專利名稱：Abo血型反定型膠體金試劑盒及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種ABO血型反定型膠體金試劑盒及制備方法。
背景技術(shù)：
ABO血型系統(tǒng)是根據(jù)紅細(xì)胞上A及B凝集原的不同，將血型分為O、A、B及AB血型。A型血紅細(xì)胞上含A抗原，血清中含抗B抗體出型血紅細(xì)胞上含B抗原，血清中含抗A抗體；0型血紅細(xì)胞上則沒有A及B抗原，血清中含抗A及抗B抗體；AB型血紅細(xì)胞上含A及B兩種抗原，血清中則不含抗A及抗B抗體。A抗原和抗A抗體，B抗原和抗B抗體會(huì)發(fā)生免疫結(jié)合反應(yīng)，使紅細(xì)胞發(fā)生凝聚。ABO血型是由紅細(xì)胞表面抗原和血清中的抗體兩者共同決定的。利用標(biāo)準(zhǔn)的抗A、抗B抗體檢測(cè)紅細(xì)胞抗原，稱之為正定型；用標(biāo)準(zhǔn)的A及B抗原檢測(cè)血清中的抗體，稱之為反定型。正反定型同時(shí)檢測(cè)，才能正確判斷ABO血型。正確的血型鑒定是保證臨床輸血安全和搶救生命的重要工作，ABO血型檢測(cè)是常規(guī)的輸血前血型血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目之一，為了保證正確的血型鑒定，衛(wèi)生部在2000年發(fā)文(衛(wèi)醫(yī)法[2000] 184號(hào))明確規(guī)定每位供血及受血的個(gè)體均要進(jìn)行ABO血型正反定型。目前臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的ABO血型反定型的鑒定方法是血凝試驗(yàn)和微柱凝膠試驗(yàn)。血凝試驗(yàn)中用到的標(biāo)準(zhǔn)A型、B型和0型紅細(xì)胞，保存期短，一般為2 8°C條件下保存3個(gè)月，且容易發(fā)生微生物污染及溶血現(xiàn)象。微柱凝膠法檢測(cè)時(shí)則需要特制的凝膠卡，同時(shí)需配備專用離心機(jī)，檢測(cè)成本較高。除以上兩種常用的方法之外，還有磁珠法。磁珠法在使用前，需進(jìn)行試劑的復(fù)溶，復(fù)溶后的試劑存放時(shí)間較短，一般7天內(nèi)必須使用完，而且需要專門的磁化程控振蕩器。目前，反定型用紅細(xì)胞試劑存在有效期短、保存條件苛刻、質(zhì)量不穩(wěn)定等問題，容易導(dǎo)致血型鑒定出差錯(cuò)，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重輸血事故。所以急需一種使用方便、有效期長(zhǎng)、準(zhǔn)確性好、成本較低的檢測(cè)ABO血型反定型的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種使用方便、有效期長(zhǎng)、準(zhǔn)確性好、成本較低的檢測(cè)ABO血型反定型的膠體金試劑盒。本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是，提供檢測(cè)ABO血型反定型的膠體金試劑盒的制備方法。為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)板，紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，反應(yīng)板上設(shè)置3N個(gè)反應(yīng)孔，分為三橫排和N縱排，其中第一橫排標(biāo)有字母A,所對(duì)應(yīng)的孔為A反應(yīng)孔,第二橫排標(biāo)有字母B,所對(duì)應(yīng)的孔為B反應(yīng)孔，第三橫排標(biāo)有字母0，所對(duì)應(yīng)的孔為0反應(yīng)孔，或者分為三縱排和N橫排，其中第一縱排標(biāo)有字母A，所對(duì)應(yīng)的孔為A反應(yīng)孔，第二縱排標(biāo)有字母B，所對(duì)應(yīng)的孔為B反應(yīng)孔，第三縱排標(biāo)有字母O，所對(duì)應(yīng)的孔為O反應(yīng)孔，其中N=I，2，3,4……，反應(yīng)孔為圓形結(jié)構(gòu)，孔底光滑呈U型，反應(yīng)孔上設(shè)置密封蓋，所述A反應(yīng)孔含有A紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述B反應(yīng)孔含有B紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述O反應(yīng)孔含有O紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述基礎(chǔ)液配方如下
Trizma base3.5~4.5g
梓檬酸鈉2.0 3.0g
濃 Ife 酸1.5~2.0通1
BI 蛋白5.0 iO.Og
聚乙爆Ilt嗜烷酬 0.5 LOg蔗糖15.0 70.0g
疊氣鈉Ig超純水定容至1L。作為一個(gè)優(yōu)選方案，所述基礎(chǔ)液配方如下
IVi/nia base3.9325g
檸樣酸鈉2.86g
濃鹽酸1.739ml
酪蛋TlSg
聚乙烯吡咯烷_ Ig
Il 糖20g
&UMIg超純水定容至1L。作為又一個(gè)優(yōu)
選方案，所述試劑盒為干試劑盒，所述紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液干燥在反應(yīng)孔上。干試劑盒的基礎(chǔ)液配方優(yōu)選如下Trizma base3.5-4,5 g
檸樣酸她2.0 3.0g 濃赴酸1.5~2.0ml
酪蛋白5.0 10.0g 聚乙烯吡咯烷_0.5 LOg
鹿糖50,0 70.%
牛血淸廣1蛋廣13.0~8.0g
疊氮鈉Ig超純水定容至1L。即提高蔗糖含量和增加牛血清白蛋白，以改善干燥后的反定型試劑難以復(fù)溶和靈敏度低的情況。干試劑盒的又一個(gè)優(yōu)選基礎(chǔ)液配方如下
Trizma ba se3.932 5 g
檸檬酸鈉2.86g
濃鹽酸1.739ml
酪蛋白Sg
聚乙烯吡嗜烷酬 Ig 蔗糖60g牛血清 S 蛋 1 5.0g
疊氮鋪1g超純水定容至1L。試劑盒的優(yōu)選方案中，反應(yīng)板對(duì)產(chǎn)品測(cè)試性能有直接影響，如造成假陰、弱陽或假陽等現(xiàn)象，為了篩選到適合ABO血型反定型試劑盒(粒子法)的反應(yīng)孔，本發(fā)明提出了反應(yīng)孔尺寸的優(yōu)選方案，所述反應(yīng)孔的孔徑為13mnTl0mm,優(yōu)選為13mm ;孔深為1. 5mnT3. 0mm,優(yōu)選為1. 5mm.為了解決本發(fā)明第二個(gè)技術(shù)方案，本發(fā)明提供了 ABO血型反定型膠體金液體試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(I)制備膠體金顆粒溶液氯金酸在還原劑作用下，聚合成大小為40nm 60nm的膠體金顆粒，所述還原劑為枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸、鞣酸中的一種或幾種；(2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物采用低滲壓溶液分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和0型紅細(xì)胞，離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，即A紅細(xì)胞膜抗原、B紅細(xì)胞膜抗原和0紅細(xì)胞膜抗原，所述低滲壓溶液為0. 1%的CaCl2溶液；
(3)標(biāo)記將步驟(I)獲得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5. 5飛.5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物反應(yīng)；(4)離心3000r/min離心，棄上清，沉淀即獲得紅細(xì)胞膜抗原金粒子；(5)復(fù)溶將步驟(4)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液；(6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，其中親水處理液配方如下曲拉通x-100 :1. 0 5. Og,超純水定容至IL ；(7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的A、B、0反應(yīng)孔中，S閉保存。本發(fā)明亦提供了 ABO血型反定型膠體金試劑盒為干試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(I)制備膠體金顆粒溶液氯金酸在還原劑作用下，聚合成大小為40nm 60nm的膠體金顆粒，所述還原劑為枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸、鞣酸中的一種或幾種；(2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物采用低滲壓溶液分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和0型紅細(xì)胞，離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，即A紅細(xì)胞膜抗原、B紅細(xì)胞膜抗原和0紅細(xì)胞膜抗原，所述低滲壓溶液為0. 1%的CaCl2溶液；(3)標(biāo)記將步驟(I)獲得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5. 5飛.5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物反應(yīng)；(4)離心3000r/min離心，棄上清，沉淀即獲得紅細(xì)胞膜抗原金粒子；(5)復(fù)溶將步驟(4)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液；(6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，其中親水處理液配方如下曲拉通x-100 :1. 0 5. Og,超純水定容至IL ；(7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的A、B、0反應(yīng)孔中；(8)干燥保存將步驟(7)獲得的反應(yīng)板進(jìn)行干燥處理，所述干燥為冷凍干燥、抽濕機(jī)抽干或烘干，將干燥后的包被有紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液的反應(yīng)板封裝于鋁箔袋內(nèi)保存。即在液體試劑盒的制備方法中，增加干燥的操作即可以獲得干試劑盒。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，本發(fā)明通過制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，然后進(jìn)行膠體金標(biāo)記，這樣就不用考慮由于紅細(xì)胞溶血或保存不當(dāng)而引起的紅細(xì)胞血型抗原性降低的因素，解決了新鮮紅細(xì)胞保存期短的問題。試劑盒還可以干試劑盒形態(tài)存在，將液體干燥直接包被在反應(yīng)孔，檢測(cè)時(shí)直接滴加血清或血漿樣本即可反應(yīng)，結(jié)果容易觀察，有效期長(zhǎng)，可以室溫保存。ABO血型反定型膠體金試劑一般在2-20°C條件下保存有效期不低于12個(gè)月，而且具有靈敏度高、使用方便、結(jié)果好判讀及成本較低等優(yōu)點(diǎn)。


圖1為ABO血型反定型膠體金試劑盒的內(nèi)部構(gòu)造，其中I為反應(yīng)孔，2為反應(yīng)板。圖2反應(yīng)孔尺寸篩選結(jié)果。圖3為標(biāo)號(hào)方式。
圖4為陽性反應(yīng)圖片。圖5為可疑陽性反應(yīng)圖片。圖6為陰性反應(yīng)圖片。圖7為實(shí)施例檢測(cè)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1. ABO血型反定型膠體金液體試劑盒ABO血型反定型膠體金試劑盒的內(nèi)部構(gòu)造如圖1所示，包括反應(yīng)板2，紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，反應(yīng)板2上設(shè)置3N個(gè)反應(yīng)孔1，分為三橫排和N縱排,其中第一橫排標(biāo)有字母A，所對(duì)應(yīng)的孔為A反應(yīng)孔，第二橫排標(biāo)有字母B，所對(duì)應(yīng)的孔為B反應(yīng)孔，第三橫排標(biāo)有字母0，所對(duì)應(yīng)的孔為0反應(yīng)孔，反應(yīng)孔I為圓形結(jié)構(gòu)，孔底光滑呈U型，反應(yīng)孔I上設(shè)置密封蓋，所述A反應(yīng)孔含有A紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述B反應(yīng)孔含有B紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述0反應(yīng)孔含有0紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述基礎(chǔ)液配方如下
Trizma base3.5~4,5g
檸檬酸鈉2‘0 3.0g
濃鹽酸1.5 2.0ml
酪蛋}5.0-1 OJg聚乙烯吡咯烷SI 0.5-1.Og廉糖15.0-70.0g
疊氣鋪Ig超純水定容至1L?；A(chǔ)液配方優(yōu)選如下
Trizma base3.9325g
檸檬酸鈉2.86g
濃鹽酸1.739ml
酪蛋白5g
聚乙烯吡咯烷IlIg
蔗糖20g
疊氣鈉Ig
超純水定容至1L。反應(yīng)板2可以是玻璃、塑料及硬紙等材質(zhì)，優(yōu)選為PET、PVC或PS塑料材質(zhì)。 實(shí)施例2. ABO血型反定型膠體金干試劑盒所述試劑盒可以為干試劑盒，即紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液干燥在反應(yīng)孔上。干試劑盒的基礎(chǔ)液可以采用和液體試劑盒一樣，也可以采用優(yōu)選方案，即提高蔗糖含量和增加牛血清白蛋白，以改善干燥后的反定型試劑難以復(fù)溶和靈敏度低的情況。干試劑盒的基礎(chǔ)液配方中，優(yōu)選提高蔗糖含量和增加牛血清白蛋白，以改善干燥后的反定型試劑難以復(fù)溶和靈敏度低的情況，配方如下
Trizma base3.5 4.5g
梓檬酸鈉2.0 3.Og
濃鹽酸1.5 2.0ml
Il蛋( 5.0 lO.Og
聚乙浠0.5"4.0g
蔗糖50.0 70.%
牛血淸Tl蛋廣13.0 8.0g
疊氮鈉Ig超純水定容至1L。干試劑盒的又一個(gè)優(yōu)選基礎(chǔ)液配方如下
Trizma ba Se3.932 5 g
朽:嫁酸鈉IMg
濃鹽酸丨.739ml
ffitKriSg
聚乙烯Ii比咯位_ I g
蔗糖60g
I1Ifiijl*! fiiiifl s.og荇鉍鈉ig超純水定容至1L。實(shí)施例3.反應(yīng)孔尺寸對(duì)試劑盒性能的影響本公司產(chǎn)品ABO血型反定型膠體金試劑盒(粒子法)的測(cè)試方法采用微量板法(U型板)，反應(yīng)板對(duì)產(chǎn)品測(cè)試性能有直接影響，如造成假陰、弱陽或假陽等現(xiàn)象，為了篩選到適合本公司產(chǎn)品ABO血型反定型膠體金試劑盒(粒子法)的反應(yīng)孔，特進(jìn)行此試驗(yàn)。主要材料
(I)ABS材料的反定型孔板；(4)振蕩器(江蘇康健，編號(hào)YH-DFX-003，型號(hào)KJ_201BD)；(5)倍比稀釋的抗-A/B血型定型試劑(單克隆抗體)；(6) EDTA 2K 抗凝血。方法步驟方法反定型試劑為ABO血型反定型試劑(粒子法)，檢測(cè)方法均為微孔板振蕩法。步驟1.在包含有ABO紅細(xì)胞膜血型抗原粒子的反應(yīng)孔中加入一定量待測(cè)血清或倍比稀釋的單克隆抗體，手動(dòng)使液體完全擴(kuò)散于反應(yīng)孔；2.反應(yīng)板置于振蕩器振蕩數(shù)分鐘，判讀結(jié)果，記錄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果好壞的判讀指標(biāo)為凝集顆粒的形態(tài)，要求陽性反應(yīng)的凝集顆粒集中在反應(yīng)孔中心形成大凝集塊，陰性反應(yīng)的反應(yīng)孔中無肉眼可見細(xì)小凝集顆粒。反應(yīng)結(jié)果如圖2，由圖2可知A排的標(biāo)有4、3、2的孔都可行，具體標(biāo)號(hào)見圖3,經(jīng)過大量的臨床試驗(yàn)最后確定的優(yōu)選方案為A排的標(biāo)有4的反應(yīng)孔。用于篩選的反應(yīng)孔的尺寸如圖3所示，同一排的孔的上表面孔徑一致，即Da=13mm、Db=12mm、Dc=I 1mm、Dd=IOmm,同一列的孔的深度一致，即 d4=l. 5mm、d3=2. 0mm、d2=2. 5mm、dl=3. 0mm。因此優(yōu)選方案A排的標(biāo)有4的反應(yīng)孔的孔徑為13mm,孔深為1. 5mm。實(shí)施例4. ABO血型反定型膠體金液體試劑盒的制備方法I)制備膠體金溶液由氯金酸在還原劑枸櫞酸鈉作用下，聚合成大小為40nm 60nm的金顆粒溶液。2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物紅細(xì)胞膜血型抗原提取物是采用低滲壓溶液法，分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和0型紅細(xì)胞，然后離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物。低滲溶液為0. 1%的CaCl2溶液，不僅可以降低成本，還可以保護(hù)膜抗原的完整性，防止膜抗原的不穩(wěn)定性。3)標(biāo)記將制備好的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5. 5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，反應(yīng)5分鐘。可以使用NaOH、Na2C03、KOH 或者 K2CO3 調(diào)節(jié) pH 至 5. 5。4)離心3000r/min離心3分鐘，棄上清，沉淀即紅細(xì)胞膜抗原金粒子。5)復(fù)溶將紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液?；A(chǔ)液的配方如下Trizma base3.9325g
檸檬酸鈉2.86g濃鹽酸1.739ml
Il蛋『ISg
聚乙烯吡咯烷_ Ig
蔗糖20g
疊氮鈉Ig超純水定容至1L。6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，其中親水處理液配方如下曲拉通x-100 :1. 0 5. Og,超純水定容至IL ；7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的A、B、0反應(yīng)孔中，每孔IOul，密閉保存。實(shí)施 例5. ABO血型反定型膠體金干試劑盒的制備方法I)制備膠體金溶液由氯金酸在還原劑枸櫞酸鈉作用下,聚合成大小為40nm 60nm的金顆粒溶液。2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物紅細(xì)胞膜血型抗原提取物是采用低滲壓溶液法，分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和0型紅細(xì)胞，然后離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物。低滲溶液為0. 1%的CaCl2溶液，不僅可以降低成本，還可以保護(hù)膜抗原的完整性，防止膜抗原的不穩(wěn)定性。3)標(biāo)記將制備好的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5. 5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，反應(yīng)5分鐘?？梢允褂肗aOH、Na2CO3^ KOH 或者 K2CO3 調(diào)節(jié) pH 至 5. 5。4)離心3000r/min離心3分鐘,棄上清,沉淀即紅細(xì)胞膜抗原金粒子。5)復(fù)溶將紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液。基礎(chǔ)液的配方如下Trizma base3.9325g
檸檬酸鈉2.86g
濃鹽酸1.739ml
酪蛋白Sg
聚乙烯吡咯烷_ Ig 蔗糖60g
牛血淸廣丨蛋廣丨5.0g
疊氮鋪ig超純水定容至1L。6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，浸潰時(shí)間為lOmin，其中親水處理液配方如下曲拉通x-100 :1. (T5. Og,超純水定容至1L。7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的A、B、0反應(yīng)孔中，每孔IOul。8)干燥保存將步驟(7)獲得的反應(yīng)板進(jìn)行干燥處理，所述干燥為抽濕機(jī)抽干，將干燥后的包被有紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液的反應(yīng)板封裝于鋁箔袋保存。實(shí)施例6. ABO型反定型膠體金試劑盒的檢測(cè)結(jié)果I)半成品檢驗(yàn)要求紅細(xì)胞膜抗原金粒子與相應(yīng)的血型抗體產(chǎn)生陽性反應(yīng)，即在反應(yīng)板微孔中有凝集塊出現(xiàn)。而與不含有紅細(xì)胞膜抗原金粒子對(duì)應(yīng)的血型抗體產(chǎn)生陰性反應(yīng)，即在反應(yīng)板微孔中有無凝集塊出現(xiàn)。2)保存實(shí)驗(yàn)分裝后經(jīng)半成品檢驗(yàn)合格的液體試劑在2 8°C下或干試劑在2 20°C下保存12個(gè)月，保存期間，ABO血型反定型膠體金試劑具有以下檢測(cè)結(jié)果(I)外觀液體試劑密封不漏液、無絮狀、不溶物或其它漂浮物質(zhì)，干試劑盒包裝密封不漏氣，外觀平整，內(nèi)容物整齊。(2)靈敏度用已注冊(cè)上市的抗A抗B血型正定型試劑和抗H試劑與本試劑相應(yīng)抗原金粒子溶液反應(yīng)，結(jié)果應(yīng)達(dá)到表I所示標(biāo)準(zhǔn)。表IABO血型反定型膠體金試劑靈敏度檢測(cè)
權(quán)利要求
1.ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)板，紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，反應(yīng)板上設(shè)置3N個(gè)反應(yīng)孔,分為三橫排和N縱排,其中第一橫排標(biāo)有字母A,所對(duì)應(yīng)的孔為A反應(yīng)孔，第二橫排標(biāo)有字母B，所對(duì)應(yīng)的孔為B反應(yīng)孔，第三橫排標(biāo)有字母0，所對(duì)應(yīng)的孔為O反應(yīng)孔，或者分為三縱排和N橫排，其中第一縱排標(biāo)有字母A，所對(duì)應(yīng)的孔為A反應(yīng)孔，第二縱排標(biāo)有字母B，所對(duì)應(yīng)的孔為B反應(yīng)孔，第三縱排標(biāo)有字母0，所對(duì)應(yīng)的孔為O反應(yīng)孔，其中N=l，2，3,4……，反應(yīng)孔為圓形結(jié)構(gòu)，孔底光滑呈U型，反應(yīng)孔上設(shè)置密封蓋，所述A反應(yīng)孔含有A紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述B反應(yīng)孔含有B紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述O反應(yīng)孔含有O紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，所述基礎(chǔ)液配方如下Trizma base3,5-4. Sg 貯橡酸鈉2.0~3.0g 濃鹽酸L5 2.0ml酪蛋白5.0 l0.0g 聚乙浠吡咯烷W0,5 丨.Og MM15.0~70.0g Hfci鈉Ig 超純水定容至1L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述基礎(chǔ)液配方如下 Trizma base3,9325g 檸探酸鈉2.86g 濃鹽酸1.739ml fffiti丨ISg 超純水定容至ILo 聚乙烯吡咯烷SN Ig鹿糖20g #/炎〔鈉Ig
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為干試劑盒，所述紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液干燥在反應(yīng)孔上。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述基礎(chǔ)液配方如下Trizma base3,5~4.5g 檸檬酸鈉2.0 3.0g 濃鹽酸1.5 2.0ml 酪蛋f1. O IC. C 4 _ 超純水定容至1L。
聚乙烯吡咯烷_ G,5~l.0g Il 糖50.0~70,0g 牛-血淸H蛋白3.0 8.0g疊氮鈉Ig
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述基礎(chǔ)液配方如下 Trizma base3.9325g 檸橡酸鈉2.86g 濃鹽酸L739ml酪蛋白Sg超純水定容至1L。 聚乙烯吡咯烷謂 Ig 蔗糖60g 牛血淸廣丨蛋廣ISg疊氮鈉Ig
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)孔的孔徑為孔深為1. 5mm 3. 0mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ABO血型反定型膠體金試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)孔的孔徑為13mm，孔深為1. 5_。
8 .權(quán)利要求1一2任一所述ABO血型反定型膠體金試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)制備膠體金顆粒溶液氯金酸在還原劑作用下，聚合成大小為40nm 60nm的膠體金顆粒，所述還原劑為枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸、鞣酸中的一種或幾種； (2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物采用低滲壓溶液分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞，離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，即A紅細(xì)胞膜抗原、B紅細(xì)胞膜抗原和O紅細(xì)胞膜抗原，所述低滲壓溶液為O. 1%的CaCl2溶液； (3)標(biāo)記將步驟(I)獲得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5.5飛.5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物反應(yīng)； (4)離心3000r/min離心,棄上清,沉淀即獲得紅細(xì)胞膜抗原金粒子；(5)復(fù)溶將步驟(4)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液； (6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，其中親水處理液配方如下曲拉通X-1OO :1. 0 5· 0g，超純水定容至IL ； (7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的Α、Β、0反應(yīng)孔中，密閉保存。
9.權(quán)利要求3— 5任一所述ABO血型反定型膠體金試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)制備膠體金顆粒溶液氯金酸在還原劑作用下，聚合成大小為40nm 60nm的膠體金顆粒，所述還原劑為枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸、鞣酸中的一種或幾種； (2)制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物采用低滲壓溶液分別破碎A型紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞，離心棄上清，再超純水洗滌，離心棄上清，直到上清無色透明，棄上清和底層雜質(zhì)即為紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，即A紅細(xì)胞膜抗原、B紅細(xì)胞膜抗原和O紅細(xì)胞膜抗原，所述低滲壓溶液為O. 1%的CaCl2溶液； (3)標(biāo)記將步驟(I)獲得的膠體金顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至5.5飛.5，加入待標(biāo)記紅細(xì)胞膜血型抗原提取物反應(yīng)； (4)離心3000r/min離心,棄上清,沉淀即獲得紅細(xì)胞膜抗原金粒子； (5)復(fù)溶將步驟(4)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子復(fù)溶于基礎(chǔ)液； (6)反應(yīng)板親水處理用親水處理液浸潰反應(yīng)板，其中親水處理液配方如下曲拉通X-100 :1. 0 5· 0g，超純水定容至IL ； (7)分裝將步驟(5)獲得的紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液分裝于對(duì)應(yīng)的Α、Β、0反應(yīng)孔中； (8)干燥保存將步驟(7)獲得的反應(yīng)板進(jìn)行干燥處理，所述干燥為冷凍干燥、抽濕機(jī)抽干或烘干，將干燥后的包被有紅細(xì)胞膜抗原金粒子溶液的反應(yīng)板封裝于鋁箔袋內(nèi)保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種ABO血型反定型膠體金試劑盒及制備方法，包括反應(yīng)板，紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，反應(yīng)板上設(shè)置3N個(gè)反應(yīng)孔，分別放置A紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，B紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液和O紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液，反應(yīng)孔為圓形結(jié)構(gòu)，孔底光滑呈U型，反應(yīng)孔上設(shè)置密封蓋。試劑盒也可以為干試劑盒，將紅細(xì)胞膜抗原金粒子與基礎(chǔ)液干燥在反應(yīng)孔上。本發(fā)明通過制備紅細(xì)胞膜血型抗原提取物，然后進(jìn)行膠體金標(biāo)記，解決了新鮮紅細(xì)胞保存期短的問題。試劑盒一般在2-20℃條件下保存有效期不低于12個(gè)月，而且具有靈敏度高、使用方便、結(jié)果好判讀及成本較低等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/80GK103033632SQ20121053717
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者胡晶高, 汪大明, 林永志, 張林華 申請(qǐng)人:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司