1.一種血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
樣品前處理：在血清樣品中加入含有25-羥基維生素D內(nèi)標(biāo)物的乙腈溶液進(jìn)行蛋白沉淀，離心，取上清液用乙腈稀釋，即得待測(cè)樣品；所述血清樣品與所述乙腈溶液的體積比為1：1-4；所述上清液與所述乙腈的體積比為1：1-4倍；
富集、分離和檢測(cè)：對(duì)所述待測(cè)樣品采用二維液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行富集、分離和檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述富集、分離和檢測(cè)的步驟包括：先用流動(dòng)相1洗脫富集柱中的待測(cè)樣品，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行富集、純化，再將富集柱與分析柱連通，用流動(dòng)相2將待測(cè)物依次從富集柱洗脫至分析柱，再斷開(kāi)富集柱與分析柱，用流動(dòng)相2將待測(cè)物從分析柱洗脫、分離至四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)；
其中，富集柱為C6-Phenyl(4×2.0mm)，分析柱為C18(100×2.0mm，3μm)；流動(dòng)相1：A相為甲醇，B相為水，流速為1.0-2.0mL/min；流動(dòng)相2：C相為含0.09-0.11％甲酸的甲醇，D相為含0.09-0.11％甲酸的水，流速為0.2-1.0mL/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，二維液相色譜的進(jìn)樣量為30-100μL，柱溫為35-50℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，流動(dòng)相采用梯度洗脫的模式：0分時(shí)，流動(dòng)相1中A相與B相的體積比為50:50，流動(dòng)相2中C相與D相的體積比為70:30，用流動(dòng)相1洗脫富集柱中的待測(cè)樣品，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行富集、純化；0.25min后將富集柱與分析柱連通，用流動(dòng)相2將待測(cè)物依次從富集柱洗脫至分析柱，1.5min時(shí)流動(dòng)相2中C相與D相的體積比為85:15；1.9min時(shí)斷開(kāi)富集柱與分析柱，用流動(dòng)相1將富集柱中的殘留雜質(zhì)梯度洗脫至廢液瓶中，用流動(dòng)相2將待測(cè)物從分析柱洗脫、分離至四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，5.5min時(shí)流動(dòng)相2中C相與D相的體積比為90:10，5.6min時(shí)流動(dòng)相2中C相與D相的體積比為95:5，6.6min時(shí)流動(dòng)相2中C相與D相的體積比為70:30；整個(gè)梯度時(shí)間為7.0-9.0min。
5.根據(jù)權(quán)利要求2任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述流動(dòng)相1的流速為1.2-1.3mL/min，所述流動(dòng)相2的流速為0.4-0.6mL/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述25-羥基維生素D內(nèi)標(biāo)物為25-羥基維生素D的C13標(biāo)記物或氘代標(biāo)記物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述離心的條件為：溫度0-5℃，轉(zhuǎn)速11000-13000r/min，時(shí)間4-8min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，四級(jí)桿質(zhì)譜條件為：正離子模式，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描MRM；
所述正離子模式中，目標(biāo)定量離子對(duì)包括25-羥基維生素D2定量離子對(duì)和/或25-羥基維生素D3定量離子對(duì)；
目標(biāo)定量離子的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描MRM的質(zhì)/荷比條件包括：25-羥基維生素D2的母離子的質(zhì)/荷比為413.0-413.8，對(duì)應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比為394.8-395.5；25-羥基維生素D3的母離子的質(zhì)/荷比為401.0-401.8，對(duì)應(yīng)的子離子的質(zhì)/荷比為383.3-383.6。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述四級(jí)桿質(zhì)譜條件還包括以下離子源參數(shù)：電離源為電噴霧電離ESI源，氣簾氣壓力為38-42psi，加熱氣壓力為48-52psi，輔助加熱氣壓力為48-52psi，加熱氣溫度為445-455℃，碰撞氣為氮?dú)猓鲎矚鈮毫?.5-8.5psi，電噴霧針電壓為5400-5600V。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血清中25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，所述四級(jí)桿質(zhì)譜條件還包括：25-羥基維生素D3定量離子對(duì)的去簇電壓為104-106V，入口電壓為9-11V，碰撞電壓為16-18V，出口電壓為12-14V；25-羥基維生素D3內(nèi)標(biāo)物的定量離子對(duì)的去簇電壓為114-116V，入口電壓為9-11V，碰撞電壓為14-15V，出口電壓為11-13V；25-羥基維生素D2定量離子對(duì)的去簇電壓為114-116V，入口電壓為9-11V，碰撞電壓為14-16V，出口電壓為12-14V；25-羥基維生素D2內(nèi)標(biāo)物的定量離子對(duì)的去簇電壓為114-116V，入口電壓為9-11V，碰撞電壓為14-16V，出口電壓為12-14V。