一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明的屬于分析化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法。以樣品的提取液作為待測液，向待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，得到混合溶液1；根據(jù)混合溶液1在(445±5)cm-1處拉曼峰的回歸方程對硫氰酸根進行定量檢測；繼續(xù)向混合溶液1中加入聚沉劑B和堿性溶液得到混合溶液2；根據(jù)混合溶液2在(704±5)cm-1處拉曼峰的回歸方程對三聚氰胺進行定量檢測。本發(fā)明對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法操作簡單，成本低廉，重現(xiàn)性良好，靈敏度高，適合于現(xiàn)場檢測，還可實現(xiàn)對乳制品中的硫氰酸根和三聚氰胺的單獨測定。
【專利說明】一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分析化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]硫氰酸根是一種常見的無機陰離子，可以在中間產(chǎn)品中形成乳化過氧化物酶-硫氰酸根-過氧化氫系統(tǒng)，這是一種非常強大的抗菌制劑。因此它也被作為防腐劑添加到乳制品中來延長乳制品的保質(zhì)期。然而，一些非法制造商將過量的硫氰酸根添加到乳制品中使保質(zhì)期達到足夠長的時間。過量的硫氰酸根會干擾碘的吸收，使甲狀腺激素的合成受到干擾，對人體造成傷害。國際上設(shè)定硫氰酸根最大含量不得超過14mg/L。
[0003]三聚氰胺是一種常見的化工原料，可以與福爾馬林反應(yīng)得到三聚氰胺樹脂，廣泛用于塑料和涂料行業(yè)。它經(jīng)常被添加到食品和飼料產(chǎn)品中冒充蛋白質(zhì)。利用傳統(tǒng)的凱氏定氮方法，不能區(qū)分氮元素的來源。因此，當(dāng)對蛋白質(zhì)含量執(zhí)行質(zhì)量監(jiān)測時，所得讀數(shù)明顯高于實際蛋白質(zhì)含量。為此，我國設(shè)定了最高限量，規(guī)定嬰兒配方奶粉中的三聚氰胺不得超過
1.0mg/kg，所有其他食物中的三聚氰胺不得超過2.5mg/kg。
[0004]現(xiàn)在，已經(jīng)開發(fā)出許多高效的方法來分別測定乳制品中的硫氰酸根和三聚氰胺。對于硫氰酸根的檢測，常用的方法有分光光度法，離子色譜法(IC)和高效液相色譜法(HPLC)等。對于三聚氰胺的檢測，常用的方法有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)，電化學(xué)傳感器，毛細管電泳法(CE)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。雖然GC-MS，HPLC, CE，IC和LC-MS等方法快速且準(zhǔn)確，但設(shè)備龐大，價格昂貴，很難應(yīng)用于現(xiàn)場檢測；電化學(xué)傳感器需要長時間的準(zhǔn)備和頻繁的校準(zhǔn)，不適合長期操作；ELISA受限于它的準(zhǔn)確性差、測試時間長，并且需要昂貴的生物分子試劑和單調(diào)乏味的樣品預(yù)處理過程。
[0005]目前還沒有開發(fā)出一種可以同時測定乳制品中的硫氰酸根和三聚氰胺的方法。如果能夠通過一次性簡單的樣品前處理，結(jié)合一個便攜式的檢測儀器，就可以同時完成兩種物質(zhì)的檢測，這可以大大縮減檢測時間，降低檢測成本，更加適合于現(xiàn)場快速檢測的要求。因此，開發(fā)一種準(zhǔn)確、快速、適用于現(xiàn)場同時檢測乳制品中的硫氰酸根和三聚氰胺的方法，是目前急需解決的關(guān)鍵性技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，乳制品中的硫氰酸根和三聚氰胺無法共檢的缺陷。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢或單獨檢測的檢測方法。
[0007]本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案是:
[0008]一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;用便攜式拉曼光譜儀測定所述混合溶液I在350?550CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)(445±5) CnT1處拉曼峰的峰面積Yl與硫氰酸根濃度Xl的回歸方程，對硫氰酸根進行定量檢測；繼續(xù)向混合溶液I中加入聚沉劑B和堿性溶液，室溫下混合均勻得到混合溶液2 ;用所述便攜式拉曼光譜儀測定混合溶液2在500?900cm—1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)(T(MiS)CnT1處拉曼峰的峰面積Y2與三聚氰胺濃度X2的回歸方程，對三聚氰胺進行定量檢測；所述待測液與增強試劑的體積比4:1?5 ;所述待測液與聚沉劑A的體積比為10?5:1 ;所述待測液與聚沉劑B的體積比為4:1?5 ;所述待測液與堿性溶液的體積比4:1?5。
[0009]所述待測樣品為固體時，提取過程為，將所述待測固體樣品用水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的溶液或懸濁液，作為待提取液；所述待測樣品為液體時，將所述液體樣品直接作為待提取液；向所述待提取液中加入蛋白沉降劑，用手搖勾后，在13000rpm轉(zhuǎn)速下尚心3min,收集上清液作為待測液；所述待提取液與蛋白沉降劑體積比為2:3。
[0010]所述蛋白沉降劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%?2%的乙酸水溶液。
[0011 ] 所述增強試劑為銀納米溶膠。
[0012]所述聚沉劑A濃度為0.1?0.3mol/L的氯化鈉(NaCl)或氯化鉀(KCl)水溶液。
[0013]所述聚沉劑B濃度為I?5mol/L的氯化鈉(NaCl)或氯化鉀(KCl)水溶液。
[0014]所述堿性溶液濃度為0.5?2.5mol/L的氫氧化鈉(NaOH)或氫氧化鉀(KOH)水溶液。
[0015]所述便攜式拉曼光譜儀激發(fā)光源的工作條件為:發(fā)射波長為785nm，積分時間為10s，激光強度為200mW。
[0016]所述硫氰酸根的回歸方程為Yl=2299.2X1+167527.6 (r=0.999)，其中Xl是以mg/L為單位的硫氰酸根濃度，線性范圍對應(yīng)2?191mg/L ;所述三聚氰胺的回歸方程為Y2=24939.2X2+103658.8 (r=0.998)，其中X2是以mg/L為單位的三聚氰胺濃度，線性范圍對應(yīng) 0.01 ?10mg/Lo
[0017]本發(fā)明也可以用于單獨檢測硫氰酸根或三聚氰胺，具體的技術(shù)方案如下述。
[0018]一種對乳制品中硫氰酸根的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;用便攜式拉曼光譜儀測定所述混合溶液I在350?550CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)(445±5)cm-1處拉曼峰的峰面積Yl與硫氰酸根濃度Xl的回歸方程對硫氰酸根進行定量檢測；其中回歸方程是Yl=2299.2X1+167527.6，(r=0.999)，Xl是以mg/L為單位的硫氰酸根濃度，線性范圍對應(yīng)2?191mg/L ;所述聚沉劑A濃度為0.1?0.3mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑A的體積比為10?5:1 ;所述增強試劑為銀納米溶膠，待測液與增強試劑的體積比4:1?5。
[0019]一種對乳制品中三聚氰胺的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;繼續(xù)向混合溶液I中加入聚沉劑B和堿性溶液，室溫下混合均勻得到混合溶液2 ;用所述便攜式拉曼光譜儀測定混合溶液2在500?900CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)(704±5) cnT1處拉曼峰的峰面積Y2與三聚氰胺濃度X2的回歸方程，對三聚氰胺進行定量檢測；其中回歸方程為Y2=24939.2X2+103658.8，(r=0.998)，X2是以mg/L為單位的三聚氰胺濃度，線性范圍對應(yīng)0.01~10mg/L ;所述聚沉劑A濃度為0.1~0.3mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑A的體積比為10~5:1 ;所述增強試劑為銀納米溶膠，待測液與增強試劑的體積比4:1~5 ;所述堿性溶液濃度為0.5~2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，待測液與堿性溶液的體積比4:1~5 ;所述聚沉劑B濃度為I~5mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑B的體積比為4:1~5。
[0020]上述的單獨檢測硫氰酸根或三聚氰胺的技術(shù)方案中，所述待測樣品為固體時，提取過程為，將所述待測固體樣品用水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的溶液或懸濁液，作為待提取液；所述待測樣品為液體時，將所述液體樣品直接作為待提取液；向所述待提取液中加入蛋白沉降劑，用手搖勻后，在13000rpm轉(zhuǎn)速下離心3min，收集上清液作為待測液；所述待提取液與蛋白沉降劑體積比為2:3。所述便攜式拉曼光譜儀激發(fā)光源的工作條件為:發(fā)射波長為785nm，積分時間為10s，激光強度為200mW。
[0021]本發(fā)明的對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法針對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺的檢測，樣品前處理簡單，操作簡便，因而成本低廉，相比傳統(tǒng)的分別檢測技術(shù)大大縮減了測試時間；本發(fā)明的檢測方法對于硫氰酸根的檢出限為0.49mg/L，定量限為1.63mg/L,對于三聚氰胺的檢出限為0.003mg/L,定量限為0.01mg/L,靈敏度非常高；對于檢測中可能涉及到的干擾物質(zhì)選擇性良好，誤差小于±5% ;而且本發(fā)明的檢測方法不需要使用大型精密儀器，采用便攜式拉曼光譜儀，更加適合現(xiàn)場檢測，易于普及?？梢姡景l(fā)明的檢測方法具有成本低廉、操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性良好、特別是能夠同時測定乳制品中非法添加硫氰酸根和三聚氰胺含量，并且適合于現(xiàn)場快速檢測的優(yōu)點，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1本發(fā)明中硫氰酸根和三聚氰胺的拉曼光譜圖。
[0023]圖2實施例1增強試劑的用量選擇圖。
[0024]圖3實施例2聚沉劑A的用量選擇圖。
[0025]圖4實施例3聚沉劑B的用量選擇圖。
[0026]圖5實施例4堿性溶液的用量選擇圖。
【具體實施方式】
[0027]下面通過【具體實施方式】來說明本發(fā)明，但并不限于此。
[0028]在實施例1~4中，均采用含有5mg/L硫氰酸根、0.5mg/L三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液,激發(fā)光源發(fā)射波長為785nm的便攜式拉曼光譜儀，積分時間為10s，激光強度為200mW，平行測定3次，優(yōu)化定量分析條件，通過考察拉曼強度選取最優(yōu)條件。
[0029]實施例1
[0030] 將200 μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液加入ImL比色皿中，加入50~250 μ L增強試劑和20 μ L0.2mol/L NaCl溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定300~600cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜，記錄(445±5)cm-1處硫氰酸根的拉曼峰峰面積；繼續(xù)向混合溶液中補充加入250 μ L2mol/L NaCl溶液和400 μ Llmol/L NaOH溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定500~900Cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(704±5)cm-1處三聚氰胺的拉曼峰峰面積。對于增強試劑的用量，在50~250 μ L范圍內(nèi)對拉曼強度的影響如圖2所示。綜合考慮兩種待測物質(zhì)的強度，選取100 μ L作為增強試劑的用量效果更佳，即優(yōu)化樣品與增強試劑的體積比為2:1。
[0031]實施例2
[0032]將200 μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液加入ImL比色皿中，加入100 μ L增強試劑和15~35 μ L0.2mol/L NaCl溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定300~600cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜，記錄(445±5)01^處硫氰酸根的拉曼峰峰面積；繼續(xù)向混合溶液中補充加入250 μ L2mol /L NaCl溶液和400 μ Llmol/L NaOH溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定500~900cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(704±5) cnT1處三聚氰胺的拉曼峰峰面積。對于聚沉劑A的用量，在15~35 μ L范圍內(nèi)對拉曼強度的影響如圖3所示。綜合考慮兩種待測物質(zhì)的強度，選取25 μ L作為聚沉劑A的用量效果更佳，即優(yōu)化樣品與聚沉劑A的體積比為8:1。
[0033]實施例3
[0034]將200 μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液加入ImL比色皿中，加入100 μ L的增強試劑和25 μ L0.2mol/L NaCl溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定300~600cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜，記錄(445±5)01^處硫氰酸根的拉曼峰峰面積；繼續(xù)向混合溶液中補充加入50~250 μ L2mol/L NaCl溶液和400 μ Llmol/L NaOH溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定500~900cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(T(MiS)CnT1處三聚氰胺的拉曼峰峰面積。由于聚沉劑B對于測定硫氰酸根沒有影響，所以僅考慮對三聚氰胺的影響。對于聚沉劑B的用量，在50~250 μ L范圍內(nèi)對拉曼強度的影響如圖4所示。選取100 μ L作為聚沉劑B的用量效果更佳，即優(yōu)化樣品與聚沉劑B的體積比為2:1。
[0035]實施例4
[0036]將200 μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液加入ImL比色皿中，加入100 μ L的增強試劑和25 μ L0.2mol/L NaCl溶液室溫下混合均勻,用便攜式拉曼光譜儀測定300~600cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜，記錄(445±5)01^處硫氰酸根的拉曼峰峰面積；繼續(xù)向混合溶液中補充加入100 μ L2mol/L NaCl溶液和50~250 μ Llmol/L NaOH溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定500~900cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(T(MiS)CnT1處三聚氰胺的拉曼峰峰面積。由于堿性溶液對于測定硫氰酸根沒有影響，所以僅考慮對三聚氰胺的影響。對于堿性溶液的用量，在50~250 μ L范圍內(nèi)對拉曼強度的影響如圖5所示。選取100 μ L作為堿性溶液的用量效果更佳，即優(yōu)化樣品與堿性溶液的體積比為2:1。
[0037]實施例5
[0038]向未檢出硫氰酸根和三聚氰胺的牛奶樣品I號、牛奶樣品2號、牛奶樣品3號和牛奶樣品4號中添加硫氰酸根和三聚氰胺，使硫氰酸根濃度為33.60mg/L，三聚氰胺濃度為1.20mg/L。分別取四種牛奶樣品ImL加入1.5mLl%乙酸溶液沉降蛋白，用手搖勻后，在13000rpm轉(zhuǎn)速下離心3min，收集上清液作為待測液。將200 μ L待測液加入ImL比色皿中，加入100 μ L增強試劑和25 μ L的0.2mol/L NaCl溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定300~600CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(445±5)01^處硫氰酸根的拉曼峰峰面積；繼續(xù)向混合溶液中補充加入100 μ L2mol/L NaCl溶液和100 μ Llmol/L NaOH溶液室溫下混合均勻，用便攜式拉曼光譜儀測定500~900CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜,記錄(704±5)01^處三聚氰胺的拉曼峰峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算測得的樣品中硫氰酸根和三聚氰胺的濃度，及加標(biāo)回收率，結(jié)果顯示在表1。
[0039]表1牛奶樣品中的硫氰酸根和三聚氰胺濃度的測定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;用便攜式拉曼光譜儀測定所述混合溶液I在350~550CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)445±5em 1處拉曼峰的峰面積Yl與硫氰酸根濃度Xl的回歸方程，對硫氰酸根進行定量檢測；繼續(xù)向混合溶液I中加入聚沉劑B和堿性溶液，室溫下混合均勻得到混合溶液2 ;用所述便攜式拉曼光譜儀測定混合溶液2在500~900cm—1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)704±5cm-1處拉曼峰的峰面積Υ2與三聚氰胺濃度Χ2的回歸方程，對三聚氰胺進行定量檢測；所述待測液與增強試劑的體積比4:1~5 ;所述待測液與聚沉劑A的體積比為10~.5:1 ;所述待測液與聚沉劑B的體積比為4:1~5 ;所述待測液與堿性溶液的體積比4:1~.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述待測樣品為固體時，提取過程為，將所述待測固體樣品用水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為.10%的溶液或懸濁液，作為待提取液；所述待測樣品為液體時，將所述液體樣品直接作為待提取液；向所述待提取液中加入蛋白沉降劑，用手搖勻后，在13000rpm轉(zhuǎn)速下離心3min，收集上清液作為待測液；所述待提取液與蛋白沉降劑體積比為2:3。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述蛋白沉降劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%~2%的乙酸水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述聚沉劑A濃度為0.1~0.3mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液；所述增強試劑為銀納米溶膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述堿性溶液濃度為0.5~2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液；所述聚沉劑B濃度為I~5mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述便攜式拉曼光譜儀激發(fā)光源的工作條件為:發(fā)射波長為785nm，積分時間為10s，激光強度為200mW。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種對乳制品中硫氰酸根和三聚氰胺進行共檢的檢測方法，其特征是，所述對硫氰酸根進行定量檢測的回歸方程為Yl=2299.2X1+167527.6，r=0.999，其中Xl是以mg/L為單位的硫氰酸根濃度，線性范圍對應(yīng)2~191mg/L ;所述對三聚氰胺進行定量檢測的回歸方程為Y2=24939.2X2+103658.8，r=0.998，其中X2是以mg/L為單位的三聚氰胺濃度，線性范圍對應(yīng)0.01~10mg/L。
8.一種對乳制品中硫氰酸根的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;用便攜式拉曼光譜儀測定所述混合溶液I在350~550Cm-1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)445±5cm-1處拉曼峰的峰面積Yl與硫氰酸根濃度Xl的回歸方程對硫氰酸根進行定量檢測；其中回歸方程是Yl=2299.2X1+167527.6，r=0.999，Xl是以mg/L為單位的硫氰酸根濃度，線性范圍對應(yīng)2~191mg/L ;所述聚沉劑A濃度為0.1~0.3mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑A的體積比為10~5:1 ;所述增強試劑為銀納米溶膠，待測液與增強試劑的體積比4:1~5。
9.一種對乳制品中三聚氰胺的檢測方法，其特征是，將待測固體樣品或液體樣品制成待測液；向所述待測液中加入增強試劑和聚沉劑A，室溫下混合均勻得到混合溶液I ;繼續(xù)向混合溶液I中加入聚沉劑B和堿性溶液，室溫下混合均勻得到混合溶液2 ;用所述便攜式拉曼光譜儀測定混合溶液2在500~900CHT1范圍內(nèi)的拉曼光譜，根據(jù)--Μ?δοπ-1處拉曼峰的峰面積Υ2與三聚氰胺濃度Χ2的回歸方程，對三聚氰胺進行定量檢測；其中回歸方程為Υ2=24939.2X2+103658.8，r=0.998，X2是以mg/L為單位的三聚氰胺濃度，線性范圍對應(yīng)0.01~10mg/L ;所述聚沉劑A濃度為0.1~0.3mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑A的體積比為10~5:1 ;所述增強試劑為銀納米溶膠，待測液與增強試劑的體積比4:1~5 ;所述堿性溶液濃度為0.5~2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，待測液與堿性溶液的體積比4:1~5 ;所述聚沉劑B濃度為I~5mol/L的氯化鈉或氯化鉀水溶液，待測液與聚沉劑B的體積比為4:1~5。
【文檔編號】G01N21/65GK103901015SQ201410131772
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】宋大千, 馬品一 申請人:長春中元儀器有限公司