專利名稱：冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法
冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種中藥注射液制劑的檢測(cè)方法，特別是一種冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
中藥特征指紋圖譜，是指中藥材經(jīng)過適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段和儀器檢測(cè)得到，能夠識(shí)別其中各個(gè)組分群體特征的共有峰的圖譜。它是一種綜合的，可量化的手段，可用于鑒別中藥材的真?zhèn)?，評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。中藥指紋圖譜可教全面的反映中藥所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而反映中藥的質(zhì)量和中醫(yī)所用藥所體現(xiàn)的整體療效，有效的表征中藥質(zhì)量；尤其在現(xiàn)階段中藥的有效成分大多尚未明確，中藥指紋圖的整體性和模糊性正好符合中藥質(zhì)控的要求，較之單一成分或指標(biāo)成分的質(zhì)控方法，更具有科學(xué) 性和全面性，更加客觀地從整體上評(píng)價(jià)中藥的內(nèi)在質(zhì)量。目前已有一些藥劑使用這種方法作為質(zhì)量檢測(cè)的手段，例如現(xiàn)有專利技術(shù)中200710098981. 8 一種雙黃連注射液的制備方法及其成分檢測(cè)方法；申請(qǐng)?zhí)?00610065282. 9，一種黃芪皂苷注射液指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法；200910186698. X 一種醒腦靜注射液的檢測(cè)方法；200910244324. 9 一種復(fù)方苦參注射液的檢測(cè)方法等等。冠心寧注射液記載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十七冊(cè)。冠心寧注射液由丹參、川芎加工制成，具有活血化瘀，通脈養(yǎng)心的功效，用于治療冠心病心絞痛。臨川效果顯著，近年銷售不斷提高?，F(xiàn)有技術(shù)中，公開了一些丹參、j 11芎的鑒別方法，但這些方法對(duì)于檢測(cè)冠心寧注射液的質(zhì)量專屬性、特征性不夠強(qiáng)，尤其是注射液，更應(yīng)該有嚴(yán)格的檢測(cè)方法控制產(chǎn)品質(zhì)量，故待完善藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高質(zhì)量可控性，確保用藥安全。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于解決冠心寧注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)，公開一種冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法，對(duì)照指紋圖譜有10個(gè)特征峰，以6號(hào)峰位參照；相對(duì)保留時(shí)間I號(hào)峰10. 536±0. 04 ；2號(hào)峰11. 145±0. 02 ；3 號(hào)峰15. 678±0. 02 ；4 號(hào)峰17. 071±0· 5 ;5 號(hào)峰23. 019±0· 04 ；6號(hào)峰 34. 2826±0. 02 ；7 號(hào)峰46. 426±0. 08 ；8 號(hào)峰50. 879+0. 06 ；9 號(hào)峰 53. 936±0. 03 ；10號(hào)峰57. 239±0. 04 ;且供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜的相似度不低于O. 9 ;剔除溶劑峰，校正色譜峰后，相似度不低于O. 90。如圖I所示意，為冠心寧注射液的對(duì)照指紋圖譜。本發(fā)明冠心寧注射液的指紋圖譜檢測(cè)方法包括如下步驟
照高效液相色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄)，結(jié)合指紋圖譜要求測(cè)定，參照物溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷真空干燥24h的阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇溶液制成每ml含O. 25mg的溶液，即得。供試品溶液的制備精密量取冠心寧注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇(O. 2%冰乙酸)稀釋至刻度，搖勻，用O. 45 μ m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定方法分別精密量取參照物溶液和供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，記錄85min圖譜即得。如圖2、3、4、5所示意,分別為不同流動(dòng)相下冠心寧注射液指紋圖譜；如圖6所示意，為不同流速下冠心寧注射液指紋圖譜，如圖7所示意，為不同柱溫冠心寧注射液指紋圖譜，如圖8所示意，不同批號(hào)冠心寧注射液指紋圖譜。根據(jù)上述結(jié)果分析可以得知，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；線性梯度洗脫，乙腈為流動(dòng)相A，0. 04%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，Omin—A: B=4:96; 60min—A: B=33:67; 68min—A: B=33:67; 72min—A: B=2:98 ；檢測(cè)波長(zhǎng) 276nm ；柱 溫25°C 30°C ;流速0. 7ml/min O. 8ml/min。 本發(fā)明采用高效液相色譜方法建立冠心寧注射液的指紋圖譜，應(yīng)用關(guān)于冠心寧注射液生產(chǎn)質(zhì)量檢測(cè)；采用藥典會(huì)發(fā)布的相似度軟件，將冠心寧注射液指紋圖譜相似度閾值定為不低于O. 9.，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明方法準(zhǔn)確，可靠，可以最大限度的體現(xiàn)各主要成分的特征峰。


圖I為冠心寧注射液的對(duì)照指紋圖譜
圖2為甲醇-O. 1%TFA流動(dòng)相下冠心寧注射液指紋圖譜 圖3為甲醇-O. 5%H3P04流動(dòng)相下冠心寧注射液指紋圖譜 圖4為乙腈-O. 5%H3P04流動(dòng)相下冠心寧注射液指紋圖譜 圖5為乙腈-O. 04%H3P04流動(dòng)相下冠心寧注射液指紋圖譜 圖6為不同流速下冠心寧注射液指紋圖譜 圖7為不同柱溫冠心寧注射液指紋圖譜 圖8為不同批號(hào)冠心寧注射液指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1，取丹參IOOOg川芎1200g
冠心寧注射液的制備方法包括如下步驟
將兩味原料藥加水煎煮三次，第一次I. 5小時(shí)，第二次、三次各2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量71%，冷藏，濾過，濾液回收乙醇，再加乙醇至含醇量82%，冷藏，濾過，濾液用39%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7. I 7. 4，冷藏，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，稀釋至1000ml,冷藏,濾過,濾液濃縮至350 400ml。用9%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2. 3 2. 8，冷藏，濾過，濾液以36% 39%的氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 3 6. 8，加熱煮沸40分鐘，加O. 2%的活性炭，稍冷，濾過，冷藏，加注射用水250ml，加硫酸氫鈉O. 3 O. 6g,濾過，濾液加注射用水至1000ml，濾過，灌封，滅菌，即得。實(shí)施例2，取丹參1200g川芎IOOOg 冠心寧注射液的制備方法包括如下步驟
將兩味原料藥加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二次、三次各I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量76%，冷藏，濾過，濾液回收乙醇，在加乙醇至含醇量88%，冷藏，濾過，濾液用36%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7. I 7. 4，冷藏，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，稀釋至IOOOml,冷藏,濾過,濾液濃縮至350 400ml。用8. 5%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2. 3，冷藏，濾過，濾液以39%的氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 8，加熱煮沸40分鐘，加O. 1%的活性炭，稍冷，濾過，冷藏,加注射用水250ml，加硫酸氫鈉O. 3g,濾過，濾液加注射用水至IOOOml，濾過，灌封，滅菌，即得。實(shí)施例3，取丹參IlOOg川彎IlOOg 冠心寧注射液的制備方法包括如下步驟
將兩味原料藥加水煎煮三次，第一次I. 8小時(shí)，第二次、三次各I. 5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量73%，冷藏，濾過，濾液回收乙醇，在加乙醇至含醇量84%，冷藏，濾過，濾液用37%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7. I 7. 4，冷藏，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，稀釋至1000ml,冷藏,濾過,濾液濃縮至350 400ml。 用8. 7%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2. 3 2. 8，冷藏，濾過，濾液以38%的氫氧化鈉調(diào)PH值至
6.3 6. 8，加熱煮沸30分鐘，加O. 15%的活性炭，稍冷，濾過，冷藏，加注射液水250ml，加硫酸氫鈉O. 5g,濾過，濾液加注射用水至IOOOml，濾過，灌封，滅菌，即得。取0812191、0802171、0805251、0807021、0807031、0807201 不同批號(hào)冠心寧注射液，依照供試品制備方法，分別精密量取冠心寧注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇(O. 2%冰乙酸)稀釋至刻度，搖勻，用O. 45 μ m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得，注入高效液相色譜儀，記錄圖譜。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；線性梯度洗脫，乙腈為流動(dòng)相A，0. 04%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，0min—A:B=4:96;60min—A:B=33:67; 68min—A:B=33:67; 72min—A:B=2:98 ;檢測(cè)波長(zhǎng) 276nm ;柱溫25°C 30°C ;流速0. 7ml/min O. 8ml/min。如圖8所示意,為不同批號(hào)冠心寧注射液的指紋圖譜。
權(quán)利要求
1.一種冠心寧注射液的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法中指紋圖譜為供試品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度不低于O. 9 ;剔除溶劑峰，校正色譜峰后，相似度不低于O.90 ;指紋圖譜應(yīng)有10個(gè)特征峰，以6號(hào)峰位參照，相對(duì)保留時(shí)間I號(hào)峰10. 536±0. 04 ；2號(hào)峰11. 145±0. 02 ；3 號(hào)峰15. 678±0. 02 ；4 號(hào)峰17. 071±0· 5 ；5 號(hào)峰23. 019±0· 04 ；6號(hào)峰 34. 2826±0. 02 ;7 號(hào)峰46. 426±0. 08 ;8 號(hào)峰50. 879+0. 06 ;9 號(hào)峰 53. 936±0. 03 ；10號(hào)峰 57. 239±0. 04 如權(quán)利要求I所述的冠心寧注射液的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；線性梯度洗脫，乙腈為流動(dòng)相A，0. 04%，磷酸水溶液為流動(dòng)相 B, Omin一A:B=4:96; 60min一A:B=33:67; 68min—A:B=33:67; 72min一A:B=2:98 ；檢測(cè)波長(zhǎng)276nm ;柱溫30。。;流速0. 8ml/min, 參照物溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷真空干燥24h的阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，力口10%甲醇溶液制成每ml含O. 25mg的溶液，即得， 供試品溶液的制備精密量取冠心寧注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用O. 45 μ m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定方法分別精密量取參照物溶液餓供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，記錄85min圖譜即得。
2.如權(quán)利要求I或2所述的冠心寧注射液的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法中的冠心寧注射液的原料藥為丹參1000 1200g 、川芎1000 1200g。
3.如權(quán)利要求2所述的冠心寧注射液的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法中冠心寧注射液的制備方法包括如下步驟 將兩味原料藥加水煎煮三次，第一次I. 5 2小時(shí)，第二次、三次各I 2小時(shí)，合并煎液，率夠，濾液濃縮至相對(duì)密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量71% 76%，冷藏，濾過，濾液回收乙醇，再加乙醇至含醇量82% 88%,冷藏，濾過，濾液用36% 39%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7. I 7. 4,冷藏,濾過,濾液回收乙醇至無醇味,稀釋至1000ml,冷藏,濾過，濾液濃縮至350 400ml，用8. 5 9%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2. 3 2. 8，冷藏，濾過，濾液以36% 39%的氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 3 6. 8，加熱煮沸25 40分鐘，加O. 1% O. 2%的活性炭，稍冷，濾過，冷藏，加注射用水250ml，加硫酸氫鈉O. 3 O. 6g,濾過，濾液加注射用水至IOOOml，濾過，灌封，滅菌，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥注射液制劑的檢測(cè)方法，特別是一種冠心寧注射液的指紋圖譜的檢測(cè)方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；線性梯度洗脫，乙腈為流動(dòng)相A，0.04%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，0min—A:B=4:96;60min—A:B=33:67;68min—A:B=33:67;72min—A:B=2:98；檢測(cè)波長(zhǎng)276nm；柱溫25℃～30℃；流速0.7ml/min～0.8ml/min。且供試品指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所附的對(duì)照指紋圖譜的相似度不低于0.9；剔除溶劑峰，校正色譜峰后，相似度不低于0.90。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102866211SQ20121032510
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者劉近榮, 高治華, 趙東洋 申請(qǐng)人:山西振東泰盛制藥有限公司