動(dòng)物模型及治療分子的制作方法
【專利說明】動(dòng)物模型及治療分子
[0001] 本申請(qǐng)是2011年1月7日提交的題為"動(dòng)物模型及治療分子"的中國專利申請(qǐng) 201180039668.1的分案申請(qǐng)。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 本發(fā)明設(shè)及非人動(dòng)物和細(xì)胞，它們被工程化而含有外源DNA，如人免疫球蛋白基因 DNA，本發(fā)明還設(shè)及它們?cè)卺t(yī)學(xué)和疾病研究中的應(yīng)用，產(chǎn)生非人動(dòng)物和細(xì)胞的方法，W及由 運(yùn)種動(dòng)物產(chǎn)生的抗體和抗體鏈及其衍生物。
[0004] 為了解決人源化抗體的問題，許多公司著手產(chǎn)生具有人免疫系統(tǒng)的小鼠。使用的 策略是敲除ES細(xì)胞中的重鏈和輕鏈基因座并且用設(shè)計(jì)為表達(dá)人重鏈和輕鏈基因的轉(zhuǎn)基因 互補(bǔ)運(yùn)些遺傳損害。盡管可W產(chǎn)生完全人抗體，但是運(yùn)些模型具有一些主要限制：
[0005] (i)重鏈和輕鏈基因座的大?。ň鶐?Mb)使得在運(yùn)些模型中不能導(dǎo)入完整基因座。 結(jié)果獲得的轉(zhuǎn)基因品系具有非常有限的V區(qū)組成部分，喪失了大多數(shù)恒定區(qū)并且重要的遠(yuǎn) 端增強(qiáng)子區(qū)未包含在轉(zhuǎn)基因中。
[0006] (ii)產(chǎn)生大插入物轉(zhuǎn)基因品系的極低效率W及將運(yùn)些雜交進(jìn)重鏈和輕鏈敲除品 系W及使它們?cè)俅渭兒系膹?fù)雜性和所需要的時(shí)間，限制了可W被分析而優(yōu)化表達(dá)的轉(zhuǎn)基因 品系數(shù)量。
[0007] (iii)個(gè)體抗體親和性很少會(huì)達(dá)到從完整動(dòng)物(非轉(zhuǎn)基因）中可獲得的程度。
[000引 W02007117410掲示了表達(dá)嵌合抗體的嵌合構(gòu)建體。
[0009] W02010039900掲示了具有編碼嵌合抗體的基因組的敲入化nock in)細(xì)胞和哺乳 動(dòng)物。
[0010] 本發(fā)明提供了在非人類哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生包含人類Ig可變區(qū)的抗體的方法，本發(fā)明 進(jìn)一步提供了產(chǎn)生運(yùn)種抗體的非人動(dòng)物模型。
[00川發(fā)明概述
[0012] -方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物，其基因組包含：
[0013] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或多個(gè)人類D區(qū) 及一或多個(gè)人類J區(qū)；
[0014] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和 一或多個(gè)人類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig 輕鏈AV區(qū)和一或多個(gè)人類Ig輕鏈AJ區(qū)；
[0015] 其中所述非人類哺乳動(dòng)物能產(chǎn)生具有非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)和人類可變區(qū)的嵌 合抗體或者嵌合抗體輕鏈或重鏈的所有組成成分(repertoire)。
[0016] 一方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物，其基因組包含：
[0017] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和一或多個(gè)人 類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū)和一或 多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū);及
[0018] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或 多個(gè)人類D區(qū)和一或多個(gè)人類J區(qū)；
[0019] 其中所述非人類哺乳動(dòng)物能產(chǎn)生具有非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)和人類可變區(qū)的嵌 合抗體或者嵌合輕鏈或重鏈的所有組成成分。
[0020] -方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其基因組包含：
[0021] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或多個(gè)人類D區(qū) 和一或多個(gè)人類J區(qū)，及
[0022] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和 一或多個(gè)人類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig 輕鏈AV區(qū)和一或多個(gè)人類Ig輕鏈AJ區(qū)。
[0023] -方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其基因組包含：
[0024] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和一或多個(gè)人 類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū)和一或 多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū);及
[0025] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或 多個(gè)人類D區(qū)和一或多個(gè)人類J區(qū)。
[0026] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及產(chǎn)生非人類細(xì)胞或哺乳動(dòng)物的方法，包括在非人類哺乳動(dòng) 物細(xì)胞基因組例如ES細(xì)胞基因組中插入：
[0027] (a)多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或多個(gè)人類D區(qū)和一或多個(gè)人類J區(qū)在宿主非人類哺乳動(dòng) 物恒定區(qū)上游;及
[00%] (b)任選地，一或多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和一或多個(gè)人類Ig輕鏈Kj區(qū)在宿主非人類 哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游和/或一或多個(gè)人類Ig輕鏈AV區(qū)和一或多個(gè)人類Ig輕鏈AJ區(qū)在宿主 非人類哺乳動(dòng)物A恒定區(qū)上游；
[0029] 所述插入是使得所述非人類細(xì)胞或哺乳動(dòng)物能產(chǎn)生具有非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū) 和人類可變區(qū)的嵌合抗體的所有組成成分，其中步驟(a)和(b)可W任意順序進(jìn)行并且(a) 和(b)步驟的每一步可W逐步或單步進(jìn)行。
[0030] 插入可W通過同源重組實(shí)現(xiàn)。
[0031] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及產(chǎn)生特異于希望抗原的抗體或抗體鏈的方法，所述方法包 括用希望抗原免疫本文掲示的轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動(dòng)物及回收所述抗體或抗體鏈。
[0032] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及產(chǎn)生完全人源化抗體的方法，包括用希望抗原免疫本文掲 示的轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動(dòng)物，回收所述抗體或產(chǎn)生所述抗體的細(xì)胞，然后例如通過蛋白質(zhì) 或DNA工程用人類恒定區(qū)置換非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)。
[0033] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的人源化抗體和抗體鏈，所述抗體和抗體 鏈均是嵌合的（例如小鼠-人類)及完全人源化形式，W及所述抗體和抗體鏈的片段和衍生 物，W及設(shè)及所述抗體、抗體鏈和片段在醫(yī)學(xué)包括診斷中的應(yīng)用。
[0034] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及本文掲示的非人類哺乳動(dòng)物作為模型檢測(cè)藥物和疫苗的應(yīng) 用。
[0035] 附圖簡述
[0036] 圖1 -8示出在小鼠Ig基因座中插入一系列人類BAC的重復(fù)過程。
[0037] 圖9-18更詳細(xì)示出針對(duì)和K基因座的圖1-8的過程。
[0038] 圖19和20示出在嵌合小鼠中的抗體產(chǎn)生原理。
[0039] 圖21示出在小鼠染色體中人類DNA的可能插入位點(diǎn)。
[0040] 圖22-26示出在小鼠Ig基因座中插入一系列人類BAC的另一重復(fù)過程。
[0041] 圖27-29示出宿主VDJ區(qū)倒位的機(jī)制。
[0042] 圖30示出使用RMCE方法插入質(zhì)粒的原理證據(jù)。
[0043] 圖31示出在著陸區(qū)（Landing化d)中相繼的RMCE-整合。
[0044] 圖32示出證實(shí)成功插入著陸區(qū)中。
[0045] 圖33示出3'末端消除化nd化ring)的PCR證實(shí)。
[0046] 圖34示出BAC#1插入和PCR診斷。
[0047] 圖35示出JH和JK使用。
[004引圖36示出DH使用。
[0049] 圖37示出在來自嵌合小鼠的人類VDJ化轉(zhuǎn)錄物中CDR-冊(cè)長度分布。
[0050] 圖38示出在IGH-VDI或IGK-VJ連接中缺失和插入核巧酸數(shù)的分布。
[0051] 圖39示出每個(gè)VH內(nèi)JH使用的分布。
[0化2] 圖40示出每個(gè)VH內(nèi)DH使用的分布。
[0053] 圖41示出在VJ連接點(diǎn)核巧酸獲得或喪失產(chǎn)生IGK變體。
[0054] 圖42示出J區(qū)內(nèi)的超變產(chǎn)生IGK變體。
[0化5]圖43示出連接多樣性產(chǎn)生功能性CDS。
[0化6] SEQ ID No: 1是大鼠轉(zhuǎn)換序列。
[0057] SEQ ID No:2是著陸區(qū)祀向載體的序列化版本）。
[005引SEQ ID No:3是著陸區(qū)祀向載體的序列(較短版本）。
[0化9] 沈Q ID No:4是小鼠品系129轉(zhuǎn)換序列。
[0060] SEQ ID No:5是小鼠品系巧7轉(zhuǎn)換序列。
[0061 ] 沈Q ID No:6是著陸區(qū)的5'同源臂。
[0062] 沈Q ID齡:7是寡核巧酸^2-5
[0063] 沈Q ID齡:8是寡核巧酸^4-4
[0064] 沈Q ID齡:9是寡核巧酸^1-3
[00化]沈Q ID齡：10是寡核巧酸^1-2
[0066] 沈Q ID齡：11是寡核巧酸^6-1
[0067] 沈Q ID No: 12是寡核巧酸化
[006引沈Q ID齡：13是寡核巧酸1(￥1-9
[0069] 沈Q ID齡：14是寡核巧酸1(￥1-8
[0070] 沈Q ID齡：15是寡核巧酸1(￥1-6
[0071] 沈Q ID齡：16是寡核巧酸1(￥1-5
[0072] 沈Q ID No: 17是寡核巧酸Ck。
[0073] -般描述
[0074] 除非特別指出，小鼠的所有核巧酸坐標(biāo)是相應(yīng)于小鼠巧7BL/6J品系的NCBI m37的 那些，例如April 2007 ENSEMBL Release 55.37h，如NCBI37化Iy 2007(NCBI build 37) (女日UCSC version mm9，見www. genome .ucsc.edu和http://genome .ucsc.edu/FAQ/ FAQreleases .himl)。除非特別指出，人核巧酸坐標(biāo)是相應(yīng)于GR畑37(如UCSC version hgl9,http://genome.ucsc.edu/FAQ/FAQreleases.html)、Feb 2009 ENSEMBL Release 55.37的那些或者是相應(yīng)于NCBI36，Ensemblerelease54的那些。除非特別指出，大鼠核巧 酸是相應(yīng)于RGSC 3.4 Dec 2004 ENSEMBL release55.34w或者Baylor College of Medicine HGSC v3.4 Nov 2004的那些（例如UCSC rn4，見www.genome.ucsc.edu和http:// genome.ucsc.edu/FAQ/FAQreleases.html)〇
[0075] 在本發(fā)明中，我們掲示了在非人類哺乳動(dòng)物如小鼠中構(gòu)建嵌合人類重鏈和輕鏈基 因座的方法。在小鼠中進(jìn)行的研究只是為了例證，除非特別指出，在小鼠中進(jìn)行的研究可W 包括所有非人類哺乳動(dòng)物，優(yōu)選小鼠作為非人類哺乳動(dòng)物。
[0076] -方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物，其基因組包含：
[0077] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或多個(gè)人類D區(qū) 和一或多個(gè)人類J區(qū)，及
[0078] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和 一或多個(gè)人類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的一或多個(gè)人類Ig 輕鏈AV區(qū)和一或多個(gè)人類Ig輕鏈AJ區(qū)；
[0079] 其中所述非人類哺乳動(dòng)物能產(chǎn)生具有非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)和人類可變區(qū)的嵌 合抗體或抗體鏈的所有組成成分。
[0080] 另一方面，本發(fā)明設(shè)及非人類哺乳動(dòng)物，其基因組包含：
[0081] (a)位于宿主非人類哺乳動(dòng)物K恒定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈KV區(qū)和一或多個(gè)人 類Ig輕鏈Kj區(qū)和/或位于宿主非人類哺乳動(dòng)物M直定區(qū)上游的多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū)和一或 多個(gè)人類Ig輕鏈W區(qū)，及
[0082] (b)任選地，位于宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的一或多個(gè)人類IgH V區(qū)、一或 多個(gè)人類D區(qū)和一或多個(gè)人類J區(qū)；
[0083] 其中所述非人類哺乳動(dòng)物能產(chǎn)生具有非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)和人類可變區(qū)的嵌 合抗體的所有組成成分。
[0084] 任選地，所述非人類哺乳動(dòng)物基因組被修飾為阻止完全宿主物種特異性抗體的表 達(dá)。
[00化]一方面，插入的人類DNA包含至少50%的人類重鏈可變(V)基因，如至少60%、至少 70%、至少80%、至少90%及在一個(gè)方面全部人類V基因。
[00化]一方面，插入的人類DNA包含至少50%的人類重鏈多樣性(D)基因，如至少60%、至 少70%、至少80%、至少90%及在一個(gè)方面全部人類D基因。
[0087] -方面，插入的人類DNA包含至少50%的人類重鏈連接(J)基因，如至少60%、至少 70%、至少80%、至少90%及在一個(gè)方面全部人類J基因。
[0088] 一方面，插入的人類DNA包含至少50%的人類輕鏈可變(V)基因，如至少60%、至少 70%、至少80%、至少90%及在一個(gè)方面全部人類輕鏈V基因。
[0089] -方面，插入的人類DNA包含至少50%的人類輕鏈連接(J)基因，如至少60%、至少 70%、至少80%、至少90%及在一個(gè)方面全部人類輕鏈J基因。
[0090] 插入的人類基因可衍生自相同或不同個(gè)體，或者是合成的或者代表人類共有序 列。
[0091] -方面，盡管V、D和J區(qū)的數(shù)目在人類個(gè)體之間是可變的，但是據(jù)認(rèn)為在重鏈上有 51個(gè)人類V基因、27個(gè)D基因和6個(gè)J基因，在K輕鏈上有40個(gè)人類V基因和5個(gè)J基因W及在入輕 鏈上有29 個(gè)人類 V基因和4個(gè) J基因（Janeway and Travers,Immunobiology,!"Iiird edition)。
[0092] -方面，插入所述非人類哺乳動(dòng)物中的人類重鏈基因座含有人類V、D和J區(qū)的所有 組成成分，在基因組中其與非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)功能性排列，由此在人類可變區(qū)與非人 類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)之間可W產(chǎn)生功能性嵌合抗體。全部插入的人類重鏈遺傳物質(zhì)在本文稱 作人類IgH VDJ區(qū)，包含來自人類基因組的DNA，其編碼編碼人類V、D和J部分的所有外顯子 及適當(dāng)?shù)匾舶嚓P(guān)內(nèi)含子。相似地，本文提及人類Ig輕鏈KV和J區(qū)是指包含編碼人類基因 組的V和J區(qū)的所有外顯子及適當(dāng)?shù)匾舶嚓P(guān)內(nèi)含子。本文提及人類Ig輕鏈W和J區(qū)是指 包含人類基因組的編碼V和J區(qū)的所有外顯子及適當(dāng)?shù)匾舶嚓P(guān)內(nèi)含子的人類DNA。
[0093] 人類可變區(qū)適當(dāng)?shù)夭迦朐诜侨祟惒溉閯?dòng)物恒定區(qū)上游，后者包含編碼全部恒定區(qū) 或者所述恒定區(qū)足夠部分所需的所有DNA，W形成能特異性識(shí)別抗原的有效的嵌合抗體。
[0094] 一方面，所述嵌合抗體或抗體鏈具有一部分宿主恒定區(qū)，足W提供在宿主哺乳動(dòng) 物中天然發(fā)生的抗體中可見的一或多種效應(yīng)物功能，例如其能與化受體相互作用和/或結(jié) 合補(bǔ)體。
[0095] 本文提及具有宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)的嵌合抗體或抗體鏈因此不限于完整 恒定區(qū)，也包括具有所有宿主恒定區(qū)或者其足W提供一或多種效應(yīng)物功能的一部分的嵌合 抗體或抗體鏈。運(yùn)也適用于本發(fā)明的非人類哺乳動(dòng)物和細(xì)胞及方法，其中人類可變區(qū)DNA可 插入宿主基因組中，由此形成具有全部或部分宿主恒定區(qū)的嵌合抗體鏈。一方面，全部的宿 主恒定區(qū)與人類可變區(qū)DNA可操縱地連接。
[0096] 本文所述宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)優(yōu)選是內(nèi)源宿主野生型恒定區(qū)，位于合適的 重鏈或輕鏈的野生型基因座。例如，人類重鏈DNA適當(dāng)?shù)夭迦朐谛∈笕旧w12上，適當(dāng)?shù)嘏c 小鼠重鏈恒定區(qū)相鄰。
[0097] 一方面，人類DNA如人類VDJ區(qū)的插入祀向于在小鼠基因組I巧基因座中J4外顯子 與化基因座之間的區(qū)域，及一方面插入在坐標(biāo)114,667，090與114,665,190之間，或者在坐 標(biāo)114，667，091，在114，667，090之后。一方面，人類DNA如人類輕鏈KVJ的插入祀向于小鼠染 色體6中坐標(biāo)70,673,899與70,675,515之間，適當(dāng)?shù)卦谖恢?0,674,734，或者在染色體16上 入小鼠基因座等價(jià)位置。
[0098] 一方面，形成嵌合抗體的宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)可W在不同的(非內(nèi)源)染色 體基因座。在運(yùn)種情況中，插入的人類DNA如人類可變VDJ或VJ區(qū)然后可被插入非人類基因 組中，位于與天然發(fā)生的重鏈或輕鏈恒定區(qū)不同的位置。所述天然恒定區(qū)可W在與天然位 置不同的染色體基因座插入基因組中或者在基因組中復(fù)制，由此其與人類可變區(qū)功能性排 列，由此仍可產(chǎn)生本發(fā)明的嵌合抗體。
[0099] -方面，所述人類DNA插入在內(nèi)源宿主野生型恒定區(qū)，位于宿主恒定區(qū)與宿主VDJ 區(qū)之間的野生型基因座。
[0100] 提及位于非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)上游的可變區(qū)的位置是指存在兩個(gè)抗體部分可 變區(qū)與恒定區(qū)的合適的相對(duì)位置，W使得所述可變區(qū)與恒定區(qū)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)形成嵌合抗 體或抗體鏈。因此，插入的人類DNA和宿主恒定區(qū)是彼此功能性排列的W產(chǎn)生抗體或抗體 鏈。
[0101] -方面，插入的人類DM通過同種型轉(zhuǎn)換而能與不同的宿主恒定區(qū)一起表達(dá)。一方 面，同種型轉(zhuǎn)換不需要或包含反式轉(zhuǎn)換。人類可變區(qū)DNA插入在與相關(guān)宿主恒定區(qū)相同染色 體上意味著不需要反式轉(zhuǎn)換W產(chǎn)生同種型轉(zhuǎn)換。
[0102] 如上所述，用于現(xiàn)有技術(shù)模型的轉(zhuǎn)基因基因座是人源的，因此即使在所述轉(zhuǎn)基因 能互補(bǔ)小鼠基因座W便小鼠產(chǎn)生產(chǎn)生完全人類抗體的B細(xì)胞的情況中，各個(gè)抗體親和性也 很少達(dá)到可得自完整（非轉(zhuǎn)基因）動(dòng)物的那些親和性水平。主要原因是（除了上述所有組成 成分和表達(dá)水平之外)所述基因座的控制元件是人類的事實(shí)。因此，例如激活高親和性抗體 超變和選擇的信號(hào)傳導(dǎo)成分被損害。
[0103] 相反，在本發(fā)明中，宿主非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)得W保持，且優(yōu)選至少一個(gè)非人類 哺乳動(dòng)物增強(qiáng)子或其他控制序列如轉(zhuǎn)換區(qū)保持與非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)功能性排列，由此 如在宿主哺乳動(dòng)物中所見的所述增強(qiáng)子或其他控制序列的作用在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中得W全部 或部分發(fā)揮。
[0104] 運(yùn)種方法被設(shè)計(jì)為允許取樣的人類基因座的完全多樣性、允許與非人類哺乳動(dòng)物 控制序列如增強(qiáng)子達(dá)到相同高的表達(dá)水平，及由此在B細(xì)胞中的信號(hào)傳導(dǎo)例如使用轉(zhuǎn)換重 組位點(diǎn)的同種型轉(zhuǎn)換將仍使用非人類哺乳動(dòng)物序列。
[0105] 具有運(yùn)種基因組的哺乳動(dòng)物將產(chǎn)生具有人類可變區(qū)與非人類哺乳動(dòng)物恒定區(qū)的 嵌合抗體，但是運(yùn)些抗體可易于例如在一個(gè)克隆步驟中人源化。此外，運(yùn)些嵌合抗體的體內(nèi) 效力可W在運(yùn)些相同動(dòng)物中評(píng)估。
[0106] -方面，插入的人類IgH VDJ區(qū)在種系構(gòu)型中包含來自于人類的所有V、D和J區(qū)及 插入序列。
[0107] -方面，將800-1000化的人類IgH VDJ區(qū)插入非人類哺乳動(dòng)物I巧基因座，及一方 面，插入940、950或960kb片段。適當(dāng)?shù)?，運(yùn)包括來自人類染色體14的堿基105,400,051-106， 368，585。一方面，插入的I巧人類片段由來自染色體14的堿基105，400，051-106，368，585組 成。一方面，插入的人類重鏈DNA如由來自染色體14的堿基105，400,051-106，368,585組成 的DNA插入在小鼠染色體12中小鼠J4區(qū)末端與化區(qū)之間，適當(dāng)?shù)卦谧鴺?biāo)114，667，090與114， 665，190之間，或者在坐標(biāo)114，667，091，在114，667，090之后。一方面，所述插入在坐標(biāo)114， 667,089與114,667,090之間（坐標(biāo)參照小鼠C57BL/6J品系的NCBIm37)，或者在另一非人類 哺乳動(dòng)物基因組的等價(jià)位置。
[0108] -方面，插入的人類KVJ區(qū)在種系構(gòu)型中包含來自人類的所有V和J區(qū)及插入序列。 合適地，運(yùn)包括來自人類染色體2的堿基88，940，356-89，857，000，適當(dāng)?shù)貫榇蠹s91化b。另 一方面，所述輕鏈VJ插入物可包含僅V節(jié)段和J節(jié)段的近端簇(proximal cluster)。運(yùn)種插 入物為大約473kb。一方面，人類輕鏈KDNA如來自人類染色體2的堿基88，940，356-89，857， 000的人類I排片段被適當(dāng)?shù)夭迦胄∈笕旧w6中坐標(biāo)70,673,899與70,675,515之間，適當(dāng) 地在位置70，674，734。運(yùn)些坐標(biāo)對(duì)于人類基因組是指NCBI36，ENSEMBL Re 1 ease 54，對(duì)于小 鼠基因組是指與小鼠品系巧7BL/6J相關(guān)的NCBIM37。
[0109] -方面，所述人類AVJ區(qū)在種系構(gòu)型中包含來自人類的所有V和J區(qū)及插入序列。
[0110] 適當(dāng)?shù)?，運(yùn)包括來自人類染色體2的針對(duì)K片段選擇的那些堿基的類似堿基。
[0111] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞或非人類哺乳動(dòng)物包含在小鼠染色體12坐標(biāo) 114，666，183 與 114，666，725 之間如在 114，666，283 與 114，666，625 之間、任選地在坐標(biāo) 114， 666,335與114,666,536之間、任選地在114,666,385與114,666,486之間或者在114,666， 425與114,666，446之間或者在11