本公開要求于2013年12月27日提交的PCT/US2013/078036的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過參考的方式并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開通常涉及流體分析器，更加尤其地涉及用于攪動(dòng)液體的方法和設(shè)備。此外，本公開涉及包括至少兩個(gè)容器的流體分析器，該容器具有圓角矩形形狀且具有容納液體的空腔，該液體包括至少一種試劑。

背景技術(shù)：

自動(dòng)分析器用于分析包括從患者收集的生物材料的樣品用于診斷的目的。通常地，樣品的分析涉及樣品與液體容器中一個(gè)或多個(gè)試劑發(fā)生的反應(yīng)。一些自動(dòng)分析器將試劑存儲(chǔ)于位于傳送帶上的容器中。當(dāng)需要特定試劑時(shí)，該傳送帶進(jìn)行旋轉(zhuǎn)以將容納試劑的容器移動(dòng)至臨近的抽吸/分配裝置。該傳送帶通過加速和減速的方式移動(dòng)，這對(duì)試劑施加了旋轉(zhuǎn)力使得微粒分散在試劑中。然而，容器中的部分微粒可能積聚在容器的底部。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

定義

下列術(shù)語與本公開相關(guān)：

“大約”是指與所述數(shù)值大約a+/-10％的變化。我們可以這樣理解，所述變化總是包含在本文提供的任何給定數(shù)值之內(nèi)，無論是否對(duì)此進(jìn)行特別說明。

“抗體”和“多個(gè)抗體”是指單克隆抗體、多特異性抗體、人抗體、人源化抗體(全部或部分人源化)、動(dòng)物抗體(例如但不限于，鳥(例如，鴨子或鵝))，鯊魚，鯨魚，以及哺乳動(dòng)物，包括非靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，牛、豬、駱駝、羊駝、馬、山羊、兔子、綿羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠、小鼠，等等)或者非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，猴子、猩猩，等等)、親和力成熟抗體、重組抗體、嵌合抗體、單鏈Fv(“scFv”)、單鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)₂片段、二硫鍵連接的Fv(“sdFv”)、以及抗獨(dú)特型(“抗Id”)抗體、雙結(jié)構(gòu)域抗體、雙可變結(jié)構(gòu)域(DVD)或三可變結(jié)構(gòu)域(TVD)抗體(雙可變結(jié)構(gòu)域免疫球蛋 白以及制備它們的方法描述于Wu,C等人，Nature Biotechnology,25(11)：1290-1297(2007)和PCT國(guó)際申請(qǐng)2001/058956中，每個(gè)文獻(xiàn)的內(nèi)容均通過引用并入本文)，和抗體片段，包括以上任意的功能活性的表位結(jié)合片段。特別地，抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，被稱為包含分析物結(jié)合位點(diǎn)的分子。免疫球蛋白分子可以是任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何類別(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂)或子類。為簡(jiǎn)單起見，針對(duì)分析物的抗體在本文中通常是指或者“抗分析物抗體”或者僅僅是指“分析物抗體”。

“親和力成熟抗體”在本文中是指在一個(gè)或多個(gè)CDR中具有一個(gè)或多個(gè)變化的抗體，與不具有所述變化的親本抗體相比，其產(chǎn)生了抗體對(duì)目標(biāo)抗原的親和力(例如，K_D、k_d、或k_a)的改進(jìn)。實(shí)例性的親和力成熟抗體將會(huì)具有對(duì)于目標(biāo)抗原的納摩爾或甚至是皮摩爾的親和力。本領(lǐng)域已知用于生產(chǎn)親和力成熟抗體的多種程序，包括已使用生物顯示而制備的結(jié)合抗體文庫的篩選。例如，MARKS等人，BioTechnology，10：779-783(1992)中描述了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域替換的親和力成熟。CDR的隨機(jī)誘變和/或框架殘基描述于Barbas等人，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，91：3809-3813(1994)、Schier等人，Gene，169：147-155(1995)、Yelton等人，J.Immunol，155：1994-2004(1995)、Jackson等人，J.Immunol，154(7)：3310-3319(1995)、以及Hawkins等人，J.Mol.Biol，226：889-896(1992)中。在選擇性誘變位置和與活性增強(qiáng)氨基酸殘基接觸或高突變位置處的選擇性突變描述于美國(guó)專利號(hào)6,914,128B1中。因此，其親和力(即K_D、k_d或k_a)已經(jīng)通過使用生物顯示而制備的結(jié)合抗體文庫的篩選而增加或提高的抗體是指“親和力成熟抗體”。

“抗體片段”、“抗體的抗原活性片段”、以及“多個(gè)抗體片段”是指包括抗原結(jié)合位點(diǎn)或可變區(qū)域的完整抗體的部分。該部分不包括完整抗體的Fc區(qū)域的恒定重鏈結(jié)構(gòu)域(例如，CH2、CH3、或CH4，這取決于抗體同種型)?？贵w片段的實(shí)例包括，但不限于，F(xiàn)ab片段、Fab’片段、Fab’-SH片段、F(ab’)₂片段、Fd片段、Fv片段、雙價(jià)抗體、單鏈Fv(scFv)分子、僅包含一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的單鏈多肽、包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的三個(gè)CDR的單鏈多肽、僅包含一個(gè)重鏈可變區(qū)的單鏈多肽、以及包含重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR的單鏈多肽。

“CDR”在本文中是指在抗體可變序列內(nèi)的“互補(bǔ)決定區(qū)”。在重鏈和輕鏈的 每個(gè)可變區(qū)均有三個(gè)CDR，其對(duì)于每個(gè)可變區(qū)分別被特定為“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。術(shù)語“CDR組”在本文中是指在與抗原結(jié)合的單一可變區(qū)內(nèi)發(fā)生的一組三個(gè)CDR。三個(gè)CDR的確切邊界已根據(jù)不同系統(tǒng)進(jìn)行不同地定義。由Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda,Md.(1987)和(1991)))描述的系統(tǒng)不僅提供了適用于抗體的任何可變區(qū)的清晰殘基編號(hào)系統(tǒng)，還提供了精確的殘基邊界用于定義三個(gè)CDR。所述CDR可以是指“Kabat CDR”。Chothia和其同事(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol，196：901-917(1987)；以及Chothia等人，Nature，342：877-883(1989))發(fā)現(xiàn)在Kabat CDR內(nèi)特定的子部分盡管在氨基酸序列的水平上具有很大的不同但卻采用了近乎相同的肽骨架構(gòu)造。所述子部分被特定為“L1”、“L2”和“L3”，或者“H1”、“H2”和“H3”，其中“L”和“H”分別指示輕鏈和重鏈區(qū)域。所述區(qū)域可以被稱作“Chothia CDR”,其邊界與Kabat CDR重疊。用于定義與Kabat CDR重疊的CDR的其他邊界描述于由Padlan，F(xiàn)ASEB J.,9:133-139(1995)，和MacCallum，J.Mol.Biol.,262(5):732-745(1996)中。還有其他CDR邊界定義可能沒有嚴(yán)格遵從本文中的任何系統(tǒng)，但其將無疑與Kabat CDR重疊，盡管它們可能會(huì)根據(jù)假設(shè)或?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)而被縮短或加長(zhǎng)，所述假設(shè)或?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)是特定殘基或殘基群或甚至整個(gè)CDR沒有顯著影響抗原結(jié)合。盡管特定實(shí)施例使用Kabat-或Chothia-定義的CDR，所述方法可利用根據(jù)所述這些系統(tǒng)中任意定義的CDR。

如本文中所使用的，表達(dá)“競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定”是指其中未標(biāo)記的抗原和標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)與相同的抗體結(jié)合的測(cè)定。舉例，固體支持物上涂覆抗體，所述抗體能特異性地結(jié)合標(biāo)記的抗原或者未標(biāo)記的抗原。將所述固體支持物、標(biāo)記的抗原和懷疑包含抗原的患者樣品混合在一起。當(dāng)然，在患者樣品中的任何抗原是未標(biāo)記的。標(biāo)記的抗原和未標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)位于固體支持物上的抗體位點(diǎn)。僅當(dāng)標(biāo)記的抗原附著在位于固體支持物上的抗體時(shí)，就會(huì)生成信號(hào)，這是因?yàn)橹挥袠?biāo)記的抗原能夠產(chǎn)生信號(hào)?；颊邩悠分械目乖瓟?shù)量與產(chǎn)生的信號(hào)數(shù)量成反比。本文提供了競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定的其他實(shí)例，以及更多的實(shí)例是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。

根據(jù)本文描述的方法和本領(lǐng)域中已知的其他方法，“組分”、“多個(gè)組分”以及“至少一種成分”，通常是指捕獲抗體、檢測(cè)或綴合抗體、校準(zhǔn)物、對(duì)照、敏感性實(shí)驗(yàn)組、容器、緩沖劑、稀釋劑、鹽、酶、酶的輔助因子、檢測(cè)劑、預(yù)處理 劑/溶液、基質(zhì)(例如，作為溶液)、停止液以及能夠包含在用于實(shí)驗(yàn)樣品測(cè)定的試劑盒中的類似物，如患者尿液、血清或血漿樣品。一些組分可以在溶液中或是凍干的用于重構(gòu)以用于測(cè)定。

“對(duì)照”是指已知不包含目的分析物(“陰性對(duì)照”)或包含目的分析物(“陽性對(duì)照”)的組合物。陽性對(duì)照可包括已知濃度的目的分析物。“對(duì)照”、“陽性對(duì)照”和“校準(zhǔn)物”可在本文中交換地使用以指示包括已知濃度的目的分析物的組合物?！瓣幮詫?duì)照”可用于建立測(cè)定性能特征，并且它是試劑(例如，分析物)完整性的有用指示器。

“由…..編碼”是指為多肽序列編碼的核酸序列。也包括通過由序列編碼成的多肽可進(jìn)行免疫識(shí)別的多肽序列。因此，本文公開的“多肽”、“蛋白”或“氨基酸”序列可以具有與特定的多肽或本文特定的氨基酸序列的至少60％的相似性、至少大約70％的相似性、至少大約80％的相似性、至少大約90％的相似性、至少大約95％的相似性以及至少大約99％的相似性。

“表位”、“多個(gè)表位”或“目的表位”是指在被識(shí)別并能夠結(jié)合至其特定結(jié)合伙伴上的互補(bǔ)位點(diǎn)的任意分子上的位點(diǎn)。該分子和特定結(jié)合伙伴是特定結(jié)合對(duì)的部分。例如，表位可以是多肽、蛋白、半抗原、碳水化合物抗原(如，但不限于，糖脂、糖蛋白或脂多糖)、或多糖。其特定結(jié)合伙伴可以是，但不限于，抗體。

特定多肽或蛋白的“片段”是指包括衍生自特定多肽或蛋白的至少大約5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、100-120、120-150、150-200或200-250個(gè)氨基酸的氨基酸序列。

“框架”(FR)或“框架序列”在本文中是指可變區(qū)減去CDR的序列。因?yàn)镃DR序列的精確定義可由不同系統(tǒng)確定(例如，參見上面的內(nèi)容)，框架序列的意思受制于相應(yīng)地不同說明。六個(gè)CDR(輕鏈的CDR-L1、-L2和-L3以及重鏈的CDR-H1、-H2和-H3)也將在輕鏈和重鏈上的框架區(qū)域劃分為在每個(gè)鏈上的四個(gè)子區(qū)域(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDR1位于FR1和FR2之間，CDR2位于FR2和FR3之間，并且CDR3位于FR3和FR4之間。在沒有將特定子區(qū)域指定為FR1、FR2、FR3和FR4的情況下，如由其他指出的框架區(qū)域表示在單一、自然發(fā)生地免疫球蛋白鏈的可變區(qū)之內(nèi)組合的FR。如本文中使用的，F(xiàn)R表示四個(gè)子區(qū)域之一，F(xiàn)R表示構(gòu)成框架區(qū)域的四個(gè)子區(qū)域中的兩個(gè)或 更多個(gè)。

本領(lǐng)域已知的人重鏈和輕鏈FR序列可被用作重鏈和輕鏈“接受者”框架序列(或者簡(jiǎn)單的說是“接受者”序列)以通過使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)來人源化非人抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，人重鏈和輕鏈接受者序列選自在公眾可獲得的數(shù)據(jù)庫如V-base(hypertext transfer protocol://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)或國(guó)際 信息系統(tǒng)((hypertext transfer protocol://imgt.cines.fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGnenes/)列示的框架序列。

本文中使用的對(duì)于兩個(gè)或更多個(gè)多肽或多核苷酸序列的內(nèi)容中的“相同”或“同一性”是指該序列具有特定比例的殘基在特定區(qū)域上是相同的。該比例可通過以下步驟計(jì)算得到：以最佳的方式比對(duì)兩個(gè)序列，比較在特定區(qū)域上的兩個(gè)序列，確定在該位置處在兩個(gè)序列中發(fā)生等同的殘基的位置的數(shù)量以得到匹配位置的數(shù)量，將匹配位置的數(shù)量除以在特定區(qū)域內(nèi)的位置的總數(shù)，并且將結(jié)果乘以100以得到序列同一性的百分比。在兩個(gè)序列具有不同的長(zhǎng)度或者比對(duì)產(chǎn)生了一個(gè)或多個(gè)交錯(cuò)末端并且比較的特定區(qū)域僅包括單一序列的情況下，那么單一序列的殘基包含在計(jì)算的分母而非分子中。

“分離的”是指材料從其原始環(huán)境(例如，如果它是自然發(fā)生的，那么就是自然環(huán)境)中移除。例如，存在于活的動(dòng)物中的自然發(fā)生的多核苷酸或多肽不是分離的，但是從自然系統(tǒng)中的一些或全部共存材料中分開的相同的多核苷酸或DNA或多肽就是分離的。這樣的多核苷酸可以是載體的部分和/或這樣的多核苷酸或多肽可以是組合物的部分，并且仍舊被分離，因此所述載體或組合物不是其自然環(huán)境的一部分。

“標(biāo)記”和“可檢測(cè)標(biāo)記”是指附著至抗體或分析物以使得在抗體和可檢測(cè)分析物之間的反應(yīng)可檢測(cè)的部分，并且這樣標(biāo)記的抗體或分析物是指“可檢測(cè)標(biāo)記的”。標(biāo)記能夠產(chǎn)生可通過視覺或有用的裝置而可檢測(cè)的信號(hào)。各種標(biāo)記包括信號(hào)生成物質(zhì)，如色原、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物、放射性化合物等等。標(biāo)記的代表性實(shí)例包括產(chǎn)生光的部分，例如吖啶化合物，和產(chǎn)生熒光的部分，例如熒光素。其他標(biāo)記在本文中描述。在這點(diǎn)上，部分本身可以不是可檢測(cè)的，但在與另一部分發(fā)生反應(yīng)而變得可檢測(cè)。使用術(shù)語“可檢測(cè)標(biāo)記的”旨在包括所述進(jìn)行標(biāo)記。

“患者”和“受試者”在本文中可交換地使用以指動(dòng)物，如鳥(例如，鴨子或鵝)， 鯊魚，鯨魚，以及哺乳動(dòng)物，包括非靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，牛、豬、駱駝、羊駝、馬、山羊、兔子、綿羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠和小鼠)和靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，猴子、猩猩和人)。優(yōu)選地，患者或受試者是人，如由于疾病或研究條件而懷疑具有目的疾病或病況、診斷具有目的疾病或病況，或正在進(jìn)行用于目的疾病或病況的預(yù)防性或治療性處理的人。

本文中使用的“多核苷酸”是指任何長(zhǎng)度的核苷酸的聚合物形式，是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸。該術(shù)語僅僅是指分子的初級(jí)結(jié)構(gòu)。因此，該術(shù)語包括雙鏈DNA和單鏈DNA以及雙鏈RNA和單鏈RNA。它還包括多核苷酸的修飾如甲基化或加帽，以及非修飾形式。

“多肽”和“蛋白”在本文中可交換地使用并且表示通過共價(jià)鍵和/或非共價(jià)鍵連接的氨基酸的分子鏈。該術(shù)語不是指產(chǎn)品的特定長(zhǎng)度。因此，肽、寡肽和蛋白包含在多肽的定義內(nèi)。該術(shù)語包括多肽的表達(dá)后修飾，例如，糖基化、乙酰化、磷酸化等等。此外，片段、類似物、突變的或變體蛋白、融合蛋白等等包含在多肽的意思內(nèi)。例如，本文中描述的多肽或肽可以具有15至750個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。

“預(yù)定的臨界”和“預(yù)定的水平”通常是指用于通過比較測(cè)定結(jié)果和預(yù)定臨界/水平而評(píng)估診斷/預(yù)后/治療的功效結(jié)果的測(cè)定臨界值，其中該預(yù)定臨界/水平已經(jīng)與各種臨床參數(shù)(例如，疾病的嚴(yán)重性、進(jìn)展/非進(jìn)展/改善，等)相聯(lián)系或關(guān)聯(lián)。本公開提供了示例性預(yù)定水平。然而，我們都知道臨界值可根據(jù)免疫測(cè)定(例如，使用的抗體，等)的性質(zhì)而變化。它也在本領(lǐng)域的普通技術(shù)內(nèi)以采用本文中的公開用于其他免疫測(cè)定，以獲得基于本公開的所述其他免疫測(cè)定的免疫測(cè)定特定臨界值。然而，預(yù)定臨界/水平的精確值可在測(cè)定之間發(fā)生變化，本文中描述的相關(guān)性通常是適用的。

在本文描述的診斷性測(cè)定中使用的“預(yù)處理試劑”，例如，裂解、沉淀和/或增溶試劑是裂解存在于測(cè)試樣品中的任何細(xì)胞和/或增溶存在于測(cè)試樣品中的任何分析物的試劑。本文還進(jìn)一步說明，預(yù)處理不是對(duì)所有樣品來說都是必需的。在其他情況下，增溶分析物使得該分析物從存在于樣品中的任何內(nèi)生結(jié)合蛋白釋放出來。預(yù)處理試劑可以是同質(zhì)的(不需要分離步驟)或者異質(zhì)的(需要分離步驟)。通過使用同質(zhì)預(yù)處理試劑，在進(jìn)行測(cè)定的下一步驟程序之前，從測(cè)試樣品中去除任何沉淀的分析物結(jié)合蛋白。該預(yù)處理試劑任選地包括：(a)一個(gè) 或多個(gè)溶劑和鹽；(b)一個(gè)或多個(gè)溶劑、鹽和去垢劑；(c)去垢劑；(d)去垢劑和鹽，或(e)適用于細(xì)胞裂解和/或分析物增溶的任何試劑或試劑的組合。

“純化的多肽”是指目的多肽或其片段基本上不含細(xì)胞組分，即，其包含少于大約50％，優(yōu)選地少于大約70％，并且更加優(yōu)選地，少于大約90％的細(xì)胞組分，目的多肽與所述細(xì)胞組分是自然地相關(guān)聯(lián)的。純化的方法在本領(lǐng)域是已知的。

在本文描述的免疫測(cè)定和試劑盒的內(nèi)容中的“質(zhì)量控制試劑”包括但不限于校準(zhǔn)物、對(duì)照和敏感性實(shí)驗(yàn)組。典型地，使用“校準(zhǔn)物”或“標(biāo)準(zhǔn)”(例如，一個(gè)或多個(gè)，如很多個(gè))是為了建立校準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn))曲線用于解釋如抗體或分析物的分析物的濃度。任選地，可以使用在預(yù)定正/負(fù)臨界附近的單一校準(zhǔn)物。多校準(zhǔn)物(例如，多于一個(gè)的校準(zhǔn)物或可變數(shù)量的校準(zhǔn)物)可以聯(lián)合使用以包括“敏感性實(shí)驗(yàn)組”。

“重組抗體”和“多個(gè)重組抗體”是指通過一個(gè)或多個(gè)步驟制備的抗體，包括通過重組技術(shù)將編碼一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體的全部或部分的核酸序列克隆如何是的表達(dá)載體，并隨后在何是的宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體。該術(shù)語包括但不限于重組產(chǎn)生的單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體(全部或部分人源化)、由抗體片段形成的多特性或多價(jià)結(jié)構(gòu)、雙功能抗體、復(fù)共軛對(duì)配合物Ab、和本文中描述的其他抗體(雙可變結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白及其制作方法描述于由Wu,C等人，Nature Biotechnology，25：1290-1297(2007)中)。本文中使用的術(shù)語“雙功能抗體”是指包括具有用于一個(gè)抗原位點(diǎn)的特異性的第一臂和具有用于不同抗原位點(diǎn)特異性的第二臂的抗體，即，該雙功能抗體具有雙重特異性，。

“重組宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞”、“細(xì)胞”、“細(xì)胞系”、“細(xì)胞培養(yǎng)物”和其他表示微生物或作為單細(xì)胞實(shí)體培養(yǎng)的更高級(jí)別真核細(xì)胞系的這類術(shù)語是指這樣的細(xì)胞，其能夠用作，或已經(jīng)用作重組載體或其他轉(zhuǎn)染的DNA的接受者，并且包括已轉(zhuǎn)染的原始細(xì)胞的原始子代。

在本文中交換使用的“重組多肽”或“重組蛋白”描述了這樣一種多肽，根據(jù)其來源或做作是其與在自然中與其相關(guān)聯(lián)的多肽的全部或部分是不相關(guān)的，和/或與除了其在自然中聯(lián)系的多肽以外的多肽相聯(lián)系。重組或編碼的多肽或蛋白不是非要從設(shè)計(jì)的核酸序列翻譯而來。它還可以以任何形式生成，包括化學(xué)合成(合成肽)或重組表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)。

“復(fù)制子”是指如質(zhì)粒、染色體或病毒的任何遺傳元件，其表現(xiàn)出如同細(xì)胞內(nèi)多核苷酸復(fù)制的自發(fā)單元。

“樣品”、“測(cè)試樣品”和“患者樣品”可以在本文中交換使用。樣品，例如尿、血清、血漿、羊水、腦脊髓液、胎盤細(xì)胞或組織、內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞或單核細(xì)胞的樣品可以如從患者獲得地直接使用，或者可預(yù)處理，如通過過濾、稀釋、提取、濃縮、離心、對(duì)干擾組分進(jìn)行滅活、增加試劑等等，從而以本文中討論的或其他本領(lǐng)域已知的一些方式來修飾樣品的特性。在本公開的上下文中，樣品優(yōu)選地是血清或血漿，并且最優(yōu)選地是血清。

“固相”或“固體支持物”是指任何不溶的或者可通過后來的反應(yīng)變得不溶的材料。就其吸引和固定化捕獲劑的本身固有的能力而選擇固相。任選地，所述固相具有在其上粘附的連接劑，該連接劑具有吸引和固定化捕獲劑的能力。例如，連接劑可包括帶電物質(zhì)，其根據(jù)捕獲劑本身或根據(jù)與捕獲劑綴合的帶電物質(zhì)而帶相反電荷?？傊?，連接劑可以是任何結(jié)合伙伴(優(yōu)選地異性的)，該結(jié)合伙伴固定化(附著)在固相上并且具有通過結(jié)合反應(yīng)來固定化捕獲劑的能力。連接劑使得捕獲劑在性質(zhì)測(cè)定之前或性質(zhì)測(cè)定期間間接地與固相材料結(jié)合。固相可以是，例如，塑料、衍生塑料、磁性或非磁性金屬、玻璃或硅，包括，例如，試管、微量滴定孔、薄片、珠、微粒、芯片和在本領(lǐng)域的普通技術(shù)中已知的其他構(gòu)造。

“特異性結(jié)合伙伴”是特異性結(jié)合對(duì)的成員。特異性結(jié)合對(duì)包括兩個(gè)不同的分子，其通過化學(xué)或物理方式彼此特異性結(jié)合。因此，除了普通免疫測(cè)定的抗原和抗體特異性結(jié)合對(duì)，其他特異性結(jié)合對(duì)可包括生物素和親和素(或者鏈霉親和素)、碳水化合物和外源凝集素、互補(bǔ)核苷酸序列、效應(yīng)子和接受子分子、輔酶因子和酶、酶和酶抑制劑，等等。進(jìn)一步，特異性結(jié)合對(duì)可包括是原始特異性結(jié)合成員的類似物的成員，例如，分析物-類似物。免疫反應(yīng)特異性結(jié)合成員包成員括抗原、抗原片段和抗體，包括單克隆和多克隆抗體，以及復(fù)合物和其片段，無論是否分離或重組生成的。

在特異性結(jié)合對(duì)的成員(例如，抗原(或其片段))和抗體(或其抗原反應(yīng)性片段)，以及結(jié)合蛋白(或其片段)之間相互作用的內(nèi)容中的“特異性的”和“特異性”是指相互作用的選擇性反應(yīng)。詞組“特別地結(jié)合至”和類似物詞組是指特異性結(jié)合對(duì)的第一成員(例如，抗體或其抗原反應(yīng)片段)與特異性結(jié)合對(duì)的第二 成員(例如，抗原)結(jié)合，而不特異性結(jié)合其他抗原(或其片段)的能力。

本文中使用的“合成肽”是指任何長(zhǎng)度的氨基酸的聚合形式，其可通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行化學(xué)合成。所述合成肽在多種應(yīng)用中都是有用的。

本文中使用的“變體”是指這樣的多肽，其通過插入、刪除或保守性置換氨基酸而在氨基酸序列方面不同于給定多肽，但保留了已知給定多肽的生物活性。氨基酸的保守性置換，即用相似屬性(例如，親水性以及帶電區(qū)域的程度以及分布)的不同氨基酸置換一個(gè)氨基酸，在本領(lǐng)域中被認(rèn)為作為一般涉及微小變化。如本領(lǐng)域中熟知的(參見，例如，Kyte等人，J.Mol.Biol.157:105-132(1982))，這些微小變化部分地可通過考慮氨基酸的親水指數(shù)而鑒定。氨基酸的親水指數(shù)基于其親水性和電荷的考慮。如本領(lǐng)域所熟知的，具有相似親水指數(shù)的氨基酸可進(jìn)行替換并且仍舊保留蛋白的功能。在一方面，具有親水指數(shù)為±2的氨基酸可進(jìn)行替換。氨基酸的親水性也可用于顯示產(chǎn)生保留生物功能的蛋白的替換。在涉及肽的內(nèi)容中考慮氨基酸的親水性允許計(jì)算所述肽的最大當(dāng)?shù)仄骄H水性，已經(jīng)報(bào)道了一種有用的措施以使得抗原性和免疫原性很好的相關(guān)聯(lián)(參見，例如，美國(guó)專利號(hào)US4，554，101，其通過參考的形式合并于并入本文)。正如本領(lǐng)域已知的，具有相似親水性的氨基酸的替換得到保留生物學(xué)活性的肽，例如免疫原性。在一方面，使用彼此具有親水值在±2之內(nèi)的氨基酸進(jìn)行替換。氨基酸的疏水指數(shù)和親水性值受到所述氨基酸的具體側(cè)鏈的影響。與觀察相一致，生物學(xué)功能相容的氨基酸替換理解為取決于氨基酸的相對(duì)相似性，并且尤其是所述氨基酸的側(cè)鏈，這通過疏水性、親水性、電荷、尺寸和其他特性得以揭示?！白凅w”也可用來指作抗體的抗原反應(yīng)性片段，其在氨基酸序列方面不同于抗體的相應(yīng)片段，但是仍舊是抗原反應(yīng)性的并且可與抗體的相應(yīng)片段競(jìng)爭(zhēng)，該抗體與目的分析物結(jié)合?！白凅w”也可用于描述通過如蛋白水解、磷酸化作用，或其他翻譯后修飾而已經(jīng)進(jìn)行不同處理，但仍舊保持其抗原反應(yīng)性的多肽或其片段，。

“載體”是復(fù)制子，另一多核苷酸部分附著在其上，以產(chǎn)生附著區(qū)段的復(fù)制和/或表達(dá)。

設(shè)備

本文公開的是用于攪動(dòng)液體，如，例如自動(dòng)診斷分析器的容器中的液體試劑的方法和設(shè)備，所述自動(dòng)診斷分析器可以是，例如，臨床化學(xué)分析器、免疫 測(cè)定分析器、和/或血液分析器。用于自動(dòng)診斷分析器中的部分試劑包括液體和微粒，其中所述微粒是混合的，并且在一些實(shí)施例中，基本上均勻地分散在液體中。自動(dòng)診斷分析器典型地圍繞軸旋轉(zhuǎn)試劑容器或瓶子并且旋轉(zhuǎn)在容器的內(nèi)含物上施加力以混合所述內(nèi)含物。傳統(tǒng)的試劑瓶是圓柱形的并且包括內(nèi)部葉片，該葉片用于混合并分散試劑液體中的顆粒。

本文公開的實(shí)例使用矩形、圓角矩形或基本上呈矩形形狀的試劑容器。所述容器具有容納至少一種液體試劑的空腔。本文公開的實(shí)施例獲得試劑的均勻混合和分散，如，例如，包括微粒的試劑。所述公開的實(shí)施例提供了比很多已知構(gòu)造在診斷系統(tǒng)中更大的空間利用。因此，使用本文描述的實(shí)施例，與很多已知的系統(tǒng)相比，分析器可具有增加的負(fù)荷容量和/或更小的尺寸。在一些實(shí)施例中，所述容器或瓶子中的一個(gè)是大約20毫米(mm)深，大約36mm寬以及大約92mm高。其他實(shí)施例可能具有其他尺寸。所述公開實(shí)施例的另一優(yōu)勢(shì)是實(shí)施例瓶子可利用制造技術(shù)，如，例如，吹塑技術(shù)而生成，這樣與很多已知構(gòu)造的制造技術(shù)相比，可減少成本。

在本文公開的實(shí)施例中，實(shí)施例瓶子的平的反面響應(yīng)瓶子的加速和減速而在瓶子的液體中生成了混合運(yùn)動(dòng)。本文公開的實(shí)施例瓶以振動(dòng)的方式在其中心縱軸周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。此外，所述瓶子連接至套筒，所述套筒在傳送帶的轉(zhuǎn)軸周圍旋轉(zhuǎn)。如本文所公開的，所述瓶子和帽包括特征，其提供支持物面用于旋轉(zhuǎn)瓶子。所述瓶子可由一種材料或多種材料構(gòu)成以使得瓶子的一個(gè)或多個(gè)表面作為舍棄式軸承一樣發(fā)揮效用。在一些實(shí)施例中，所述瓶子可由高密度聚乙烯構(gòu)成，其具有良好的耐磨特性并且能夠經(jīng)受，例如，30天的機(jī)載使用期(例如，在診斷分析器上連續(xù)使用)，只有微不足道的磨損。加速和減速以及矩形壁在瓶中的液體上施加力以促進(jìn)瓶中內(nèi)含物的混合。瓶子內(nèi)的圓形或曲線型底部也可通過生成由于沉淀而積聚在瓶子底部的顆粒向上的運(yùn)動(dòng)來幫助混合，當(dāng)瓶子處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)會(huì)有沉降的發(fā)生。更加特別地，通過瓶子的旋轉(zhuǎn)生成的離心力使得所述沉降的顆粒移出瓶子的底部中心，并且在顆粒隨著瓶子底部的輪廓時(shí)提升顆粒。在一些實(shí)施例中，在大約振動(dòng)一分鐘內(nèi)從視覺上確認(rèn)均勻混合。其他混合周期和振動(dòng)頻率可根據(jù)所用的試劑、所用的微粒、進(jìn)行的診斷測(cè)試和/或其他因素被使用。

本文公開的是包括基座、第一端壁和第二端壁的實(shí)施例設(shè)備。所述實(shí)施例 設(shè)備還包括第一容器和第二容器，所述第一容器和第二容器具有圓角矩形剖面狀并且形成圓角矩形塊，例如，具有圓角邊緣的條狀物體(總體地是指呈圓角矩形形狀)。此外，實(shí)施例設(shè)備包括第一容器支持物用于保持第一容器。所述實(shí)施例第一容器支持物包括第一桿用于嚙合第一容器的第一邊緣從而非旋轉(zhuǎn)地將第一容器連接至基座。同樣的，實(shí)施例設(shè)備還包括第二容器支持物用于保持第二容器。所述實(shí)施例第二容器支持物包括用于嚙合第二容器的凹槽的圈以及用于嚙合第二容器的第二邊緣的脊。所述實(shí)施例第二容器相對(duì)于基座進(jìn)行選擇性旋轉(zhuǎn)。

在一些實(shí)施例中，實(shí)施例設(shè)備還包括第三容器支持物用于保持第三容器。所述實(shí)施例第三容器支持物包括第二桿用于嚙合第三容器的第三邊緣從而非旋轉(zhuǎn)地將第三容器連接至基座。

在一些實(shí)施例中，設(shè)備在第一旋轉(zhuǎn)軸周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，同時(shí)第二容器相對(duì)于基座在第二旋轉(zhuǎn)軸周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。

在一些實(shí)施例中，第二容器在鎖緊位置和非鎖緊位置之間移動(dòng)，在所述鎖緊位置處第二容器的第二邊緣與脊進(jìn)行嚙合從而非旋轉(zhuǎn)地將第二容器連接至基座，在非鎖緊位置處第二容器被提高使得第二邊緣與脊脫離，同時(shí)凹槽在圈周圍旋轉(zhuǎn)。

在一些實(shí)施例中，所述設(shè)備包括具有進(jìn)入第一容器的第一孔和進(jìn)入第二容器的第二孔的蓋子。

同樣的，本文公開了包括第一側(cè)壁和基本上平行于第一側(cè)壁的第二側(cè)壁的實(shí)施例設(shè)備。所述實(shí)施例設(shè)備還包括連接至第一側(cè)壁和第二側(cè)壁上的頂壁。所述實(shí)施例設(shè)備還包括與頂壁相對(duì)的底壁并且該底壁連接至第一側(cè)壁和第二側(cè)壁上。所述底壁具有第一側(cè)面用于限定容納液體的空腔。所述實(shí)施例設(shè)備還包括從底壁的第一側(cè)面朝向頂壁延伸的突出。

在一些實(shí)施例中，所述突出位于底壁的中心。同樣地，在一些實(shí)施例中，所述突出位于底壁的旋轉(zhuǎn)軸上。此外，在一些實(shí)施例中，所述突出具有沿底壁的旋轉(zhuǎn)軸放置的尖端。

在一些實(shí)施例中，所述實(shí)施例設(shè)備包括第三側(cè)壁和與第三側(cè)壁相對(duì)的第四側(cè)壁。在這樣的實(shí)施例中，所述第三側(cè)壁和第四側(cè)壁是彎曲的。

在一些實(shí)施例中，底壁具有第一彎曲半徑，并且突出具有不同于第一彎曲 半徑的第二彎曲半徑。在一些實(shí)施例中，第一彎曲半徑定向于第一方向并且第二彎曲半徑定向于不同于第一方向的第二方向。

在一些實(shí)施例中，所述第一側(cè)壁包括向第二側(cè)壁延伸的肋。同樣地，在一些實(shí)施例中，設(shè)備包括依靠于底壁的第一側(cè)的桿。在這樣的實(shí)施例中，所述突出從底壁的第二側(cè)延伸。在一些實(shí)施例中，所述桿限定了很多槽口。同樣地，在一些實(shí)施例中，所述槽口是與旋轉(zhuǎn)裝置可嚙合的從而在與凹部對(duì)齊的旋轉(zhuǎn)軸周圍旋轉(zhuǎn)設(shè)備，即，與凹部的中心軸共軸。

在一些實(shí)施例中，第一側(cè)壁包括第一平面部分并且第二側(cè)壁包括第二平面部分。此外，在一些實(shí)施例中，所述實(shí)施例設(shè)備包括第三側(cè)壁和與第三側(cè)壁相對(duì)的第四側(cè)壁。在這樣的實(shí)施例中，第一側(cè)壁、第二側(cè)壁、第三側(cè)壁或第四側(cè)壁的至少兩個(gè)包括邊緣用于嚙合載體上的脊從而在非旋轉(zhuǎn)位置容納所述容器。

本文還公開的是實(shí)施例方法，該方法包括將第一容器從第一位置提升至第二位置，在所述第一位置中第一容器的邊緣與運(yùn)載器的脊嚙合并且第一容器的凹槽與運(yùn)載器的圈嚙合，在所述第二方向中所述邊緣從所述脊脫離而所述凹槽與所述圈嚙合。所述實(shí)施例方法還包括在旋轉(zhuǎn)軸的周圍旋轉(zhuǎn)第一容器，并混合第一容器的內(nèi)含物。在這樣的實(shí)施例中，所述內(nèi)含物通過第一容器的第一基本上平的側(cè)壁和第一容器的底部突出而混合。

在一些實(shí)施例中，所述實(shí)施例方法包括非旋轉(zhuǎn)支持運(yùn)載器上的第二容器同時(shí)旋轉(zhuǎn)第一容器。此外，在一些實(shí)施例中，所述實(shí)施例方法包括降低第一容器至第一位置從而非旋轉(zhuǎn)地將第一容器連接至運(yùn)載器。

試劑

本文中公開的設(shè)備包括至少第一容器和第二容器。任選地，所述設(shè)備可包括第三容器。每個(gè)容器具有圓角矩形形狀。第一和第二容器，并且任選地，如果存在的話，第三容器，各含有容納液體的空腔。在每個(gè)容器中的液體可包括許多試劑。

該容器包括用于確定存在于測(cè)試樣品中HIV抗體和/或HIV抗原的存在、數(shù)量和/或濃度所需的試劑。在本領(lǐng)域中已知的任何合適的測(cè)定可用于此方法。實(shí)例包括，但不限于，免疫測(cè)定，如，例如，單克隆-多克隆或單克隆-單克隆或抗原-抗原、夾心免疫測(cè)定、放射性同位素檢測(cè)測(cè)定(放射免疫分析(RIA))和酶檢測(cè)測(cè)定(酶免疫分析(EIA)或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA))、競(jìng)爭(zhēng)抑制免 疫測(cè)定(例如，正向和反向)、熒光偏振免疫測(cè)定(FPIA)、酶倍增免疫測(cè)定技術(shù)(EMIT)、生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移測(cè)定(BRET)、以及均相化學(xué)發(fā)光測(cè)定等。

在一個(gè)實(shí)施例中，該液體試劑是一個(gè)或多個(gè)特異性結(jié)合伙伴，其中該特異性結(jié)合伙伴特異性地結(jié)合包含在測(cè)試樣品中的任何抗HIV抗體和/或HIV抗原。例如，特異性結(jié)合伙伴可以是特異性地結(jié)合測(cè)試樣品中的任何HIV抗原的一個(gè)或多個(gè)抗體和/或，特異性結(jié)合伙伴可以是特異性結(jié)合測(cè)試樣品中的任何HIV抗體的一個(gè)或多個(gè)蛋白、多肽或關(guān)于其片段(如分離的多肽、純化的多肽、合成肽或重組多肽或重組蛋白)。捕獲測(cè)試樣品中的HIV抗原的特異性結(jié)合伙伴被稱為“捕獲劑”,例如“捕獲抗體”。捕獲測(cè)試樣品中的抗HIV抗體的特異性結(jié)合伙伴被稱為“捕獲劑”,例如“捕獲抗原”。檢測(cè)測(cè)試樣品中的HIV抗原的特異性結(jié)合伙伴被稱為“檢測(cè)劑”,例如“綴合物”。檢測(cè)測(cè)試樣品中的抗HIV抗體的特異性結(jié)合伙伴被稱為“檢測(cè)劑”，例如“綴合物”。

在一個(gè)實(shí)施例中，下面的表1提供了可用于本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)容器中(如第一容器、第二容器、第三容器，等)的一個(gè)或多個(gè)捕獲劑和一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)劑：

表1

確定測(cè)試樣品中抗HIV抗體和/或HIV抗原的存在、數(shù)量或濃度的方法

本公開提供了用于確定測(cè)試樣品中存在的HIV抗體和/或HIV抗原的存在、數(shù)量和/或濃度的方法。在本領(lǐng)域中已知的任何合適的測(cè)定可用于此方法。實(shí)例包括，但不限于，免疫測(cè)定，如，例如，單克隆-多克隆或單克隆-單克隆或抗原-抗原、夾心免疫測(cè)定、放射性同位素檢測(cè)測(cè)定(放射免疫分析(RIA))和酶檢測(cè)測(cè)定(酶免疫分析(EIA)或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA))、競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定(例如，正向和反向)、熒光偏振免疫測(cè)定(FPIA)、酶倍增免疫測(cè)定技術(shù)(EMIT)、生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移測(cè)定(BRET)、以及均相化學(xué)發(fā)光測(cè)定等。在SELDI為基礎(chǔ)的免疫測(cè)定中，捕獲劑(試劑)附著在質(zhì)譜探針的表面上，如預(yù)激活蛋白芯片陣列。分析物(例如，抗HIV抗體和/或HIV抗原)然后被特異性地捕獲在生物芯片上，并且該捕獲(例如，抗HIV抗體和/或HIV抗原)由質(zhì)譜檢測(cè)出來。可替代地，抗HIV抗體和/或HIV抗原可從捕獲劑中洗脫出來，并且通過傳統(tǒng)的MALDI(基質(zhì)輔助的激光解吸離子化質(zhì)譜技術(shù))或SELDI進(jìn)行檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光微粒免疫測(cè)定，特別是使用自動(dòng)分析器(Abbott Laboratories，ABBOTT Park,IL),是優(yōu)選的免疫測(cè)定的實(shí)例，盡管可以使用如本文所述的抗體進(jìn)行其他測(cè)定和工具。

臨床化學(xué)也可用于本公開的內(nèi)容。臨床化學(xué)涉及通過利用多種技術(shù)來分析體液，如，血液、尿液、腦脊髓液(CSF)、積液，以及糞便，或者任何前述的組分，所述技術(shù)包括從簡(jiǎn)單化學(xué)分析技術(shù)(例如，肝臟功能和腎臟功能)到使用且測(cè)量酶活性，分光光度測(cè)定法，以及電泳。臨床化學(xué)也包括內(nèi)分泌學(xué)、毒理學(xué)以及治療性藥物監(jiān)測(cè)。臨床化學(xué)進(jìn)一步可包括僅使用單一抗體、濁度測(cè)定以及顆粒加強(qiáng)的濁度測(cè)定，本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的其他形式。

本領(lǐng)域已知的用于收集、處理和加工體液，如，尿液、血液、血清和血漿等以及其他體液的方法用于本公開的實(shí)際操作中，例如，當(dāng)根據(jù)本公開的抗體用作免疫診斷試劑，和/或用在抗HIV抗體和/或HIV抗原的免疫測(cè)定的試劑盒中時(shí)。測(cè)試樣品還包括除了目的分析物之外的部分，如抗體、抗原、半抗原、激素、藥物、酶、受體、蛋白、肽、多肽、寡核苷酸或多核苷酸。例如，所述樣品可以是從受試者獲得的全血液樣品。必要的或者期望的是，測(cè)試樣品，尤其是全血，在進(jìn)行本文描述的免疫測(cè)定之前被處理，例如，用預(yù)處理試劑處理。即使預(yù)處理是不必要的(例如，大多數(shù)尿液樣品)情況下，僅僅為了方便，可選擇進(jìn)行預(yù)處理(例如，關(guān)于商業(yè)平臺(tái)的部分規(guī)則)。任選地，所述測(cè)試樣品是血清。

預(yù)處理試劑可以是適合用于本發(fā)明的免疫測(cè)定和試劑盒的任何試劑。預(yù)處理任選地包括：(a)一種或多種溶劑(例如，甲醇和乙二醇)和鹽；(b)一種或多種溶劑、鹽和去垢劑；(c)去垢劑，或者(d)去垢劑和鹽。預(yù)處理試劑在本領(lǐng)域中是已知的，并且可采用這種預(yù)處理，例如，如文獻(xiàn)中所述的(參見，例如，Yatscoff等人，Abbott TDx Monoclonal Antibody Assay Evaluated for Measuring Cyclosporine in Whole Blood,Clin.Chem.36：1969-1973(1990)和Wallemacq等人，Evaluation of the New AxSYM Cyclosporine Assay:Comparison with TDx Monoclonal Whole Blood and EMIT Cyclosporine Assays,Clin.Chem.45:432-435(1999))用于Abbott TDx，和分析器(Abbott實(shí)驗(yàn)室，Abbott Park,IL)的測(cè)定，和/或市場(chǎng)上可得到的。此外，可以如Abbott的美國(guó)專利號(hào)US 5,135,875、歐洲專利公開號(hào)0471293，以及美國(guó)專利US 7,993,851、8,329,415和7,883,855(通過引用將其涉及預(yù)處理的教導(dǎo)的全部?jī)?nèi)容并入本文)中描述的進(jìn)行預(yù)處理。預(yù)處理試劑可以是異質(zhì)劑或同質(zhì)劑。

使用異質(zhì)預(yù)處理試劑時(shí)，預(yù)處理試劑使存在于樣品中的分析物結(jié)合蛋白沉淀。這樣的預(yù)處理步驟包括：通過從沉淀的分析物結(jié)合蛋白中分離通過向樣品中添加預(yù)處理試劑而形成混合物的上層清液，而去除任何分析物結(jié)合蛋白。在這種測(cè)定中，缺少任何結(jié)合蛋白的混合物的上層清液用于測(cè)定，直接進(jìn)入抗體捕獲步驟。

如果使用同質(zhì)預(yù)處理試劑，那么就不存在分離步驟。測(cè)試樣品的整個(gè)混合物和預(yù)處理試劑與用于抗HIV抗體和/或HIV抗原的標(biāo)記的特異性結(jié)合伙伴接 觸。在由第一特異性結(jié)合伙伴捕獲之前或者期間，這種測(cè)定所采用的預(yù)處理試劑通常稀釋在預(yù)處理測(cè)試樣品混合物中。盡管這樣稀釋，在捕獲期間，一定數(shù)量的預(yù)處理試劑(例如，在使用有機(jī)試劑的情況下，會(huì)有5M甲醇和/或0.6M乙二醇)仍然存在(或保留)于測(cè)試樣品混合物中。

在異質(zhì)形式中，從受試者獲得測(cè)試樣品之后，制備第一混合物。所述混合物包含用于評(píng)估抗HIV抗體和/或HIV抗原的測(cè)試樣品以及一種或多種第一特異性結(jié)合伙伴，其中，第一特異性結(jié)合伙伴和包含在測(cè)試樣品中的任何抗HIV抗體和/或HIV抗原形成了第一特異性結(jié)合伙伴-抗-HIV抗體復(fù)合物和/或第一特異性結(jié)合伙伴-HIV抗原復(fù)合物。第一特異性結(jié)合伙伴可以是特異性地結(jié)合測(cè)試樣品中的任何HIV抗原的抗體和/或，第一特異性結(jié)合伙伴可以是特異性地結(jié)合測(cè)試樣品中的任何HIV抗體的蛋白、多肽或其片段(如分離的多肽、純化的多肽、合成肽或重組多肽或重組蛋白)。添加測(cè)試樣品和第一特異性結(jié)合伙伴以形成混合物的順序不是關(guān)鍵的。任選地，第一特異性結(jié)合伙伴固定化在固相上。用于免疫測(cè)定(用于第一特異性結(jié)合伙伴和，任選地，第二特異性結(jié)合伙伴)的固相可以是本領(lǐng)域中已知的任何固相，如，但不限于，磁性顆粒、珠、試管、微量滴定板、小玻璃管、膜、支架分子、薄膜、濾紙、盤和芯片。

在含有第一特異性結(jié)合伙伴-抗-HIV抗體復(fù)合物和/或第一特異性結(jié)合伙伴-HIV抗原復(fù)合物的混合物形成之后，使用本領(lǐng)域中已知的任何技術(shù)去除任何未結(jié)合的抗-HIV抗體和/或HIV抗原。例如，未結(jié)合的抗-HIV抗體和/或HIV抗原可通過洗滌被去除。理想地，然而，第一特異性結(jié)合伙伴存以過量于測(cè)試樣品中任何抗-HIV抗體和/或HIV抗原而存著，這樣存在于測(cè)試樣品中的所有抗-HIV抗體和/或HIV抗原被第一特異性結(jié)合伙伴結(jié)合。

在去除任何未結(jié)合的抗-HIV抗體和/或HIV抗原之后，將第二特異性結(jié)合伙伴添加至混合物以形成第一特異性結(jié)合伙伴-抗-HIV抗體-第二特異性結(jié)合伙伴復(fù)合物和/或第一特異性結(jié)合伙伴-HIV抗原-第二特異性結(jié)合伙伴復(fù)合物。任選地，第二特異性結(jié)合伙伴是特異性地結(jié)合目的分析物上的表位的抗體，所述表位不同于被第一特異性結(jié)合伙伴結(jié)合的目的分析物上的表位，和/或第二特異性結(jié)合伙伴是特異性地結(jié)合樣品中的抗-HIV抗體的蛋白、多肽或其片段(如分離的多肽、純化的多肽、合成肽或重組多肽或重組蛋白)。因此，同樣任選地，第二特異性結(jié)合伙伴使用上述可檢測(cè)標(biāo)記進(jìn)行標(biāo)記或包含上述可檢測(cè)標(biāo)記。

可以使用本領(lǐng)域中已知的任何合適的可檢測(cè)標(biāo)記。例如，可檢測(cè)標(biāo)記可以是放射性標(biāo)記(如³H、¹²⁵I、³⁵S、¹⁴C、³²P和³³P)、酶標(biāo)記(如生物素、辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖6-磷酸脫氫酶，等等)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記(如吖啶 醚、硫酯、或者磺胺藥物；魯米諾、異魯米諾、phenanthridinium ester，等等)、熒光標(biāo)記(如熒光素(例如，5-熒光素、6-羧基熒光素、3’6-羧基熒光素、5(6)-羧基熒光素、6-六氯-熒光素、6-四氯熒光素、熒光素異硫氰酸鹽,等等))、羅丹明、藻膽蛋白、R-藻紅素、量子點(diǎn)(例如，鋅硫化物加帽的硒化鎘)、熱標(biāo)記、或者免疫-聚合酶鏈反應(yīng)標(biāo)記。關(guān)于標(biāo)記、加標(biāo)記的步驟和標(biāo)記的檢測(cè)的介紹可參見Polak和Van Noorden，Introduction to Immunocytochemistry，第二編,Spring Verlag,N.Y.(1997)和Haugland，Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals(1996)，其是由Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oregon出版的合并手冊(cè)和目錄。熒光標(biāo)記可用于FPIA(參見，例如，美國(guó)專利號(hào)5,593,896、5,573,904、5,496,925、5,359,093和5,352,803，通過引用將其整體并入本文)。吖啶化合物在均相化學(xué)發(fā)光測(cè)定中可作為可檢測(cè)標(biāo)記使用(參見，例如，Adamczyk等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.16:1324-1328(2006)；Adamczyk等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.4:2313-2317(2004)；Adamczyk 等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.14:3917-3921(2004)和Adamczyk 等人，Org.Lett.5:3779-3782(2003))。

化學(xué)發(fā)光測(cè)定可根據(jù)由Adamczyk等人，Anal.Chim.Acta579(1):61-67(2006)中描述的方法進(jìn)行。當(dāng)可使用任何合適的測(cè)定形式時(shí)，微孔板塊化學(xué)發(fā)光計(jì)量?jī)x(Mithras LB-940,Berthold Technologies U.S.A.,LLC,Oak Ridge,TN)使得迅速測(cè)定小體積的多個(gè)樣品?；瘜W(xué)發(fā)光計(jì)量?jī)x可通過使用96-孔黑色聚乙烯微孔板(Costar#3792)而裝備有多個(gè)試劑注射器。每個(gè)樣品可被添加至分別的孔，接著根據(jù)所用測(cè)定的類型所確定的，同時(shí)添加/按次序添加其他試劑。理想地，在使用吖啶芳基酯的中性或堿性溶液中形成pseudobases是可避免的，如通過酸化。然后通過孔-孔的方式記錄化學(xué)發(fā)光響應(yīng)。這點(diǎn)上，記錄化學(xué)發(fā)光應(yīng)答的時(shí)間將部分取決于添加試劑和所使用顆粒吖啶之間的延遲。

添加測(cè)試樣品和特異性結(jié)合伙伴以形成用于化學(xué)發(fā)光測(cè)定的混合物的順序不是關(guān)鍵的。如果用吖啶化合物對(duì)第一特異性結(jié)合伙伴進(jìn)行可檢測(cè)地標(biāo)記，那么形式可檢測(cè)標(biāo)記的第一特異性結(jié)合伙伴-分析物(抗原或抗體)復(fù)合物?？?替代地，如果使用第二特異性結(jié)合伙伴，并且用吖啶化合物對(duì)第二特異性結(jié)合伙伴進(jìn)行可檢測(cè)地標(biāo)記，那么形成可檢測(cè)標(biāo)記的第一特異性結(jié)合伙伴-分析物(抗原或抗體)-第二特異性結(jié)合伙伴的復(fù)合物。任何未結(jié)合的特異性結(jié)合伙伴，無論標(biāo)記的或未標(biāo)記的，可以通過使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)，如通過洗滌，從混合物中去除。

在添加上述吖啶化合物之前、同時(shí)、或之后，過氧化氫可在混合物的原位生成或者提供或供應(yīng)給混合物。過氧化氫可以以對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說顯而易見的很多方式在原位生成。

可替代的，過氧化氫的源可以簡(jiǎn)單地添加至混合物。例如，過氧化氫的源可以是已知包含有過氧化氫的一種或多種緩沖液或其他溶液。在這點(diǎn)上，可以簡(jiǎn)單地添加過氧化氫溶液。

當(dāng)向樣品中同時(shí)或相繼添加至少一種堿性溶液時(shí)，產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)，即化學(xué)發(fā)光信號(hào)，指示抗-HIV抗體和/或HIV抗原的存在。堿性溶液包含至少一種堿，并且pH大于或等于10，優(yōu)選地，大于或等于12。堿性溶液的實(shí)例包括，但不限于，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化銨、氫氧化錳、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈣、碳酸鈣和碳酸氫鈣。添加至樣品的堿性溶液的量取決于堿性溶液的濃度。根據(jù)所用的堿性溶液的濃度，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地確定添加至樣品中的堿性溶液的量。

可通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)檢測(cè)生成的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。根據(jù)生成信號(hào)的強(qiáng)度，可定量樣品中抗-HIV抗體和/或HIV抗原的量。特別地，樣品中抗-HIV抗體和/或HIV抗原的量與生成信號(hào)的強(qiáng)度成比例?？赏ㄟ^將生成的光的量與抗-HIV抗體和/或HIV抗原的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較或與參考標(biāo)準(zhǔn)比較而定量存在的抗-HIV抗體和/或HIV抗原的量。標(biāo)準(zhǔn)曲線可通過質(zhì)譜、重量分析法和其他本領(lǐng)域已知的其他技術(shù)，通過使用抗-HIV抗體和/或HIV抗原的連續(xù)稀釋或已知濃度的溶液而生成。

抗-HIV抗體和/或HIV抗原免疫測(cè)定通?？赏ㄟ^使用本領(lǐng)域已知的任何形式來進(jìn)行，所述形式如，但不限于，夾心形式。特別地，在一種形式中，特異性地結(jié)合HIV抗原的抗體用于確定樣品中HIV抗原的總量。更加特別地，抗體結(jié)合HIV抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，這被稱為彼此“夾心”。通常地，用于捕獲測(cè)試樣品中的HIV抗原的抗體被稱為“捕獲劑”，例如“捕獲抗體”。用于將可檢 測(cè)和可定量的標(biāo)記結(jié)合在夾心上的抗體被稱為“檢測(cè)劑”，例如“檢測(cè)抗體”或“綴合物”。

在另一形式中，特異性地結(jié)合抗-HIV抗體的蛋白、多肽或其片段(如分離的多肽、純化的多肽、合成肽或重組多肽或重組蛋白)用于確定樣品中HIV抗體的總量。更加特別地，蛋白多肽或其片段結(jié)合HIV抗體而形成免疫復(fù)合物，這被稱為彼此“夾心”。通常地，用于捕獲測(cè)試樣品中抗-HIV抗體的蛋白多肽或其片段被稱為“捕獲劑”，例如“捕獲蛋白/肽/多肽”。用于將可檢測(cè)和可定量的標(biāo)記與夾心結(jié)合的蛋白多肽或其片段被稱為“檢測(cè)劑”，例如“檢測(cè)蛋白/肽/多肽”或“綴合物”。

一般地說，用于(例如，懷疑含有)抗-HIV抗體和/或HIV抗原的在測(cè)試樣品可與至少一種捕獲劑(例如，抗體和/或蛋白多肽或其片段)和至少一種檢測(cè)劑(例如，分別是抗體和/或蛋白多肽或其片段)同時(shí)或者相繼并且以任何的順序相接觸。例如，測(cè)試樣品可以首先接觸至少一種捕獲劑，然后(相繼)接觸至少一種檢測(cè)劑。可替代地，測(cè)試樣品可以首先接觸至少一種檢測(cè)劑，然后(相繼)接觸至少一種捕獲劑。在另一替代中，測(cè)試樣品可與捕獲劑和檢測(cè)劑同時(shí)接觸。

在夾心測(cè)定的形式中，懷疑含有抗-HIV抗體和/或HIV抗原的樣品首先在允許形成捕獲劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物的條件下與至少一種捕獲劑接觸。如果使用了多于一種的捕獲劑，那么就會(huì)形成多重捕獲劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或多重捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物。在夾心測(cè)定中，以樣品中預(yù)期的抗-HIV抗體和/或HIV抗原的最大量的摩爾過量使用捕獲劑。例如，可使用每毫升大約5μg至大約1mg捕獲劑的緩沖液(例如，微粒涂覆緩沖液)。

競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定經(jīng)常用于測(cè)量小分析物，這是因?yàn)樾枰獌H通過一個(gè)抗體的結(jié)合，所述競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定包括相繼和經(jīng)典形式。在相繼的競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定中，將針對(duì)目的分析物的捕獲單克隆抗體和/或捕獲蛋白多肽或其片段涂覆或捕獲在微量滴定板的孔上。當(dāng)含有目的分析物的樣品被添加至孔中時(shí)，目的分析物結(jié)合涂覆的或捕獲的單克隆抗體和/或捕獲的蛋白多肽或其片段結(jié)合。洗滌之后，將已知量的標(biāo)記的(例如，生物素或辣根過氧化物酶(HRP))分析物添加至孔中。用于酶標(biāo)記的底物是產(chǎn)生信號(hào)所必須的。用于HRP的合適底物的實(shí)施例是3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或分子鄰苯二胺鹽酸鹽(OPD)。 洗滌之后，測(cè)量由標(biāo)記的分析物生成的信號(hào)，并且與樣品中分析物的量成反比。在經(jīng)典的競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定中，將針對(duì)目的分析物的單克隆抗體和/或蛋白多肽或其片段涂覆或捕獲在微量滴定板的孔上。然而，不同于相繼競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫測(cè)定，同時(shí)將樣品和標(biāo)記的分析物添加至孔。樣品中的任何分析物與標(biāo)記的分析物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合捕獲的單克隆抗體和/或捕獲的蛋白/肽/多肽。洗滌之后，測(cè)量由標(biāo)記的分析物生成的信號(hào)，并且該信號(hào)與樣品中分析物的量成反比。

可替代地，捕獲劑可與微量結(jié)合，其事前被涂覆鏈酶親和素或生物素(例如，使用Power-BindTM-SA-MP鏈酶親和素涂覆的微量滴定板(Seradyn,Indianapolis,IN))或抗-種類-特異單克隆抗體。如果需要，底物可以被衍生以允許與捕獲劑上的各種官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。這種衍生需要使用特定的連接劑，其實(shí)例包括，但不限于，馬來酸酐、N-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺。

在測(cè)試樣品用于測(cè)定抗-HIV抗體和/或HIV抗原之后，將其與至少一種捕獲劑(例如，第一捕獲抗體)接觸，孵育混合物以使得形成第一捕獲(或多重捕獲)劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或第一捕獲(或多重捕獲)劑/HIV抗原復(fù)合物。如果將測(cè)試樣品與多于一個(gè)的捕獲劑接觸，那么會(huì)形成多重捕獲劑/抗-HIV復(fù)合物和/或多重捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物。孵育可在pH為大約4.5至大約10.0，溫度為大約2℃至大約45℃，時(shí)間為至少大約為一(1)分鐘至大約十八(18)分鐘，優(yōu)選地大約1分鐘至大約24分鐘，最優(yōu)選地大約4分鐘至大約18分鐘的條件下進(jìn)行。本文所述的免疫測(cè)定可在一步(是指測(cè)試樣品、至少一種捕獲抗體和至少一種檢測(cè)抗體和/或測(cè)試樣品，至少一種捕獲蛋白/肽/多肽和至少一種檢測(cè)蛋白/肽/多肽都被相繼或同時(shí)添加至反應(yīng)器中)或多于一步，如2步、3步等進(jìn)行。

在形成(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物之后，所述復(fù)合物然后與至少一種檢測(cè)劑接觸(在允許形成(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物的條件下)。如果(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物與多于一個(gè)檢測(cè)劑相接觸，那么然后形成(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體/多個(gè)檢測(cè)劑復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原/多個(gè)檢測(cè)劑復(fù)合物。由于利用捕獲劑，當(dāng)將至少一種 檢測(cè)劑與(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原復(fù)合物相接觸時(shí)，需要在與上述相似的條件下的孵育時(shí)間用于形成(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原檢測(cè)劑復(fù)合物。優(yōu)選地，至少一種檢測(cè)劑包含可檢測(cè)標(biāo)記?？蓹z測(cè)標(biāo)記可以在形成(第一或多重)捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或(第一或多重)捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物形成之前、同時(shí)或之后與至少一種檢測(cè)劑結(jié)合?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何可檢測(cè)標(biāo)記(參見上述討論，包括Polak和Van Noorden(1997)和Haugland(1996))。

可檢測(cè)標(biāo)記可直接或通過連接劑結(jié)合檢測(cè)劑?？梢允褂玫倪B接劑的實(shí)例是EDAC(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺、氫氯化物)，其可以從Sigma-Aldrich,St.Louis,MO公司商購獲得?？梢允褂玫钠渌B接劑是本領(lǐng)域已知的。用于將可檢測(cè)標(biāo)記與檢測(cè)劑結(jié)合的方法在本領(lǐng)域是已知的。此外，許多可檢測(cè)標(biāo)記能夠買到或合成，其已經(jīng)含有有助于將可檢測(cè)標(biāo)記連接至抗體和/或蛋白多肽或其片段的末端基團(tuán)，如CPSP-吖啶醚(例如，9-[N-甲苯璜?；?N-(3-丙羧基)]-10-(3-磺丙基)吖啶羧胺)或者SPSP-吖啶醚(例如，N10-(3-丙羧基)-N-(3-丙羧基)-吖啶-9-羧胺)。

捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物可以是，但不一定是，在標(biāo)記的定量之前從測(cè)試樣品的殘留物中分離出來。例如，如果至少一種捕獲劑結(jié)合固體支持物，如，孔或珠，分離可以通過去除與固體支持物接觸的(測(cè)試樣品的)流體而實(shí)現(xiàn)?？商娲?，如果至少一種捕獲劑結(jié)合固體支持物，那么它可以同時(shí)與測(cè)試樣品和至少一種檢測(cè)劑接觸以形成捕獲劑/抗-HIV抗體//檢測(cè)劑復(fù)合物和/或捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物，接下來去除與固體支持物接觸的測(cè)試樣品。如果至少一種捕獲劑沒有結(jié)合固體支持物，然后捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物不必從測(cè)試樣品中去除用于定量標(biāo)記的量。

在形成標(biāo)記的捕獲劑/抗-HIV抗體/檢測(cè)劑復(fù)合物和/或標(biāo)記的捕獲劑/HIV抗原/檢測(cè)劑復(fù)合物之后，通過使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)定量復(fù)合物中標(biāo)記的量。例如，如果使用酶標(biāo)記，標(biāo)記的復(fù)合物與用于標(biāo)記的底物發(fā)生反應(yīng)，從而給出定量的反應(yīng)如顏色的顯色。如果所述標(biāo)記是放射性標(biāo)記，使用閃爍計(jì)數(shù)器定量該標(biāo)記。如果所述標(biāo)記是熒光標(biāo)記，通過用一種顏色的光(被稱為“激發(fā)波長(zhǎng)”) 刺激標(biāo)記，并檢測(cè)響應(yīng)刺激由標(biāo)記發(fā)射出的另一顏色(被稱為“發(fā)射波長(zhǎng)”)而定量該標(biāo)記。如果所述標(biāo)記是化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，通過檢測(cè)可視的發(fā)射光或通過使用照度計(jì)、X-射線膠片、高速攝影膠片、CCD照相機(jī)等檢測(cè)發(fā)射光而定量該標(biāo)記。一旦已經(jīng)定量復(fù)合物中標(biāo)記的量之后，確定測(cè)試樣品中抗-HIV抗體和/或HIV抗原的存在和/或濃度。特別地，抗-HIV抗體和/或HIV抗原的濃度可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定，該標(biāo)準(zhǔn)曲線通過使用已知濃度的抗-HIV抗體和/或HIV抗原的連續(xù)稀釋而生成。除了使用連續(xù)稀釋，標(biāo)準(zhǔn)曲線可以通過質(zhì)譜和通過本領(lǐng)域已知的其他技術(shù)經(jīng)重量分析地生成。

在化學(xué)發(fā)光微粒測(cè)定中使用分析器，綴合物稀釋液pH應(yīng)該在大約6.0+/-0.2，微粒涂覆緩沖液應(yīng)該被保持在室溫下(例如，大約17℃至大約27℃)，微粒涂覆緩沖液pH應(yīng)該在大約6.5+/-0.2，并且微粒稀釋液pH應(yīng)該在大約7.8+/-0.2。固體優(yōu)選地小于大約0.2％，如小于大約0.15％，小于大約0.14％，小于大約0.13％，小于大約0.12％，或小于大約0.11％，如大約0.10％。

在向前的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合形式中，使用等份的已知濃度的可檢測(cè)標(biāo)記的抗-HIV抗體和/或HIV抗原與測(cè)試樣品中的抗-HIV抗體和/或HIV抗原競(jìng)爭(zhēng)與捕獲劑結(jié)合，如，分別特異性地結(jié)合HIV抗原和/或抗-HIV抗體的抗-HIV抗體和/或HIV抗原。所述捕獲劑可同時(shí)或相繼與測(cè)試樣品和標(biāo)記的抗-HIV抗體和/或HIV抗原相接觸。所述捕獲劑可以固定化在固體支持物上。如果理想的話，捕獲劑可直接固定化在固體支持物上或通過連接劑固定化在固體支持物上。例如，分別特異性地結(jié)合HIV抗原和/或抗-HIV抗體的抗體和/或蛋白多肽或其片段可通過與連接劑結(jié)合而固定化在固體支持物上，該連接劑固定化在固體支持物上。兩種不同類型的復(fù)合物可生成—捕獲劑-標(biāo)記的抗-HIV抗體復(fù)合物和捕獲劑-未標(biāo)記的抗-HIV抗體復(fù)合物和/或捕獲劑-標(biāo)記的HIV抗原復(fù)合物和捕獲劑-未標(biāo)記的HIV抗原復(fù)合物。所述復(fù)合物可以是，但不需要是，在通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較而定量可檢測(cè)標(biāo)記之前分離自測(cè)試樣品的殘留物(例如，從固體支持物上分離測(cè)試樣品)，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線例如通過一系列的校準(zhǔn)物、通過質(zhì)譜、重力分析法或其他方式而生成的曲線。

在相反的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合形式中，固定化的抗-HIV抗體和/或HIV抗原可以相繼地或同時(shí)地與測(cè)試樣品和標(biāo)記的特異性結(jié)合伙伴，如抗體或蛋白多肽或其片段相接觸，該特異性結(jié)合伙伴特異性地結(jié)合HIV抗原和/或抗-HIV抗體。標(biāo)記 的特異性結(jié)合伙伴可以結(jié)合存在于測(cè)試樣品中的固定化的HIV抗原和/或抗-HIV抗體。結(jié)合存在于測(cè)試樣品中的HIV抗原和/或抗-HIV抗體的標(biāo)記的特異性結(jié)合伙伴與測(cè)試樣品的殘留物一起從固定化的HIV抗原和/或抗-HIV抗體中分離出來。然后通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較而檢測(cè)和/或定量附著至固定化的HIV抗原和/或抗-HIV抗體的可檢測(cè)標(biāo)記的量，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線例如通過一系列的校準(zhǔn)物、通過質(zhì)譜、重力分析法或其他方式而生成的曲線。

FPIA基于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合免疫測(cè)定原則。當(dāng)被線式偏振光激活時(shí)，熒光標(biāo)記的化合物將會(huì)發(fā)射熒光素，該熒光素的偏振度與其旋轉(zhuǎn)速率成反比。當(dāng)熒光標(biāo)記的跟蹤-捕獲劑復(fù)合物被線式偏振光激活時(shí)，發(fā)射的光保持高的偏振，這是因?yàn)闊晒鈭F(tuán)被束縛不在光吸收的時(shí)間和光發(fā)射的時(shí)間之間的旋轉(zhuǎn)。當(dāng)“游離”跟蹤化合物(即，沒有結(jié)合捕獲劑的化合物)被線式偏振光激活時(shí)，其旋轉(zhuǎn)要比在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合免疫測(cè)定中產(chǎn)生的相應(yīng)跟蹤-捕獲劑綴合物更快。FPIA優(yōu)于RIA，這是因?yàn)闆]有放射性物質(zhì)需要特殊處理和處置。此外，F(xiàn)PIA是能夠簡(jiǎn)單且快速進(jìn)行的同質(zhì)測(cè)定。

通常地，預(yù)定水平可用作參照標(biāo)準(zhǔn)，從而相對(duì)于參照標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)估當(dāng)就抗-HIV抗體和/或HIV抗原測(cè)定測(cè)試樣品時(shí)獲得的結(jié)果。通常地，在作出所述比較時(shí)，通過在合適的條件下運(yùn)行足夠次特定的測(cè)定而獲得預(yù)定水平，從而可以得出分析物存在、量或濃度與疾病、紊亂或病況的特定的階段或終點(diǎn)或者與特定病征相聯(lián)系或關(guān)聯(lián)。典型地，預(yù)定水平通過測(cè)定參考受試者(或受試者群體)而獲得。

根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第一容器和所述第二容器各具有容納液體的空腔。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第一容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

a)至少一種固相，在所述固相上涂覆選自如下的至少一種蛋白：

i.來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；以及

iv.i-iii的任何組合；以及

b)至少一種固相，在所述固相上涂覆結(jié)合p24抗原的至少一種抗體或其抗 體片段。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第一容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

至少一種固相，在所述固相上涂覆至少一種選自如下的蛋白：

i.來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；以及

iv.i-iii的任何組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第二容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

a)選自如下的至少一種蛋白：

i.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的至少一種重組HIV-1p24蛋白；

iv.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

v.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2和/或HIV-1的包膜區(qū)的至少一種蛋白；以及

vi.i-v的任何組合；以及

b)與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、結(jié)合p24抗原的至少一種抗體或其抗體片段。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)的設(shè)備，其中所述第二容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

選自如下的至少一種蛋白：

i.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的至少一種重組HIV-1p24蛋白；

iv.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

v.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2和/或HIV-1的包膜區(qū)的至少一種蛋白；以及

vi.i-v的任何組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第二容器包括液體， 所述液體包括至少下列試劑：

a)至少一種固相，在所述固相上涂覆選自如下的至少一種蛋白：

i.來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；和

iv.i-iii的任何組合；以及

b)至少一種固相，在所述固相上涂覆結(jié)合p24抗原的至少一種抗體或其抗體片段。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第二容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

至少一種固相，在所述固相上涂覆選自如下的至少一種蛋白：

i.來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iv.i-iii的任何組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第一容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

a)選自如下的至少一種蛋白：

i.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的至少一種重組HIV-1p24蛋白；

iv.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

v.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2和/或HIV-1的包膜區(qū)的至少一種蛋白；以及

vi.i-v的任何組合；以及

b)與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、結(jié)合p24抗原的至少一種抗體或其抗體片段。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第一容器包括液體，所述液體包括至少下列試劑：

選自如下的至少一種蛋白：

i.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自M型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白：

ii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自O(shè)型HIV-1的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

iii.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的至少一種重組HIV-1p24蛋白；

iv.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2的包膜區(qū)的至少一種重組蛋白；

v.與可檢測(cè)標(biāo)記綴合的、來自HIV-2和/或HIV-1的包膜區(qū)的至少一種蛋白；以及

vi.i-v的任何組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述固相是微粒。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述重組蛋白是融合蛋白。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述抗體是多克隆的、單克隆的、人的、人源化的、嵌合抗體、單鏈抗體、表位結(jié)合片段、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)、包括VL或VH結(jié)構(gòu)域的片段或者由Fab表達(dá)文庫產(chǎn)生的片段。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者任何所述可檢測(cè)標(biāo)記中兩個(gè)或更多個(gè)的組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是生物素、吖啶或其組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，其中所述第二容器具有容納液體的空腔，所述液體包括至少一種試劑，其中，所述至少一種試劑是：

a.洗滌溶液；

b.稀釋劑；或者

c.其任意組合。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本申請(qǐng)所述的設(shè)備，還包括具有呈圓角矩形形狀的第三容器，所述第三容器具有容納液體的空腔，所述液體包括至少一種試劑，其中，所述至少一種試劑是：

a.洗滌溶液；

b.稀釋劑；或者

c.其任意組合。

附圖說明

圖1A示出了容納多個(gè)實(shí)施例容器的實(shí)施例套筒，并且所述實(shí)施例套筒通過在第一位置的第一容器連接至實(shí)施例傳送帶的部分。

圖1B示出了在第二位置具有第一容器的圖1A的實(shí)施例套筒。

圖2是圖1A的A-A截面的剖面圖。

圖3是實(shí)施例套筒和脫離傳送帶并且密封的圖1A和2的容器的透視圖。

圖4示出了圖1A-3的實(shí)施例套筒的實(shí)施例容器的多個(gè)支座。

圖5是從實(shí)例傳送帶脫離的圖2中的實(shí)施例容器和套筒的下部的放大圖。

圖6是實(shí)例第一容器的上部和實(shí)施例套筒沿圖3的B-B截面的透視圖、剖面圖。

圖7是圖2中第一容器在非鎖緊位置的放大圖。

圖8是實(shí)例第一容器沿圖1A的C-C截面的頂視圖、剖面圖。

圖9是從實(shí)施例套筒移除的實(shí)例第一容器沿圖3的D-D截面的剖面圖。

圖10是從實(shí)施例套筒移除的實(shí)例第一容器沿圖3的B-B截面的側(cè)剖面圖。

圖11示出了圖6-9中實(shí)例第一容器的替代底壁。

圖12是圖11中實(shí)例底壁的頂視圖。

圖13是表示本文公開的實(shí)例方法的流程圖。

若干附圖或若干附圖的部分可能沒有按比例繪制。相反地，為了清楚說明多層和區(qū)域，可能放大附圖中層的厚度。只要有可能，整個(gè)附圖和附屬的書面說明中使用相同的參考數(shù)字指示相同或類似的部件。如本專利中所使用的，說明任何部件(例如，層、薄膜、區(qū)域、或板塊)以任何方式(例如，安置于、位于、放置于、或形成于，等)位于另一部件上，這是指參考部件或者與其他部件相接觸，或者參考部件通過位于它們之間的一個(gè)或多個(gè)中間部件而位于其他部件之上。說明任何部件與另一部件相接觸，就是說在兩個(gè)部件之間沒有中間部件。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)在轉(zhuǎn)至附圖，圖1A是連接至診斷分析器的傳送帶102上的實(shí)施例套筒100的透視圖。在示出的實(shí)施例中，傳送帶102包括平臺(tái)104，套筒100支持于其上。套筒100可手動(dòng)地通過自動(dòng)裝置經(jīng)由傳送裝置，和/或經(jīng)由任何其他裝置和/或技術(shù)被傳送至和/或放置于平臺(tái)104上。在操作實(shí)施例傳送帶102期間，平臺(tái)104和因此套筒100在第一旋轉(zhuǎn)軸106周圍沿著由傳送帶102限定的基本上 環(huán)形通道108進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。在一些實(shí)施例中，多個(gè)套筒連接至平臺(tái)104。

在一些實(shí)施例中，平臺(tái)104定期地或不定期地在一個(gè)方向上例如，通道108的方向上移動(dòng)。在其他實(shí)施例中，平臺(tái)104以前后(例如，擺動(dòng))的運(yùn)動(dòng)形式移動(dòng)。例如，平臺(tái)104可重復(fù)地在第一方向(例如，順時(shí)針)移動(dòng)第一距離，然后在與第一方向相反的第二方向(例如，逆時(shí)針)移動(dòng)第二距離。在一些實(shí)施例中，第一方向大于第二方向使得位于平臺(tái)104上的套筒100在第一旋轉(zhuǎn)軸106的周圍通過前后的運(yùn)動(dòng)方式旋轉(zhuǎn)。在一些實(shí)施例中，在平臺(tái)104在第一方向移動(dòng)之后，平臺(tái)104在以第二方向移動(dòng)之前在給定量的時(shí)間段內(nèi)基本上是靜止的。

在示出的實(shí)施例中，套筒100包括基座或運(yùn)載器110、第一容器112、第二容器114和第三容器116。在一些實(shí)施例中，可能存在其他數(shù)量的容器，包括，例如，1、2、4、5、6等等。同樣地，在一些實(shí)施例中，一個(gè)或多個(gè)容器可被分割成多個(gè)艙以增加運(yùn)載器上艙的數(shù)量。因此，運(yùn)載器可包括三個(gè)容器，并且一個(gè)容器可具有三個(gè)艙從而在運(yùn)載器上總共有5個(gè)艙。其他組合也是可能的。在示出的實(shí)施例中，運(yùn)載器110被連接至平臺(tái)104以與平臺(tái)104一起旋轉(zhuǎn)。實(shí)施例運(yùn)載器110包括支座118、第一端壁120、第二端壁122和蓋子124。在示出的實(shí)施例中，第一容器112、第二容器114和第三容器116的第一端126、128、130分別連接至支座118上，并且第一容器112、第二容器114和第三容器116的第二端132、134、136分別連接至蓋子124上。

在示出的實(shí)施例中，第一容器112、第二容器114和第三容器116相對(duì)于由傳送帶102限定的環(huán)形通道108呈徑向排列在運(yùn)載器110內(nèi)。在示出的實(shí)施例中，第一容器112臨近第一端壁120放置，第三容器116臨近第二端壁122放置，并且第二容器114放置在第一容器112和第二容器114之間。實(shí)施例容器112、114、116具有圓角矩形形狀。在其他實(shí)施例中，實(shí)施例容器112、114、116具有其他形狀(例如，矩形、正方形、圓柱形、三角形或其他合適的形狀)。每個(gè)容器112、114、116可容納液體。在一些實(shí)施例中，所述液體包括待分析的樣品，一個(gè)或多個(gè)試劑和/或固體顆粒(例如，涂覆順磁性顆粒和/或其他微粒的膠乳)。實(shí)施例蓋子124包括三個(gè)進(jìn)入容器112、114、116的孔138、140、142。例如，液體可經(jīng)由各自的孔138、140、142被存放入第一容器112、第二容器114和第三容器116中和/或從其中移除。在一些實(shí)施例中，第一容器112、第二 容器114和/或第三容器116具有大約相同的液體容量。在其他實(shí)施例中，第一容器112、第二容器114和/或第三容器116具有不同的液體容量。第一容器112、第二容器114和/或第三容器116可被充以相同量或不同量的液體。

圖1B是實(shí)施例套筒100在第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110在第二旋轉(zhuǎn)軸144周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)時(shí)的透視圖。在示出的實(shí)施例中，第一容器112被連接至運(yùn)載器110上使得第一容器112與運(yùn)載器110一起在第一旋轉(zhuǎn)軸106的周圍并且相對(duì)于運(yùn)載器110在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。在一些實(shí)施例中，相對(duì)于運(yùn)載器110的第一容器112的旋轉(zhuǎn)對(duì)應(yīng)于平臺(tái)104的運(yùn)動(dòng)。在示出的實(shí)施例中，當(dāng)套筒100與平臺(tái)104在第一方向上移動(dòng)時(shí)，第一容器112在第一方向上相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)了2轉(zhuǎn)。當(dāng)套筒100與平臺(tái)104在第二方向上移動(dòng)時(shí)，第一容器112在第二方向上相對(duì)于運(yùn)載器110移動(dòng)了1轉(zhuǎn)。以這種方式，第一容器112以前后和/或振動(dòng)的運(yùn)動(dòng)方式相對(duì)于運(yùn)載器110移動(dòng)。第一容器112在第一方向和第二方向上相對(duì)于運(yùn)載器110的上述旋轉(zhuǎn)數(shù)量以及方式(例如，前后移動(dòng))僅僅是實(shí)施例，在所述方式中容器相對(duì)于運(yùn)載器110移動(dòng)。在其他實(shí)施例中，第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110以其他方式、旋轉(zhuǎn)數(shù)量、方向等等旋轉(zhuǎn)。在一些實(shí)施例中，第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍完全旋轉(zhuǎn)，并且在一些實(shí)施例中，第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍前后擺動(dòng)。同樣地，在一些實(shí)施例中，第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍移動(dòng)，同時(shí)傳送帶102相對(duì)于第一旋轉(zhuǎn)軸106是靜止的。

圖2是連接至傳送帶102上的實(shí)施例套筒100沿圖1A中A-A截面的剖面圖。實(shí)施例套筒100經(jīng)由運(yùn)載器110可拆卸地連接至傳送帶102。在示出的實(shí)施例中，平臺(tái)104包括第一叉子200和第二叉子202以使在運(yùn)載器110上嚙合相應(yīng)的結(jié)構(gòu)(例如，孔、插孔連接器等)，并且在相對(duì)于平臺(tái)104的位置容納運(yùn)載器110。在其他實(shí)施例中，套筒100以其他方式(例如，經(jīng)由一個(gè)或多個(gè)卡箍、夾子、螺栓、卡位、彈簧加載鞘、和/或其他機(jī)械緊固零件)可拆卸地連接至傳送帶102。

在示出的實(shí)施例中，第一容器112、第二容器114和第三容器116各包括與蓋子124的孔138、140、142之一相通(例如，延伸至)的喉口203、205、206(例如，與容器112、114、116之一流體相通的套管或管子)。在操作實(shí)施例傳送帶102期間，液體可經(jīng)由喉口203、205、206(例如，經(jīng)由吸液管)從容器 112、114、116中分配(例如，存放)和/或吸取(例如，移除)。

在示出的實(shí)施例中，第二容器114和第三容器116連接至運(yùn)載器110，使得在操作傳送帶102期間(例如，當(dāng)平臺(tái)104沿著環(huán)形通道108移動(dòng)套筒100時(shí))第二容器114和第三容器116相對(duì)于運(yùn)載器110基本上是靜止的。

在示出的實(shí)施例中，傳送帶102包括聯(lián)軸器210以使第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)。在示出的實(shí)施例中，運(yùn)載器110的支座118限定臨近第一容器112的第一端126的第四孔212。在示出的實(shí)施例中，聯(lián)軸器210通過第四孔212以圖2的方位從平臺(tái)104的下方延伸以嚙合第一容器112。結(jié)合圖8更加詳細(xì)的描述，聯(lián)軸器210將第一容器112從支座118提升以使得第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)。

圖2的實(shí)施例聯(lián)軸器210是插頭連接器以嚙合位于實(shí)施例第一容器112的第一端126上的插孔連接器214。在其他實(shí)施例中，插頭連接器210和插孔連接器214可以掉換。在示出的實(shí)施例中，插頭聯(lián)軸器210包括具有突出218的柄216，并且實(shí)施例插孔連接器214包括具有槽口222的桿220以接收柄216的突出218。在示出的實(shí)施例中，聯(lián)軸器210通過操作連接至旋轉(zhuǎn)裝置224(例如，齒輪)。旋轉(zhuǎn)裝置224可操作地連接至傳送帶102的驅(qū)動(dòng)裝置(例如，發(fā)動(dòng)機(jī))(未示出)。

在一些實(shí)施例中，當(dāng)傳送帶102在第一旋轉(zhuǎn)軸106周圍旋轉(zhuǎn)平臺(tái)104時(shí)，旋轉(zhuǎn)裝置224和聯(lián)軸器210在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍進(jìn)行旋轉(zhuǎn)以在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)第一容器112。因此，在示出的實(shí)施例中，聯(lián)軸器210用于限定第二旋轉(zhuǎn)軸144。在示出的實(shí)施例中，第二旋轉(zhuǎn)軸144基本上平行于第一容器112的縱軸。

圖3是實(shí)施例套筒100從圖1A-2的傳送帶102解連接的透視圖。在示出的實(shí)施例中，運(yùn)載器110包括第一手柄300和第二手柄302以便于通過人(例如，手動(dòng))和/或機(jī)器人抓住、容納、提升、移動(dòng)和/或傳送套筒100。在示出的實(shí)施例中，第一帽304連接至第一容器112，第二帽306連接至第二容器114，并且第三帽308連接至第三容器116。帽304、306、308基本上覆蓋和/或密封容器112、114、116的喉口203、205、206。在一些實(shí)施例中，第一容器112、第二容器114和/或第三容器116在套筒100連接至傳送帶102之前至少部分被填充液體。因此，實(shí)施例帽304、306、308阻止液體流出容器112、114、116，同時(shí) 套筒100被提升、搬運(yùn)、移動(dòng)、傳送等。如在下面更詳盡的描述，實(shí)施例第一帽304可在鎖緊位置容納第一容器112。

圖4示出了圖1A-3中運(yùn)載器110的實(shí)施例支座118。在示出的實(shí)施例中，支座118包括支持物表面400、第一容器支持物402、第二容器支持物404和第三容器支持物406。第二容器114和第三容器116分別經(jīng)由第二容器支持物404和第三容器支持物406連接至支座118上。在示出的實(shí)施例中，第二容器支持物404和第三容器支持物406包括第一突出408(例如，脊)和第二突出410(例如，桿)。在示出的實(shí)施例中，當(dāng)?shù)诙萜?14和第三容器116連接至支座118上時(shí)，第二容器114和第三容器116位于支持物表面400上，并且嚙合第一突出408和第二突出410。第一突出408和第二突出410保持第二容器114和第三容器116，并且基本上阻止第二容器114和第三容器116相對(duì)于運(yùn)載器110的移動(dòng)。在其他實(shí)施例中，運(yùn)載器110采用額外的和/或不同的突出，保持成員和/或裝置以保持第二容器114和/或第三容器116。

實(shí)施例第一容器支持物402包括第三突出412(例如，脊)以保持第一容器112和/或基本上阻止當(dāng)?shù)谝蝗萜?12在鎖緊位置(例如，非旋轉(zhuǎn)位置)(圖5)時(shí)第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)。在示出的實(shí)施例中，第三突出412是具有對(duì)應(yīng)于第一容器112的圓角矩形形狀的圓角矩形剖面狀的脊。在示出的實(shí)施例中，第三突出412被升高到相對(duì)于支座118的支持物表面400的第一高度。實(shí)施例第一容器支持物402還包括環(huán)形脊或圈414。在示出的實(shí)施例中，第四孔212由第一容器支持物402限定，并且圈414放置于第四孔212周圍的支持物表面400上。實(shí)施例圈414在操作實(shí)施例定位裝置224和實(shí)施例傳送帶102期間，提供了齒輪表面，保持、支持、穩(wěn)定、對(duì)齊和/或定向第一容器112。實(shí)施例圈414被升高到相對(duì)于支持物表面400的第二高度，且第二高度高于第一高度。結(jié)合圖7在下文中更詳盡的描述，當(dāng)套筒100放置在平臺(tái)104上時(shí)，傳送帶102的聯(lián)軸器210嚙合第一容器112，并且相對(duì)于運(yùn)載器110的支持物表面400提升第一容器112至未鎖緊位置，在該未鎖緊位置中第一容器112經(jīng)由聯(lián)軸器210自由旋轉(zhuǎn)。

圖5是當(dāng)?shù)谝蝗萜?12在下部或鎖緊位置時(shí)，實(shí)施例第一容器112的第一端126的剖面圖。在示出的實(shí)施例中，套筒100從傳送帶102上解連接(例如，在將套筒100傳送至平臺(tái)104期間)。在鎖緊位置上，第一容器112的第一周邊 外緣或邊緣500被支持于運(yùn)載器110的支持物表面400上。第一容器112的第一邊緣500嚙合第三突出412，使得第三突出412基本上阻止第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)(例如，第三突出412阻止第一容器112的旋轉(zhuǎn))。因此，在示出的實(shí)施例中，當(dāng)?shù)谝蝗萜?12在鎖緊位置時(shí)，第一容器112非旋轉(zhuǎn)地連接至運(yùn)載器110上。在一些實(shí)施例中，第一容器112的第一邊緣500的形狀和尺寸基本上符合第三突出412的形狀。在示出的實(shí)施例中，第一容器112的插孔連接器214放置在由圈414限定的空間(例如，第四孔212)，并且圈414在第一容器112的凹槽501中被接收到。

實(shí)施例第二容器114包括第二邊緣502和第二凹槽503。在示出的實(shí)施例中，第二邊緣502嚙合第一突出408和第二容器支持物404的第二突出410以將第二容器114非旋轉(zhuǎn)地連接至運(yùn)載器110。實(shí)施例第三容器116包括第三邊緣504和第三凹槽506。在示出的實(shí)施例中，第三容器支持物406的第一突出408和第二突出410放置在第三凹槽506中，并且嚙合第三容器116的第三邊緣504以將第三容器116非旋轉(zhuǎn)地連接至運(yùn)載器110上。

圖6是當(dāng)?shù)谝蝗萜?12在鎖緊位置時(shí)，第一容器112的第二端132沿著圖3的B-B截面的剖面圖。圖5的實(shí)施例第一帽304延伸至蓋子124的第一孔138，并且連接至第一容器112的喉口203。實(shí)施例第一帽304包括密封部分600用于蓋子124和/或密封第一容器112的喉口203。在示出的實(shí)施例中，第一帽304包括連接在密封部分600上的手柄602。手柄602便于操縱第一帽304、連接并且解連接(例如，移除)第一帽304至第一容器112上等。

當(dāng)?shù)谝蝗萜?12連接至運(yùn)載器110，并且第一帽304連接至第一容器112時(shí)，第一帽304嚙合(例如，接觸)蓋子124以基本上在鎖緊位置容納或保持第一容器112。在示出的實(shí)施例中，第四突出606從第一帽304的密封部分延伸。實(shí)施例第四突出606從密封部分600的外周表面608徑向延伸。實(shí)施例運(yùn)載器110的實(shí)施例蓋子124包括延伸入第一孔138的部分的棱610。在圖6的定向中，第一帽304在第一位置，使得第四突出606放置在棱610的下面。因此，當(dāng)?shù)谝幻?04在第一位置時(shí)，第四突出606嚙合棱610以基本上阻止第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110平行于第二旋轉(zhuǎn)軸144的移動(dòng)。例如，第四突出606可接觸棱610以阻止第一容器112在第三突出412之上被提升(圖5)。因此，在示出的實(shí)施例中，第一帽304容納與第三突出412嚙合的第一容器112，借以保持第一 容器112位于鎖緊位置。

移除實(shí)施例第一帽304使得第一容器112從下降的或鎖緊位置(圖5)移動(dòng)至升高的或未鎖緊位置(圖7)，其中第一容器112可相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)。為了從第一容器112移除圖6的實(shí)施例第一帽304，第一帽304進(jìn)行旋轉(zhuǎn)直至第四突出606在蓋子124的棱610的第一孔138的槽口或空間612(例如，與第一孔138相通的狹槽)中對(duì)齊。第一帽304然后可從第一容器112(例如，經(jīng)由手柄602)中移除。如下面詳盡的描述，當(dāng)?shù)谝蝗萜?12位于未鎖緊位置時(shí)，第一容器112可從支持物表面400處被提升以使得第一容器112相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)。第二帽306和第三帽308進(jìn)行相似地操作以分別確保第二容器114和第三容器116并且確保蓋子124的位置。

圖7示出了位于未鎖緊位置的實(shí)施例第一容器112。在示出的實(shí)施例中，套筒100連接至傳送帶102上，并且第一帽304從第一容器112中移除。運(yùn)載器110的實(shí)施例聯(lián)軸器210通過第四孔212延伸并且沿著第二旋轉(zhuǎn)軸144移動(dòng)(例如，提升或升高)第一容器112。在示出的實(shí)施例中，聯(lián)軸器210將第一容器112移動(dòng)到第三高度，該第三高度大于第三突出412(圖4和5)的第一高度且小于圈414的第二高度。當(dāng)實(shí)施例第一容器112被提升至第三高度時(shí)，第一容器112的第一邊緣500脫離第三突出412。因此，第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍自由旋轉(zhuǎn)(例如，第三孔412沒有阻止第一容器112的旋轉(zhuǎn))。在示出的實(shí)施例中，當(dāng)?shù)谝蝗萜?12被移動(dòng)至未鎖緊位置時(shí)，插孔連接器214保持在由圈414限定的空間內(nèi)。在一些實(shí)施例中，當(dāng)?shù)谝蝗萜?12相對(duì)于運(yùn)載器110旋轉(zhuǎn)時(shí)，第一容器112的插孔連接器214和圈414作為齒輪發(fā)揮效用。

圖8是圖1A-7的實(shí)施例第一容器112沿圖1A的C-C截面的剖面圖。在示出的實(shí)施例中，第一容器112包括第一側(cè)壁800、第二側(cè)壁802、第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁804。第一側(cè)壁800位于第二側(cè)壁802的對(duì)側(cè)。在示出的實(shí)施例中，第一側(cè)壁800包括向第二側(cè)壁802延伸的第一肋808。實(shí)施例第二側(cè)壁802包括向第一側(cè)壁800延伸的第二肋810。實(shí)施例第一肋808和實(shí)施例第二肋810分別沿著第一側(cè)壁800和第二側(cè)壁802延伸，基本上平行于第二旋轉(zhuǎn)軸144。在示出的實(shí)施例中，第一肋808和第二肋810各放置在與第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806幾乎等距的位置。圖8中示出的第一肋808和第二肋810僅僅是實(shí)施例。因此，第一肋808和/或第二肋810在其他實(shí)施例中可具有其他定向、形狀、尺寸等。 在一些實(shí)施例中，第一側(cè)壁800和/或第二側(cè)壁802可包括其他數(shù)量的肋(例如，0、2、3等)。此外，在一些實(shí)施例中，一個(gè)或多個(gè)肋可僅以相對(duì)于第二旋轉(zhuǎn)軸144的角度定向和/或比其他更接近于端壁804、806之一而向壁下部分延伸。

實(shí)施例第一容器112呈圓角矩形形狀。在示出的實(shí)施例中，第一側(cè)壁800基本上與第二側(cè)壁802平行。實(shí)施例第一側(cè)壁800包括第一平的或平面的部分812，并且實(shí)施例第二側(cè)壁802包括平行于第一平面部分812的第二平的或平面的部分814。在示出的實(shí)施例中，第三側(cè)壁804在第四側(cè)壁806的對(duì)側(cè),并且第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806是彎曲的。在示出的實(shí)施例中，第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806相對(duì)于第一容器112的縱軸向外彎曲。在示出的實(shí)施例中，在第一側(cè)壁800和第二側(cè)壁802之間的第一距離小于在第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806之間的第二距離。在其他實(shí)施例中，第一距離大于或等于第二距離。在一些實(shí)施例中，第一容器112的深度為大約20毫米(例如，從第一側(cè)壁800的最外面的點(diǎn)到第二側(cè)壁802上最外面點(diǎn)的距離)，且寬度為大約36毫米(例如，從第三側(cè)壁804上最外面點(diǎn)到第四側(cè)壁806上最外面點(diǎn)的距離)。其他實(shí)施例具有其他尺寸。在其他實(shí)施例中，第一容器112具有其他形狀，如，例如，矩形、正方形、圓柱形、三角形和/或其他合適的形狀或形狀的組合。

圖9是圖1A-8中實(shí)施例第一容器112沿圖3的D-D截面且從套筒100移除的剖面圖。圖10是實(shí)施例第一容器112沿圖3中B-B截面的剖面圖，其相似于圖6，但是顯示的是第一容器112的全長(zhǎng)。參考圖9，實(shí)施例第一容器112包括底壁900和在底壁900對(duì)側(cè)的頂壁902。實(shí)施例頂壁902連接至第一側(cè)壁800、第二側(cè)壁802、第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806。在示出的實(shí)施例中，頂壁902基本上是平面的。喉口203在圖9的定向中從實(shí)施例頂壁902開始向上延伸。在示出的實(shí)施例中，除去喉口203和第一帽304的第一容器112的高度(例如，從第一邊緣500的最外面的點(diǎn)到頂壁902上最外面點(diǎn))是大約94毫米。其他實(shí)施例可能包括其他高度。

圖9中實(shí)施例底壁900連接至第一側(cè)壁800、第二側(cè)壁802、第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806。在示出的實(shí)施例中，底壁900是通過第一側(cè)壁800和第二側(cè)壁802在第一軸的周圍從頂壁902拱起的或者彎曲。因此，當(dāng)從容器112的外側(cè)觀察時(shí)(例如，從容器112的外部的底部),底壁900是凸的，或者當(dāng)從容器112的內(nèi)側(cè)觀察時(shí)是凹的。實(shí)施例底壁900也是通過第三側(cè)壁804和第四側(cè)壁806 在第二軸的周圍從頂壁902拱起的或者彎曲。因此，實(shí)施例底壁900形成弓形結(jié)構(gòu)。

在一些實(shí)施例中，第一容器112至少部分充滿包括固體顆粒的試劑(例如，涂覆順磁性顆粒的膠乳)。液體中的一些顆粒可以沉降并且停留在底壁900上(例如，在將套筒100傳送至傳送帶102期間)。在操作傳送帶102期間，第一容器112在第一旋轉(zhuǎn)軸106(例如，以前后的方式運(yùn)動(dòng))和第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍移動(dòng)以攪動(dòng)液體和/或?qū)㈩w粒分散在液體中。例如，當(dāng)?shù)谝蝗萜?12經(jīng)由傳送帶102移動(dòng)時(shí)，底壁900的彎曲指引液體和/或位于底壁900上或附近的顆粒向頂壁902方向移動(dòng)(例如，流動(dòng))，從而攪動(dòng)液體并且分散顆粒。進(jìn)一步地，側(cè)壁800、802、804、806，第一肋808和/或第二肋810與和/或相對(duì)于液體的運(yùn)動(dòng)使得攪動(dòng)液體并且分散顆粒。在一些實(shí)施例中，第一容器112攪動(dòng)液體使得在操作傳送帶102期間，液體基本上均勻地分散在液體內(nèi)。

圖11-12示出了本文公開的具有替代底壁1100的第一容器112。圖11是第一容器112下部的透視圖、剖面圖，該圖示出了實(shí)施例底壁1100。在示出的實(shí)施例中，側(cè)壁800、802、804、806，頂壁902和底壁1100限定了空腔1101用以接收且容納液體。在示出的實(shí)施例中，底壁1100包括從第一側(cè)壁800延伸至第二側(cè)壁802，且從第三側(cè)壁804延伸至第四側(cè)壁806的洼或凹部1102(當(dāng)從容器112內(nèi)側(cè)觀察時(shí))。實(shí)施例凹部1102從頂壁902在第一軸1104和第二軸1106的周圍向外拱起(例如，垂直于第二旋轉(zhuǎn)軸144并且彼此相互垂直的斧狀物)。在一些實(shí)施例中，凹部1102是類似于弓形的或半球形的結(jié)構(gòu)。

實(shí)施例底壁1100還包括從底壁1100的第一側(cè)1110向頂壁902延伸的凸出或突出1108(例如，延伸至空腔1101)。在示出的實(shí)施例中，插孔連接器214的桿220與突出1108對(duì)齊，并且依靠于底壁1100的第二側(cè)1112，其在第一側(cè)1110的對(duì)側(cè)。在示出的實(shí)施例中，突出1108是具有頂或尖1114的凸面(例如，圓形的或彎曲的突出或凸出)。因此，圖11的實(shí)施例底壁1100包括凹部1102和凸部(例如，實(shí)施例突出1108)。在其他實(shí)施例中，突出1108具有其他形狀(例如，錐形的、角錐形的、等等)。圖12的實(shí)施例突出1108具有第一彎曲半徑，并且實(shí)施例凹部1102具有第二彎曲半徑。在示出的實(shí)施例中，第一彎曲半徑小于第二彎曲半徑。同樣地，在示出的實(shí)施例中，第一彎曲半徑和第二彎曲半徑置于相對(duì)的方向。

圖12是圖11的實(shí)施例底壁1100的頂視圖。在示出的實(shí)施例中，突出1108具有置于底壁1100的中心1202上的基本上呈圓形的基座1200。在示出的實(shí)施例中，底壁1100的中心1202沿著第二旋轉(zhuǎn)軸144。因此，當(dāng)實(shí)施例第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144周圍旋轉(zhuǎn)時(shí)，底壁1100在第二旋轉(zhuǎn)軸144周圍旋轉(zhuǎn)。實(shí)施例突出1108的尖1114也放置于底壁1100的中心1202上，并且，因此，在示出的實(shí)施例中，尖1114沿著第二旋轉(zhuǎn)軸144放置。因此，突出1108從第二旋轉(zhuǎn)軸144向下傾斜。

當(dāng)實(shí)施例第一容器112在第二旋轉(zhuǎn)軸144周圍旋轉(zhuǎn)時(shí)，置于第一容器112中液體的顆粒沿著第二旋轉(zhuǎn)軸144可能感受到小的離心力或感受不到離心力。因此，這些顆?？赡艹两翟诘妆?100的突出1108之上或附近。在示出的實(shí)施例中，當(dāng)顆粒沉降在底壁1100的突出1108之上時(shí)，顆粒在突出1108上以遠(yuǎn)離尖1114的方向滑動(dòng)和/或滾動(dòng)。因此，顆粒向側(cè)壁800、802、804、806移動(dòng)，其中離心力便于液體中顆粒均勻的分散。

圖13示出了的代表實(shí)施例方法的流程圖。盡管對(duì)實(shí)施例過程參照?qǐng)D13示出的流程圖進(jìn)行了描述，但是很多其他的方法可以是替代使用的。例如，執(zhí)行方框的順序可以改變，和/或所描述的一些方框可以改變、消除，或合并。

圖13的方法通過將第一容器112下降至第一位置在方框1302處開始，用以將第一容器112非旋轉(zhuǎn)地連接至運(yùn)載器110。例如，圖1A-12中第一容器112可被下降至運(yùn)載器110的支座118的第一容器支持物402之上。在一些這樣的實(shí)施例中，第一容器112嚙合在第一位置的運(yùn)載器110的第一部分和運(yùn)載器110的第二部分。例如，第一邊緣500嚙合第三突出412，并且插孔連接器214嚙合圈414。在一些實(shí)施例中，第一帽304連接至第一容器112以容納或保持第一容器112在第一位置。

在方框1304，第二容器114非旋轉(zhuǎn)地支持于運(yùn)載器110上。在一些實(shí)施例中，第二容器114經(jīng)由第二容器支持物404的第一突出408和第二突出410非旋轉(zhuǎn)地連接至第二容器支持物404。在一些實(shí)施例中，第三容器116經(jīng)由第三容器支持物406的第一突出408和第二突出410也非旋轉(zhuǎn)地支持在運(yùn)載器110上。

在方框1306，第一容器112從第一位置被提升至第二位置，其中第一容器112從運(yùn)載器110的第一部分脫離，同時(shí)保持與運(yùn)載器110的第二部分的嚙合。例如，第一容器112可以通過傳送帶102的實(shí)施例聯(lián)軸器210從支持物表面提 升至第三高度。當(dāng)套筒100連接至傳送帶102時(shí)，聯(lián)軸器210延伸至第四孔212中，并且將第一容器112提升至第三高度。當(dāng)?shù)谝蝗萜?12被提升至第三高度時(shí)，第一邊緣500脫離第三突出412，并且插孔連接器214被放置于由圈414限定的空間內(nèi)。

在方框1308，第一容器112在旋轉(zhuǎn)軸周圍旋轉(zhuǎn)(例如，擺動(dòng)和/或旋轉(zhuǎn))。在一些實(shí)施例中，第一容器112在第一旋轉(zhuǎn)軸106的周圍與平臺(tái)104一起旋轉(zhuǎn)，并且經(jīng)由聯(lián)軸器210在第二旋轉(zhuǎn)軸144的周圍旋轉(zhuǎn)。在方框1310，混合第一容器112中的內(nèi)含物。例如，通過第一側(cè)壁800和/或第二側(cè)壁802的平面部分?jǐn)噭?dòng)容器中的液體和/或顆粒。在一些實(shí)施例中，同樣地通過容器的底部突出，如，例如，圖11和12的底壁1100的突出1108混合第一容器112的內(nèi)含物。在一些實(shí)施例中，混合第一容器112的內(nèi)含物，使得顆?；旧暇鶆虻胤稚⒃诘谝蝗萜?12的液體中。

盡管特定實(shí)施例方法、設(shè)備和制品已在本文中作出了描述，但是本專利覆蓋的范圍不僅限于此。相反地，本專利涵蓋完全落在本專利權(quán)利要求的范圍內(nèi)的所有方法、設(shè)備和制品。