本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利格列汀異構(gòu)體的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

利格列?。↙inagliptin Tablets），利格列汀是一種二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑，可在飲食控制和體育鍛煉的基礎(chǔ)上改善2型糖尿?。═2DM）成年患者的血糖控制水平。利格列汀得異構(gòu)體有很多，但是當(dāng)前的測(cè)定方法專(zhuān)屬性差、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種利格列汀異構(gòu)體的檢測(cè)方法。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：一種利格列汀異構(gòu)體的檢測(cè)方法，其中所述利格列汀包括8-［（3R）-3-氨基-1-哌啶基］-7-（2-丁炔-1-基）-3，7-二氫-3-甲基-1-［（4-甲基-2喹唑啉基）甲基］-1H-嘌呤-2，6-二酮,該方法是采用高效液相色譜法進(jìn)行的，包括下述步驟：

（1）配制利格列汀樣品溶液，所述利格列汀樣品溶液包括供試品溶液，和對(duì)照品溶液。

（2）將步驟（1）所得樣品溶液注入高效液相色譜儀，采用流動(dòng)相作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，并記錄色譜圖；

其中，所述供試品溶液的制備方法包括下述步驟：精密稱(chēng)取利格列汀樣品；

加稀釋液溶解并稀釋至利格列汀樣品的濃度為0.1mg/ml，得到供試品溶液；

所述高效液相色譜法的色譜柱固定相用直鏈淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)為填充劑；

流動(dòng)相：正己烷-無(wú)水乙醇-甲醇-二乙胺（80∶30∶4：0.1）。

優(yōu)選的，所述高效液相色譜法的洗脫順序如下：

0-40 分鐘時(shí)流動(dòng)相為： 100 體積%。

優(yōu)選的，所述流動(dòng)相的流速為0.9ml/min，優(yōu)選流動(dòng)相的流速為0.9ml/min。

優(yōu)選的，所述高效液相色譜法的色譜柱柱溫為25 ～ 40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm。

優(yōu)選的，所述利格列汀樣品溶液還包括對(duì)照品溶液；取利格列汀與利格列汀異構(gòu)體各適量，置量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解定量稀釋制成每1ml各約含0.1mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；所述對(duì)照品溶液的濃度為0.1mg/ml。

優(yōu)選的，所述利格列汀樣品供試品溶液的濃度為0.1mg/ml。

優(yōu)選的，在高效液相色譜法檢測(cè)步驟（2）中，首先將樣品對(duì)照溶液注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿(mǎn)量程的80% ；再將供試品溶液和對(duì)照品溶液分別注入液相色譜儀，采用流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，并記錄色譜圖；優(yōu)選地，注入液相色譜儀中樣品溶液的量均為10μl。

優(yōu)選的，所述高效液相色譜法的色譜柱柱溫為30℃ 。

本發(fā)明的檢測(cè)方法在同一液相條件下測(cè)定起始原料異構(gòu)體測(cè)定方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可信。

實(shí)施方式

實(shí)施例1

采用高效液相色譜法，步驟如下：

（1）配制利格列汀樣品溶液，所述利格列汀樣品溶液包括供試品溶液，和對(duì)照品溶液。

（2）將步驟（1）所得樣品溶液注入高效液相色譜儀，采用流動(dòng)相作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，并記錄色譜圖；

其中，所述供試品溶液的制備方法包括下述步驟：精密稱(chēng)取利格列汀樣品；

加稀釋液溶解并稀釋至利格列汀樣品的濃度為0.1mg/ml，得到供試品溶液；

所述高效液相色譜法的色譜柱固定相用直鏈淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)為填充劑；

流動(dòng)相：正己烷-無(wú)水乙醇-甲醇-二乙胺（80∶30∶4：0.1）。

色譜條件：

色譜柱：Chiralpak AD-H 5um，25cm×4.6mm

流速：0.9ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm

進(jìn)樣量：10ul 柱溫：30℃

流動(dòng)相：正己烷-無(wú)水乙醇-甲醇--二乙胺（80：30：4：0.1）

樣品配制：

供試品：取本品適量，用無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml含0.1mg的樣品。

對(duì)照品：取LGLT對(duì)照品及LGLT-S異構(gòu)體對(duì)照品各適量，置量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解定量稀釋制成每1ml各約含0.1mg的溶液。

測(cè)定法：

取對(duì)照品10ul注入液相色譜儀，異構(gòu)體峰與主峰的分離度應(yīng)大于2.0。取供試品溶液10ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，僅對(duì)異構(gòu)體峰與主峰進(jìn)行積分。供試品溶液色譜圖中，按面積歸一化法計(jì)算，異構(gòu)體不得過(guò)0.15%。