流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針及試劑盒，所述熒光探針包括四種熒光標(biāo)記抗體，所述四種熒光標(biāo)記抗體為均帶有熒光標(biāo)記的GD2抗體、CD90抗體、CD45抗體和CD56抗體，其中，不同的抗體帶有不同的熒光標(biāo)記。所述試劑盒包括探針溶液；溶血劑；磷酸鹽緩沖液和陽性標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明的熒光探針分別能夠與骨髓中的橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞及急性白血病原始細(xì)胞特異性結(jié)合，能夠通過流式細(xì)胞術(shù)快速準(zhǔn)確鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病細(xì)胞這三類兒童骨髓中常見的腫瘤細(xì)胞，指導(dǎo)臨床治療，具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針及試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種醫(yī)療檢測試劑，尤其涉及一種流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針及試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]在臨床上，兒童骨髓中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞常見的是白血病、橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤，正確鑒別三者對患者的治療具有重要的指導(dǎo)意義。橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童常見的惡性實體腫瘤，對兒童生命有嚴(yán)重的威脅和危害。部分患者可以通過手術(shù)治療得到康復(fù)。但本病易發(fā)生骨髓轉(zhuǎn)移，常危及患兒生命，需及時采取化療、放療甚至自體干細(xì)胞移植等治療措施。因此對骨髓轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療是提高治愈率、降低死亡率的關(guān)鍵。
[0003]目前國內(nèi)外主要通過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查來診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移，但細(xì)胞形態(tài)學(xué)對于早期轉(zhuǎn)移的患者的診斷不敏感，容易產(chǎn)生假陰性結(jié)果，且兩者細(xì)胞形態(tài)學(xué)與原始淋巴細(xì)胞和原始粒細(xì)胞相似，極易被誤診為白血病，同時橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤在骨髓中的細(xì)胞形態(tài)學(xué)也相似而較難鑒別。
[0004]正是由于目前的對診斷和鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移的各種檢查方法還無法滿足臨床醫(yī)生的要求，尋求一種快速簡便且準(zhǔn)確性和敏感性高的方法來診斷和鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的方法極為重要。流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)是近年來發(fā)展起來的高科學(xué)技術(shù),它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)于一體，同時具有分析和分選細(xì)胞功能。它不僅可測量細(xì)胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀，還可檢測細(xì)胞表面和細(xì)胞漿抗原、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA含量等，可對群體細(xì)胞在單細(xì)胞水平上進行多參數(shù)分析，即在同一細(xì)胞上進行2-3種或多種抗原的共同表達(dá)的分析，在短時間內(nèi)檢測分析大量細(xì)胞，并收集、儲存和處理數(shù)據(jù)，進行多參數(shù)定量分析，具有敏感性和準(zhǔn)確性高的特點，目前臨床上多運用于白血病和淋巴瘤的骨髓標(biāo)本的診斷，而對橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的診斷和鑒別診斷罕見報道。由于兩者細(xì)胞目前沒有單一的特異性的抗原標(biāo)志物，流式細(xì)胞術(shù)對鑒別診斷橫紋肌肉瘤與瘤神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病關(guān)鍵在于多種抗體的組合。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針，利用該熒光探針可以快速、準(zhǔn)確的得到診斷結(jié)果。
[0006]一種流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針，包括四種熒光標(biāo)記抗體，所述四種熒光標(biāo)記抗體為均帶有熒光標(biāo)記的GD2抗體、CD90抗體、CD45抗體和CD56抗體，其中，不同的抗體帶有不同的熒光標(biāo)記。
[0007]橫紋肌肉瘤是兒童最常見的軟組織腫瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤屬于神經(jīng)內(nèi)分泌性腫瘤，而CD56是一類免疫球蛋白樣區(qū)域的膜糖蛋白神經(jīng)細(xì)胞粘附分子，在神經(jīng)外胚層來源的細(xì)胞表面表達(dá)。⑶90和⑶56作為粘附分子表達(dá)在橫紋肌肉瘤細(xì)胞及神經(jīng)母細(xì)胞瘤上，NK細(xì)胞主要也表達(dá)這種HOkDa的⑶56異構(gòu)體，而⑶45是血細(xì)胞系列限制性的膜蛋白分子，表達(dá)在除了紅細(xì)胞外的包括造血干細(xì)胞到成熟血細(xì)胞(包括NK細(xì)胞)膜表面上，因此⑶90+⑶56+/⑶45-表型可以避免誤診為NK細(xì)胞腫瘤和白血病，并可以作為判斷神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤及橫紋肌肉瘤存在的指證。
[0008]神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞來源于分化差的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，其表面有神經(jīng)黏附分子⑶56抗原和神經(jīng)節(jié)苷脂⑶2的表達(dá)，而不表達(dá)白細(xì)胞共同抗原⑶45，橫紋肌肉瘤是起源于橫紋肌細(xì)胞或向橫紋肌細(xì)胞分化的間葉細(xì)胞的一種惡性腫瘤，不表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷脂GD2。同樣白血病細(xì)胞不表達(dá)GD2但其表達(dá)白細(xì)胞共同抗原CD45及原始細(xì)胞標(biāo)志CD90，因此可以通過多色流式細(xì)胞術(shù)測定這四種抗原的不同表達(dá)來識別橫紋肌肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤及白血病原始細(xì)胞這三類兒童骨髓標(biāo)本中常見的腫瘤細(xì)胞。三者具有不同的免疫表型，即:
[0009]橫紋肌肉瘤細(xì)胞:⑶2TD90+CD56+CD45-；
[0010]神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞:⑶2+⑶90+CD56+⑶45-；
[0011]急性白血病原始細(xì)胞:⑶2TD90+CD56TD45+。
[0012]本發(fā)明聯(lián)合⑶2、⑶90、⑶56和⑶45四種熒光標(biāo)記抗體作為探針，運用目前醫(yī)院常見的多色流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的免疫表型(一管法)即可鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病，特異性可達(dá)100%。
[0013]具體的，所述四種熒光標(biāo)記抗體為⑶2-FITC抗體、CD90-PE抗體、CD45_PerCP抗體和CD56-APC抗體。
[0014]為保證檢測的特異性，四種熒光標(biāo)記抗體為單克隆抗體。
[0015]本發(fā)明還提供了一種流式細(xì)胞技術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的試劑盒，包括:
[0016](I)探針溶液,包含有四種熒光標(biāo)記抗體,其中，四種熒光標(biāo)記抗體為均帶有熒光標(biāo)記的⑶2抗體、⑶90抗體、⑶45抗體和⑶56抗體，不同的抗體帶有不同的熒光標(biāo)記；
[0017](2)溶血劑；
[0018](3)磷酸鹽緩沖液；
[0019](4)陽性標(biāo)準(zhǔn)品。
[0020]所述的探針溶液以磷酸鹽緩沖液為溶劑。
[0021]所述的四種熒光標(biāo)記抗體具體為⑶2-FITC抗體、CD90-PE抗體、CD45_PerCP抗體和CD56-APC抗體。其中，CD90-PE可購自美國BD公司，貨號:555596、CD45_PerCP可購自美國BD公司，貨號:347464、CD56-APC可購自美國BD公司，貨號:341025、⑶2-FITC制備方法可參照CANCER RESEARCH, 1986年46期2988頁，Highly selective recognition of humanneuroblastoma cells by mouse monoclonal antibody to a cytoplasmic antigen。
[0022]所述四種熒光標(biāo)記抗體的濃度比為1:1:1:1。
[0023]所述的溶血劑的組成為:8.3%氯化銨和15%多聚甲醛。
[0024]所述探針溶液包含防腐劑，所述防腐劑為疊氮鈉。
[0025]所述磷酸鹽緩沖液也含有含防腐劑，所述防腐劑為疊氮鈉。
[0026]所述疊氮鈉的添加量為0.05?0.1%，優(yōu)選為0.1%。[0027]試劑盒中所使用的磷酸鹽緩沖液的濃度均為0.8?1M，優(yōu)選為1M，該磷酸鹽緩沖液的 pH=7.4。
[0028]需要指出的是，由于兒童無慢性淋巴細(xì)胞白血病，慢性粒細(xì)胞白血病極少，如無特殊說明，本申請中所提及的白血病均指的是急性白血病。
[0029]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0030]本發(fā)明的熒光探針能夠與骨髓中的腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合，無交叉反應(yīng)，能夠準(zhǔn)確快速通過流式細(xì)胞術(shù)檢測橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤是否骨髓轉(zhuǎn)移，具有很高的特異性(可達(dá)100%)和靈敏度，同時可區(qū)別急性白血病原始細(xì)胞，簡單快速準(zhǔn)確，具有較好的臨床應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1為本發(fā)明對實施例1患者骨髓標(biāo)本的瑞氏染色結(jié)果圖；其中，A為橫紋肌肉瘤骨髓轉(zhuǎn)移，B為神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移。
[0032]圖2為本發(fā)明對實施例1橫紋肌肉瘤患者骨髓標(biāo)本的流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果圖；其中，A:CD45-和CD56+細(xì)胞設(shè)Rl門，B:GD2-和CD90+細(xì)胞設(shè)R2門；C:FSC和SSC細(xì)胞設(shè)R3門；R2來源于Rl, R3來源于R2。
[0033]圖3為本發(fā)明對實施例1神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者骨髓標(biāo)本的流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果圖；其中，A:CD45-和CD56+細(xì)胞設(shè)Rl門，B:0)2+和CD90+細(xì)胞設(shè)R2門；C:FSC和SSC細(xì)胞設(shè)R3門；R2來源于Rl, R3來源于R2。
[0034]圖4為實施例1急性白血病原始細(xì)胞的瑞氏染色結(jié)果圖。
[0035]圖5為本發(fā)明對實施例1急性白血病患者骨髓標(biāo)本的流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果圖；其中，A:CD45+和CD90+細(xì)胞設(shè)Rl門，B:來源于Rl的細(xì)胞顯示⑶2-和CD45+;C:來源于Rl的細(xì)胞顯示⑶56-和⑶45+。
[0036]圖6a為本發(fā)明對實施例1橫紋肌肉瘤患者骨髓標(biāo)本(稀釋比例為1:100)的流式細(xì)胞術(shù)敏感性檢測結(jié)果圖。
[0037]圖6b為本發(fā)明對實施例1橫紋肌肉瘤患者骨髓標(biāo)本(稀釋比例為1:1000)的流式細(xì)胞術(shù)敏感性檢測結(jié)果圖。
[0038]圖6c為本發(fā)明對實施例1橫紋肌肉瘤患者骨髓標(biāo)本(稀釋比例為1:10000)的流式細(xì)胞術(shù)敏感性檢測結(jié)果圖。
[0039]圖7為本發(fā)明對實施例2橫紋肌肉瘤患者腦脊液標(biāo)本的瑞氏染色結(jié)果圖。
[0040]圖8為本發(fā)明對實施例2橫紋肌肉瘤患者腦脊液標(biāo)本的流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果圖，其中，A:CD45-和CD56+細(xì)胞設(shè)Rl門，B:⑶2-和CD90+細(xì)胞設(shè)R2門；C:FSC和SSC細(xì)胞設(shè)R3門；R2來源于Rl, R3來源于R2。
【具體實施方式】
[0041 ] 下面結(jié)合【具體實施方式】進一步闡釋本發(fā)明。
[0042]實施例1
[0043]⑶2-FITC (自備，以神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株LAN-1免疫BALB/c小鼠，取小鼠B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞株NSl融合成雜交瘤細(xì)胞制備單克隆抗體GD2并標(biāo)記FITC熒光素，具體技術(shù)步驟參考雜志CANCER RESEARCH, 1986年46期2988頁；Highly selectiverecognition of human neuroblastoma cells by mouse monoclonal antibody to acytoplasmic antigen)、CD90-PE (美國 BD 公司，貨號:555596)、CD45_PerCP (美國 BD 公司，貨號:347464)、CD56-APC (美國 BD 公司，貨號:341025)。
[0044]一、試劑盒組成:
[0045]I)探針溶液(2mLX I 瓶):
[0046]⑶2-FITC:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含異硫氰酸熒光素標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0047]CD90-PE:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含藻紅蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0048]CD45_PerCP:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含草履蟲葉綠素蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0049]CD56_APC:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含異藻藍(lán)蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0050]組合物抗體濃度比例⑶2-FITC:CD90-PE:CD45_PerCP:CD56_APC 為 1:1:1:1。
[0051]2) 10X溶血劑(IOOmLX I瓶):8.3%氯化銨，含15%多聚甲醛；
[0052]3) 10X 磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.4，lM，含 1% 疊氮鈉)(IOOmLX I 瓶)；
[0053]4)陽性標(biāo)準(zhǔn)品(2mLX I瓶):固定和保存液處理的細(xì)胞株(5X IO7個細(xì)胞/mL)。
[0054]二、試劑盒的應(yīng)用
[0055]研究對象:15例非白血病及腫瘤兒童、21例橫紋肌肉瘤、25例神經(jīng)母細(xì)胞瘤及22例急性粒細(xì)胞白血病患者的骨髓標(biāo)本，骨髓標(biāo)本均來自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院門診及住院患者。
[0056]操作步驟:100 μ L骨髓液，分別加入單克隆熒光標(biāo)記抗體(⑶2-FITC、CD90-PE，CD45-PerCP和CD56-APC)各20 μ L，4°C避光反應(yīng)30分鐘，加入溶血劑ImL，靜置5分鐘，力口PBS5mL, 500G離心沉淀5分鐘，棄上清，沉淀物加PBS300 μ L，混勻，上流式細(xì)胞儀檢測50000個細(xì)胞。
[0057]流式圖像分析策略:
[0058]橫紋肌肉瘤:1、CD45-和CD56+設(shè)Rl門;2、⑶2_和CD90+細(xì)胞設(shè)R2門;3、FSC和SSC細(xì)胞設(shè)R3門分析；4、計算R3門內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)。(R2來源于Rl ;R3來源于R2)。
[0059]神經(jīng)母細(xì)胞瘤:1、CD45-和CD56+設(shè)Rl門；2、GD2+和CD90+細(xì)胞設(shè)R2門；3、FSC和SSC細(xì)胞設(shè)R3門分析；4、計算R3門內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)。(R2來源于Rl ；R3來源于R2)。
[0060]急性白血病原始細(xì)胞:1、⑶45+和⑶90+設(shè)Rl門；2、分析⑶45+和⑶2_細(xì)胞；3、分析⑶45+和⑶56-細(xì)胞。
[0061]同時設(shè)立陰性對照。
[0062]陽性結(jié)果以免疫表型判斷細(xì)胞類型如下:
[0063]表型呈⑶2TD90+⑶56+CD45-為橫紋肌肉瘤細(xì)胞；
[0064]表型呈⑶2+⑶90+⑶56+CD45-為神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；
[0065]表型呈⑶2TD90+⑶56XD45+為急性白血病原始細(xì)胞。
[0066]檢測敏感性測定:分別將橫紋肌肉瘤細(xì)胞用正常骨髓細(xì)胞稀釋成1:100,1:1000，1:10000的比例，同樣用以上方法檢測。
[0067]統(tǒng)計方法:利用軟件SPSS11.5 (SPSS Inc.，Chicago, IL, USA)，分析評價診斷方法的敏感性和特異性。
[0068]各類型標(biāo)本的檢測結(jié)果如圖1、圖2、圖3、圖4、圖5、圖6a、圖6b、圖6c所示。
[0069]結(jié)果表明:15例非白血病及腫瘤兒童均未檢測到以上三類免疫表型細(xì)胞；21例橫紋肌肉瘤細(xì)胞患者中5例檢測到GD2_CD90+CD56+CD45_免疫表型細(xì)胞，臨床最終確診該5例為橫紋肌肉瘤骨髓轉(zhuǎn)移；25例神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者中11例檢測到⑶2+⑶90+CD56+⑶45_免疫表型細(xì)胞，臨床最終確診該11例為神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移；22例急性白血病細(xì)胞均為GD2_CD90+CD56_CD45+細(xì)胞免疫表型；流式細(xì)胞術(shù)對骨髓中三類腫瘤細(xì)胞診斷的特異性均為100%，敏感性為1/10_4(即在10000個正常細(xì)胞中可檢測到I個腫瘤細(xì)胞)。
[0070]實施例2
[0071]一、試劑盒組成:
[0072]I)探針溶液(2mLX I 瓶):
[0073]⑶2-FITC:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含異硫氰酸熒光素標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0074]CD90-PE:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含藻紅蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0075]CD45-PerCP:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含草履蟲葉綠素蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0076]CD56_APC:2mL PBS (含0.1%疊氮鈉)含異藻藍(lán)蛋白標(biāo)記的100 μ g抗體蛋白(50 μ g/mL)；
[0077]組合物抗體濃度比例⑶2-FITC:CD90-PE:CD45_PerCP:CD56_APC 為 1:1:1:1。
[0078]2) IOX溶血劑(IOOmLX I瓶):8.3%氯化銨，含15%多聚甲醛；
[0079]3) IOX 磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.4，lM，含 1% 疊氮鈉)(IOOmLX I 瓶)；
[0080]4)陽性標(biāo)準(zhǔn)品(2mLX I瓶):固定和保存液處理的細(xì)胞株(5X IO7個細(xì)胞/mL)。
[0081]二、試劑盒的應(yīng)用
[0082]研究對象:2例疑是橫紋肌肉瘤腦脊液轉(zhuǎn)移患者穿刺腦脊液標(biāo)本。
[0083]操作步驟、分析策略和統(tǒng)計方法同實施例1。
[0084]結(jié)果表明:2例橫紋肌肉瘤臨床懷疑為腦脊液轉(zhuǎn)移患者進行穿刺腦脊液經(jīng)本抗體組合流式細(xì)胞儀檢測，發(fā)現(xiàn)⑶2TD90+⑶56+CD45_S疫表型細(xì)胞(圖7、圖8)，最終臨床診斷該兩例為橫紋肌肉瘤腦脊液轉(zhuǎn)移，并進行鞘內(nèi)化療及顱脊柱的放射治療。表明本發(fā)明的熒光探針能夠監(jiān)測橫紋肌肉瘤腦脊液轉(zhuǎn)移，指導(dǎo)臨床合理用藥。
【權(quán)利要求】
1.一種流式細(xì)胞術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的熒光探針，包括四種熒光標(biāo)記抗體，其特征在于，所述四種熒光標(biāo)記抗體為均帶有熒光標(biāo)記的⑶2抗體、CD90抗體、CD45抗體和CD56抗體，其中，不同的抗體帶有不同的熒光標(biāo)記。
2.如權(quán)利要求1所述的熒光探針，其特征在于，所述四種熒光標(biāo)記抗體為GD2-FITC抗體、CD90-PE 抗體、CD45-PerCP 抗體和 CD56-APC 抗體。
3.如權(quán)利要求1或2所述的熒光探針，其特征在于，四種熒光標(biāo)記抗體為單克隆抗體。
4.一種流式細(xì)胞技術(shù)鑒別診斷橫紋肌肉瘤與神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移及白血病的試劑盒，其特征在于，包括: (O探針溶液，包含有四種熒光標(biāo)記抗體，其中，四種熒光標(biāo)記抗體為均帶有熒光標(biāo)記的GD2抗體、CD90抗體、CD45抗體和CD56抗體，不同的抗體帶有不同的熒光標(biāo)記； (2)溶血劑； (3)磷酸鹽緩沖液； (4)陽性標(biāo)準(zhǔn)品。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的探針溶液以磷酸鹽緩沖液為溶劑。
6.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的四種熒光標(biāo)記抗體為GD2-FITC抗體、CD90-PE 抗體、CD45-PerCP 抗體和 CD56-APC 抗體。
7.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，四種熒光標(biāo)記抗體的濃度比為1:1:1:1。
8.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的探針溶液含有防腐劑。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述防腐劑為疊氮鈉。
【文檔編號】G01N33/533GK103675277SQ201310559467
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】舒強, 沈紅強, 趙正言, 湯永民 申請人:浙江大學(xué)