專(zhuān)利名稱(chēng)：抗ctnnb1單克隆抗體3f9及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā) 明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域,特別涉及一種抗β-Catenin的單克隆抗體,產(chǎn)生該抗體的雜交瘤細(xì)胞株，以及該抗體的免疫檢測(cè)用途。
背景技術(shù)：
β -Catenin是環(huán)連蛋白家族中的一員，分子量約90kd,為一種多功能蛋白質(zhì)；β -Catenin是新原癌基因的產(chǎn)物，可與二十多種蛋白質(zhì)結(jié)合，也是一種具有介導(dǎo)細(xì)胞粘附及信號(hào)傳導(dǎo)雙重活性的多功能蛋白。β -Catenin蛋白有兩個(gè)重要功能，一方面它是重要的細(xì)胞粘附分子和細(xì)胞骨架成分，另一方面它又是fct信號(hào)通路中的一個(gè)重要成員，在發(fā)育過(guò)程中指導(dǎo)機(jī)體的正常發(fā)育，在腫瘤細(xì)胞中，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡。編碼β-Catenin的基因稱(chēng)為CTNNBl，定位于染色體3p21，全長(zhǎng)23. 2kb，有16個(gè)外顯子；Van Nhieu等的研究顯示，CTNNBl突變所導(dǎo)致的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常激活，是惡性腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。β-Catenin蛋白在細(xì)胞中異常表達(dá)可見(jiàn)于人類(lèi)多種惡性腫瘤。細(xì)胞中的β -Catenin以?xún)煞N形式存在游離β -Catenin以及與E_cadherin、APC蛋白等結(jié)合形成復(fù)合體的β-Catenin，二者共同組成一個(gè)“胞內(nèi)β-Catenin庫(kù)”，并可互相轉(zhuǎn)換；正常情況下，兩者達(dá)成一種平衡，一旦這種平衡被打破，則可能造成惡性腫瘤的發(fā)生。Dong KyumWo等以及近年來(lái)的其他研究均顯示，β -Catenin異常的亞細(xì)胞定位、聚集與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、增殖密切相關(guān)，并在胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肝癌等惡性腫瘤中均得到類(lèi)似結(jié)論。β-Catenin作為腫瘤預(yù)后的影響因素，在不同的組織器官具有不同的意義。β -Catenin的免疫組化(IHC)結(jié)果顯示，結(jié)腸癌中胞質(zhì)和核染色增加可能是預(yù)后較差的獨(dú)立因素，而表達(dá)水平的降低或缺失是胃癌和胰腺癌的不良預(yù)后因素。β-Catenin核內(nèi)高表達(dá)或細(xì)胞膜表達(dá)缺失的惡性黑色素瘤、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌的患者生存期短，預(yù)后差。目前臨床上通常通過(guò)免疫組織化學(xué)病理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中β-Catenin的表達(dá)狀況。而IHC實(shí)驗(yàn)的核心為一抗，即可特異性結(jié)合β-Catenin的單克隆抗體,其性能的優(yōu)劣直接決定著整個(gè)檢測(cè)的靈敏度和特異性。因此，研制出一種結(jié)合特異性高的抗β -Catenin的單克隆抗體具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題為提供一種結(jié)合特異性高的抗β-Catenin的單克隆抗體3F9，及其在制備用于檢測(cè)β -Catenin蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種雜交瘤細(xì)胞株，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)為CGMCC)，保藏日期為2012年5月16日，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6134。本發(fā)明還提供了一種特異性結(jié)合β -Catenin蛋白的單克隆抗體3F9,由上述雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。本發(fā)明所述單克隆抗體的制備方法如下(I)重組表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)β-Catenin基因的ORF全序列(如SEQ ID No. I所示)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，基因兩側(cè)分別引入限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)SgfI和Mlul，并在其C末端引入Myc-DDK標(biāo)簽序列(標(biāo)簽序列如SEQ ID No. 2所示),插入表達(dá)載體pCMV6_Entry,構(gòu)建β -Catenin重組表達(dá)質(zhì)粒(簡(jiǎn)稱(chēng)為pCMV6_CTNNBl)；(2) β -Catenin重組蛋白的表達(dá)與純化以pCMV6_CTNNBl質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，裂解離心取上清，DDK親和層析柱純化,獲得純化的β-Catenin重組蛋白；(3)單抗的篩選與制備采用上述β-Catenin重組蛋白免 疫BALB/c小鼠，取小鼠脾臟細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，有限稀釋法獲得單克隆，ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，獲得能分泌抗β -Catenin特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為3F9，亞型鑒定為IgG2a ;制備小鼠腹水，通過(guò)親和層析柱純化β-Catenin單抗3F9。分別通過(guò)Western Blot (結(jié)果見(jiàn)圖3)、免疫組化實(shí)驗(yàn)(結(jié)果見(jiàn)圖4-6)驗(yàn)證該單抗的靈敏度和特異性。發(fā)明人還通過(guò)OriGene高密度蛋白芯片驗(yàn)證了上述單克隆抗體的特異性O(shè)riGene高密度蛋白芯片上包含10400種HEK293T細(xì)胞蛋白過(guò)表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過(guò)Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過(guò)參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。將本發(fā)明單克隆抗體3F9與上述芯片雜交并確定陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)，結(jié)果顯示本發(fā)明單克隆抗體3F9特異性結(jié)合β -Catenin蛋白，與其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種單克隆抗體3F9在制備用于檢測(cè)β-Catenin蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。具體地，所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。本發(fā)明還提供了上述單克隆抗體在制備用于診斷β -Catenin相關(guān)性腫瘤的病理診斷試劑盒中的應(yīng)用。由于β-Catenin蛋白的異常表達(dá)、異常亞細(xì)胞定位及聚集均與人類(lèi)多種惡性腫瘤有關(guān)，因此使用本發(fā)明單克隆抗體檢測(cè)細(xì)胞中β-Catenin蛋白的表達(dá)狀況或亞細(xì)胞定位,可用于輔助診斷β -Catenin相關(guān)性腫瘤。所述β -Catenin相關(guān)性腫瘤為胃癌、食管癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肝癌、子宮內(nèi)膜癌、惡性黑色素瘤、乳腺癌或非小細(xì)胞肺癌。本發(fā)明還提供了一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，包括上述單克隆抗體3F9 ;可用于檢測(cè)組織細(xì)胞中β-Catenin蛋白的表達(dá)狀況。本發(fā)明所述針對(duì)β-Catenin蛋白的特異性單抗3F9,可與β-Catenin特異結(jié)合，提高了實(shí)驗(yàn)的特異性和可靠性，并建立了基于單抗3F9的免疫組織化學(xué)技術(shù)，主要用于大腸癌、子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌、食管癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的輔助診斷。保藏信息用于保藏的雜交瘤細(xì)胞株的科學(xué)描述為抗人CTNNBl單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株3F9 ；保藏單位全稱(chēng)中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；
保藏單位簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC ；保藏單位地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2012年5月16日；保藏編號(hào)CGMCCNo. 6134。


圖I為Western blot驗(yàn)證β -Catenin重組質(zhì)粒在ΗΕΚ293Τ細(xì)胞中的表達(dá)；左邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染PCMV6空載體的ΗΕΚ293Τ細(xì)胞裂解液，右邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染PCMV6-CTNNB1重組質(zhì)粒的ΗΕΚ293Τ細(xì)胞裂解液，雜交所用一抗為抗DDK標(biāo)簽抗體；圖2為β -Catenin重組蛋白的SDS-PAGE鑒定圖；
圖3為單克隆抗體3F9在9種不同細(xì)胞系中的Western blot結(jié)果；圖4為以單克隆抗體3F9為一抗，免疫組化法檢測(cè)腎組織中β -Catenin蛋白的表達(dá)；圖5為以單克隆抗體3F9為一抗，免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中β -Catenin蛋白的表達(dá)；圖6為以單克隆抗體3F9為一抗，免疫組化法檢測(cè)肝臟組織中β -Catenin蛋白的表達(dá)。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I抗β -Catenin單克隆抗體的制備一、β-Catenin重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建以從ATCC 獲得的質(zhì)粒 BC058926 (含 SEQ ID No. I 所示 β -Catenin ORF 序列)為模板，設(shè)計(jì)兩條引物并分別引入酶切位點(diǎn)Sgfl、MluI,以及C末端Myc-DDK標(biāo)簽(標(biāo)簽序列如SEQ ID No. 2所示),并克隆入表達(dá)載體pCMV6-Entry,構(gòu)建β-Catenin重組表達(dá)質(zhì)粒(簡(jiǎn)稱(chēng)為 pCMV6-CTNNBl)。二、β-Catenin重組蛋白的表達(dá)與純化I、轉(zhuǎn)染 ΗΕΚ293Τ 細(xì)胞ΗΕΚ293Τ細(xì)胞以1:3傳至直徑IOcm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)；取7. 5ml DMEM (無(wú)血清及抗生素)培養(yǎng)基至50ml管中，加入300 μ I PEI MegaTranL O混勻，然后加入75 μ g上述β -Catenin重組質(zhì)粒(pCMV6_CTNNBl) DNA混勻并靜置30分鐘；分別取515 μ I上述混合液至各細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，每培養(yǎng)皿細(xì)胞添加25 μ 12Μ 丁酸鈉至終濃度5mM。2、裂解細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，進(jìn)行細(xì)胞裂解。吸去培養(yǎng)基，加入Iml PBS進(jìn)行漂洗，吸去PBS。加入Iml裂解緩沖液，使用前加入蛋白酶抑制劑PI和PMSF。置于冰盒中在搖床上振蕩，收集所有培養(yǎng)皿中的裂解液，4°C離心，收集上清。3、DDK親和層析柱純化
以孔徑為O. 45 μ m,直徑為33mm的PVDF膜濾器過(guò)濾離心后的裂解液上清并轉(zhuǎn)入15ml管中，加入混合好的Sepharose Beadslml,封口后放入360度混勻器中，于4°C結(jié)合2小時(shí)；取出15ml管，將裂解液倒入BIO-RAD層析柱中，并接住穿透液，滴盡后穿透液取樣WB檢測(cè)，見(jiàn)圖I (圖I顯示β-Catenin重組質(zhì)粒在HEK293T細(xì)胞中正常表達(dá))；以裂解緩沖液沖洗柱料1-2次，滴盡后再用TBST沖洗Beads3次，滴盡后用O. IM Glycine (ρΗ3· 5)洗脫，第一次200 μ 1，滴盡不收集，第二、三次各500 μ 1，第四次250 μ 1，收集至一個(gè)1.5mlTube中，并迅速加入NaH2PO4 CpH=Il. O)中和至pH7. O左右，每管加入甘油至終濃度為10%，Tween-80至終濃度為O. 1%。純化后的β -Catenin重組蛋白用SDS-PAGE鑒定，結(jié)果見(jiàn)圖2。三、單抗的篩選與制備I、動(dòng)物免疫上述純化的β -Catenin重組蛋白以完全弗氏佐劑乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周齡BALB/c小鼠，免疫劑量為50 μ g/只，間隔兩周后進(jìn)行第二次免疫，以不完全弗氏佐劑乳化，免疫劑量為50 μ g/只。免疫兩次后取尾血以ELISA法梯度稀 釋測(cè)定血清效價(jià)；根據(jù)結(jié)果確定是否加強(qiáng)免疫，選取抗體效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合。2、細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞采用BALB/c小鼠來(lái)源的sp2/0，融合時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；取上述免疫的小鼠脾臟，制成淋巴細(xì)胞單細(xì)胞懸液；免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞以1:5-1:10混合，滴加37°C的50%PEG (PH8. 0)lml，加入不完全培養(yǎng)基及其余終止液，離心棄上清后加入HAT培養(yǎng)基懸浮混勻，MC定容到50ml，分裝到3. 5cm培養(yǎng)皿中，放于濕盒中，置于37°C、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。3、篩選和克隆融合7-10天內(nèi)挑選細(xì)胞克隆,使用上述純化的β-Catenin重組蛋白進(jìn)行ELISA測(cè)試，標(biāo)記細(xì)胞株號(hào)。對(duì)陽(yáng)性孔細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋?zhuān)看斡邢尴♂尯?-6天測(cè)定ELISA值，挑取0D280陽(yáng)性值較高的單克隆孔進(jìn)行有限稀釋?zhuān)敝罞LISA測(cè)定96孔板全板結(jié)果為陽(yáng)性；挑取陽(yáng)性值高的單克隆定株，其對(duì)應(yīng)融合板細(xì)胞株為3F9。4、腹水單抗的制備與純化10-12周齡的雄性BALB/c小鼠腹腔注射O. 5ml降植烷，一周后每只小鼠用Iml注射器腹腔注射經(jīng)PBS洗滌重懸的單克隆細(xì)胞懸液，細(xì)胞用量為
5X IO6/只，每株抗體打2只小鼠。待小鼠腹水積聚后收集腹水，離心取上清，親和層析法進(jìn)行腹水純化，根據(jù)抗體亞型選擇相應(yīng)柱料，單抗3F9亞型為IgG2a,采用protein G進(jìn)行純化。純化后的單抗?jié)舛葴y(cè)定、分裝、凍存在_20°C。以單抗 3F9 為一抗，對(duì) H印G2、HeLa、SVT2、A549、C0S7、Jurkat、MDCK、PCl2、MCF7九種細(xì)胞系的蛋白裂解液進(jìn)行雜交、顯色，其結(jié)果如圖3所示，由圖3可見(jiàn)β -Catenin蛋白在上述九種細(xì)胞系中均有表達(dá)。實(shí)施例2以單抗3F9為一抗對(duì)多種癌變組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)I、取腎癌、子宮內(nèi)膜癌、肝癌組織分別進(jìn)行石蠟包埋，使用Finesse組織切片機(jī)進(jìn)行切片，組織厚度為6μπι;2、脫臘與水化分析純二甲苯3次X IOmin,無(wú)水乙醇3次X IOmin, 95%乙醇5min,85%乙醇5min, 75%乙醇5min,去離子水浸泡3minX 3次；3、加入抗原修復(fù)液(O. 01M, pH6. O枸櫞酸鈉緩沖液)高壓鍋高壓熱修復(fù)2min，待高壓鍋溫度降至約90°C時(shí)，打開(kāi)高壓鍋，取出標(biāo)本，然后自然冷卻至室溫。去離子水浸泡3minX 3 次。4、使用3%過(guò)氧化氫滅活組織內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫靜置lOmin。去離子水浸泡5minX 3 次。5、加上封閉液(PBS+5%脫脂奶粉+5%正常山羊血清)，37°C孵育60min。6、去除封閉液，勿沖洗，加入1:150比例稀釋的本發(fā)明單抗3F9 ;置于濕盒中，37°C孵育 60min。PBST (含 O. l%Tween_20)洗滌 2 次，每次洗滌 5min。PBST (含 O. 02%Tween_20)洗漆I次，每次洗漆5min。7、滴加 Polink-試劑盒 2 (Catlog No. D37-15)中的試劑 1，37°C孵育 10-20 分鐘。使用PBS洗滌3次，每次5min。滴加Pol ink-2試劑盒(Catlog No. D37-15)中的試劑2，37°C孵育10-20分鐘，使用PBS洗滌3次，每次5min。8、應(yīng)用DAB溶液(中杉金橋ZLI-9019)顯色，顯色3 lOmin。蒸餾水洗滌。9、蘇木精復(fù)染細(xì)胞核2min，蒸餾水漂洗，1%鹽酸分化。蒸餾水漂洗3次，室溫靜置·Imin010、脫水和透明75%乙醇5min，100%乙醇5minX3次，85%乙醇5min，95%乙醇5min，100%乙醇3 X 5min ;二甲苯3 X 5min，中性樹(shù)膠封片。11、鏡檢，其結(jié)果分別見(jiàn)圖4-6。由圖4-6可見(jiàn)腎癌組織、子宮內(nèi)膜癌組織、肝癌組織經(jīng)染色后，可見(jiàn)大量棕黃色顆粒，為β-Catenin蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞；并且，β-Catenin陽(yáng)性著色定位準(zhǔn)確，染色信號(hào)強(qiáng)，未發(fā)現(xiàn)非特異染色。實(shí)施例3、單克隆抗體3F9的特異性檢測(cè)OriGene高密度蛋白芯片上包含10400種ΗΕΚ293Τ細(xì)胞蛋白過(guò)表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過(guò)Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過(guò)參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。以下為使用OriGene蛋白(OriGene C at PA100001)芯片對(duì)3F9單克隆抗體進(jìn)行特異性鑒定的具體步驟I、將一張蛋白芯片放在50ml離心管中，使用40ml去離子水浸潤(rùn)芯片，置于搖床上，室溫混合30分鐘；棄掉去離子水，使用IOml PBST平衡芯片，室溫處理10分鐘。2、向50ml離心管中加入40ml5%脫脂牛奶(用PBST進(jìn)行稀釋)置于搖床上，室溫封閉30分鐘。3、使用封閉液(5%脫脂牛奶)稀釋一抗3F9 (稀釋比例I :200)。4、將潔凈的封口膜粘貼到實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，滴加250-300 μ I上述稀釋一抗在封口膜上。5、將蛋白芯片從封閉液中抽出，將蛋白芯片NC膜的一面朝下，從芯片的一邊接觸抗體，慢慢滑下，依靠液體表面張力，抗體將慢慢浸潤(rùn)芯片NC膜，直至整張NC膜浸潤(rùn)在一抗溶液中。整個(gè)操作過(guò)程避免產(chǎn)生氣泡。將芯片移到4度環(huán)境下，靜置，一抗孵育過(guò)夜。在芯片上加蓋培養(yǎng)皿蓋，其上黏附一張濕紙巾，以防止長(zhǎng)時(shí)間孵育導(dǎo)致抗體蒸發(fā)。6、第二天將芯片移至50ml離心管中，使用PBST漂洗芯片兩次，去除多余的抗體。使用40ml PBST (含O. l%Tween-20)洗滌芯片，置于搖床上混合均勻，洗滌三次，每次洗滌5min。7、使用封閉液(5% 脫脂牛奶)稀釋二抗 DyLight649_conjugated AffiniPureFragment Goat-anti-Mouse IgG,稀釋比例為 I :400。8、按照上述步驟4，步驟5進(jìn)行二抗孵育操作。室溫孵育I小時(shí)。在芯片上方用鋁箔紙遮蓋，以防止發(fā)生信號(hào)漂白。9、按照上述步驟6，使用PBST洗滌芯片。10、使用去離子水沖洗芯片，以去除殘余的鹽分和變性劑。11、室溫干燥芯片，確保芯片完全干燥。12、使用芯片掃描儀讀取熒光信號(hào)。
13、根據(jù)B SA-Cy3以及BSA_Cy5確定芯片方向以及陽(yáng)性信號(hào)的位點(diǎn)。14、根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)找出對(duì)應(yīng)蛋白裂解液ID，根據(jù)裂解液數(shù)據(jù)庫(kù)信息，查找到對(duì)應(yīng)蛋白名稱(chēng)，NCBI錄入號(hào)(accession number),蛋白ID,蛋白大小等信息。芯片雜交結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組芯片上僅出現(xiàn)一個(gè)陽(yáng)性信號(hào)點(diǎn)，對(duì)應(yīng)蛋白為β -Catenin ;結(jié)論本發(fā)明單克隆抗體3F9僅特異性結(jié)合β -Catenin蛋白，而與其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種特異性結(jié)合β-Catenin蛋白的單克隆抗體3F9，由保藏編號(hào)為CGMCC No. 6134的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。
2.一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 6134。
3.如權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備用于檢測(cè)β-Catenin蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。
5.如權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備用于診斷β-Catenin相關(guān)性腫瘤的病理診斷試劑盒中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述β-Catenin相關(guān)性腫瘤為胃癌、食管癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肝癌、子宮內(nèi)膜癌、惡性黑色素瘤、乳腺癌或非小細(xì)胞肺癌。
7.一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求I所述的單克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC No.6134，以及由此雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體3F9。本發(fā)明還涉及單克隆抗體3F9在制備用于檢測(cè)β-Catenin蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用，含單克隆抗體3F9的免疫組化試劑盒，以及單克隆抗體3F9在制備用于診斷β-Catenin相關(guān)性腫瘤的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明所述單克隆抗體可與β-Catenin蛋白特異性結(jié)合，而與細(xì)胞內(nèi)其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)，顯著提高了β-Catenin蛋白免疫檢測(cè)的特異性和可靠性。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102898520SQ20121044418
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月8日
發(fā)明者何為無(wú), 馬東輝, 袁克湖, 陳堅(jiān), 王超, 王宜, 李楊, 周春 申請(qǐng)人:無(wú)錫傲銳東源生物科技有限公司