1.一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法,其特征在于,首先采用乙腈對(duì)蜜柚外表皮、內(nèi)表皮、內(nèi)果皮及果肉等各部位中的有機(jī)物進(jìn)行提取,然后同時(shí)采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器和液相色譜-紫外檢測器進(jìn)行檢測,對(duì)福建琯溪蜜柚各部位中有機(jī)物進(jìn)行色譜定性分析,準(zhǔn)確地檢測出福建琯溪蜜柚中的蛇床子素、檸檬烯、α-亞油酸、棕櫚酸、谷甾醇、油酸酰胺和諾卡酮等特異性物質(zhì),成功建立蜜柚特異性物質(zhì)色譜指紋圖譜;
1)采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法,操作步驟如下:
1.1)氣相色譜儀的色譜柱初始溫度為室溫,升溫速率10℃/min升至溫度50~280℃,為滿足試樣中所有成分的峰完全分離,結(jié)合各物質(zhì)沸點(diǎn),確定氣相色譜最優(yōu)分析條件如下:
氣相色譜分析儀分析條件
色譜柱:30m×0.25mm DB-17色譜柱;載氣:N2;載氣流速:1mL/min;色譜柱溫度:120℃;進(jìn)樣量:1μL;氣化室溫度:260℃;檢測器溫度:280℃;檢測器為FID檢測器;
1.2)外標(biāo)物溶液的配制:根據(jù)外標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù),分別稱取不同質(zhì)量的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮,分別用乙腈加入到10mL的容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配成濃度為1000mg/L外標(biāo)物溶液,并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標(biāo)準(zhǔn)外標(biāo)溶液;
1.3)檢測樣品的制備:準(zhǔn)確稱取5g樣品(鮮重)于100mL離心管中,加入25mL乙腈,渦旋2min,超聲30min,4500r/min離心3min,抽取上清液1.5mL,經(jīng)0.22μm微膜過濾,待測樣品的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮;
2)采用液相色譜-紫外檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法,操作步驟如下:
2.1)液相色譜儀以254nm為紫外吸收波長,梯度洗脫,為滿足試樣中所有成分的峰完全分離,結(jié)合各物質(zhì)極性,確定液相色譜最優(yōu)分析條件如下:
液相色譜分析儀分析條件
色譜柱:Zorbax Eclipse XDB C18 250mm×4.6mm×5μm色譜柱;流動(dòng)相:A為水相,B為乙腈;洗脫流速:1mL/min;色譜柱溫度:30℃;進(jìn)樣量:10μL;梯度洗脫程序:水A%:乙腈B%為70:30,洗脫0~15min、水A%:乙腈B%為40:60,洗脫15~20min、水A%:乙腈B%為40:60,洗脫20~40min、水A%:乙腈B%為20:80,洗脫40~45min、水A%:乙腈B%為20:80,洗脫45~65min、水A%:乙腈B%為70:30,洗脫65~70min;檢測器為紫外檢測器;
2.2)外標(biāo)物溶液的配制:根據(jù)外標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù),分別稱取不同質(zhì)量的檸檬烯、谷甾醇和油酸酰胺,分別用乙腈溶解加入到10mL的容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配成濃度為1000mg/L外標(biāo)物溶液,并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標(biāo)準(zhǔn)外標(biāo)溶液;
2.3)檢測樣品的制備:準(zhǔn)確稱取5g鮮樣品于100mL離心管中,加入25mL乙腈,渦旋2min,超聲30min,4500r/min離心3min,抽取上清液1.5mL,經(jīng)0.22μm微膜過濾,待測樣品的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮。