

(1)樣品的制備：取牛奶0.5ml，加入1ml細胞裂解液，超聲處理5min，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入雙混合內(nèi)標肽段，加150mmol/L碳酸氫銨溶液1000μL，渦旋(800rmp)5min，加入90mmol/L二硫蘇糖醇溶液400μL，60℃溫育振蕩(1000rmp)50min，放置至室溫后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液400μL，30℃溫育振蕩(1000rmp)40min，加入1mg/ml胰蛋白酶溶液200μL，50℃溫育振蕩(1000rmp)60min，放置至室溫后，加入10％甲酸水溶液800μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

(2)將雙混合內(nèi)標物質(zhì)和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測。特征肽段1的檢出限為1ng，特征肽段2的檢出限為3ng，相對標準偏差小于2.03％，回收率為96.3％～101.1％(n＝6)。

實施例2：

樣品：市售牛奶粉

單一內(nèi)標物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

單一內(nèi)標肽段II：

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

(1)樣品的制備：取牛奶粉100mg，加入1ml細胞裂解液，超聲處理1min，冰浴裂解2h，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入內(nèi)標肽段2，加入80mmol/L碳酸氫銨溶液900μL，渦旋(1200rmp)2min，加入150mmol/L二硫蘇糖醇溶液300μL，65℃溫育振蕩(1200rmp)30min，放置至室溫后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液500μL，30℃溫育振蕩(1200rmp)40min，加入0.5mg/ml胰蛋白酶溶液500μL，55℃振蕩(1500rmp)溫育50min，放置至室溫后，加入15％甲酸水溶液350μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

(2)將單一內(nèi)標物質(zhì)II和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，檢出限為3ng，相對標準偏差小于1.59％，回收率為94.2％～100.2％(n＝6)。

實施例3：

樣品：市售奶酪

單一標準物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

1)樣品的制備：取奶酪100mg，加入1ml細胞裂解液，超聲破碎1min，冰浴裂解2h，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入100mmol/L碳酸氫銨溶液1000μL，渦旋(1000rmp)5min，加入150mmol/L二硫蘇糖醇溶液100μL，60℃溫育振蕩(1200rmp)60min后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液500μL，30℃溫育振蕩(1000rmp)40min，加入400μg/ml胰蛋白酶溶液500μL，35℃溫育振蕩(1500rmp)12h，放置至室溫后，加入20％甲酸水溶液500μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

2)將單一標準物質(zhì)II和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，檢出限為2ng，相對標準偏差小于3.44％，回收率為97.3％～101.3％(n＝6)。

實施例4：

樣品：市售牛奶粉

單一標準物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標物質(zhì)I

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

1)樣品的制備：取牛奶粉1g，加入1ml細胞裂解液，超聲破碎1min，冰浴裂解2h，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入內(nèi)標肽段1，加入100mmol/L碳酸氫銨溶液800μL，渦旋(800rmp)10min，加入100mmol/L二硫蘇糖醇溶液300μL，70℃溫育振蕩(2000rmp)3h，放置至室溫后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液500μL，25℃溫育振蕩(2000rmp)30min，加入1mg/ml胰蛋白酶溶液200μL，55℃振蕩(1500rmp) 溫育45min，放置至室溫后，加入5％甲酸水溶液700μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

2)將特征肽段1和內(nèi)標肽段1混合后，與最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，特征肽段1的檢出限為2ng，相對標準偏差小于3.11％，回收率為96.7％～98.9％(n＝6)。

實施例5：

樣品：市售牛奶片

單一內(nèi)標物質(zhì)III

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一內(nèi)標肽段II：

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

1)樣品的制備：取牛奶片500mg，加入1ml細胞裂解液，超聲破碎1min，冰浴裂解2h，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入內(nèi)標肽段2，加入100mmol/L碳酸氫銨溶液1000μL，渦旋(1000rmp)6min，加入100mmol/L二硫蘇糖醇溶液100μL，60℃溫育振蕩(1200rmp)60min溫后，加入800mmol/L碘代乙酰胺溶液500μL，30℃溫育振蕩(1000rmp)50min，加入1mg/ml胰蛋白酶溶液1000μL，35℃溫育振蕩(1800rmp)10h，放置至室溫后，加入5％甲酸水溶液800μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

2)將單一內(nèi)標物質(zhì)III和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測，特征肽段2的檢出限為3ng，相對標準偏差小于2.35％，回收率為95.6％～99.9％(n＝6)，特征肽段1作為佐證肽段。

實施例6：

樣品：酸牛奶

單一內(nèi)標物質(zhì)IV

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

單一內(nèi)標肽段I：

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

(1)樣品的制備：取酸牛奶0.5ml，加入1ml細胞裂解液，超聲處理5min，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入雙混合內(nèi)標肽段，加100mmol/L碳酸氫銨溶液800μL，渦旋(800rmp)5min，加入90mmol/L二硫蘇糖醇溶液400μL，60℃溫育振蕩(1000rmp)50min，放置至室溫后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液500μL，30℃溫育振蕩(1000rmp)40min，加入1mg/ml胰蛋白酶溶液200μL，50℃溫育振蕩(1000rmp)60min，放置至室溫后，加入10％甲酸水溶液800μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

(2)將雙混合內(nèi)標物質(zhì)和最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測。特征肽段1的檢出限為1ng，相對標準偏差小于2.03％，回收率為96.3％～101.1％(n＝6)，特征肽段2為佐證肽段。

實施例7：

樣品：牛奶

單一標準物質(zhì)I

特征肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

單一標準物質(zhì)II

特征肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

雙混合內(nèi)標肽段

內(nèi)標肽段1 HQGLPQEVLNENLLR

內(nèi)標肽段2 EPMIGVNQELAYFYPELFR

(1)樣品的制備：取牛奶0.5ml，加入1ml細胞裂解液，超聲處理5min，精密吸取400μL勻漿液，加入1.6ml甲醇，離心(2000rpm)，棄取上清液，殘渣加入雙混合內(nèi)標肽段，加150mmol/L碳酸氫銨溶液1000μL，渦旋(800rmp)5min，加入90mmol/L二硫蘇糖醇溶液400μL，60℃溫育振蕩(1000rmp)50min，放置至室溫后，加入100mmol/L碘代乙酰胺溶液400μL，30℃溫育振蕩(1000rmp)40min，加入1mg/ml胰蛋白酶溶液200μL，50℃溫育振蕩(1000rmp)60min，放置至室溫后，加入10％甲酸水溶液800μL，終止反應，冷凍干燥，得到最終酶解產(chǎn)物。

(2)將單一標準物質(zhì)I和II與雙混合內(nèi)標物質(zhì)混合，與最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測。特征肽段1的檢出限為1ng，特征肽段2的檢出限為3ng，相對標準偏差小于2.16％，回收率為96.3％～99.1％(n＝6)。

以上實施例中：標準物質(zhì)的特征肽段可以單獨使用也可以與其他特征肽段配成兩種標準物質(zhì)使用，具體實施方式不再一一贅述。

標準物質(zhì)的特征肽段與其內(nèi)標肽段配成的混合內(nèi)標物質(zhì)，單獨使用或與另外一種混合內(nèi)標物質(zhì)同時使用，具體實施方式不再一一贅述。

標準物質(zhì)配成單劑或雙劑，具體不再一一贅述。

所述胰蛋白酶為序列級胰蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一種。

總之，上述替換的實施例在這里不做贅述。

總之，實驗證明，采用本發(fā)明的檢測試劑盒完全可以對樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白進行鑒定，并得出所需的絕對含量測定結(jié)果，并且靈敏度高、特異性好、精密度高、不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。

本發(fā)明的檢測試劑盒及檢測方法具有專屬性強、精密度高、結(jié)果準確可靠、操作簡便等優(yōu)點，可用于樣品中牛ɑ_s1-酪蛋白含量測定。

蛋白序列

αs1-酪蛋白

MKLLILTCLVAVALARPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRFFVAPFPEVFGKEKVNELSKDIGSESTEDQAMEDIKQMEAESISSSEEIVPNSVEQKHIQKEDVPSERYLGYLEQLLRLKKYKVPQLEIVPNSAEERLHSMKEGIHAQQKEPMIGVNQELAYFYPELFRQFYQLDAYPSGAWYYVPLGTQYTDAPSFSDIPNPIGSENSEKTTMPLW 。

αs1-酪蛋白

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