一種利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法
【專利摘要】一種利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法，包括以下步驟：(1)試樣消化：以濃硝酸、高氯酸和1.5％亞曬酸三者體積比為7∶2∶3組合成混合消化劑消化，其中，亞硒酸添加濃度為1.5～2.0％；(2)標準典線制作；(3)生物樣品測定：用3ml濃度為3％吐溫80保護劑在消化定容后75～120min內(nèi)檢測。本發(fā)明克服了重量法對含硫量較微和大批量樣品分析中的不足，為大批量含硫量變化較大的鹿毛、飼料、鹿血生物樣品中硫的測定提供了一個簡單、快速、準確的方法。
【專利說明】-種利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種測定生物樣品中總硫的方法，具體涉及一種利用比濁法測定鹿 毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，為了研究塔里木馬鹿食毛癥與硫含量關(guān)系，很有必要對其被毛、血液和采食 飼料中硫元素進行測定。然而，至今有關(guān)元素硫微量分析的文獻報道并不多，主要集中在土 壤、巖石、石化等產(chǎn)品上，而生物樣品中硫元素的分析報道較少。近些年來，硫測定方法主要 有比濁法、容量法和重量法三種。其中，重量法雖然準確，但手續(xù)繁長，不經(jīng)濟，而且樣品前 處理過程非常復雜；容量法較重量法快速，但靈敏度差，準確性差，尤其對含有微量硫的生 物樣品容量法就更難適用。比濁法較前兩種方法快速、準確、經(jīng)濟，但未見分析資料報道對 液體、毛發(fā)等樣品前處理過程，而且分析條件報道也很不統(tǒng)一，給分析測試工作帶來了諸多 不便。因此，急需探索篩選出一個快速、靈敏準確，適合大批量鹿毛、飼料、鹿血樣品中硫元 素的分析方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種利用比濁法簡單、快速、靈敏準確地測定 鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法。
[0004] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是，一種利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血 樣品中總硫的方法，包括以下步驟： (1) 試樣消化：先將鹿毛洗凈、脫脂、干燥，或者用生理鹽水配制成的1%肝素溶液的鹿 血用肝素40ul抗凝保存，接著平行稱取0. 15g鹿毛、飼料樣品或0. 15?2ml鹿血樣品三 份，分別置于三個1〇〇毫升燒瓶或燒杯中，然后分別加入消化劑濃硝酸和高氯酸，在電爐上 加熱，待消化液沸騰時移開電爐，并加入1.5%亞硒酸消化劑，復置于電爐上加熱沸騰，其 中，加入消化劑濃硝酸、高氯酸、0.5%?1.5%亞曬酸三者的體積比為7 : 2 : 3;待消化 液呈淡黃色、清亮快干時，將所述燒瓶或燒杯移開電爐，稍冷加入10%鹽酸I. 5ml繼續(xù)加熱 lmin，最后將消化液移入IOOml容量瓶中，用蒸餾水充分洗滌燒瓶后，把洗滌液一并移入容 量瓶，并定容至刻度，以同樣方式做一空白消化； (2) 標準典線制作：取7只50ml容量瓶并編號，每只加入3.5ml甘油，10%鹽酸2ml， 再依次加入硫的標準工作液〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次為0? 0、 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐溫80溶液10ml，用水補充至刻度定 容搖勻，并靜置75?120min后于500nm處比色，以空白調(diào)零點，以已知50ml容量瓶內(nèi)硫的 毫克數(shù)為橫坐標，所測得光密度為縱坐標繪制標準曲線，并求出回歸方程； (3) 生物樣品測定：取25ml容量瓶，加3. 5 %甘油4ml，10 %鹽酸Iml和樣品消化液 10ml，0. 5mol/L BaCl2-吐溫80溶液10ml，搖勻、靜置，75?120min后，于500nm處比色，以 空白調(diào)零點，以所得光密度在標準曲線上查出硫的毫克數(shù)，或以回歸方程計算。
[0005] 進一步，步驟（1)中，所述鹿毛用500ml蒸溜水分三次浸洗并晾干，然后經(jīng)70°C烘 干后用索氏提取法脫脂處理；所述肝素為低分子含量肝素（LMW-H);所述亞曬酸的濃度為 1. 5%。
[0006] 在本發(fā)明中，消化條件是決定分析結(jié)果是否可靠的條件之一，以消化劑組合濃硝 酸：高氯酸：1.5%亞曬酸=7 : 2 : 3不僅測定結(jié)果高，而且測定值變異也較小，不僅適 合于含硫量低的固體、液體樣，也適合于含硫量高的毛發(fā)樣。為了緩解結(jié)晶沉淀速度，以黃 色粘稠狀液體吐溫-80作為保護劑，可提高比濁讀數(shù)的再現(xiàn)性和結(jié)果的可靠性，同時吸光 度在75?120min之間讀數(shù)普遍比較穩(wěn)定。
[0007] 本發(fā)明與"重量法"相比，對含硫量不等的生物樣品中同一類樣品所測定的結(jié)果進 行比較，結(jié)果均差異不顯著（P>〇. 05)。由此，本發(fā)明克服了重量法對含硫量較微和大批量 樣品分析中的不足，為大批量含硫量變化較大的鹿毛、飼料、鹿血生物樣品中硫的測定提供 了一個簡單、快速、準確的方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1為吸光度與硫含量（y g)標準曲線。
[0009] 圖2為不同濃度吐溫-80測定時吸光度隨時間變化曲線。

【具體實施方式】
[0010] 1、材料
[0011] 選用南疆某馬鹿場母鹿精飼料、血液和毛發(fā)。
[0012] 2、主要儀器
[0013] 選用分光光度計。
[0014] 3、試劑（試劑均為分析純） 1) 濃硫酸 2) 高氯酸（70% ) 3) 亞硒酸（1. 5% ):稱取3. OOg亞硒酸溶于200ml水中備用； 4) 標準硫貯備液：稱取I. 3615g烘干K2SO4溶于IOOml水中，移入250ml容量瓶中定容 至刻度（該溶液Iml相當于Img硫）； 5) 標準硫工作液：取標準硫貯備液IOml于IOOml容量瓶中定容（該溶液Iml相當于 100 U g 硫）； 6) 0. 5mol/L BaCl2-吐溫80溶液：稱取無水氯化鋇52. 07g溶于300ml水中，加入吐溫 80 -定量劇烈振蕩至溶解，再移入500ml容量瓶中加水定容至刻度； 7) 10鹽酸溶液：取濃鹵酸68ml加水182ml，搖勻備用； 8) 3. 5 %甘油：取甘油7ml加水定容至刻度搖勻備用； 9) EDTA-洗滌液：稱取EDTANa2鹽75g溶于500ml水中，再加入26gNa0H，待溶后移入 IOOOml容量瓶中定容，用于清洗器皿中所沾硫酸鋇結(jié)晶。
[0015] 實施例1 :鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的測定方法 (1)試樣消化 飼料、毛發(fā)樣：先將飼料、毛發(fā)樣洗凈、脫脂、干燥，平行稱取〇. 15g樣品三份，分別置于 三個100毫升凱氏燒瓶中，再加入7ml的濃硝酸、2ml高氯酸消化劑在電爐上加熱至沸，待消 化液沸騰時移開電爐，并加入1. 5%亞硒酸3ml，復置于電爐上加熱沸騰。待消化液呈淡黃 色、清亮快干時，將燒瓶移開電爐，稍冷加入10%鹽酸I. 5ml繼續(xù)加熱約lmin，以除去剩余 硝酸。再將消化液移入IOOml容量瓶中，用蒸餾水充分洗滌燒瓶后，把洗滌液一并移入容量 瓶，并定容至刻度，以同樣方式做一空白消化。 血樣：動物全血用肝素抗凝保存，取2ml分別置于三只1001燒懷中，加入上述消化劑消 化，消化方法同上。 (2) 標準典線制作 取50ml容量瓶7只并編號，每只加入3. 5ml甘油，10 %鹽酸2ml，再依次加入硫的標 準工作液 〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次為 0? 0、0? 1、0. 2、0. 4、0. 6、 0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐溫80溶液10ml，用水補充至刻度定容搖勻，并靜置 75min后，于500nm處比色，以空白調(diào)零點。以已知50ml容量瓶內(nèi)硫的毫克數(shù)為橫坐標，所 測得光密度為縱坐標繪制標準曲線，見圖1，并求出回歸方程。 (3) 樣品測定 取25ml容量瓶，加3. 5%甘油4ml，10%鹽酸Iml和樣品消化液10ml，BaCl2-吐溫80 溶液l〇ml，搖勻，靜置75min后，于500nm處比色，以空白調(diào)零點。以所得光密度在標準曲線 上查出硫的毫克數(shù)，或以回歸方程計算。 (4) 計算

【權(quán)利要求】
1. 一種利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法，其特征在于，包括以下步 驟： (1) 試樣消化：先將鹿毛洗凈、脫脂、干燥，或者用生理鹽水配制成的1 %肝素溶液的鹿 血用肝素40ul抗凝保存，接著平行稱取0. 15g鹿毛、飼料樣品或0. 15?2ml鹿血樣品三 份，分別置于三個100毫升燒瓶或燒杯中，然后分別加入消化劑濃硝酸和高氯酸，在電爐上 加熱，待消化液沸騰時移開電爐，并加入1.5%亞硒酸消化劑，復置于電爐上加熱沸騰，其 中，加入消化劑濃硝酸、高氯酸、0.5%?1.5%亞曬酸三者的體積比為7 : 2 : 3;待消化 液呈淡黃色、清亮快干時，將所述燒瓶或燒杯移開電爐，稍冷加入10%鹽酸1. 5ml繼續(xù)加熱 lmin，最后將消化液移入100ml容量瓶中，用蒸餾水充分洗滌燒瓶后，把洗滌液一并移入容 量瓶，并定容至刻度，以同樣方式做一空白消化； (2) 標準典線制作：取7只50ml容量瓶并編號，每只加入3. 5ml甘油，10%鹽酸2ml， 再依次加入硫的標準工作液〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次為0? 0、 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐溫80溶液10ml，用水補充至刻度定 容搖勻，并靜置75?120min后于500nm處比色，以空白調(diào)零點，以已知50ml容量瓶內(nèi)硫的 毫克數(shù)為橫坐標，所測得光密度為縱坐標繪制標準曲線，并求出回歸方程； (3) 生物樣品測定：取25ml容量瓶，加3. 5 %甘油4ml，10 %鹽酸lml和樣品消化液 10ml，0. 5mol/L BaCl2-吐溫80溶液10ml，搖勻、靜置，75?120min后，于500nm處比色，以 空白調(diào)零點，以所得光密度在標準曲線上查出硫的毫克數(shù)，或以回歸方程計算。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用比濁法測定鹿毛、飼料、鹿血樣品中總硫的方法，其特征 在于，步驟（1)中，所述鹿毛用500ml蒸溜水分三次浸洗并晾干，然后經(jīng)70°C烘干后用索氏 提取法脫脂處理；所述肝素為低分子含量肝素；所述亞曬酸的濃度為1. 5%。
【文檔編號】G01N21/82GK104406959SQ201410642976
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】錢文熙, 許貴善, 張玲 申請人:塔里木大學