本發(fā)明涉及一種生物標志物組合物，進一步具體涉及用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物。

背景技術(shù)：

宮頸炎是婦科常見疾病之一，包括子宮頸陰道部炎癥及子宮頸管黏膜炎癥。因子宮頸管陰道部鱗狀上皮與陰道鱗狀相延續(xù)，陰道炎癥均可引起子宮頸陰道部炎癥。由于子宮頸管黏膜上皮為單層柱狀上皮，抗感染能力較差，易發(fā)生感染。臨床多見的子宮頸炎是急性子宮頸管黏膜炎，若急性子宮頸炎未經(jīng)及時診治或病原體持續(xù)存在，可導(dǎo)致慢性子宮頸炎癥。

宮頸癌是婦女中的第二大常見腫瘤，大約占所有女性癌癥的12％，每年導(dǎo)致大約250,000人死亡。大部分宮頸癌的病例表現(xiàn)為鱗狀細胞癌，盡管也觀察到腺癌?？赏ㄟ^人群篩查來預(yù)防宮頸癌，因為其通過已完全明確的非浸潤上皮內(nèi)階段演化而來，所述階段可通過形態(tài)學(xué)方法進行辨別。

已證實宮頸癌和通過高危型的人乳頭瘤病毒(HPV)例如16、18和31型的感染之間的強關(guān)聯(lián)性。事實上，大量流行病學(xué)和分子生物學(xué)證據(jù)已將HPV感染確定為宮頸癌的病因因素。此外，在85％或更多的高度子宮頸疾病的病例中發(fā)現(xiàn)了HPV。然而，HPV感染非常普遍，可能在5-15％超過30歲的婦女中發(fā)生，但很少有HPV陽性的婦女會發(fā)展成高度子宮頸疾病或癌癥。單獨的HPV存在只是感染的指標，而不是高度子宮頸疾病的指標，因此，只對HPV感染進行檢測導(dǎo)致許多假陽性。在許多不能進行大規(guī)模篩查程序的發(fā)展中國家，臨床問題更加嚴重。在這些國家，宮頸癌是婦女中癌癥死亡的頭號病因。

針對上述問題，本發(fā)明提供了一種用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物，能夠快速、準確、方便的診斷宮頸炎和宮頸癌疾病。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明第一個方面提供了一種用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物，至少包括5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷、苯基乳酸一種或幾種的組合。

本發(fā)明第二個方面提供了一種用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括：5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'—單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖一種或幾種的組合。

本發(fā)明第三個方面提供了一種用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括：組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯一種或幾種的組合。

本發(fā)明第四個方面提供了獲取上述的生物標志物組合物的方法，步驟至少包括，

獲取受試者樣品，并進行前處理；

將上述前處理的受試者樣品進行GC-MS或者LC-MS進行檢測，并收集數(shù)據(jù)；

分析上述收集數(shù)據(jù)，獲取可行的標志物。

本發(fā)明第五個方面提供了生物標志物組合物診斷宮頸炎的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸炎。

本發(fā)明第六個方面提供了生物標志物組合物診斷宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

本發(fā)明第七個方面提供了生物標志物組合物區(qū)分宮頸炎和宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

本發(fā)明第八個方面提供了用于確定患有宮頸癌的受試者是否將對療法有反應(yīng)的方法，所述方法包括：

在受試者的樣品中測定上述的一種或多種生物標志物組合物的水平；

將受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，其中與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比，受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述療法有反應(yīng)。

本發(fā)明第九個方面提供了用于患有宮頸癌的受試者中監(jiān)測治療功效的方法，所述方法包括：

在開始所述治療之前，在來自受試者的第一樣品中測定上述一種或多種生物標志物組合物的水平；

在已給予所述治療的至少一部分之后，在來自受試者的第二樣品中測定上述一種或多種生物標志物組合物的水平；

將第一樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對應(yīng)第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述治療有療效。

本發(fā)明第十個方面提供了用于確定受試者是否具有或?qū)l(fā)展宮頸癌的試劑盒，所述試劑盒包括上述生物標志物組合物。

說明書附圖

圖1：實施例15，以5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸為標志物的ROC圖；

圖2：實施例16，以以5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'—單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖組合為標志物的ROC圖；

圖3：實施例17，以以組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯組合為標志物的ROC圖；

具體實施方式

參選以下本發(fā)明的優(yōu)選實施方法的詳述以及包括的實施例可更容易地理解本發(fā)明的內(nèi)容。除非另有限定，本文使用的所有技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。當存在矛盾時，以本說明書中的定義為準。

當量、濃度、或者其它值或參數(shù)以范圍、優(yōu)選范圍、或一系列上限優(yōu)選值和下限優(yōu)選值限定的范圍表示時，這應(yīng)當被理解為具體公開了由任何范圍上限或優(yōu)選值與任何范圍下限或優(yōu)選值的任一配對所形成的所有范圍，而不論該范圍是否單獨公開了。例如，當公開了范圍“1至5”時，所描述的范圍應(yīng)被解釋為包括范圍“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。當數(shù)值范圍在本文中被描述時，除非另外說明，否則該范圍意圖包括其端值和在該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分數(shù)。

單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)討論對象，除非上下文中另外清楚地指明?！叭芜x的”或者“任意一種”是指其后描述的事項或事件可以發(fā)生或不發(fā)生，而且該描述包括事件發(fā)生的情形和事件不發(fā)生的情形。

說明書和權(quán)利要求書中的近似用語用來修飾數(shù)量，表示本發(fā)明并不限定于該具體數(shù)量，還包括與該數(shù)量接近的可接受的而不會導(dǎo)致相關(guān)基本功能的改變的修正的部分。相應(yīng)的，用“大約”、“約”等修飾一個數(shù)值，意為本發(fā)明不限于該精確數(shù)值。在某些例子中，近似用語可能對應(yīng)于測量數(shù)值的儀器的精度。在本申請說明書和權(quán)利要求書中，范圍限定可以組合和/或互換，如果沒有另外說明這些范圍包括其間所含有的所有子范圍。

此外，本發(fā)明要素或組分前的不定冠詞“一種”和“一個”對要素或組分的數(shù)量要求(即出現(xiàn)次數(shù))無限制性。因此“一個”或“一種”應(yīng)被解讀為包括一個或至少一個，并且單數(shù)形式的要素或組分也包括復(fù)數(shù)形式，除非所述數(shù)量明顯旨指單數(shù)形式。

如本文所用，以下術(shù)語的每一個具有與其在本部分中相關(guān)的含義。冠詞"一個"和"一種"在本文用于指該冠詞的一個或超過一個(即至少一個)的語法對象。例如，"要素"意指一個要素或超過一個要素。

如本文所用，術(shù)語“靈敏度”定義為測定(例如,方法,測試)性能的統(tǒng)計學(xué)量度，通過真陽性數(shù)除以真陽性和假陰性的和來計算。

如本文所用，術(shù)語“特異性”定義為測定(例如,方法,測試)性能的統(tǒng)計學(xué)量度，通過真陰性數(shù)除以真陰性和假陽性之和來計算。

如本文所用，術(shù)語“信息指示的”或“信息指示”指稱標志物或標志物組的質(zhì)量，及特別指稱在陽性樣品中發(fā)現(xiàn)標志物(或標志物組)的似然性。

如本文所用，術(shù)語“標志物”或“生物標志物”是與另一種表型狀態(tài)(例如未患有疾病)相比，在取自一種表型狀態(tài)(例如患有疾病)的受試者的樣品中差別存在的有機生物分子。如果在不同組中生物標志物的平均或中位水平、例如表達水平經(jīng)計算為統(tǒng)計學(xué)顯著的，則生物標志物在不同的表型狀態(tài)中差別存在。統(tǒng)計學(xué)顯著性的常見檢驗特別包括t-檢驗、ANOVA、Kruskal-Wallis、Wilcoxon、Mann-Whitney和優(yōu)勢比。單獨或組合的生物標志物提供受試者屬于一種表型狀態(tài)或另一種表型狀態(tài)的相對風(fēng)險的度量。因此，它們用作標志物，例如，用于疾病(預(yù)后和診斷)、藥物的治療功效(治療診斷學(xué))和藥物毒性的標志物。

用于本發(fā)明的生物標志物組合物和方法的標志物的準確性可通過接收器工作特征曲線(“ROC曲線”)來表征。ROC是對于診斷標志物的不同可能的割點的真陽性率相對假陽性率的曲線。ROC曲線顯示靈敏性和特異性之間的關(guān)系。即是說，靈敏性的增加將伴隨特異性的降低。曲線越靠近ROC空間的左軸，然后頂緣，標志物越準確。相反地，曲線越靠近ROC圖的45度對角線，標志物越不準確。ROC下的面積是標志物準確性的度量。標志物的準確性取決于標志物如何適當?shù)貙⒋郎y試的組分成具有所述疾病的組和不具有所述疾病的組。曲線下面積(稱為“AUC”)為1表示完美的標志物，而面積為0.5表示有用性較差的標志物。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明的生物標志物和方法的AUC大于約0.50、大于約0.60或大于約0.70。

如本文所用，術(shù)語“宮頸炎”，指和宮頸組織或子宮頸細胞相關(guān)的任何發(fā)炎性病變。包括但不限于宮頸息肉、宮頸糜爛、宮頸納囊、黏液膿性宮頸炎、宮頸糜爛、宮頸管息肉、宮頸肥大和宮頸腺囊腫等疾病。

如本文所用，術(shù)語“宮頸癌”，指和宮頸組織或子宮頸細胞相關(guān)的任何癌癥或癌癥病變。包括但不限于子宮原位癌、擴散性癌、轉(zhuǎn)移癌以及癌前狀態(tài)(如，發(fā)育異常，包括CIN或SIL)?；贖PV型和宮頸癌以及癌前病變的相關(guān)性已將其分為高危型和低危型類別。低危HPV型包括6、11、42、43、44型，并且和增加的宮頸癌風(fēng)險無關(guān)。相反地，高危HPV型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型，和宮頸癌以及鱗狀上皮內(nèi)病變強烈相關(guān)。

如本文所用，術(shù)語"受試者"指稱任何動物(例如,哺乳動物)，包括但不限于人，非-人靈長類動物，嚙齒動物等，尤其是特定處理的受試者。一般而言，在說到人受試者時，術(shù)語"受試者"和"患者"在本文互換使用。

如本文所用，術(shù)語“標志物的水平”或“生物標志物的水平”是指在待測試的樣品中存在的標志物的量。標志物的水平可以是絕對水平或量(例如μg/ml)或相對水平或量(例如相對信號強度)。

如本文所用，標志物的“更高水平”或“水平增加”是指大于用于評估標志物水平的測定法的標準誤差的試驗樣品中的標志物水平，和優(yōu)選為對照樣品中標志物水平。

如本文所用，標志物的“更低水平”或“水平降低”是指小于用于評估標志物水平的測定法的標準誤差的試驗樣品中的標志物的水平，和優(yōu)選為對照樣品中標志物水平。

如本文所用，術(shù)語“已知的標準水平”或“對照水平”是指標志物的公認的或預(yù)定的水平，其用于比較源自受試者的樣品中的標志物的水平。

標志物的對照水平基于來自具有正常健康的受試者的樣品中的標志物的水平。

在一些實施方式中，標志物的對照水平基于來自具有診斷宮頸炎和宮頸癌的一個或多個受試者的樣品中的標志物的水平。

本發(fā)明也涉及用于診斷、疾病分期、預(yù)測、監(jiān)測和治療子宮頸癌的各種方法、試劑和試劑盒。

如本文所用的，術(shù)語"患者"或“受試者”是指人和非人動物，例如獸醫(yī)學(xué)患者。術(shù)語“非人動物”包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，例如非人靈長類動物、小鼠、兔、綿羊、狗、貓、馬、奶牛、雞、兩棲動物和爬行動物。在一個實施方案中，所述受試者是人。

如本文所用，術(shù)語"非-人動物"指稱全部非-人動物包括，但不限于，脊椎動物，諸如嚙齒動物，非-人靈長類動物，綿羊，牛，反芻動物，兔類動物，豬，山羊，馬科動物，犬科動物，貓科動物，鳥類，等。

在一些實施方案中，受試者的體重指數(shù)(BMI)為小于約40kg/m2(例如約40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19或約18kg/m²)。在其它實施方案中，受試者的體重指數(shù)(BMI)為大于約40kg/m²(例如約41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或約80kg/m²)。

本文所用的術(shù)語“樣品”是指自受試者分離的類似細胞或組織的收集物，以及在受試者內(nèi)存在的組織、細胞和流體。術(shù)語“樣品”包括來自受試者的任何體液(例如血液、淋巴、婦科流體、囊液、尿液、眼淚和通過支氣管灌洗和/或腹膜沖洗收集的流體)或細胞。在一個實施方案中，從受試者取出所述組織或細胞。在另一實施方案中，所述或細胞存在于所述受試者內(nèi)。其它受試者樣品包括淚滴、血清、腦脊液、糞便、痰和細胞提取物。在一個實施方案中，生物學(xué)樣品包含來自測試受試者的蛋白分子。在另一實施方案中，生物學(xué)樣品可包含來自測試受試者的mRNA分子或來自測試受試者的基因組DNA分子。

術(shù)語"測定"意指包括檢測樣品中標志物的存在或不存在、定量測定樣品中標志物的量、和/或確定生物標志物的類型的方法。測量可通過本領(lǐng)域已知的方法和本文進一步描述的那些方法實現(xiàn)。

如本文所用的，術(shù)語"調(diào)節(jié)"的各種形式意圖包括刺激(例如增加或增量調(diào)節(jié)特定的反應(yīng)或活性)和抑制(例如降低或減量調(diào)節(jié)特定的反應(yīng)或活性)。

試劑盒是包含特異性檢測本發(fā)明的標志物的至少一種試劑例如探針、引物或抗體的任何制品(例如包裝或容器)，所述制品作為用于進行本發(fā)明的方法的一個單位來推銷、分配或銷售。在某些實施方案中，試劑盒可包括基質(zhì)，例如包含本發(fā)明的一種或多種標志物的捕獲試劑和/或與本發(fā)明的一種或多種標志物結(jié)合的捕獲試劑的基質(zhì)。在一些實施方案中，這樣的試劑盒包含用于使用質(zhì)譜測定標志物的水平的使用說明書。

標志物組合物

本發(fā)明第一個方面提供了一種用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物，至少包括5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷、苯基乳酸一種或幾種的組合。

術(shù)語“標志物”即生物標志物，可以標記系統(tǒng)、器官、組織、細胞及亞細胞結(jié)構(gòu)或功能的改變或可能發(fā)生的改變的生化指標，具有非常廣泛的用途。生物標志物可用于疾病診斷、判斷疾病分期或者用來評價新藥或新療法在目標人群中的安全性及有效性。生物標志物是生物體受到嚴重損害之前，在不同生物學(xué)水平(分子、細胞、個體等)上因受環(huán)境污染物影響而異?；男盘栔笜?。它可以對嚴重毒性傷害提供早期警報。這種信號指標可以是細胞分子結(jié)構(gòu)和功能的變化、可以是某一生化代謝過程的變化或生成異常的代謝產(chǎn)物或其含量，可以是某一生理活動或某一生理活性物質(zhì)的異常表現(xiàn)，可以是個體表現(xiàn)出的異常現(xiàn)象，可以是種群或群落的異常變化，可以是生態(tài)系統(tǒng)的異常變化。

在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物是5'-尿苷酸二鈉。在一個實施方案中，生物標志物組合物是組胺。在一個實施方案中，生物標志物組合物是3'—甲氧基鳥苷。在一個實施方案中，生物標志物組合物是苯基乳酸。

在本發(fā)明的其它方面，超過一種標志物，例如多種標志物，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或更多種標志物，可用于本發(fā)明的生物標志物組合物。例如，在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉和組胺。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉和3'—甲氧基鳥苷。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉和苯基乳酸。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括組胺和3'-甲氧基鳥苷。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括組胺和苯基乳酸。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉、組胺和3'-甲氧基鳥苷。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉、組胺和苯基乳酸。在一個實施方案中，用于本發(fā)明生物標志物組合物包括5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸。

在一種優(yōu)選的實施方式中，所述用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物的P值小于0.05。

閾值(P值)：統(tǒng)計學(xué)上的量，代表結(jié)果顯著性。P值<0.05代表隨機誤差產(chǎn)生這種結(jié)果的概率小于0.05。

本發(fā)明第二個方面提供了一種用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括：5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'-單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖一種或幾種的組合。

在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括L-半胱氨酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括異檸檬酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括二磷酸尿苷葡糖。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括一磷酸腺苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括次黃苷5'-單磷酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括L-六氫吡啶羧酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括N-乙酰腐胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括蔗糖。

在本發(fā)明的其它方面，超過一種標志物，例如多種標志物，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或更多種標志物，可用于本發(fā)明的生物標志物組合物。例如，在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和L-半胱氨酸的組合。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和異檸檬酸的組合。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和二磷酸尿苷葡糖的組合。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和一磷酸腺苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和次黃苷5'-單磷酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和L-六氫吡啶羧酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和N-乙酰腐胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括5'-尿苷酸二鈉和蔗糖。

在一種最優(yōu)選的實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括：5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'-單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖的組合。

在一種優(yōu)選的實施方式中，所述用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物的P值小于0.05。

閾值(P值)：統(tǒng)計學(xué)上的量，代表結(jié)果顯著性。P值<0.05代表隨機誤差產(chǎn)生這種結(jié)果的概率小于0.05。

本發(fā)明第三個方面提供了一種用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括：組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯的組合。

在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括苯基乳酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括檸康酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括L-2-氨基己二酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括3'-O-甲氧基鳥苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括β-D-葡萄糖胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括甘油。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括膽固醇硫酸酯。

在本發(fā)明的其它方面，超過一種標志物，例如多種標志物，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或更多種標志物，可用于本發(fā)明的生物標志物組合物。例如，在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和苯基乳酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和檸康酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和L-2-氨基己二酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和3'-O-甲氧基鳥苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和β-D-葡萄糖胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和甘油。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺和膽固醇硫酸酯。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和檸康酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和L-2-氨基己二酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和3'-O-甲氧基鳥苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和β-D-葡萄糖胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和甘油。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸和膽固醇硫酸酯。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸和L-2-氨基己二酸。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸和3'-O-甲氧基鳥苷。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸和β-D-葡萄糖胺。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸和甘油。在一種實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸和膽固醇硫酸酯。

在一種最優(yōu)的實施方式中，所述用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯的組合。

本發(fā)明的第四個方面提供了一種獲取上述生物標志物組合物的方法，其步驟至少包括，

獲取受試者樣品，并進行前處理；

將上述前處理的受試者樣品進行GC-MS或者LC-MS進行檢測，并收集數(shù)據(jù)；

分析上述收集數(shù)據(jù)，獲取可行的標志物。

本發(fā)明中采用血漿學(xué)代謝組學(xué)的方法來篩查并鑒定獲取生物標志物組合物。

代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)之后迅速崛起的一門新興學(xué)科，已成為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。代謝組學(xué)是研究生物體系受外部刺激或擾動后所產(chǎn)生的內(nèi)源性代謝物整體及其變化規(guī)律的科學(xué)，是探明生物體系代謝途徑的研究方法細胞內(nèi)許多生命活動發(fā)生于代謝層面，如細胞信號釋放、能量傳遞、細胞間通信等，機體內(nèi)任何生理或病理改變都離不開代謝過程及其組分的變化。

代謝組學(xué)的研究樣本可以是生物體液(如血漿、尿液、唾液等)、細胞提取物、細胞培養(yǎng)液和組織等。其中心任務(wù)包括檢測、量化和編錄生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其變化規(guī)律，并且通過這種變化規(guī)律探究所發(fā)生的生物學(xué)事件或過程的本質(zhì)。代謝組學(xué)的研究對象是相對分子質(zhì)量1000Da以下的小分子物質(zhì)，包括：糖類、氨基酸、脂類、有機酸、肉堿等。

代謝組學(xué)的研究，一般包括樣品的采集及制備、代謝物組數(shù)據(jù)的采集、預(yù)處理、多變量統(tǒng)計分析和代謝途徑分析等步驟：獲取生物樣本、樣品前處理、進行分析測試技術(shù)的分析處理、靶向或非靶向分析、數(shù)據(jù)預(yù)處理、多元變量分析和可能的生物標志物的確定。

樣品的采集和制備是代謝組學(xué)研宄中的最初始的步驟，也是最重要的步驟之一?？蓱?yīng)用于代謝組學(xué)研宄的體液除常見的血液(血清、血漿)和尿液外，還包括：腦脊液，腹水，羊水，精液，消化液，肺吸氣等。

目前，常用的分析測試技術(shù)為以核磁共振譜(NMR)、質(zhì)譜(MS)為核心的分析技術(shù)以及色譜與波譜聯(lián)用技術(shù)，包括：NMR、LC-NMR或LC-NMR-MS、LC-MS和GC-MS等。NMR技術(shù)具有無偏向性、無損傷樣品等特點，但該技術(shù)靈敏度低、檢測動態(tài)范圍窄。MS及MS/MS技術(shù)具有較高的靈敏度和專屬性，可以實現(xiàn)多個化合物的同時快速檢測和定量分析。

數(shù)據(jù)預(yù)處理與分析：在代謝組學(xué)研究中，海量數(shù)據(jù)的預(yù)處理、分析和管理需要專門的數(shù)學(xué)、統(tǒng)計學(xué)和生物信息學(xué)工具。其中，NMR譜數(shù)據(jù)需要首先把譜信號分成很多小單元(bins)，然后進行基線校正和整合,降低水抑制效應(yīng)帶來的變異和尿素的交叉馳豫效應(yīng)；基于MS的分析方法，是對一定質(zhì)荷比(zw/z)范圍進行全掃描的基礎(chǔ)上，將獲得的數(shù)據(jù)分成若干小窗，方便計算機分區(qū)域進行峰匹配。

由于生物樣品中代謝物組分復(fù)雜、含量差異大，高含量化合物容易掩蓋低含量化合物的變化，往往使一些含量較低但具有重要生物學(xué)意義的代謝物組分不能被識別。因此，需要對數(shù)據(jù)進行標度化，以消除不同代謝物的尺度差異。

多元變量分析：也稱多變量分析或者多元統(tǒng)計分析，主要研究多個變量的集合之間的關(guān)系以及具有這些變量的個體之間的關(guān)系。簡單地說，就是研究n個觀測對象集合之間特征的方法，其中對每個對象觀測p個因素(變量)。觀測對象的集合可以是整個集合，也可以是取自較大集合的一個或多個子集；可以是固定的，也可以是隨機的；可以是類型變量，也可以是數(shù)量變量；數(shù)量變量可以是連續(xù)的，也可以是離散的；并且變量集本身可以是取自較大變量集合的一個或多個子集。

在一種實施方式中，所述受試者樣品可以是固體、液體，也可以是細胞、微生物等。

在一種實施方式中，當所述受試者樣品為固體時，所述具體前處理的方法為：將100mg固體溶于400μL提取試劑，加入鋼珠進行研磨，所述研磨的條件為30Hz，7分鐘；然后進行離心，取上清。

若要進行GC-MS測試，可進行濃縮干燥。所述濃縮干燥的步驟為將上清中加入20mg/ml的甲氧胺，在60℃下干燥30min，然后加入試劑BSTFA下進行衍生化處理2小時后，進行測試。

若要進行LC-MS測試，則只需將上清液進行濃縮干燥，加入100μL乙腈進行復(fù)溶，經(jīng)過濾塞，可直接進行LC-MS測試。

在一種實施方式中，所述受試者樣品為液體時，例如血清、尿液等。所述具體前處理的方法為：100μL液體加入400μL甲醇中，進行斡旋混勻，高速離心，取上清液，進行測試。

若要進行GC-MS測試，可進行濃縮干燥。所述濃縮干燥的步驟為將上清中加入20mg/ml的甲氧胺，在60℃下干燥30min，然后加入試劑BSTFA下進行衍生化處理2小時后，進行測試。

若要進行LC-MS測試，則只需將上清液進行濃縮干燥，加入100μL乙腈進行復(fù)溶，經(jīng)過濾塞，可直接進行LC-MS測試。

在一種實施方式中，所述受試者樣品為微生物時，所述處理方式與細胞的處理方式一樣。

本發(fā)明第五個方面提供了生物標志物組合物診斷宮頸炎的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸炎。

在一種實施方式中，所述受試者的組織樣本可以流體樣本或組織樣本。所述流體樣本可以是體液，所述體液包括，例如，血液、淋巴液、腹水、婦科分泌液、子宮液、子宮沖洗收集液、子宮滲出液、子宮頸滲出液、膽囊液、胸膜液、尿液和通過陰道沖洗收集的液體等。

所述對照樣品可以是健康受試者的樣品。

本發(fā)明第六個方面提供了生物標志物組合物診斷宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

在一種實施方式中，所述受試者的組織樣本可以流體樣本或組織樣本。所述流體樣本可以是體液，所述體液包括，例如，血液、淋巴液、腹水、婦科分泌液、子宮液、子宮沖洗收集液、子宮滲出液、子宮頸滲出液、膽囊液、胸膜液、尿液和通過陰道沖洗收集的液體等。

所述對照樣品可以是健康受試者的樣品。

本發(fā)明第七個方面提供了生物標志物組合物區(qū)分宮頸炎和宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

本發(fā)明第八個方面提供了用于確定患有宮頸癌的受試者是否將對療法有反應(yīng)的方法，所述方法包括：

在受試者的樣品中測定上述的一種或多種生物標志物組合物的水平；

將受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，其中與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比，受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述療法有反應(yīng)。

本發(fā)明第九個方面提供了用于患有宮頸癌的受試者中監(jiān)測治療功效的方法，所述方法包括：

在開始所述治療之前，在來自受試者的第一樣品中測定上述一種或多種生物標志物組合物的水平；

在已給予所述治療的至少一部分之后，在來自受試者的第二樣品中測定上述一種或多種生物標志物組合物的水平；

將第一樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對應(yīng)第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述治療有療效。

本發(fā)明第十個方面提供了用于確定受試者是否具有或?qū)l(fā)展宮頸癌的試劑盒，所述試劑盒包括上述生物標志物組合物。

試劑盒用于評估患者是否患宮頸炎的試劑盒。所述“試劑盒”是指包含至少一種用于特異性地檢測本發(fā)明生物標志物表達的試劑，例如抗體、核酸探針等的任何產(chǎn)品(例如，包裝盒或容器)。所述試劑盒包含一種用于評估本發(fā)明標記物表達的試劑。所述試劑盒包含一種用于評估本發(fā)明標記物表達的試劑，和可還包含一或多種上述試劑。

在本發(fā)明的任何方法和試劑盒中，獲自受試者的樣品中本發(fā)明的標志物的水平可通過各種眾所周知的技術(shù)和方法中任一種來測定，其將樣品中的本發(fā)明的標志物轉(zhuǎn)化成可檢測和定量的部分。這樣的方法的非限制性實例包括使用用于檢測蛋白質(zhì)的免疫學(xué)方法、蛋白質(zhì)純化方法、蛋白質(zhì)功能或活性測定法、核酸雜交方法、核酸逆轉(zhuǎn)錄方法和核酸擴增方法、免疫印跡法、但報紙印跡法、RNA印跡法、電子顯微術(shù)、質(zhì)譜法、免疫沉淀、免疫熒光、免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸附測定法、基于血液的定量測定法、基于尿液的定量測定法、流式細胞術(shù)、DNA雜交、陳列分析等和其組合或亞組合分析樣品。

試劑盒可以作為進行本發(fā)明方法的單位形式推銷、分發(fā)或銷售。此外，試劑盒可包含描述試劑盒和其使用方法的說明書。

本發(fā)明的試劑盒可進一步包括用于培養(yǎng)獲自受試者的樣品的試劑。

在一種優(yōu)選的實施方式中，試劑盒經(jīng)設(shè)計用于人類受試者。

本發(fā)明通過以下實施例作進一步說明，實施例不應(yīng)解釋為進一步限制。本申請全文所引用的所有參考文獻、專利和公開的專利申請的內(nèi)容，以及附圖，明確地通過引用以其整體結(jié)合到本文中。

實施方式

實施方式1：實施方式1提供了一種用于診斷宮頸炎和宮頸癌的生物標志物組合物，至少包括5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷、苯基乳酸一種或幾種的組合。

實施方式2：實施方式2提供了一種用于診斷宮頸炎的生物標志物組合物，包括：5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'—單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖一種或幾種的組合。

實施方式3：實施方式3提供了用于診斷宮頸癌的生物標志物組合物，包括：組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯一種或幾種的組合。

實施方式4：實施方式4提供了獲取權(quán)利要求實施方式1至實施方式3所述的生物標志物組合物的方法，步驟至少包括，

獲取受試者樣品，并進行前處理；

將上述前處理的受試者樣品進行GC-MS或者LC-MS進行檢測，并收集數(shù)據(jù)；

分析上述收集數(shù)據(jù)，獲取可行的標志物。

實施方式5：實施方式5提供了生物標志物組合物診斷宮頸炎的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定實施方式2所述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸炎。

實施方式6：實施方式6提供了實施方式3所述的生物標志物組合物診斷宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定實施方式3所述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

實施方式7：實施方式7提供了實施方式1所述的生物標志物組合物區(qū)分宮頸炎和宮頸癌的方法，所述方法包括：

在受試者的組織樣本中測定實施方式1所述生物標志物組合物的水平；

在正常對照組的組織樣本中測定上述生物標志物組合物的水平；

其中，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平和正常對照組樣本的水平相比，受試者樣本中所述生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者具有宮頸癌。

實施方式8：實施方式8提供了用于確定患有宮頸癌的受試者是否將對療法有反應(yīng)的方法，所述方法包括：

在受試者的樣品中測定實施方式3所述的一種或多種生物標志物組合物的水平；

將受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，其中與對照樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比，受試者樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述療法有反應(yīng)。

實施方式9：實施方式3提供了用于患有宮頸癌的受試者中監(jiān)測治療功效的方法，所述方法包括：

在開始所述治療之前，在來自受試者的第一樣品中測定實施方式2中所述一種或多種生物標志物組合物的水平；

在已給予所述治療的至少一部分之后，在來自受試者的第二樣品中測定實施方式3中所述一種或多種生物標志物組合物的水平；

將第一樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平與對應(yīng)第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平相比較，第二樣品中的一種或多種生物標志物組合物的水平的差異指示所述受試者將對所述治療有療效。

實施方式10：實施方式10提供了用于確定受試者是否具有或?qū)l(fā)展宮頸癌的試劑盒，所述試劑盒包括如實施方式3所述的一種或多種生物標志物組合物。

具體實施例

分組：分為慢性宮頸炎組、急性宮頸炎組、宮頸癌組；

選取1500個受試者，其中患有宮頸癌500人；患有慢性宮頸炎500人；患有急性宮頸炎500人。

一、獲取標志物

步驟：1、獲取受試者血液，并進行前處理：100μL液體加入400μL甲醇中，進行斡旋混勻，高速離心，取上清液，進行濃縮干燥，加入100μL乙腈進行復(fù)溶，經(jīng)過濾塞，可直接進行UHPLC-QQQ-MS測試；收集UHPLC-QQQ-MS數(shù)據(jù)，進行多元變量統(tǒng)計分析。

采用UHPLC-QQQ-MS定量驗證后發(fā)現(xiàn)宮頸炎組，與正常人組相比，特異高表達物質(zhì)有：5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷、苯基乳酸。對數(shù)據(jù)進行t檢驗，以T-test的p值(閾值<0.05)來確定差異性表達代謝物，

標志物組合物診斷區(qū)分宮頸炎和宮頸癌

實施例1以5'-尿苷酸二鈉為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.5455，診斷靈敏度為89.66％，特異度為50％。

實施例2以組胺為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7853，診斷靈敏度為68.97％，特異度為13.64％。

實施例3以3'-甲氧基鳥苷為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7457，診斷靈敏度為45.45％，特異度為13.79％。

實施例4以苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7226，診斷靈敏度為89.66％，特異度為45.45％。

實施例5以5'-尿苷酸二鈉和組胺為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8025，診斷靈敏度為86.36％，特異度為31.03％。

實施例6以5'-尿苷酸二鈉和3'-甲氧基鳥苷為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7445，診斷靈敏度為54.55％，特異度為6.89％。

實施例7以5'-尿苷酸二鈉和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7884，診斷靈敏度為63.64％，特異度為13.79％。

實施例8以組胺和3'-甲氧基鳥苷為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8339，診斷靈敏度為77.27％，特異度為17.24％。、

實施例9以組胺和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8464，診斷靈敏度為86.36％，特異度為20.69％。

實施例10以3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.7351，診斷靈敏度為72.73％，特異度為20.69％。

實施例11以5'-尿苷酸二鈉、組胺和3'-甲氧基鳥苷為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8664，診斷靈敏度為93.81％，特異度為13.41％。

實施例12以5'-尿苷酸二鈉、組胺和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8495，診斷靈敏度為68.18％，特異度為10.34％。

實施例13以5'-尿苷酸二鈉、3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8088，診斷靈敏度為54.55％，特異度為3.44％。

實施例14以組胺、3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8511，診斷靈敏度為81.82％，特異度為17.24％。

實施例15以5'-尿苷酸二鈉、組胺、3'-甲氧基鳥苷和苯基乳酸為標志物

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為0.8699，診斷靈敏度為86.36％，特異度為13.79％。

二、診斷宮頸炎

分組：分為正常組、慢性宮頸炎組、急性宮頸炎組；

選取1500個受試者，其中正常健康500人；慢性宮頸炎500人；急性宮頸炎500人。

實施例16以5'-尿苷酸二鈉、L-半胱氨酸、異檸檬酸、二磷酸尿苷葡糖、一磷酸腺苷、次黃苷5'—單磷酸、L-六氫吡啶羧酸、N-乙酰腐胺、蔗糖組合為標志物。

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為1，診斷靈敏度為100％，特異度為0％。

三、診斷宮頸癌

分組：分為正常組、宮頸癌；

選取1000個受試者，其中正常健康500人；宮頸癌500人。

實施例17以組胺、苯基乳酸、檸康酸、L-2-氨基己二酸、3'-O-甲氧基鳥苷、β-D-葡萄糖胺、甘油、膽固醇硫酸酯組合為標志物。

經(jīng)過ROC曲線(受試者工作特征曲線)測試，可知AUC(ROC曲線下的面積)為1，診斷靈敏度為100％，特異度為0％。

前述的實例僅是說明性的，用于解釋本公開的特征的一些特征。所附的權(quán)利要求旨在要求可以設(shè)想的盡可能廣的范圍，且本文所呈現(xiàn)的實施例僅是根據(jù)所有可能的實施例的組合的選擇的實施方式的說明。因此，申請人的用意是所附的權(quán)利要求不被說明本發(fā)明的特征的示例的選擇限制。而且在科技上的進步將形成由于語言表達的不準確的原因而未被目前考慮的可能的等同物或子替換，且這些變化也應(yīng)在可能的情況下被解釋為被所附的權(quán)利要求覆蓋。