胰高血糖素樣肽-1的測定法及其中使用的試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種GLP-1的測定法，其特征在于，其為測定被檢體中的胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）的存在和／或量的方法，包括預(yù)先用酸性溶液處理被檢體的工序，以及，一種試劑盒，其為測定被檢體中的GLP-1的存在和／或量的試劑盒，包含：（a）酸性溶液、（b）GLP-1的特異性抗體和（c）操作說明書。
【專利說明】胰高血糖素樣肽-1的測定法及其中使用的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及容易且準(zhǔn)確地測定胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)的方法和其中使用的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]在以二肽基肽酶IV (以下有時(shí)稱為“DPP-1V”)活性的抑制為目標(biāo)的藥物、或以胰高血糖素樣肽-1 (GLP-D為藥物的藥品(主要是糖尿病藥)的開發(fā)中，為了測定藥效評(píng)價(jià)參數(shù)和藥物濃度，分別頻繁地對(duì)血中活性型GLP-1濃度(GLP-1 (活性型))、或總GLP-1濃度(GLP-1 (總))進(jìn)行測定。
[0003]DPP-1V抑制劑的作用機(jī)理如下:通過抑制DPP-1V活性，使得具有被DPP-1V分解的性質(zhì)的活性型GLP-1濃度上升，通過該GLP-1促進(jìn)胰島素的分泌，促進(jìn)糖的利用。因此，通過測定GLP-1的濃度可以判定DPP-1V抑制劑的作用效果。
[0004]作為活性型GLP-1，已知存在GLP-1 (7-36酰胺)和GLP-1 (7-37)。已知的是，這些物質(zhì)的測定通過使用了特異性抗體的免疫學(xué)測定法(ELISA法:密理博公司制試劑盒等)而廣泛進(jìn)行，但由于非特異性反應(yīng)時(shí)有發(fā)生，為了測定血漿中的準(zhǔn)確濃度，必須進(jìn)行一些前處理以消除非特異性反應(yīng)(非專利文獻(xiàn)I)。一般ELISA法中的非特異性反應(yīng)可考慮到是起因于血液等被檢體的反應(yīng)、起因于抗體、試劑的反應(yīng)、起因于微孔板的反應(yīng)等。以往方法中，認(rèn)為非特異性反應(yīng)起因于被檢體，通過利用柱的前處理法將這些從被檢體除去后實(shí)施ELISA法。該前處理方法利用固相柱或乙醇提取操作將引起非特異性反應(yīng)的物質(zhì)和GLP-1分離，I次檢查中所需的血漿量多達(dá)300 μ L，需要試劑制備、分離操作、氮?dú)飧晒毯驮偃芙膺@樣的復(fù)雜操作以及時(shí)間，對(duì)操作人員也要求操作熟練。綜上，以往方法不能稱為簡便且低成本的測定法。進(jìn)而，利用該前處理操作，被檢體中的20?30% GLP-1損失是無法避免的，因此可以想到GLP-1測定值相對(duì)于真實(shí)值為70?80%左右，在準(zhǔn)確性方面也存在問題。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0006]非專利文獻(xiàn)
[0007]非專利文獻(xiàn)1:CF.Deacon, JJ.Holst/Best Practice&Research Clinical Endocrinology&Metabolism23(2009)425-432

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的課題在于，提供一種能夠解決上述問題的、能夠在臨床試驗(yàn)中在實(shí)用條件下簡便且準(zhǔn)確地對(duì)被檢體中的GLP-1進(jìn)行測定的方法和試劑盒。
[0009]本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，通過不使用固相柱而是對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理，消除回收操作所導(dǎo)致的損失，排除非特異性反應(yīng)物質(zhì)的影響而獲得準(zhǔn)確的測定值，還能夠以低成本實(shí)現(xiàn)簡便的測定。具體而言，不使用固相柱從而不再需要柱的清洗、洗脫、氮?dú)飧晒獭⒃偃芙膺@些繁雜操作，被檢體的前處理所需的時(shí)間也縮短約4.5小時(shí)，必需血漿量可減半。尤其是檢查室要求處理大量被檢體，因此根據(jù)本發(fā)明能夠極大提高處理能力。此外，由于是操作時(shí)無需特殊技能的簡便方法，不論是什么樣的操作者均能夠進(jìn)行穩(wěn)定的測定?；谶@些見解完成了本發(fā)明。
[0010]此外，已知酸處理具有在某些氨基酸序列的情況下導(dǎo)致其失去活性等影響，一般而言，限于用于活性高(或穩(wěn)定的)的抗體的精制等。根據(jù)本發(fā)明的酸處理，GLP-1穩(wěn)定，但非特異性反應(yīng)物質(zhì)遭受變性等，GLP-1濃度的測定法中的非特異性反應(yīng)被抑制，能夠準(zhǔn)確地測定GLP-1濃度，這些效果是出乎意料的。
[0011]S卩，本發(fā)明如下所述。
[0012](I) 一種GLP-1的測定法，其特征在于，其為測定被檢體中的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)的存在和/或量的方法，包括預(yù)先用酸性溶液處理被檢體的工序。
[0013](2)根據(jù)(I)所述的測定法，其中，酸性溶液為包含甘氨酸、鹽酸、醋酸、鹽酸胍、硫酸、磷酸中的至少一種的溶液。
[0014](3)根據(jù)(I)或(2)所述的測定法，其中，被檢體為血液。
[0015](4)根據(jù)(I)?(3)中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，GLP-1的測定法為酶聯(lián)免疫測定法或競爭性放射免疫測定(競爭性RIA)法。
[0016](5) 一種試劑盒，其為測定被檢體中的GLP-1的存在和/或量的試劑盒，包含(a)酸性溶液、(b) GLP-1的特異性抗體和(c)操作說明書。
[0017]作為“GLP-1”，包括活性型GLP-1、非活性型GLP-1、全長GLP-1等由全長GLP-1生成的物質(zhì)。
[0018]各“GLP-1”的氨基酸序列如下所示。
[0019]活性型GLP-1
[0020]GLP-1 (7-36)酰胺:
[0021 ] HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR (序列號(hào) I) -CONH2
[0022]GLP-1 (7-37):
[0023]HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG (序列號(hào) 2、
[0024]非活性型GLP-1
[0025]GLP-1 (9-36)酰胺:
[0026]EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR (序列號(hào) 3) -CONH2
[0027]GLP-1 (9-37):
[0028]EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG (序列號(hào) 4)
[0029]全長GLP-1
[0030]GLP-1 (1-37):
[0031 ] HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG (序列號(hào) 5)
[0032]GLP-1 (1-36)酰胺:
[0033]HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR (序列號(hào) 6) -CONH2
[0034]上述“GLP-1”中，活性型GLP-1具有腸促胰島素(Incretin)作用。本發(fā)明優(yōu)選針對(duì)活性型GLP-1來使用。
[0035]發(fā)明的效果
[0036]根據(jù)本發(fā)明，能夠有效地抑制測定被檢體中的GLP-1時(shí)的非特異性反應(yīng)，能夠簡便且準(zhǔn)確地測定該GLP-1。通過利用本發(fā)明，能夠使供于測定的被檢體量為以往的一半左右，此外不論測定者的熟練程度如何均能夠準(zhǔn)確地且低成本地測定GLP-1。即使在臨床現(xiàn)場也無需繁雜操作，能夠簡便地實(shí)施均一的測定，這是非常有用的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0037]圖1是表示對(duì)29名健康人的空腹時(shí)血漿通過無前處理法、固相柱法、酸處理法處理后測定活性型GLP-1濃度的結(jié)果的圖。
[0038]圖2是表示對(duì)進(jìn)食后的血漿通過固相柱法(有校正、無校正)、酸處理法處理后測定活性型GLP-1濃度的結(jié)果的圖。
[0039]圖3是表示用各種酸處理后的空腹時(shí)血漿和進(jìn)食后血漿中的活性型GLP-1濃度的測定結(jié)果的圖。
[0040]圖4是表示對(duì)另外50名健康人的空腹時(shí)血漿通過無前處理法、固相柱法、酸處理法處理后測定活性型GLP-1濃度的結(jié)果的圖。
[0041]圖5是表示對(duì)另外50名健康人的進(jìn)食后血漿通過無前處理法、固相柱法、酸處理法處理后測定活性型GLP-1濃度的結(jié)果的圖。
[0042]圖6是基于實(shí)施例5、6的結(jié)果對(duì)無前處理法、固相柱法、酸處理法中的各組合的相關(guān)性進(jìn)行解析的結(jié)果的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0043]本發(fā)明的特征在于，在測定被檢體中的GLP-1時(shí)，預(yù)先對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理而供于前述測定。
[0044]本發(fā)明可以用于公知的測定被檢體中的GLP-1的存在和/或量(濃度)的方法。即，本發(fā)明的測定法除了本發(fā)明的預(yù)先對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理而供于前述測定外可以與通常的GLP-1測定法相同。作為測定法，可以列舉例如免疫學(xué)方法、儀器分析法等，優(yōu)選免疫學(xué)方法。
[0045]作為GLP-1量的測定，一般進(jìn)行的是僅以被稱為“GLP-U活性型)”的活性型GLP-1為對(duì)象的測定和以被稱為“GLP-1 (總)”的、活性型GLP-1、非活性型GLP-1、全長GLP-1等由全長GLP-1生成的GLP-1總量為對(duì)象的測定等。各GLP-1量的測定法本身沒有任何限定，可以利用公知的免疫分析、儀器分析等進(jìn)行，優(yōu)選免疫學(xué)方法，例如優(yōu)選使用酶聯(lián)免疫測定法、競爭性RIA法等。作為酶聯(lián)免疫測定法，例如采用利用吸光、熒光、化學(xué)發(fā)光等的方法，其中特別優(yōu)選使用熒光、化學(xué)發(fā)光法。還可以使用市售的EIA、ELISA或RIA試劑盒進(jìn)行測定。
[0046]本發(fā)明中，預(yù)先對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理是指，在將被檢體供于前述GLP-1量的測定工序之前，用酸性溶液進(jìn)行處理。例如，在被檢體中加入酸性溶液，在室溫或37°C保溫一定時(shí)間。一定時(shí)間優(yōu)選為約10?30分鐘。此外，此后用堿溶液進(jìn)行了中和的方式有時(shí)也稱為進(jìn)行了酸處理。在添加堿溶液后，立即混和即可。
[0047]本發(fā)明中能夠使用的被檢體只要是前述GLP-1量的測定中能夠使用的即可，沒有限制，可以列舉血液(全血、血漿、血清等)?？梢詢?yōu)選使用血漿。
[0048]本發(fā)明中的酸處理是指:GLP_1不變性但除其以外的引起非特異性反應(yīng)的夾雜物發(fā)生變性等、從而抑制對(duì)于前述GLP-1量的測定的影響的方法。[0049]作為本發(fā)明的酸處理中使用的酸性溶液，只要是GLP-1不變性但除其以外的引起非特異性反應(yīng)的夾雜物能夠變性、對(duì)后續(xù)測定沒有影響的物質(zhì)即可。這樣的酸性溶液是本領(lǐng)域技術(shù)人員無需進(jìn)行過度的嘗試試驗(yàn)即能夠從公知的酸性溶液中選擇出的。例如，PH4以下的酸性溶液。更優(yōu)選PH2.5以下的酸性溶液。酸性溶液的pH的下限沒有特別限制，例如SpHl以上。具體而言，可以列舉包含甘氨酸(氨基乙酸)、鹽酸、醋酸、鹽酸胍、硫酸、磷酸中的至少I種的溶液。適宜的PH根據(jù)各酸而不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定。通常優(yōu)選PH較低。此外，具有緩沖能力的酸性溶液由于能夠彌補(bǔ)操作性的偏差而優(yōu)選。例如，可以列舉甘氨酸-鹽酸緩沖液、鹽酸-氯化鉀緩沖液、檸檬酸緩沖液、醋酸緩沖液、檸檬酸-磷酸緩沖液等。通過使用這樣的酸性溶液可以僅使非特異性反應(yīng)物質(zhì)變性，因此能夠準(zhǔn)確地僅測定GLP-1。此外，由于變性后的非特異性反應(yīng)物質(zhì)不易沉淀、析出，因此前處理后無需經(jīng)過被檢體的離心、沉淀除去操作就能夠供于測定，操作簡便。
[0050]酸性溶液更優(yōu)選相對(duì)于試樣溶液以1:9?1:1的體積添加。
[0051]進(jìn)行酸處理后，為了不影響前述GLP-1量的測定，可以添加堿溶液將其中和為pH7左右。作為能夠用于進(jìn)行中和的堿溶液，只要是不影響測定的堿溶液即可，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需進(jìn)行過度的嘗試試驗(yàn)即能夠從公知的堿溶液中選擇?？梢粤信e例如Tris(三羥甲基氨基甲烷)、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、碳酸鈉、碳酸氫鈉。此外，具有緩沖能力的堿溶液由于能夠彌補(bǔ)操作性的偏差而優(yōu)選。例如，可列舉出Tris-鹽酸緩沖液、磷酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、碳酸-碳酸氫鹽緩沖液等。
[0052]本發(fā)明的試劑盒的特征在于，可以用于實(shí)施本發(fā)明的測定法，包含用于預(yù)先對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理的酸性溶液。具體而言，包含:
[0053](a)酸性溶液、
[0054](b) GLP-1的特異性抗體、
[0055](C)操作說明書。
[0056]本發(fā)明的試劑盒中使用的前述抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體中的任一種。此外，試劑盒中還可以使用保持與GLP-1的特異性結(jié)合能力的抗體片段，例如Fab、Fab’、F(ab，) 2、或 Fv。
[0057]進(jìn)而，前述抗體可以本來狀態(tài)用于試劑盒，也可以根據(jù)所利用的免疫學(xué)手法而以適合于該手法的形態(tài)用于試劑盒，例如，如果采用膠乳凝集免疫測定法則可以以固定于膠乳載體的狀態(tài)用于試劑盒，如果采用使用了磁性粒子等的高靈敏度測定法則可以以固定于磁性粒子的狀態(tài)用于試劑盒，如果是免疫色譜法等利用基板的方法則可以以固定于基板的狀態(tài)用于試劑盒，如果需要利用標(biāo)記物質(zhì)(例如酶、熒光物質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、放射性同位素、生物素、抗生物素蛋白)進(jìn)行標(biāo)記則可以以標(biāo)記化的狀態(tài)用于試劑盒。
[0058]此外，本發(fā)明的試劑盒中包含的前述操作說明書只要至少言及通過酸性溶液預(yù)先處理被檢體即可，沒有特別限定，除了前述言及內(nèi)容，還可以包含例如關(guān)于使用本發(fā)明的試劑盒的免疫學(xué)測定的實(shí)施步驟的說明、關(guān)于試劑盒自身的保存、操作等的注意事項(xiàng)等。
[0059]予以說明，用于進(jìn)行酸處理的酸性溶液即使與測定GLP-1的試劑不同，只要是在測定GLP-1時(shí)用于預(yù)先對(duì)被檢體進(jìn)行酸處理則實(shí)質(zhì)上構(gòu)成本發(fā)明的試劑盒。
[0060]實(shí)施例
[0061]以下列舉實(shí)施例具體說明本發(fā)明。但本發(fā)明不限于以下實(shí)施例的方式。[0062]《實(shí)施例1:本發(fā)明的利用酸處理的測定法和以往的利用固相柱的測定法的步驟》_3] 1-1:本發(fā)明的利用酸處理的測定法的步驟
[0064]1-1-1:被檢體
[0065]關(guān)于被檢體，以健康人為對(duì)象，在EDTA采血管(NIPR0公司制)中按照日本特開2008-104870添加DIPROTIN A(抑二肽素A)，在空腹時(shí)或進(jìn)食后采血，在以下的測定中使用與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿。
[0066]1-1-2:標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)試樣溶液
[0067]使用胰高血糖素樣肽I (人，7-36酰胺)(肽研究所公司制)作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，制備O和I?IOOpmol / L為止的8級(jí)別濃度的溶液，用于定量。
[0068]1-1-3:酸處理
[0069]在聚丙烯制管中添加0.2mol / L甘氨酸鹽酸緩沖液(pHl.3) 150 μ L、以及標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)試樣溶液或與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿150 μ L，混和。在37°C保溫10分鐘，然后添加30 μ L的2mol / L Tris-鹽酸緩沖液(pH8.5)進(jìn)行中和，作為酸處理后的樣品，用于以下的活性型GLP-1量的測定。
[0070]1-1-4:活性型GLP-1濃度的測定
[0071]活性型GLP-1濃度的測定中，使用利用了抗GLP-1單克隆抗體的GLUCAGON-LIKEPEPTIDE-1 (ACTIVE)ELISA KIT96孔板(密理博公司制)。測定法是按照所附的說明書進(jìn)行的。測定裝置使用的是Veritas微孔板發(fā)光檢測儀(普洛麥格公司制)，利用SoftMax Pro(分子儀器(日本)公司制)進(jìn)行解析。
[0072]1-2:以往的利用固相柱的測定法的步驟
[0073]除了將1-1-3的酸處理變更為以下的固相柱以外，與1-1同樣進(jìn)行。
[0074]作為固相柱，使用的是Oasis HLB Extraction Plate(Waters公司制)。使用方法是按照所附的說明書進(jìn)行的。在進(jìn)行柱的平衡(conditioning)后，將1-1-1中制備的血漿300 μ L用PBS稀釋4倍而制備成1200 μ L，添加到孔中后，離心(IOX g、3分鐘、室溫)。然后，添加10%甲醇溶液lmL，然后進(jìn)行離心(10Xg、3分鐘、室溫)，對(duì)孔進(jìn)行清洗。重復(fù)進(jìn)行2次該操作。接著安設(shè)深孔板，添加含有0.5%氨的75%甲醇溶液0.5mL,然后離心(IOX g、3分鐘、室溫)，進(jìn)行洗脫。重復(fù)進(jìn)行2次該操作，然后利用離心(100Xg、l分鐘、室溫)從孔中完全回收洗脫液。接著將該洗脫液在氮?dú)鈿饬飨逻M(jìn)行干固。向其中添加GLUCAG0N-LIKEPEPTIDE-1(ACTIVE)ELISA KIT96孔板試劑盒(密理博公司制)所包含的分析緩沖液250 μ L，在微孔板振蕩搖床(Plate Shaker)中進(jìn)行約5分鐘的再溶解，作為前處理后的樣品用于活性型GLP-1濃度的測定。由于再溶解量為250 μ L，少于被檢體量300 μ L，因此測定值乘以體積校正系數(shù)(0.83:再溶解量除以被檢體量而得的值)。
[0075]此外，作為比較而不進(jìn)行前處理時(shí)，將1-1-1中制備的血漿直接用于活性型GLP-1濃度的測定(也無需進(jìn)行體積校正)。
[0076]《實(shí)施例2:活性型GLP-1濃度測定中的前處理法的效果的比較》
[0077]當(dāng)對(duì)于同一個(gè)體比較活性型GLP-1濃度和總GLP-1濃度時(shí)，在無前處理的方法中發(fā)現(xiàn)了活性型GLP-1濃度超過總GLP-1濃度的個(gè)體，表明無前處理時(shí)未能準(zhǔn)確測定活性型GLP-1，確認(rèn)了以往的利用固相柱進(jìn)行的前處理的有效性。
[0078]空腹時(shí)活性型GLP-1濃度非常低(在定量下限lpmol / L附近)，因此通過測定空腹時(shí)血漿，能夠準(zhǔn)確地確認(rèn)非特異性反應(yīng)物質(zhì)對(duì)測定值的影響。
[0079]按照實(shí)施例1，利用各前處理法測定了活性型GLP-1濃度。
[0080]由29名空腹時(shí)的健康人制備與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿，利用無前處理法、固相柱法、酸處理法處理血漿后，測定活性型GLP-1濃度。其中，固相柱法中，測定值由于前處理所導(dǎo)致的損失而較低，因此為了方便比較，使用的是對(duì)測定值進(jìn)行了回收率校正(測定值/ 0.75)的結(jié)果。其結(jié)果是，本發(fā)明的酸處理法獲得了與固相柱法同等的結(jié)果。結(jié)果示于圖1。 [0081]無前處理時(shí)，多個(gè)被檢體確認(rèn)到非特異性值的上升，但通過基于被檢體的酸處理法的前處理顯著抑制了該上升。此外，固相柱法中，為了方便而對(duì)測定值進(jìn)行回收率校正而求取值，但回收率并非總是穩(wěn)定的，無法確定測定值是否正確。但是，酸處理法即使不使用如上的校正系數(shù)也為與固相柱法的校正后的測定值同等程度，因此可知簡便且高精度地求出測定值。上述表明:利用酸處理能夠穩(wěn)定、準(zhǔn)確地獲得測定結(jié)果。
[0082]《實(shí)施例3:活性型GLP-1濃度測定中的前處理法的效果的比較》
[0083]按照實(shí)施例1，利用各前處理法測定了 10名進(jìn)食后的健康人的活性型GLP-1濃度。
[0084]進(jìn)食導(dǎo)致內(nèi)源性活性型GLP-1濃度增加，因此通過測定進(jìn)食后的血漿能夠確認(rèn)酸處理法不影響內(nèi)源性的活性型GLP-1濃度的測定。
[0085]由10名進(jìn)食后的健康人制備與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿，通過固相柱法、酸處理法處理血漿后，測定活性型GLP-1濃度。其中，固相柱法中，測定值由于前處理所導(dǎo)致的損失而較低，因此為了方便比較，使用的是對(duì)測定值進(jìn)行了回收率校正(測定值/ 0.75)的結(jié)果。結(jié)果可知，本發(fā)明的酸處理法獲得了與進(jìn)行了回收率校正的固相柱法同等的結(jié)果，能夠準(zhǔn)確地測定活性型GLP-1濃度。結(jié)果示于圖2。
[0086]可知:與實(shí)施例2同樣地，通過酸處理法，不論測定者的熟練度和柱的批次差異等如何，均能夠穩(wěn)定、簡便且高精度地求出測定值。
[0087]《實(shí)施例4:各種酸的酸處理?xiàng)l件的比較》
[0088]按照實(shí)施例1和下述表1，各測定2人的空腹時(shí)或進(jìn)食后的與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿，對(duì)無前處理法、固相柱法和酸處理法時(shí)的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行比較。固相柱法中，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度由于前處理所導(dǎo)致的損失而較低，因此為了方便比較，使用的是對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行了回收率校正(化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度/ 0.75)的結(jié)果。酸處理液全部和與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿等量(150 μ L)地添加，實(shí)施例1所示的酸處理?xiàng)l件以外的酸處理液的種類和中和條件示于表1。關(guān)于酸處理法，使用的是針對(duì)中和液添加量進(jìn)行了體積校正{化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度X (與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿量+酸處理液量+中和液添加量)/ (與個(gè)體對(duì)應(yīng)的血漿量+酸處理液量)}的結(jié)果。
[0089][表 I]
[0090]
[0091]
【權(quán)利要求】
1.一種GLP-1的測定法，其特征在于，其為測定被檢體中的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)的存在和/或量的方法，包括預(yù)先用酸性溶液處理被檢體的工序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定法，其中，酸性溶液為包含甘氨酸、鹽酸、醋酸、鹽酸胍、硫酸、磷酸中的至少一種的溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定法，其中，被檢體為血液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1?3中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，GLP-1的測定法為酶聯(lián)免疫測定法或競爭性放射免疫測定法。
5.一種試劑盒，其為測定被檢體中的GLP-1的存在和/或量的試劑盒，包含(a)酸性溶液、(b) GLP-1的特異性抗體和(c)操作說明書。
【文檔編號(hào)】G01N33/53GK103765213SQ201280041481
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月25日
【發(fā)明者】酒井千菜, 田代茂 申請(qǐng)人:三菱化學(xué)美迪恩斯株式會(huì)社