本發(fā)明涉及生物制藥領域，具體而言，涉及一種微晶纖維素提高蛋白質(zhì)澄清度的方法及其產(chǎn)品和應用。
背景技術：
：人免疫球蛋白(immunoglobulin，ig)是人體對外來抗原(如細菌、病毒及其它毒素或異物)進行免疫應答的主要物質(zhì)，又稱抗體。再次免疫應答的主要抗體，具有中和毒素作用、中和病毒作用、調(diào)理作用、介導抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用等。目前國內(nèi)血液制品生產(chǎn)廠家制備靜注人免疫球蛋白(ph4)的制備工藝均采用傳統(tǒng)的低溫乙醇工藝進行。目前在靜注人免疫球蛋白制備工藝中通常采用反復多步低溫乙醇沉淀方法實現(xiàn)對制品外觀乳光的控制。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種微晶纖維素提高蛋白質(zhì)澄清度的方法及其產(chǎn)品和應用，其旨在提供一種新的提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度的方法。本發(fā)明提供一種技術方案：微晶纖維素在提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度中的應用。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述微晶纖維素作為提高蛋白質(zhì)的澄清度的吸附劑的應用。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述蛋白質(zhì)為免疫球蛋白。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述免疫球蛋白來源于人體血液。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述蛋白質(zhì)為靜注人免疫球蛋白或靜注人免疫球蛋白的中間產(chǎn)物。本發(fā)明還提供一種技術方案：微晶纖維素于提高血漿蛋白澄清度的應用。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述微晶纖維素于消除血漿蛋白乳光中的應用。一種提高靜注人免疫球蛋白澄清度的方法，其包括用微晶纖維素吸附帶有乳光的靜注人免疫球蛋白使靜注人免疫球蛋白澄清。在本發(fā)明較佳的實施例中，還包括將吸附步驟后的微晶纖維素與靜注人免疫球蛋白分離。本發(fā)明還提供一種技術方案：一種靜注人免疫球蛋白，由上述的提高靜注人免疫球蛋白澄清度的方法制得。本發(fā)明實施例提供的微晶纖維素提高蛋白質(zhì)澄清度的方法及其產(chǎn)品和應用的有益效果是：本發(fā)明提供的這種方法、產(chǎn)品及應用，通過利用微晶纖維素提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度，從而降低蛋白質(zhì)溶液中雜質(zhì)的含量或者去除蛋白質(zhì)溶液中的乳光。當上述蛋白質(zhì)為靜注人免疫球蛋白時，采用微晶纖維素對其澄清、純化，最終得到的靜注人免疫球蛋白能夠達到國家標準。本發(fā)明提供的應用與現(xiàn)有的低溫乙醇工藝比較而言，采用微晶纖維素提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度，操作簡單，微晶纖維素價格低廉，降低整個流程的成本的同時減小操作的步驟及工藝的時間。具體實施方式血漿來源的人免疫球蛋白制品按注射途徑分為：靜注人免疫球蛋白(ivig)和肌肉注射人免疫球蛋白(imig)，其主要成分為免疫球蛋白g，它是最重要的血漿蛋白之一。隨著國內(nèi)國際市場對ivig需求量的不斷增多和ivig臨床適應癥的不斷擴展，ivig的價值也將持續(xù)增加，市場前景廣闊。因此，降低靜注人免疫球蛋白制備過程的時間對于增加市場供應、緩解國內(nèi)靜注人免疫球蛋白供應緊張的局面具有極大意義。低溫乙醇法是以經(jīng)檢驗合格的原料血漿為起點，分級沉淀相關組分ii+iii或i+ii+ⅲ，經(jīng)過純化及病毒滅活工藝得到人免疫球蛋白。2015版《中華人民共和國藥典》對靜注人免疫球蛋白外觀的鑒定要求表述為“應為無色或淡黃色透明液體，可帶輕微乳光，不應出現(xiàn)渾濁”。控制靜注人免疫球蛋白的乳光是本版藥典所提出的鑒定指標。目前在靜注人免疫球蛋白制備工藝中通常采用反復多步低溫乙醇沉淀方法實現(xiàn)對制品外觀乳光的控制。低溫乙醇沉淀技術是最初用于純化制備白蛋白以及免疫球蛋白，由此也奠定了血漿蛋白分離工藝的基礎，經(jīng)典的cohn-oncley法血漿蛋白分離中應用的就是冷乙醇沉淀技術，時至今日其依然是免疫球蛋白以及白蛋白主要生產(chǎn)手段。低溫乙醇沉淀工藝中，工藝周期較長，且耗費大量乙醇。此外，蛋白質(zhì)沉淀后重溶操作易導致蛋白質(zhì)在溶液中溶解分散不完全，而使溶液產(chǎn)生乳光。另外靜注人免疫球蛋白的病毒巴氏滅活步驟導致制品中部分蛋白質(zhì)受熱，蛋白質(zhì)結構遭受熱損傷，也使制品溶液產(chǎn)生乳光。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)將微晶纖維素應用于提高蛋白質(zhì)澄清度中。微晶纖維素能夠吸附蛋白質(zhì)中產(chǎn)生乳光的成分，使被吸附后的靜注人免疫球蛋白溶液呈現(xiàn)較高的澄清度。為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對本發(fā)明實施例的微晶纖維素提高蛋白質(zhì)澄清度的方法及其產(chǎn)品和應用進行具體說明。微晶纖維素在提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度中的應用。蛋白質(zhì)的分子量往往達到10kda以上，甚至超過1000kda，蛋白質(zhì)分子不同于小分子，其結構要復雜的多并且具有可變性，因此蛋白質(zhì)的分離純化與小分子相比是完全不同的。蛋白質(zhì)的分離純化需要根據(jù)不同蛋白質(zhì)之間的物理化學性質(zhì)以及生物學特性。更重要的是，蛋白質(zhì)分子在分離純化的過程中還需要保持其生物學活性。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，采用多晶纖維素對蛋白質(zhì)溶液進行純化，可以提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度。本發(fā)明的應用與低溫乙醇工藝比較而言，操作簡單，不僅能夠降低純化工藝的時間，同時工藝操作步驟簡單可靠。進一步地，微晶纖維素應用于提高蛋白質(zhì)溶液的澄清度，使蛋白質(zhì)溶液中含有乳光或者雜質(zhì)的部分更好地分離，即增加含乳光部分與不含乳光部分的可分離性。微晶纖維素是一種無臭、無味、極細微的白色短棒狀或無定形結晶粉末。微晶纖維素具有極強的吸水性，聚合度約220，結晶度高。微晶纖維素的外形接近球狀，其比表面積較大。在本發(fā)明的實施例中，上述微晶纖維素作為提高蛋白質(zhì)的澄清度的吸附劑的應用。微晶纖維素內(nèi)部分布有多個孔道，且多個孔道呈不規(guī)則分布。蛋白質(zhì)溶液中帶有雜質(zhì)或者乳光的部分被微晶纖維素吸附，使含乳光部分與不含乳光部分更好地分離。進一步地，微晶纖維素在蛋白質(zhì)溶液中分散成凝膠體，凝膠態(tài)的微晶纖維素由于氫鍵的作用，將蛋白質(zhì)中的雜質(zhì)或者含有乳光的成分留在凝膠態(tài)的微晶纖維素內(nèi)。通過分離之后將蛋白質(zhì)與微晶纖維素分離得到高純度的蛋白質(zhì)。微晶纖維素內(nèi)部含有氫鍵，微晶纖維素能夠與蛋白質(zhì)內(nèi)的羥基、氨基等蒂合，分離過程中氫鍵斷裂。使蛋白質(zhì)得到更好地純化，增加其澄清度。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述蛋白質(zhì)為免疫球蛋白。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述免疫球蛋白來源于人體血液。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述蛋白質(zhì)為靜注人免疫球蛋白或靜注人免疫球蛋白的中間產(chǎn)物。靜注人免疫球蛋白是一種由人體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后產(chǎn)生的免疫物質(zhì)所制成的生物制劑，含有igg抗體，具有免疫替代和免疫調(diào)節(jié)的雙重治療作用，能迅速提高接受者血液中的igg水平，增強機體的抗感染能力和免疫調(diào)節(jié)功能。微晶纖維素于提高血漿蛋白澄清度的應用。進一步地，微晶纖維素于消除血漿蛋白乳光中的應用。靜注人免疫球蛋白或者靜注人免疫球蛋白的中間制品含有部分帶有乳光的物質(zhì)，發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，微晶纖維素能夠澄清或者去除帶有乳光的物質(zhì)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一種提高靜注人免疫球蛋白澄清度的方法，其包括用微晶纖維素吸附帶有乳光的靜注人免疫球蛋白使靜注人免疫球蛋白澄清。在本發(fā)明較佳的實施例中，還包括將吸附步驟后的微晶纖維素與靜注人免疫球蛋白分離。本發(fā)明還提供一種技術方案：一種靜注人免疫球蛋白，由上述的提高靜注人免疫球蛋白澄清度的方法制得。在本發(fā)明較佳的實施例中，上述微晶纖維素作為吸附劑消除血漿蛋白中的乳光。一種靜注人免疫球蛋白的澄清方法，其包括微晶纖維素澄清靜注人免疫球蛋白中的乳光。在本發(fā)明較佳的實施例中，還包括將澄清步驟后的微晶纖維素與靜注人免疫球蛋白分離。此外，本發(fā)明還提供一種靜注人免疫球蛋白，其通過微晶纖維素澄清靜注人免疫球蛋白制得。以下結合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1實施例1提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：用1mol/l醋酸調(diào)節(jié)巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白中間制品的ph值為6.0；在靜注人免疫球蛋白中間制品中加入微晶纖維素，微晶纖維素與靜注人免疫球蛋白的比例為2g/l。并在攪拌條件下均勻混合30分鐘。將上述混合物置于安裝有50p濾板的壓濾機中，加壓至1kg/cm2過濾，收集濾出的澄清溶液。實施例2實施例2提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液100ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到乳光較重的靜注人免疫球蛋白溶液上清。將上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液25ml，使用1mol/l的醋酸調(diào)節(jié)溶液ph值為4.0。加入微晶纖維素0.050g，置于回旋式搖床上振蕩，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，30分鐘后該混懸液以10000g離心處理10分鐘，收集濾液。實施例3實施例3提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液100ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到乳光較重的靜注人免疫球蛋白溶液上清。將上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液25ml，用1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的ph值為8.0。加入微晶纖維素0.10g，置于回旋式搖床上振蕩，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，30分鐘后該混懸液以10000g離心處理10分鐘，收集濾液。實施例4實施例4提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液100ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到乳光較重的靜注人免疫球蛋白溶液上清。將上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液25ml，用1mol/l醋酸調(diào)節(jié)溶液的ph值為7.0。加入微晶纖維素0.20g，置于回旋式搖床上振蕩，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，30分鐘后該混懸液以10000g離心處理10分鐘，收集濾液。實施例5實施例5提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液200ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到靜注人免疫球蛋白溶液上清。取上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液50ml，使用1mol/l的醋酸調(diào)節(jié)溶液ph值為6.0。向上述的靜注人免疫球蛋白溶液中分別加入0.10g微晶纖維素。置于搖床上振蕩混勻30分鐘，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，該混懸液以10000g離心處理10分鐘使固液分離，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清液。實施例6實施例6提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液200ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到靜注人免疫球蛋白溶液上清。取上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液50ml，使用1mol/l的醋酸調(diào)節(jié)溶液ph值為7.0。向上述的靜注人免疫球蛋白溶液中分別加入0.10g微晶纖維素。置于搖床上振蕩混勻30分鐘，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，該混懸液以10000g離心處理10分鐘使固液分離，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清液。實施例7實施例7提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液200ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到靜注人免疫球蛋白溶液上清。取上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液50ml，使用1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)份溶液ph值為8.0。向上述的靜注人免疫球蛋白溶液中分別加入0.10g微晶纖維素。置于搖床上振蕩混勻30分鐘，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，該混懸液以10000g離心處理10分鐘使固液分離，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清液。對比例1對比例1提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液200ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到靜注人免疫球蛋白溶液上清。取上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液50ml，使用1mol/l的醋酸調(diào)節(jié)溶液ph值為3.0。向上述的靜注人免疫球蛋白溶液中分別加入0.10g微晶纖維素。置于搖床上振蕩混勻30分鐘，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，該混懸液以10000g離心處理10分鐘使固液分離，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清液。對比例2對比例2提供一種靜注人免疫球蛋白，主要由以下步驟制得：取巴氏滅活后的靜注人免疫球蛋白溶液200ml，在離心機中以10000g的離心力處理10分鐘去除可見固體沉淀，得到靜注人免疫球蛋白溶液上清。取上述得到的靜注人免疫球蛋白溶液上清液50ml，使用1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液ph值為9.0。向上述的靜注人免疫球蛋白溶液中分別加入0.10g微晶纖維素。置于搖床上振蕩混勻30分鐘，使微晶纖維素充分混勻分散在靜注人免疫球蛋白溶液中，該混懸液以10000g離心處理10分鐘使固液分離，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清液。對比例3對比例3提供一種巴氏滅活后離心處理靜注人免疫球蛋白上清液。試驗例對實施例1-7、對比例1-3得到的靜注人免疫球蛋白進行觀察、檢測。(1)：將實施例1-7、對比例1-3得到靜注人免疫球蛋白分裝于25ml西林瓶中，于澄明度檢測儀下觀察各樣品呈現(xiàn)乳光狀況。(2)：將實施例1-7、對比例1-3得到的靜注人免疫球蛋白在分光光度計上測試0d340光吸收值，獲取的靜注人免疫球蛋白溶液上清在分光光度計上于340nm波長檢測光學澄清度。(3)：測試實施例1-7、對比例1-3得到的靜注人免疫球蛋白溶液中蛋白質(zhì)含量。其中，蛋白質(zhì)含量檢測所采用方法為雙縮脲法。觀察及測試結果如表1所示。表1實施例及對比例靜注人免疫球蛋白的檢測結果組別外觀蛋白濃度g/lod340澄清度實施例1淡藍色透明液體、輕微乳光15.30.071實施例2淡藍色透明液體、輕微乳光16.70.110實施例3無色透明液體、無乳光13.50.063實施例4無色透明液體、無乳光11.20.057實施例5淡藍色透明液體、輕微乳光15.60.079實施例6無色透明液體、無乳光13.60.061實施例7無色透明液體、無乳光11.40.068對比例1藍色液體、有沉淀、有乳光17.60.204對比例2藍色液體、有沉淀、有乳光16.30.210對比例3藍色液體、有乳光、有沉淀17.30.267通過表1中的實驗數(shù)據(jù)可知，微晶纖維素能夠純化蛋白質(zhì)，進一步地，微晶纖維素的對靜注人免疫球蛋白制品乳光的消除效果佳。本發(fā)明實施例1-7提供的靜注人免疫球蛋白滿足2015版《中華人民共和國藥典》對靜注人免疫球蛋白(ph4)外觀的鑒定要求。進一步的且實施例3、實施例4、實施例6、實施例7提供的靜注人免疫球蛋白比其他實施例的效果佳。本發(fā)明提供的這種方法、產(chǎn)品及應用，通過利用微晶纖維素對蛋白質(zhì)溶液的澄清、純化，從而降低蛋白質(zhì)溶液中雜質(zhì)的含量或者去除蛋白質(zhì)溶液中的乳光。當上述蛋白質(zhì)為靜注人免疫球蛋白時，采用微晶纖維素對其澄清，使最終得到的靜注人免疫球蛋白能夠達到國家標準。此外，利用微晶纖維素對蛋白質(zhì)溶液純化，減小純化時間，降低成本。與低溫乙醇工藝相比，節(jié)約制冷所需的能源。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁12