本發(fā)明涉及輸血前檢查領(lǐng)域，特別是一種聚凝胺微孔板輸血前檢測技術(shù)。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)的聚凝胺方法是采用試管，經(jīng)過離心等步驟進行檢測，該方法需要配套的離心機等儀器。但是在急診或者外傷現(xiàn)場，由于患者情況危急，采集標本送檢驗科進行交叉配血需要一段時間，貽誤患者搶救時機。另外在比較偏遠的地區(qū)及國家，由于資源匱乏，沒有離心機等配套設備，開展輸血前檢查難以保證應有的效果。手工聚凝胺法與其它配血方法比較具有靈敏、準確、操作簡便、快速(只需3～5min)等優(yōu)點。目前廣泛應用于臨床輸血前檢查，包括新生兒溶血病、抗體篩選和交叉配血，得到了大家一致好評。目前使用的聚凝胺方法是采用試管，經(jīng)過離心等步驟進行檢測，該方法需要配套的離心機等儀器。但是在東莞地區(qū)的調(diào)查結(jié)果表明，調(diào)查的39家醫(yī)院，只有4家配備有血型血清學專用離心機。大部分醫(yī)院輸血科(血庫)都是采用普通離心機進行標本血型檢測及交叉配血。采用普通離心機對于精確調(diào)整離心時間和離心速度比較困難。血型血清學實驗中，離心速度和時間對結(jié)果具有重要的意義，是導致假陽性和假陰性結(jié)果常見原因之一。東莞屬于經(jīng)濟比較發(fā)達的地區(qū)，醫(yī)療資源相對比較充足。對于一些相對比較落后的地區(qū)，這種現(xiàn)象可能更加嚴重。據(jù)報道，在一些欠發(fā)達的國家和地區(qū)，如越南和泰國等地區(qū)，離心機非常有限。

采用微孔板聚凝胺法進行輸血前檢查，可以一次性同時檢測大量標本。一方面可以保證所有檢測標本的一致性，提高檢測的標準化操作；同時可以大大提高檢測效率，節(jié)約寶貴的時間。目前國內(nèi)也有采用微孔板進行血型檢測及抗體篩選的報告，使用效果很好，但都需要平板離心機等配套設備進行檢測。同時也有商業(yè)的固相微孔板技術(shù)應用于不規(guī)則抗體篩選，該技術(shù)需要專用的儀器，價格比較昂貴。2007年王福成等使用Poseidon數(shù)字血型儀，結(jié)合Tecan RSP樣本處理系統(tǒng)，用于對獻血者ABO血型的常規(guī)檢測，效果較好。但是該方法反應時間為1小時，同時需要使用血型儀進行判讀。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明將傳統(tǒng)的聚凝胺方法進一步進行改良，自行設計微孔板，省去了離心機、試管等器材，建立一種比傳統(tǒng)的試管聚凝胺方法更加簡便、快速的無須離心的微孔板聚凝胺法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是，它依次包含有如下步驟：

A、以生理鹽水配制紅細胞懸液；

B、于微孔板中加血漿2滴，紅細胞懸液1滴；

C、加低離子介質(zhì)液(LIM)，用手輕輕晃動微孔板均勻，室溫孵育1min(圖2)；

D、加2滴0.1~0.15％聚凝胺溶液，混合后靜置30s，再用手輕輕晃動微孔板1~2分鐘，可見明顯的紅細胞凝聚(圖3)；

E、加入重懸液，輕輕晃動微孔板1分鐘左右，觀察結(jié)果；

F、結(jié)果判定：如凝聚散開，則為引起的非特異性凝集，；如凝集不散開，則為抗原抗體結(jié)合的特異性反應(圖4)。

所述A步驟中以生理鹽水配置紅細胞的比例為10％-15％；

所述C步驟中計入的低離子介質(zhì)液為0.2ml。

采用上述方法，本發(fā)明一方面利用聚凝胺技術(shù)檢測靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，同時融合微孔板適合大規(guī)模操作、標準化操作的優(yōu)點，以適用于落后地區(qū)以及緊急又沒有離心機等配套設備情況下進行輸血前檢查。

附圖說明

圖1為本發(fā)明微孔板的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明紅細胞抗原與血清中的抗體反應示意圖；

圖3為紅細胞非特異性聚集示意圖；

圖4為檢測結(jié)果示意圖。

本發(fā)明目的、功能及優(yōu)點將結(jié)合實施例，參照附圖做進一步說明。

具體實施方式

參考1-4圖，本發(fā)明通過改良手工聚凝胺方法，第一改變所用的耗材及配套設施，改用自行設計的微孔板(圖1)，不需要試管及離心機；第二，改變聚凝胺試劑的濃度和量。聚凝胺是一種四胺聚合物，可中和紅細胞上的負電荷，降低Zeta電位，縮短細胞間距離，在低濃度的情況下，當紅細胞間的距離縮短后通過離心可以形成一種可逆性非特異性的紅細胞凝聚現(xiàn)象；當聚凝胺濃度升高后，紅細胞直接形成非特異性的紅細胞凝聚。當重新恢復紅細胞表面的負電荷后，紅細胞間由于負電荷的排斥，紅細胞凝聚現(xiàn)象消失，而真正的由于紅細胞抗原抗體引起的凝集，抗原抗體的親和力不消失。本發(fā)明建立的無須離心聚凝胺微孔板輸血前檢測技術(shù)，主要操作如下：A、以生理鹽水配制紅細胞懸液；B、于微孔板中加血漿2滴，紅細胞懸液1滴；C、加低離子介質(zhì)液(LIM)2ml，用手輕輕晃動微孔板均勻，室溫孵育1min(圖2)；D、加2滴0.1~0.15％聚凝胺溶液，混合后靜置30s，再用手輕輕晃動微孔板1~2分鐘，可見明顯的紅細胞凝聚(圖3)；E、加入重懸液，輕輕晃動微孔板1分鐘左右，觀察結(jié)果；F、結(jié)果判定：如凝聚散開，則為引起的非特異性凝集，；如凝集不散開，則為抗原抗體結(jié)合的特異性反應(圖4)。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，并非因此限制本專利范圍，凡是利用本明書及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。