檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒及制備方法，應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內(nèi)，應(yīng)用液瓶中裝有應(yīng)用液，其組分：增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.01~0.5%，氯化鈉1%~20%，緩沖液20~200mmol/L；抗體懸浮液瓶中裝有包被β2微球蛋白單克隆抗體的乳膠懸液，其組分：包被β2微球蛋白單克隆抗體的乳膠0.05%~0.5%，增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.01~0.5%，緩沖液20~200mmol/L；標準品瓶中裝有β2微球蛋白標準品。實現(xiàn)人血清β2微球蛋白在生化儀上大批量定量檢測，操作簡單，靈敏度高，不易受人為因素干擾。
【專利說明】檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫比濁的檢測方法，尤其涉及檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]β 2微球蛋白快速檢測酶免試劑盒，是衡量腎功能減退和療效觀察的一種簡便、精確而敏感的指標。此試劑盒適用多種樣本類型:血清、血漿、尿或者體液(腦脊液或胎兒臍血清)均可直接檢測。液體雙試劑，Rl:R2=4:1.可直接使用。校準品為液體多項免疫類校準血清，使用方便，可單點定標，省時，省試劑，線性范圍高，配套質(zhì)控多項免疫類質(zhì)控血清，保證結(jié)果準確。
[0003]血清β 2—微球蛋白的升高可反映腎小球濾過功能受損或濾過負荷是否增加的情況；而尿液中排出β 2—微球蛋白增高，則提示腎小管損害或濾過負荷增加；在急慢性腎盂腎炎時，因腎臟受損，故尿β2—微球蛋白升高，而膀胱炎患者則β2—微球蛋白正常；主要用于監(jiān)測近端腎小管的功能。在急性腎小管損傷或壞死、慢性間質(zhì)性腎炎、慢性腎衰等情況下，均可使得尿β 2—MG顯著升高。腎移植患者血、尿β 2—MG明顯增高，提示機體發(fā)生排異反應(yīng)；腎移植后連續(xù)測定β 2—MG可作為評價腎小球和腎小管功能的敏感指標。糖尿病腎病早期有腎小管功能改變，尿β 2— G也會升高。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期，造血系統(tǒng)惡性腫瘤,如慢性淋巴細胞性白血病時,尿液β 2—MG也有升高。
[0004]顆粒增強免疫透射比池法(particle—enhancedturbidimetric immunoassay,PETIA)是近年來出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法，其基本原理是一定粒徑膠乳顆粒的表面交聯(lián)單克隆或多克降抗體，當交聯(lián)有抗體的微球與抗原結(jié)合后，在短時間內(nèi)會迅速聚集在一起，改變了反應(yīng)體系的吸光度。這種改變與被測抗原的濃度有一定的相關(guān)性，在一定范鬧內(nèi)可以反映被測抗原的濃度。此技術(shù)通過顆粒增強的方式，放大了抗原抗體反應(yīng)，彌補了普通透射比濁法靈敏度不夠的缺點，同時又繼承了透射比濁法穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點，克服了 ELISA和RIA方法的缺點，已越來越廣泛應(yīng)用于臨床上各種微量蛋白的定量檢測。日前，顆粒增強免疫透射比濁法廣泛用于腎功能檢測、心腦血管功能檢測檢測、糖尿病檢測和脂類檢測等，取得了良好的社會效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒及其制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，特點是:包括盒體、應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶，所述應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內(nèi)，所述應(yīng)用液瓶中裝有應(yīng)用液，應(yīng)用液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~?%，防腐劑0.01-ο.5%，氯化鈉1%~20%，緩沖液2(T200mmol/L ;所述抗體懸浮液瓶中裝有包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠懸液，乳膠懸液的組分及其重量百分比為:包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠0.05°4-0.5%,增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.ο4-ο.5%,緩沖液2(T200mmol/L ;所述標準品瓶中裝有β 2微球蛋白標準品。
[0007]進一步地，上述的檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，所述應(yīng)用液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;所述應(yīng)用液中的防腐劑為疊氮鈉或Proclin-300或兩者混合物，所述應(yīng)用液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。所述乳膠懸液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;所述乳膠懸液中的防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物，所述乳膠懸液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
[0008]本發(fā)明檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，包括以下步驟:
a)制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混勻，3(T40°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于2l°C環(huán)境下保存；
b)制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；
c)配制β2微球蛋白標準品:選用β2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L。
[0009]更進一步地，上述的檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，在步驟a)中，乳膠微球的粒徑為100nnT500nm。所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.2-9.2，質(zhì)量比為2(T200mmOl/L。步驟a)中，所述清洗儲存液pH為7.4-9.0，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.Ο4-Ο.5%，緩沖液2(T200mmol/L，增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。步驟a)中，所述乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。步驟b)中，所述緩沖液pH為7.4-9.0，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。步驟c)中，所述緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
[0010]
本發(fā)明技術(shù)方案突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步主要體現(xiàn)在:
通過顆粒增強的方式，放大了抗原抗體反應(yīng)，彌補了普通透射比濁法靈敏度不夠的缺點，同時又繼承了透射比濁法穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點，克服了 ELISA和RIA方法的缺點，實現(xiàn)人血清β 2微球蛋白在生化儀上大批量定量檢測，操作簡單，靈敏度高，不易受人為因素干擾，檢測穩(wěn)定性和重復(fù)性好，能真實反映被檢測物的含量，能利用生化分析儀進行檢測，容易實現(xiàn)自動化，適于臨床推廣應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0011]檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，包括盒體、應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶，應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內(nèi)，應(yīng)用液瓶中裝有應(yīng)用液，應(yīng)用液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.01~0.5%，氯化鈉1%~20%，緩沖液2(T200mmOl/L ;抗體懸浮液瓶中裝有包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠懸液，乳膠懸液的組分及其重量百分比為:包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠0.05%~0.5%，增敏劑
0.01%~?%，防腐劑0.ο4-ο.5%，緩沖液2(T200mmol/L ;標準品瓶中裝有β 2微球蛋白標準品。
[0012]其中，應(yīng)用液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;應(yīng)用液中的防腐劑為疊氮鈉或Proclin-300或兩者混合物；應(yīng)用液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。乳膠懸液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;乳膠懸液中的防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物；乳膠懸液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
[0013]檢測β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備工藝步驟為:
a)制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40度旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于21度環(huán)境下保存；其中，乳膠微球的粒徑為100nnT500nm;磷酸鹽緩沖液的pH為7.2、.2，質(zhì)量比為20-200mmol/L ;清洗儲存液pH為7.4-9.0，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.01~0.5%，緩沖液2(T200mmol/L，增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸；乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合；
b)制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；其中，增敏劑0.01%~?%，防腐劑0.01-0.5%，氯化鈉1%~20%，緩沖液2(T200mmol/L，增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;防腐劑為疊氮鈉或Proclin-300或兩者混合物，緩沖液pH為7.4-9.0，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸；
c)配制β2微球蛋白標準品:選用β2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L ;其中，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
[0014]實施例1
制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40度旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于21度環(huán)境下保存；其中，乳膠微球的粒徑為IOOnm ;磷酸鹽緩沖液的pH為7.2，質(zhì)量比為30mmol/L ;清洗儲存液PH為7.4，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.2%，防腐劑0.05%,緩沖液30mmol/L，增敏劑為聚乙二醇2000，防腐劑為Proclin-300，緩沖液為甘氨酸；乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。
[0015]制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；其中，增敏劑0.1%，防腐劑0.05%,氯化鈉5%，緩沖液30mmol/L，增敏劑為聚乙二醇8000，防腐劑為疊氮鈉，緩沖液PH為8.0，緩沖液為甘氨酸。
[0016]配制β 2微球蛋白標準品:選用β 2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L ;其中，緩沖液為三羥基氨基甲烷。
[0017]實施例2
制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40度旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于21度環(huán)境下保存；其中，乳膠微球的粒徑為500nm ;磷酸鹽緩沖液的pH為9.2，質(zhì)量比為60mmol/L ;清洗儲存液PH為9.0，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.4%，防腐劑0.2%，緩沖液60mmol/L，增敏劑為聚乙二醇4000，防腐劑為疊氮鈉，緩沖液為三羥基氨基甲烷；乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。
[0018]制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；其中，增敏劑0.4%，防腐劑0.2%，氯化鈉10%，緩沖液60mmol/L，增敏劑為聚乙二醇6000，防腐劑為Proclin-300，緩沖液pH為8.0，緩沖液為三羥基氨基甲烷。
[0019]配制β 2微球蛋白標準品:選用β 2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L ;其中，緩沖液為碳酸鹽。
[0020]實施例3
制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40度旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于21度環(huán)境下保存；其中，乳膠微球的粒徑為200nm ;磷酸鹽緩沖液的pH為8.0，質(zhì)量比為120mmol/L ;清洗儲存液PH為8.4，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.6%，防腐劑0.4%，緩沖液120mmol/L，增敏劑為聚乙二醇6000，防腐劑為疊氮鈉和Proclin-300混合物，緩沖液為碳酸鹽；乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。
[0021]制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；其中，增敏劑0.6%，防腐劑0.4%，氯化鈉15%，緩沖液120mmol/L，增敏劑為聚乙二醇6000，防腐劑為疊氮鈉，緩沖液pH為9.0,緩沖液為碳酸鹽。
[0022]配制β 2微球蛋白標準品:選用β 2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L ;其中，緩沖液為三羥基氨基甲烷。
[0023]實施例4
制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40度旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于21度環(huán)境下保存；其中，乳膠微球的粒徑為150nm ;磷酸鹽緩沖液的pH為8.2，質(zhì)量比為150mmol/L ;清洗儲存液PH為8.0,清洗儲存液的組分及其重`量百分比為:增敏劑0.8%，防腐劑0.8%，緩沖液180mmol/L,增敏劑為聚乙二醇8000，防腐劑為疊氮鈉，緩沖液為磷酸鹽；乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。
[0024]制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液；其中，增敏劑0.8%，防腐劑0.8%，氯化鈉20%，緩沖液180mmol/L，增敏劑為聚乙二醇4000，防腐劑為疊氮鈉和Proclin-300混合物，緩沖液pH為7.4，緩沖液為磷酸鹽。
[0025]配制β 2微球蛋白標準品:選用β 2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為
18.0mg/L ;其中，緩沖液為甘氨酸。
[0026]以下結(jié)合采用所述β 2微球蛋白的免疫比濁試劑盒在生化分析儀上進行β 2微球蛋白檢測的具體條件:
在日立7080生化儀上的的設(shè)定參數(shù):
反應(yīng)溫度:37度
分析方法:2點終點法
主波長:546nm,副波長700nm (可不選)
樣本量/應(yīng)用液/包被β 2微球蛋白抗體的乳膠懸液:3ul/200ul/50ul 反應(yīng)方向:上升 讀點分別為19點及31點
選擇多點定標后，僅器自動完成定標，定標OK后,進彳丁常規(guī)β 2微球蛋白檢測。
[0027]本發(fā)明通過顆粒增強的方式，放大了抗原抗體反應(yīng)，彌補了普通透射比濁法靈敏度不夠的缺點，同時又繼承了透射比濁法穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點，克服了 ELISA和RIA方法的缺點，實現(xiàn)人血清β 2微球蛋白在生化儀上大批量定量檢測，有以下幾個方面突出優(yōu)點:1)操作簡單；2)靈敏度高；3)不易受人為因素干擾，檢測穩(wěn)定性和重復(fù)性好，能真實反映被檢測物的含量；4)能利用生化分析儀進行檢測，容易實現(xiàn)自動化，適于臨床推廣應(yīng)用。
[0028]需要理解到的是:以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，其特征在于:包括盒體、應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶，所述應(yīng)用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內(nèi)，所述應(yīng)用液瓶中裝有應(yīng)用液，應(yīng)用液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.01-0.5%，氯化鈉1%~20%，緩沖液20-200mmol/L ;所述抗體懸浮液瓶中裝有包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠懸液，乳膠懸液的組分及其重量百分比為:包被β 2微球蛋白單克隆抗體的乳膠0.05%~0.5%,增敏劑0.01%~1%，防腐劑0..01-0.5%,緩沖液20-200mmol/L ;所述標準品瓶中裝有β 2微球蛋白標準品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，其特征在于:所述應(yīng)用液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;所述應(yīng)用液中的防腐劑為疊氮鈉或Proclin-300或兩者混合物,所述應(yīng)用液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒，其特征在于:所述乳膠懸液中的增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;所述乳膠懸液中的防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物，所述乳膠懸液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
4.權(quán)利要求1所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟: a)制備乳膠懸液:在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被β2微球蛋白單克隆抗體混勻，30-40°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于2-8C環(huán)境下保存； b)制備應(yīng)用液:將增敏劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應(yīng)用液； c)配制β2微球蛋白標準品:選用β2微球蛋白標準品，由緩沖液稀釋成濃度為18.0mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:在步驟a)中，乳膠微球的粒徑為100nm-500nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:步驟a)中，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.2-9.2，質(zhì)量比為20-200mmol/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:步驟a)中，所述清洗儲存液pH為7.4-9.0，清洗儲存液的組分及其重量百分比為:增敏劑0.01%~1%，防腐劑0.Ο1-Ο.5%，緩沖液20-200mmol/L，增敏劑為聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000 ;防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物，緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:步驟a)中，所述乳膠微球與包被β 2微球蛋白單克隆抗體混合是等體積混合。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:步驟b)中，所述緩沖液pH為7.4-9.0,緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測β2微球蛋白的免疫比濁試劑盒的制備方法，其特征在于:步驟c)中，所述緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基甲烷或甘氨酸。
【文檔編號】G01N33/531GK103454431SQ201310397456
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】劉照關(guān), 康英杰 申請人:蘇州照康生物技術(shù)有限公司