一種過氧乙酸殘留的快速測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種過氧乙酸殘留的快速測定方法，該方法為一種響應(yīng)時間快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡便、經(jīng)濟實用的能現(xiàn)場快速檢測樣品中殘留過氧乙酸含量的方法，最低可檢測過氧乙酸的含量為0.5mg/L。本發(fā)明方法所用試紙中的pH調(diào)節(jié)劑保證了測試結(jié)果的準(zhǔn)確性；試紙中的酶保護劑保證了酶試紙的穩(wěn)定性，保質(zhì)期至少可達到12個月；所用試紙面積小，且測試過程簡單，無需其它儀器和配件，可大大節(jié)約測試成本；試紙的可持式底板可防止拿取的過程中受人手的污染，十分安全可靠。
【專利說明】一種過氧乙酸殘留的快速測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)酶法分析領(lǐng)域，特別涉及一種過氧乙酸殘留的快速測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]過氧乙酸作為一種新型高效低毒的殺菌消毒劑主要應(yīng)用于食品加工器具，醫(yī)療器械和用品等的消毒。隨著環(huán)境的惡化，全球的腎病患者越來越多，據(jù)不完全統(tǒng)計，2008年我國的血透析患者已超過10萬人，所以過氧乙酸應(yīng)用在血透析方面的消毒顯得尤為重要。血透析機一般1-3個月內(nèi)需進行一次消毒，可采用0.2%的過氧乙酸循環(huán)20分鐘，浸泡30分鐘消毒；儲水罐和管道一般15天需要進行一次消毒，可采用0.2%的過氧乙酸浸泡30分鐘消毒，每次消毒后均需用反滲水反復(fù)沖洗并進行殘留的測試，確保無過氧乙酸殘留。
[0003]過氧乙酸殘留檢測目前尚缺乏被廣泛認可的方法，因此開發(fā)出一種便捷、靈敏度高、可靠性強的過氧乙酸殘留測試產(chǎn)品迫在眉睫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種過氧乙酸殘留的快速測定方法。
[0005]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
一種過氧乙酸殘留的快速測定方法，包括以下步驟:將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入待測樣品制成的試液中，2秒后取出，甩去試紙上多余的溶液，顯色完全后，將試紙所顯的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色卡相比較，讀出過氧乙酸殘留的濃度數(shù)據(jù)；
其中，過氧乙酸殘留快速測定試紙由以下方法制備:用純水將辣根過氧化物酶、顯色齊U、PH調(diào)節(jié)劑、蛋白酶保護劑配制成混合液，將濾紙在混合液中浸泡5?30min后取出，烘干成形，裁切至設(shè)定尺寸，粘貼在底板上，制得用于測定過氧乙酸殘留的試紙；所述混合液中，辣根過氧化物酶的濃度為0.01?0.10g/L，顯色劑的濃度為1.0?2.0g/L。
[0006]優(yōu)選的，所述顯色劑為四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽、四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽、四甲基聯(lián)苯胺丙磺酸鹽或2，2-聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽。
[0007]優(yōu)選的，所述蛋白酶保護劑為糖、氨基酸、蛋白質(zhì)和聚合物的混合物。
[0008]優(yōu)選的，所述蛋白酶保護劑中，糖為蔗糖、海藻糖中的至少一種；氨基酸為甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的至少一種；蛋白質(zhì)為牛血清蛋白、人血清白蛋白中的至少一種；聚合物為聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。
[0009]優(yōu)選的，所述蛋白酶保護劑中，糖為海藻糖，氨基酸為甘氨酸，蛋白質(zhì)為人血清白蛋白，聚合物為聚乙二醇。
[0010]優(yōu)選的，所述混合液中，糖的濃度為4?20g/L，氨基酸的濃度為2?10g/L，蛋白質(zhì)的濃度為I?5g/L，聚合物的濃度為4?20g/L。
[0011]優(yōu)選的，所述pH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸與磷酸氫二鈉的混合物，混合液中，檸檬酸的濃度為0.028?0.044mol/L，磷酸氫二鈉的濃度為0.11?0.14 mol/L。
[0012]所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡，由以下方法制備:
1)用純水配制濃度為0.5mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入標(biāo)準(zhǔn)溶液中，2秒后取出，甩去多余的溶液，待試紙所呈現(xiàn)的顏色穩(wěn)定后，在潘通色卡上找出對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)色；
2)同步驟I)所述方法，分別獲得檢測濃度為lmg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液時試紙所呈現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)色；
3)根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)色的色值制備得到標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0013]本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明提供了一種靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡便、經(jīng)濟實用的能現(xiàn)場快速檢測樣品中殘留過氧乙酸含量的方法，該方法響應(yīng)時間快，不超過15秒，試紙檢測靈敏度高，最低可檢測過氧乙酸的含量為0.5mg/L。
[0014]本發(fā)明方法所用試紙中的pH調(diào)節(jié)劑即可保持辣根過氧化物酶的活性也可緩沖試樣的pH，保證了測試結(jié)果的準(zhǔn)確性；試紙中的酶保護劑保證了酶試紙的穩(wěn)定性，在室溫的條件下，避光密閉保存，保質(zhì)期至少可達到12個月；試紙的面積小，單次測試試劑用量只有普通實驗室方法的幾百分之一，且測試過程簡單，無需其它儀器和配件，可大大節(jié)約測試成本；試紙的可持式底板可防止拿取的過程中受人手的污染，十分安全可靠。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為標(biāo)準(zhǔn)比色卡1#的視圖。
【具體實施方式】
[0016]一種過氧乙酸殘留的快速測定方法，包括以下步驟:將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入待測樣品制成的試液中，2秒后取出，甩去試紙上多余的溶液，顯色完全后，將試紙所顯的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色卡相比較，讀出過氧乙酸殘留的濃度數(shù)據(jù)；
其中，過氧乙酸殘留快速測定試紙由以下方法制備:用純水將辣根過氧化物酶、顯色齊U、PH調(diào)節(jié)劑、蛋白酶保護劑配制成混合液，將濾紙在混合液中浸泡5?30min后取出，烘干成形，裁切至設(shè)定尺寸，粘貼在底板上，制得用于測定過氧乙酸殘留的試紙；所述混合液中，辣根過氧化物酶的濃度為0.01?0.10g/L，優(yōu)選濃度為0.03?0.05g/L，最佳濃度為
0.04g/L ;顯色劑的濃度為1.0?2.0g/L。
[0017]所述顯色劑為易溶于水的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)鹽酸鹽、TMB硫酸鹽、TMB丙磺酸鹽以及2，2-聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)中的一種，其中TMB鹽酸鹽顯藍色，TMB硫酸鹽、TMB丙磺酸鹽以及ABTS均顯藍綠色。優(yōu)選的顯色劑為TMB鹽酸鹽，其在混合液中最佳濃度為1.5g/L。
[0018]所述的蛋白酶保護劑為糖、氨基酸、蛋白質(zhì)和聚合物的混合物，其中，糖為蔗糖、海藻糖中的至少一種，優(yōu)選為海藻糖；氨基酸為甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的至少一種，優(yōu)選為甘氨酸；蛋白質(zhì)為牛血清蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)中的至少一種，優(yōu)選為HSA ;聚合物為聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的至少一種，優(yōu)選為PEG。所述混合液中，蛋白酶保護劑中糖、氨基酸、蛋白質(zhì)和聚合物的濃度分別為4?20g/L、2?10g/L、l?5g/L、4?20g/L ;優(yōu)選濃度分別為:5?15g/L、4?6g/L、2?4g/L、5?15g/L ;最佳濃度分別為:10g/L、5 g/L、3g/L、10 g/L。
[0019]優(yōu)選的，所述pH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸與磷酸氫二鈉的混合物，混合液中，檸檬酸的濃度為0.028?0.044mol/L，磷酸氫二鈉的濃度為0.11?0.14 mol/L。
[0020]所述濾紙為層析濾紙、定性濾紙和定量濾紙中的一種；優(yōu)選為層析濾紙。
[0021]優(yōu)選的，將濾紙置于低于30°C條件下真空干燥，烘干成形，將此濾紙裁切成25?IOOmm2的小塊，用膠粘在長條狀的底板一端，即制得用于測定過氧乙酸殘留的試紙；所述底板的寬度為5?IOmm,長度為50mm?120mm ;所述底板由不吸水的塑料板制成。
[0022]所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡，由以下方法制備:
1)用純水配制濃度為0.5mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入標(biāo)準(zhǔn)溶液中，2秒后取出，甩去多余的溶液，待試紙所呈現(xiàn)的顏色穩(wěn)定后，在潘通色卡上找出對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)色；
2)同步驟I)所述方法，分別獲得檢測濃度為lmg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液時試紙所呈現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)色；
3)根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)色的色值制備得到標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
[0023]本發(fā)明方法所用試紙對過氧化氫同樣也有響應(yīng)，因過氧乙酸消毒液中一般同時含有過氧化氫，所以該試紙只能用于過氧乙酸的半定量測試。但經(jīng)過氧乙酸消毒的醫(yī)療器械和管道要求不得有過氧乙酸殘留檢出，所以一般只需定性測試即可，本發(fā)明方法能滿足其測試需求。
[0024]下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0025]實施例1
用純水配制含0.04g/L辣根過氧化物酶、1.5g/L TMB鹽酸鹽、0.037mol/L檸檬酸、
0.126mol/L 磷酸氫二鈉、10 g/L 海藻糖、5 g/L 甘氨酸、3g/LBSA、10 g/LPEG4000 的混合顯色液。將層析濾紙完全浸泡至上述混合液中約10分鐘，取出濾紙，在低于30°C溫度下真空干燥，將此濾紙切成5X6 mm的小塊,用膠粘在5X80mm條狀的底板一端，即制成過氧乙酸殘留快速測定試紙1#。
[0026]實施例2
用純水配制含0.0I g/L辣根過氧化物酶、1.0g/L TMB硫酸鹽、0.028mol/L檸檬酸、
0.llmol/L磷酸氫二鈉、10g/L海藻糖、5g/L精氨酸、5g/LBSA、10 g/LPVP的混合顯色液。將層析濾紙完全浸泡至上述混合液中5分鐘，取出濾紙，在低于30°C溫度下真空干燥，將此濾紙切成5X5 mm的小塊,用膠粘在5X50mm條狀的底板一端，即制成過氧乙酸殘留快速測定試紙2#。
[0027]實施例3
用純水配制含0.025g/L辣根過氧化物酶、1.25g/L TMB丙磺酸鹽、0.044mol/L檸檬酸、
0.14mol/L磷酸氫二鈉、2g/L鹿糖、2g/L海藻糖、2g/L甘氨酸、lg/LHSA、4g/LPEG6000的混合顯色液。將定性完全浸泡至上述混合液中約20分鐘，取出濾紙，在低于30°C溫度下真空干燥，將此濾紙切成5X5 mm的小塊,用膠粘在5X50mm條狀的塑料硬板一端，即制成過氧乙酸殘留快速測定試紙3#。
[0028]實施例4用純水配制含0.1 g/L辣根過氧化物酶、2.0g/L ABTS、0.044mol/L檸檬酸、0.14mol/L磷酸氫二鈉、20g/L蔗糖、6g/L谷氨酸、2g/L甘氨酸、2g/L精氨酸、4g/LHSA、20g/LPEG8000的混合顯色液。將定量濾紙完全浸泡至上述混合液中30分鐘，取出濾紙，在低于30°C溫度下真空干燥，將此濾紙切成10X 10mm的小塊,用膠粘在10X 120mm條狀的塑料硬板一端，即制成過氧乙酸殘留快速測定試紙4#。
[0029]實施例5
制備與過氧乙酸殘留快速測定試紙1#配套使用的標(biāo)準(zhǔn)比色卡1#:
1)用純水配制濃度為0.5mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,將實施例1制備的試紙浸入溶液中，2秒后取出，甩去多余的溶液，15秒后根據(jù)試紙所呈現(xiàn)的顏色在潘通色卡上找出色調(diào)一致的標(biāo)準(zhǔn)色；
2)同步驟1)所述方法，分別獲得檢測濃度為lmg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液時試紙所呈現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)色；
3)根據(jù)得到的各潘通標(biāo)準(zhǔn)色所列色值采用電腦調(diào)色和印制，得到標(biāo)準(zhǔn)比色卡1#(如圖1所示)。
[0030]實施例6
同實施例5所述的方法，分別制備得到與檢測試紙2#?4#配套使用的標(biāo)準(zhǔn)比色卡
2# -4# ο
[0031]實施例7
將過氧乙酸殘留快速測定試紙1#-3#置于密實袋中，放置37°C烘箱中，每隔30天觀
察試紙外觀及進行顯色效果測試。測試方法:配制0.5mg/L、L 0mg/L>2.0mg/L>4.0mg/L、
10.0mg/L,20.0mg/L,40.0mg/L系列過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將試紙1#插入標(biāo)準(zhǔn)溶液中2秒后取
出，甩去試紙上多余的溶液，顯色完全后觀察顯色效果，并分別與配套的標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照，
讀出過氧乙酸濃度的數(shù)據(jù)。隨著過氧乙酸含量的增加，試紙所顯的顏色逐漸加深。檢測結(jié)
果如表1-3所示:
表1過氧乙酸殘留快速測定試紙1#的穩(wěn)定性
【權(quán)利要求】
1.一種過氧乙酸殘留的快速測定方法，包括以下步驟:將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入待測樣品制成的試液中，2秒后取出，甩去試紙上多余的溶液，顯色完全后，將試紙所顯的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色卡相比較，讀出過氧乙酸殘留的濃度數(shù)據(jù)； 其中，過氧乙酸殘留快速測定試紙由以下方法制備:用純水將辣根過氧化物酶、顯色齊U、PH調(diào)節(jié)劑、蛋白酶保護劑配制成混合液，將濾紙在混合液中浸泡5?30min后取出，烘干成形，裁切至設(shè)定尺寸，粘貼在底板上，制得用于測定過氧乙酸殘留的試紙；所述混合液中，辣根過氧化物酶的濃度為0.0l?0.10g/L，顯色劑的濃度為1.0?2.0g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述顯色劑為四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽、四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽、四甲基聯(lián)苯胺丙磺酸鹽或2，2-聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述蛋白酶保護劑為糖、氨基酸、蛋白質(zhì)和聚合物的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述蛋白酶保護劑中，糖為蔗糖、海藻糖中的至少一種；氨基酸為甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的至少一種；蛋白質(zhì)為牛血清蛋白、人血清白蛋白中的至少一種；聚合物為聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述蛋白酶保護劑中，糖為海藻糖，氨基酸為甘氨酸，蛋白質(zhì)為人血清白蛋白，聚合物為聚乙二醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求3、4或5所述的方法，其特征在于:所述混合液中，糖的濃度為4?20g/L，氨基酸的濃度為2?10g/L，蛋白質(zhì)的濃度為I?5g/L，聚合物的濃度為4?20g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述pH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸與磷酸氫二鈉的混合物，混合液中，檸檬酸的濃度為0.028?0.044mol/L，磷酸氫二鈉的濃度為0.11?0.14mol/L0
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡，由以下方法制備: 1)用純水配制濃度為0.5mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將過氧乙酸殘留快速測定試紙浸入標(biāo)準(zhǔn)溶液中，2秒后取出，甩去多余的溶液，待試紙所呈現(xiàn)的顏色穩(wěn)定后，在潘通色卡上找出對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)色； 2)同步驟I)所述方法，分別獲得檢測濃度為lmg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的過氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液時試紙所呈現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)色； 3)根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)色的色值制備得到標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
【文檔編號】G01N21/78GK103439322SQ201310336589
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月5日
【發(fā)明者】鄧金花, 秦惠, 黃報亮, 吳清平 申請人:廣東環(huán)凱微生物科技有限公司