多肽顆粒及其制造方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種來自蛛絲蛋白質(zhì)的多肽顆粒（粒子）及其制造方法。
【背景技術】
[0002] 探討了多肽對生物體材料的應用。在專利文獻1中提出了一種將絲素蛋白溶解于 聚乙二醇等的吸濕聚合物的水凝膠、薄膜、海綿狀泡沫。在專利文獻2中公開有一種以蜘蛛 絲為原料、進行光交聯(lián)的凝集體。 現(xiàn)有技術文獻 專利文獻
[0003] 專利文獻1:日本特表2007-515391號公報 專利文獻2:日本特表2008-506409號公報

【發(fā)明內(nèi)容】
發(fā)明所要解決的課題
[0004] 但是，現(xiàn)有法中所提出的溶劑的尿素水溶液，其溶解蛛絲蛋白質(zhì)的力弱，胍水溶液 或六氟異丙醇（HFIP)等價格昂貴，且溶劑殘存時，難以適用于生物體成為問題。另外，關于 現(xiàn)有的絲素蛋白的粒體，其特性尚不明確。
[0005] 本發(fā)明為了解決上述現(xiàn)有的問題，提供一種對生物體的應用優(yōu)異的多肽顆粒及其 制造方法，另外，本發(fā)明還要以使來自蛛絲蛋白質(zhì)的多肽顆粒的特性明確為解決課題。 用于解決課題的技術方案
[0006] 本發(fā)明提供一種多肽顆粒，來自蛛絲蛋白質(zhì)，其特征在于，所述多肽含有水溶性多 肽，平均粒徑為1000 nm以下。予以說明，在此所說的水溶性多肽包含完全溶解于水溶性溶 劑的物質(zhì)、或分散于水溶性溶劑中并實質(zhì)上為溶解狀態(tài)的物質(zhì)。
[0007] 本發(fā)明提供一種多肽顆粒的制造方法，其特征在于，包括：使來自蛛絲蛋白質(zhì)的多 肽溶解于由下述（A)~（C)構成的組中的至少一種溶解用溶劑中而得到多肽的溶液的溶液 生成工序；通過將所述溶液生成工序中生成的溶液替換為水溶性溶劑而得到多肽的水溶液 的工序；和對所述多肽的水溶液進行干燥的工序。 (A) 二甲基亞砜、 (B) 在二甲基亞砜中加入有無機鹽的溶液、 (C) 在N，N-二甲基甲酰胺中加入有無機鹽的溶液。 予以說明，在此所說的多肽的水溶液包含多肽完全溶解的物質(zhì)、多肽的微粒子分散而 實質(zhì)上具有水溶液的形態(tài)的物質(zhì)這兩方。下面，以同一意思使用。另外，在此所說的"使多 肽溶解于溶解用溶劑"包含使多肽完全溶解于溶解用溶劑、和通過使多肽的微粒分散于溶 解用溶劑中而成為使多肽的微粒實質(zhì)上溶解于溶解用溶劑的形態(tài)這兩者。以下，在相同的 意義中使用。 發(fā)明效果
[0008] 本發(fā)明在制作多肽溶液時使用特定的溶劑，通過替換為水溶性溶劑而取得多肽凝 膠并進行干燥，由此可以制造幾乎不含有殘存溶劑或殘存溶液非常少的多肽顆粒。另外，本 發(fā)明的多肽顆粒由于平均粒徑非常小，所以相較于平均粒徑大的顆粒，例如可更大量地附 著于藥劑或香料等規(guī)定的基材表面上。因此，在本發(fā)明的多肽顆粒中，在附著于藥劑或香料 等基材表面上時，即使一個個粒子的基材表面上的分解速度或從基材表面上的脫離速度與 大的平均粒徑的粒子相同，也能夠高效地減緩基材表面的露出。而且，作為其結(jié)果，發(fā)揮可 以使藥劑或香料的效果緩慢釋放的優(yōu)異的特性。
[0009] 予以說明，本發(fā)明的顆粒中，形狀為大致球狀的顆粒適合用作化妝品或涂料的成 分等。而且，本發(fā)明手法中使用的溶劑為丙烯酸系纖維或聚酰亞胺樹脂的制造中使用的溶 劑，還具有成本低的優(yōu)點。
【附圖說明】
[0010] 圖1是本發(fā)明實施例1的多肽顆粒的掃描型電子顯微鏡（SEM)照片（倍率15， 000) 〇 圖2是本發(fā)明實施例2的多肽顆粒的掃描型電子顯微鏡（SEM)照片（倍率15,000)。 圖3是本發(fā)明實施例3的多肽顆粒的掃描型電子顯微鏡（SEM)照片（倍率15,000)。
【具體實施方式】
[0011] 本發(fā)明的蛋白質(zhì)使用來自蛛絲蛋白質(zhì)的多肽。來自蛛絲蛋白質(zhì)的多肽只要是來自 天然型蛛絲蛋白質(zhì)或類似的多肽即可，沒有特別限定。例如包含天然型蛛絲蛋白質(zhì)的變異 體、類似體或衍生物等。從堅韌性優(yōu)異的觀點出發(fā)，上述重組蛛絲蛋白質(zhì)優(yōu)選為來自蜘蛛的 大壺狀腺中產(chǎn)生的大吐絲管牽引絲蛋白質(zhì)的重組蛛絲蛋白質(zhì)。作為上述大吐絲管牽引絲蛋 白質(zhì)，可列舉來自美國絡新婦蛛（Nephila clavipes)的大壺狀腺絲蛋白MaSpl或MaSp2、來 自十字圓蛛（Araneus diadematus)的 ADF3 或 ADF4 等。
[0012] 上述重組蛛絲蛋白質(zhì)可以為來自蜘蛛的小壺狀腺中所產(chǎn)生的小吐絲管牽引絲的 重組蛛絲蛋白質(zhì)。作為上述小吐絲管牽引絲蛋白質(zhì)，可列舉來自美國絡新婦蛛（Nephila clavipes)的小壺狀腺絲蛋白MiSpl或MiSp2。
[0013] 此外，上述重組蛛絲蛋白質(zhì)可以為來自蜘蛛的鞭毛狀腺（flagelliform gland)中 所產(chǎn)生的橫絲蛋白質(zhì)的重組蛛絲蛋白質(zhì)。作為上述橫絲蛋白質(zhì)，可列舉例如來自美國絡新 婦蛛（Nephila clavipes)的鞭毛狀絲蛋白質(zhì)（flagelliform silk protein)等。
[0014] 作為來自所述大吐絲管牽引絲蛋白質(zhì)的多肽，可列舉含有式I :REP1-REP2(1)所 示的氨基酸序列的單元2個以上、優(yōu)選4個以上、更優(yōu)選6個以上的多肽。予以說明，在來 自所述大吐絲管牽引絲蛋白質(zhì)的組多肽中，式（I) :REP1_REP2(1)所示的氨基酸序列的單 元可以相同，也可以不同。上述式（1)中，REPl是指聚丙氨酸。在所述REPl中，連續(xù)排列 的丙氨酸優(yōu)選為2殘基以上，更優(yōu)選為3殘基以上，進一步優(yōu)選為4殘基以上，特別優(yōu)選為5 殘基以上。另外，在所述REPl中，連續(xù)排列的丙氨酸優(yōu)選為20殘基以下，更優(yōu)選為16殘基 以下，進一步優(yōu)選為14殘基以下，特別優(yōu)選為12殘基以下。上述式（1)中，REP2為由10~ 200殘基的氨基酸構成的氨基酸序列，所述氨基酸序列中所含的甘氨酸、絲氨酸、谷氨酰胺、 脯氨酸及丙氨酸的總計殘基數(shù)相對于氨基酸殘基數(shù)整體為40%以上，優(yōu)選為50%以上，更 優(yōu)選為60%以上。
[0015] 在大吐絲管牽引絲中，所述REPl相當于在纖維內(nèi)形成結(jié)晶β片材的結(jié)晶區(qū)域，所 述REP2相當于在纖維內(nèi)更具有柔軟性、且大部分欠缺有規(guī)則的結(jié)構的無定型區(qū)域。而且， 所述[REP1-REP2]相當于由結(jié)晶區(qū)域和無定型區(qū)域構成的重復區(qū)域（重復序列），為牽引絲 蛋白質(zhì)的特征的序列。
[0016] 作為含有上述式I :REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的單元2個以上的多肽，可 列舉例如具有序列號1、序列號2、序列號3及序列號4中的任一序列號所;^的氨基酸序列 的來自ADF3的重組蛛絲蛋白質(zhì)。序列號1所示的氨基酸序列相當于在從NCBI數(shù)據(jù)庫中獲 得的ADF3的部分的氨基酸序列（NCBI的基因庫的登錄號：AAC47010、GI :1263287)的N末 端附加有由起始密碼子、HislO標簽及HRV3C蛋白酶（Human rhinovirus 3C蛋白酶）識別 位點構成的氨基酸序列（序列號5)的氨基酸序列的從第1殘基至第542殘基的氨基酸序 列。序列號2所示的氨基酸序列為在N末端附加有由起始密碼子、HislO標簽及HRV3C蛋 白酶（Human rhinovirus 3C蛋白酶）識別位點構成的氨基酸序列（序列號5)的ADF3的 氨基酸序列（NCBI的基因庫的登錄號：AAC47010、GI :1263287)中，使第1~13號的重復區(qū) 域以成為大約2倍的方式增加，同時以在第1154號氨基酸殘基上終止的方式使翻譯變異的 氨基酸序列。序列號3所示的氨基酸序列為在從NCBI數(shù)據(jù)庫中獲得的ADF3的部分的氨基 酸序列（NCBI的基因庫的登錄號：AAC47010、GI :1263287)的N末端附加有由起始密碼子、 HislO標簽及HRV3C蛋白酶（Human rhinovirus 3C蛋白酶）識別位點構成的氨基酸序列 (序列號5)的氨基酸序列。序列號4所示的氨基酸序列為在N末端附加有由起始密碼子、 HislO標簽及HRV3C蛋白酶（Human rhinovirus 3C蛋白酶）識別位點構成的氨基酸序列 (序列號5)的ADF3的氨基酸序列（NCBI的基因庫的登錄號：AAC47010、GI :1263287)中， 使第1~13號的重復區(qū)域以成為大約2倍的方式增加的氨基酸序列。另外，作為含有上述 式I :REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的單元2個以上的多肽，可以使用包含在序列號1、 序列號2、序列號3及序列號4中的任一序列號所示的氨基酸序列中1個或多個的氨基酸被 替換、缺失、插入和/或附加的氨基酸序列、且具有由結(jié)晶區(qū)域和無定型區(qū)域構成的重復區(qū) 域的多肽。
[0017] 本發(fā)明中，"1個或多個"是指例如1~40個、1~35個、1~30個、1~25個、1~ 20個、1~15個、1~10個、或1個或數(shù)個。另外，本發(fā)明中，"1個或數(shù)個"是指1~9個、 1~8個、1~7個、1~6個、1~5個、1~4個、1~3個、1~2個、或1個。
[0018] 作為來自上述小吐絲管牽引絲