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一種納米探針誘導酶聚合放大電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法與流程

文檔序號:12155919閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟一、納米探針的制備:在金納米粒子溶液中緩慢加入5’末端巰基標記癌胚抗原核酸適體信號探針溶液,反應后陳化,然后離心、洗滌、離心、重懸;

步驟二、電化學傳感器的制備:(a)金電極的清洗:以NaBH4溶液浸泡后打磨,然后超聲清洗;(b)自清潔表面的制備:室溫下在金電極表面自組裝3’末端標記巰基的癌胚抗原核酸適體捕獲探針溶液,然后用HS-(CH2)11-EG2-OH室溫下浸泡封閉,得到自清潔表面;(c)納米探針的修飾:在自清潔表面滴加癌胚抗原溶液反應不少于1小時,滴加納米探針溶液反應不少于1小時;(d)末端延伸:在末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶的作用下,在步驟(c)修飾到金電極表面的5’端巰基標記癌胚抗原核酸適體信號探針的3’端延伸生物素標記的核酸長鏈,加入親和素標記的辣根過氧化物酶反應不少于15min,通過生物素-親和素相互作用,在電極表面修飾辣根過氧化物酶,制得電化學傳感器;

步驟三、電化學信號檢測:將制備完成的電化學傳感器放在三電極體系中以循環(huán)伏安法和時間電流曲線法進行檢測,得到電化學信號。

2.如權利要求1所述的納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,步驟一中,采用的重懸溶劑為含有1wt%吐溫的PBS溶液,其中金納米粒子的粒徑為30nm,其溶液濃度為1nmol/L;5’末端巰基標記癌胚抗原核酸適體信號探針的溶液濃度為0.5-15μmol/L。

3.如權利要求1所述的納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,步驟二(b)中,3’端巰基標記癌胚抗原捕獲探針的濃度為0.5-5μmol/L,自組裝時間不小于4小時;HS-(CH2)11-EG2-OH的濃度為0.5-2.5mmol/L,浸泡時間不小于4小時。

4.如權利要求1所述的納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,步驟二(d)中,末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶的濃度為1U,生物素標記的核苷酸為生物素標記的腺嘌呤脫氧核糖核苷酸,濃度為5.7μmol/L,延伸時間不小于1小時。

5.如權利要求1所述的納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,步驟三中,電化學檢測體系為三電極體系,工作電極為金電極,參比電極為Ag/AgCl電極,對電極為鉑絲電極,其中,電解液為3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺溶液,循環(huán)伏安法掃描高電位為0.7V,低電位為0V,掃描速度為0.1V/s;時間電流曲線法的掃描電位為0.1V,掃描時間為100s。

6.如權利要求1所述的納米探針誘導酶聚合放大的電化學核酸適體傳感器檢測癌胚抗原的方法,其特征在于,步驟一和二中,所述核酸適體序列如下:所述的5’末端巰基標記癌胚抗原核酸適體信號探針序列為:5’-SH-TTT TTT TTT TCC CAT AGG GAA GTG GGG GA-3’;所述的3’末端巰基標記癌胚抗原核酸適體捕獲探針序列為:5’-TTA ACT TAT TCG ACC ATA TTT TTT TTT T-SH-3’。

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