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通過質(zhì)譜細(xì)胞術(shù)對組織樣品的多重成像的制作方法

文檔序號:11889738閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)用多個不同的標(biāo)記原子標(biāo)記所述組織樣品中的多個不同的靶分子,以提供標(biāo)記的組織樣品;(ii)使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受具有亞細(xì)胞分辨率的激光燒蝕,以形成多個煙流;和(iii)使煙流經(jīng)受電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

2.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)用多個不同的標(biāo)記原子標(biāo)記所述組織樣品中的多個不同的靶分子,以提供標(biāo)記的組織樣品;(ii)使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受激光燒蝕,以形成多個煙流;和(iii)使煙流經(jīng)受使用飛行時(shí)間質(zhì)量分析器的電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

3.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)用不同的標(biāo)記原子標(biāo)記所述組織樣品中的至少四種不同的靶分子,以提供標(biāo)記的組織樣品;(ii)使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受激光燒蝕,以形成多個煙流;和(iii)使煙流經(jīng)受電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

4.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)用多個不同的標(biāo)記原子標(biāo)記所述組織樣品中的多個不同的靶分子,以提供標(biāo)記的組織樣品;(ii)劃分所述樣品中的單獨(dú)的細(xì)胞;(iii)使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受激光燒蝕,以形成多個煙流;(iii)和使煙流經(jīng)受電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

5.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)用標(biāo)記原子標(biāo)記所述組織樣品中的一個或更多個靶分子,以提供標(biāo)記的組織樣品;(ii)使用4μm或更少的激光光斑尺寸使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受激光燒蝕,以形成多個煙流;和(iii)使煙流經(jīng)受電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

6.一種使包含多個細(xì)胞的組織樣品成像的方法,所述方法包括以下的步驟:(i)提供標(biāo)記的組織樣品,其中多個不同的靶分子已用多個不同的標(biāo)記原子標(biāo)記;(ii)使所述標(biāo)記的組織樣品的多個細(xì)胞在多個已知的位置經(jīng)受具有亞細(xì)胞分辨率的激光燒蝕,以形成多個煙流;和(iii)使煙流經(jīng)受電感耦合等離子體質(zhì)譜法,借此所述煙流中的標(biāo)記原子的檢測允許構(gòu)造所述組織樣品的圖像。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述圖像具有小于2μm的分辨率。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述圖像具有亞細(xì)胞分辨率,并且所述樣品的激光燒蝕以至少10Hz的頻率發(fā)生。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述激光燒蝕使用在0.2-2μm范圍內(nèi)的激光光斑尺寸。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中在具有100ms或更少的沖洗時(shí)間的燒蝕單元中發(fā)生激光燒蝕。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中激光燒蝕(i)在具有30ms或更少的沖洗時(shí)間的燒蝕單元中(ii)以至少20Hz的頻率發(fā)生。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述激光具有2-5J/cm2的能量密度。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述激光是準(zhǔn)分子激光或復(fù)合受激態(tài)激光。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中使用至少20種(例如至少30種或至少50種)具有不同的原子質(zhì)量的不同的標(biāo)記原子。

15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中在標(biāo)記前,所述標(biāo)記原子在所述樣品中基本不存在。

16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述標(biāo)記原子是過渡金屬,諸如鑭系元素。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述標(biāo)記原子具有在80-250范圍內(nèi)的原子質(zhì)量。

18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述質(zhì)譜步驟使用飛行時(shí)間檢測。

19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中靶分子用金屬綴合的抗體和/或用金屬綴合的核酸探針標(biāo)記。

20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中至少一個細(xì)胞內(nèi)的靶和至少一個細(xì)胞表面的靶被標(biāo)記。

21.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組織樣品來自腫瘤或含有腫瘤細(xì)胞。

22.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組織樣品是切片。

23.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中激光燒蝕通過光柵掃描發(fā)生。

24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法,其中所述光柵掃描具有與所述激光光斑尺寸基本相同的步長。

25.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述樣品中的單獨(dú)的細(xì)胞被劃分。

26.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中靶分子被定量。

27.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述樣品在經(jīng)受激光燒蝕前,被用顯微術(shù)分析。

28.一種用四種或更多種過渡金屬(例如稀土金屬)標(biāo)記組織樣品的方法,所述四種或更多種過渡金屬具有不同的原子質(zhì)量。

29.一種使組織樣品成像的方法,其中所述組織樣品的多個細(xì)胞以亞細(xì)胞分辨率經(jīng)受質(zhì)譜細(xì)胞術(shù)。

30.一種使組織樣品成像的方法,其中所述組織樣品的多個細(xì)胞以亞細(xì)胞分辨率經(jīng)受LA-ICP-TOFMS。

31.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法,用于使貼壁細(xì)胞的單層成像或用于使固體表面上固定的細(xì)胞成像,而不是使組織樣品成像。

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