一種純化抗體中制備純化曲線的方法
【專利摘要】一種純化抗體中制備純化曲線的方法，其特點是：A）對經(jīng)過飽和硫酸銨沉淀的兔抗乙腦病毒血清選用蛋白A柱純化；B）同時用多個0.5ml離心管接收流出組分；C）用Bindingbuffer清洗柱；使純化樣品進(jìn)入柱內(nèi)，連續(xù)接收流出組分；D）使用Bindingbuffer清洗柱，連續(xù)接收流出組分；E）使用Elutionbuffer洗脫柱，連續(xù)接收流出組分；F）每個收集管中取50μl分別加入384孔板中。本方法利用酶標(biāo)儀，對每個洗脫組分在280nm波長下檢測其吸收值，進(jìn)而檢測其IgG含量，并得到最終純化組分曲線，可替代自動檢測器描述整個過程純化。
【專利說明】一種純化抗體中制備純化曲線的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物制備中的實驗方法，特別是涉及一種純化抗體中制備純化曲線的方法，主要應(yīng)用于實驗室內(nèi)抗體(蛋白)制備，可以代替檢測器制備純化曲線。
【背景技術(shù)】
[0002]紫外檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點:使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；靈敏度高；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
[0003]酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同，可以同時對幾十或上百個樣品進(jìn)行檢測。
[0004]微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，微孔板上每個小孔可盛放10-100微升的溶液?？梢钥焖?、平行檢測大量的樣品。
[0005]蛋白質(zhì)純化是生物實驗的基礎(chǔ)技術(shù)，實驗室內(nèi)經(jīng)常制備少量純化抗體用于實驗應(yīng)用。由于樣品量少，多采用注射器加壓的手動進(jìn)樣方式代替進(jìn)樣泵，并且一般不需檢測器檢測流出各組分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，公開一種純化抗體中制備純化曲線的方法。本發(fā)明在少量制備抗體時，可以代替實驗室昂貴的純化設(shè)備，用手動的方法繪制整個純化過程曲線圖譜。
[0007]本發(fā)明利用實驗室常用儀器一酶標(biāo)儀，以蛋白A親和柱純化兔抗乙腦病毒多克隆抗體為例對每個洗脫組分在280nm波長下檢測其吸收值，進(jìn)而檢測其IgG含量，并得到最終純化組分曲線，替代自動檢測器描述整個過程純化。
[0008]本發(fā)明給出的技術(shù)方案是:這種純化抗體中制備純化曲線的方法，其特征在于有以下步驟。
[0009]A)對經(jīng)過飽和硫酸銨沉淀的兔抗乙腦病毒血清選用蛋白A柱純化，選擇純化柱的體積是1ml。
[0010]B)同時用多個0.5ml離心管接收流出組分，每個管內(nèi)收集0.2ml流出組分。
[0011]C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱，清洗5個柱體積(取最后I個柱體積的流出組分作為實驗空白)。
[0012]D)使用注射器注射Iml待純化樣品進(jìn)入柱內(nèi)，連續(xù)接收流出組分。
[0013]C)使用5個柱體積的Binding buffer清洗柱，連續(xù)接收流出組分。
[0014]E)使用3個柱體積的Elution buffer洗脫柱,連續(xù)接收流出組分。
[0015]F)每個收集管中取50 μ I分別加入384孔板中.(此板需適合紫外檢測,加樣時避免產(chǎn)生氣泡)；設(shè)定平衡柱的流出組分為空白。同時設(shè)定酶標(biāo)儀波長280nm。[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是。
[0017]本發(fā)明在少量制備抗體時，可以代替實驗室昂貴的純化設(shè)備，用手動的方法直接繪制整個純化過程曲線圖譜，不必使用專用設(shè)備繪制純化曲線。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1是親和純化抗體的曲線。
【具體實施方式】
[0019]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明給出的技術(shù)方案做出進(jìn)一步說明。
[0020]這種純化抗體中制備純化曲線的方法有以下步驟。
[0021]A)對經(jīng)過飽和硫酸銨沉淀的兔抗乙腦病毒血清選用蛋白A柱純化。選擇純化柱的體積是1ml。
[0022]B)同時用多個0.5ml離心管接收流出組分，每個管內(nèi)收集0.2ml流出組分。
[0023]C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱，清洗5個柱體積(取最后I個柱體積的流出組分作為實驗空白)。
[0024]D)使用注射器注射Iml待純化樣品進(jìn)入柱內(nèi)，連續(xù)接收流出組分。
[0025]C)使用5個柱體積的Binding buffer清洗柱，連續(xù)接收流出組分。
[0026]E)使用3個柱體積的Elution buffer洗脫柱,連續(xù)接收流出組分。
[0027]F)每個收集管中取50 μ I分別加入384孔板中.(此板需適合紫外檢測,加樣時避免產(chǎn)生氣泡)；設(shè)定平衡柱的流出組分為空白。同時設(shè)定酶標(biāo)儀波長280nm。
[0028]親和純化檢測A280數(shù)據(jù)列表。I 篡輕mmm
【權(quán)利要求】
1.一種純化抗體中制備純化曲線的方法，其特征在于有以下步驟: A)對經(jīng)過飽和硫酸銨沉淀的兔抗乙腦病毒血清選用蛋白A柱純化，選擇純化柱的體積是 Iml ； B)同時用多個0.5ml離心管接收流出組分，每個管內(nèi)收集0.2ml流出組分； C)首先平衡柱:用Bindingbuffer清洗柱,清洗5個柱體積(取最后I個柱體積的流出組分作為實驗空白)； D)使用注射器注射Iml待純化樣品進(jìn)入柱內(nèi)，連續(xù)接收流出組分； C)使用5個柱體積的Binding buffer清洗柱，連續(xù)接收流出組分； E)使用3個柱體積的Elutionbuffer洗脫柱,連續(xù)接收流出組分； F)每個收集管中取50μ I分別加入384孔板中.(此板需適合紫外檢測,加樣時避免產(chǎn)生氣泡)；設(shè)定平衡柱的流出組分為空白，同時設(shè)定酶標(biāo)儀波長280nm。
【文檔編號】G01N21/33GK103926207SQ201310015275
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月16日
【發(fā)明者】高旭哲, 張玥, 劉暢, 戰(zhàn)辛 申請人:遼寧成大生物股份有限公司