專利名稱：一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，屬于分析化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
硒是人和動(dòng)物體必需的微量元素，具有多種生物學(xué)功能，如具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人體免疫力、保護(hù)心腦血管等作用，它的生物學(xué)功能主要是以硒蛋白表現(xiàn)的。已發(fā)現(xiàn)的硒蛋白大多數(shù)是具有重要作用的酶，又稱之為硒酶。目前已有大量研究表明人體40多種疾病與硒的營(yíng)養(yǎng)狀況有密切的關(guān)系。因此，對(duì)硒蛋白的研究已成為近年來(lái)的熱點(diǎn)研究課題。硒蛋白的純化過(guò)程中硒含量的測(cè)定有多種方法，如利用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)，電感耦合等離子體發(fā)射光譜(ICP-AES)對(duì)純化的蛋白進(jìn)行硒含量的測(cè)定。這些方法雖然方法快速，但儀器設(shè)備的費(fèi) 用昂貴，電感耦合等離子體質(zhì)譜或發(fā)射光譜的儀器費(fèi)用是原子熒光的3倍以上，載氣的使用費(fèi)用是原子熒光的50倍以上，這些設(shè)備昂貴不利于測(cè)試的普及，尋求一種設(shè)備簡(jiǎn)單，精度較高的方法十分有必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便，能精確快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法。為達(dá)上述目的，本發(fā)明借助原子熒光光譜(AFS)對(duì)提取蛋白中的硒進(jìn)行定量分析。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于它由如下步驟組成1.提取蛋白的處理，2.原子熒光光譜法測(cè)定硒含量，3.結(jié)果計(jì)算。下面對(duì)上述技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步解釋
I、提取蛋白的處理本發(fā)明中所涉及的蛋白為通過(guò)不同層析方法獲得的蛋白，因?yàn)榧兓^(guò)程中收集的蛋白組分往往較少，有時(shí)僅為幾十到幾百微升微升，除了進(jìn)行硒含量的測(cè)定，還需進(jìn)行進(jìn)一步的純化或其他生物學(xué)功能的測(cè)定。而常規(guī)的混酸消解往往需要毫升量級(jí)體積的樣品，所以純化提取的蛋白不適合用常規(guī)的混酸消解后進(jìn)行測(cè)定。將層析純化收集的蛋白取部分樣品加入一定體積的濃鹽酸(l:2(Tl:40，ν/ν)沸水浴中保持O. 5 lh，冷卻后純水定容至5 ml，利用原子熒光進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)做試樣空白。2、原子熒光光譜法測(cè)定硒取硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 yg/ml)(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)逐級(jí)稀釋，再配置成I ppb, 2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb幾個(gè)濃度系列。作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。線性關(guān)系達(dá)到O. 999以上方可進(jìn)行樣品檢測(cè)。測(cè)定的儀器參考條件條件為負(fù)高壓270 V ；燈電流80 mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800mL/min ;測(cè)量方式標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式峰面積；延遲時(shí)間1 s ;讀數(shù)時(shí)間7 S。設(shè)定好儀器條件，點(diǎn)火預(yù)熱10 mirT20 min待儀器穩(wěn)定后開(kāi)始測(cè)量。先測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再進(jìn)行試樣測(cè)量。3. 結(jié)果計(jì)算分別測(cè)定試樣空白和試樣,試樣測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算試樣中硒的
含量X= (C-CO) XV1/V2式中
X—試樣中硒的含量，單位為微克每升(μ g/L)； c一試樣測(cè)定的濃度，單位為微克每升(μ g/L)；
CO一試樣空白測(cè)定濃度,單位為微克每升(μ g/L)；
Vl一試樣定容體積，單位為毫升(mL)；
V2—試樣取樣體積，單位為毫升(mL)。本發(fā)明能提供一種操作簡(jiǎn)便，精確度高RSD〈2%，加標(biāo)回收率為929Γ100%，成本低廉的測(cè)定硒的方法。本發(fā)明是對(duì)提取的蛋白進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理，利用原子熒光(AFS)直接測(cè)定硒含量，方法簡(jiǎn)便，精確度高，成本低廉。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明和效果，但不影響發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例一
取層析純化收集的蛋白50 ul,加入Iml濃鹽酸沸水浴保持10 min,冷卻后定容至5 ml利用原子熒光進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)做試樣空白，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。取硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 μ g/ml)(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)逐級(jí)稀釋，再配置成O. I ppb，O. 2 ppb,O. 5 ppb,O. 8 ppb, I. O ppb幾個(gè)濃度系列。作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。線性關(guān)系達(dá)到O. 999以上方可進(jìn)行樣品檢測(cè)。測(cè)定的儀器參考條件條件為負(fù)聞壓270 V ;燈電流80mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800 mL/min ;測(cè)量方式標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式峰面積；延遲時(shí)間1 s ;讀數(shù)時(shí)間-J S。設(shè)定好儀器條件，點(diǎn)火預(yù)熱10 mirT20 min待儀器穩(wěn)定后開(kāi)始測(cè)量。先測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再進(jìn)行試樣測(cè)量。分別測(cè)定試樣空白和試樣，試樣測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算試樣中硒的含量
X= (C-CO) XV1/V2
式中X—試樣中硒的含量,單位為微克每升(μ g/L) ;C—試樣測(cè)定的濃度，單位為微克每升(μ g/L) ；C0一試樣空白測(cè)定濃度,單位為微克每升(μ g/L) ；V1一試樣定容體積，單位為暈升(mL) ；V2一試樣取樣體積，單位為暈升(mL)。測(cè)定的結(jié)果如下表
權(quán)利要求
1.一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于包括如下步驟組成 (1)硒蛋白的提取處理將通過(guò)層析純化方法獲得的含硒蛋白溶于濃鹽酸中并進(jìn)行沸水浴，冷卻后純水定容待測(cè)，同時(shí)做試樣空白； (2)原子熒光光譜法測(cè)定硒含量取硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000u g/ml)(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)逐級(jí)稀釋，再配置成I ppb,2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb幾個(gè)濃度系列；作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；線性關(guān)系達(dá)到0. 999以上方可進(jìn)行樣品檢測(cè)；測(cè)定的儀器參考條件條件為負(fù)高壓270 V ；燈電流80 mA ;原子化溫度800 V ;爐高8 mm ;載氣流速400 mL/min ;屏蔽氣流速800mL/min ;測(cè)量方式標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式峰面積；延遲時(shí)間1 s ;讀數(shù)時(shí)間7 s ;設(shè)定好儀器條件，點(diǎn)火預(yù)熱10 mirT20 min待儀器穩(wěn)定后開(kāi)始測(cè)量；先測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；再進(jìn)行試樣測(cè)量； (3)結(jié)果計(jì)算分別測(cè)定試樣空白和試樣，試樣測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算試樣中硒的含量X= (C-CO) XV1/V2 式中 X—試樣中硒的含量，單位為微克每升(U g/L)； C一試樣測(cè)定的濃度，單位為微克每升(y g/L)； CO一試樣空白測(cè)定濃度,單位為微克每升(y g/L)； Vl一試樣定容體積，單位為毫升(mL)； V2—試樣取樣體積，單位為毫升(mL)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過(guò)程中含硒蛋白與濃鹽酸的混合體積比為1:2(T40。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過(guò)程中含硒蛋白與濃鹽酸的混合體積比為1:30。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過(guò)程中在沸水浴中的時(shí)間為0. 5^1小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取處理過(guò)程中在沸水浴中的時(shí)間為45分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法，它由如下步驟組成1.提取蛋白的處理，2.原子熒光光譜法測(cè)定硒含量，3.結(jié)果計(jì)算。本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便，能精確快速測(cè)定含硒蛋白中硒的方法。本發(fā)明能提供一種操作簡(jiǎn)便，精確度高RSD<2%，加標(biāo)回收率為92%~100%，成本低廉的測(cè)定硒的方法。本發(fā)明是對(duì)提取的蛋白進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理，利用原子熒光(AFS)直接測(cè)定硒含量，方法簡(jiǎn)便，精確度高，成本低廉。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102809552SQ201210288300
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者朱元元 申請(qǐng)人:蘇州硒谷科技有限公司