液相色譜法分離測(cè)定沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬藥物領(lǐng)域，涉及液相色譜法分離測(cè)定沙康唑及其其光學(xué)異構(gòu)體的方法，本發(fā)明以纖維素-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇溶液為流動(dòng)相。解決了泊沙康唑的光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定問(wèn)題，從而保證了生產(chǎn)過(guò)程中泊沙康唑及其制劑的質(zhì)量可控。
【專利說(shuō)明】液相色譜法分離測(cè)定沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬藥物領(lǐng)域，具體涉及用液相色譜法分離測(cè)定泊沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]泊沙康唑(posaconazole)化學(xué)名為4_ [4_ [4_ [4_ [ [ (3R, 5R) _5_ (2, 4一二氟苯基)-5-(1, 2，4一三唑-1 一基甲基)氧雜戊環(huán)-3-基」甲氧基〕苯基〕哌嗪-1-基〕苯基〕-2-[ (2S, 3S) -2-羥基戊-3-基〕-1，2，4-三唑-3-酮，由 Schering-Plough 研發(fā)，2005年首次在德國(guó)上市，商品名為Noxafil。隨后在澳大利亞，英國(guó)，美國(guó)，歐盟等多個(gè)國(guó)家上市，用于預(yù)防和治療侵襲性真菌感染、耐藥或其他藥物無(wú)效的侵襲性真菌感染；對(duì)于曲霉菌數(shù)其療效更好，在腦中的生物利用度也很高，且安全性，耐受性好。
[0003]泊沙康唑是從伊曲康唑衍生而來(lái)的難溶于水的二代新型三唑類抗真菌藥物，其抗真菌活性優(yōu)于其他所有三唑類藥物，該類藥物具有代謝穩(wěn)定、低毒、生物利用度高、低蛋白結(jié)合率、分布廣泛、較長(zhǎng)的半衰期以及較好的耐受性和療效。在酸性胃液環(huán)境下的口服生物利用度高，特別是在與脂肪食物共用時(shí)，相對(duì)小的劑量下，其生物利用度就會(huì)飽和。與伊曲康唑不同，泊沙康唑能較好透過(guò)腦脊液屏障，在腦中具有較高的生物利用度。
[0004]對(duì)于泊沙康唑的光學(xué)異構(gòu)體為雜質(zhì)，在生產(chǎn)泊沙康唑過(guò)程中需要進(jìn)行質(zhì)量控制。手性藥物的光學(xué)異構(gòu)體的分離一直是手性藥物質(zhì)量控制的難點(diǎn)。因此，實(shí)現(xiàn)泊沙康唑與其光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定在于泊沙康唑質(zhì)量控制方面具有現(xiàn)實(shí)意義。
[0005]經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用DAICEL OD ( 4.6_X 250mm)色譜柱，以正己燒一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10)為流動(dòng)相?？梢詫⒉瓷晨颠蚺c其光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行有效分離，從而可以準(zhǔn)確控制泊沙康唑的質(zhì)量。本發(fā)明的方法能簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地分離、檢測(cè)出泊沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006][0006]本發(fā)明的目的是提供一種用手性色譜柱分離測(cè)定泊沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)的高效液相色譜方法，從而實(shí)現(xiàn)泊沙康唑與其光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定。
本發(fā)明所說(shuō)的用液相色譜方法分離測(cè)定泊沙康唑及其光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，其特征在于:以纖維素-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇溶液為流動(dòng)相，正己烷-低級(jí)醇溶液體積比為80:20?50:50。
[0007]這里所說(shuō)的液相色譜法包括高效液相色譜法或高效液相色譜法-質(zhì)譜法聯(lián)用。上述所說(shuō)的手性色譜柱選自牌號(hào)為DAICEL 0D( 4.6mmX 250mm),CHIRALPAK AD或CHIRALPAKAD-H的色譜柱。
[0008]本發(fā)明的低級(jí)醇選自以下化合物:甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇，優(yōu)選為無(wú)水乙醇或
異丙醇。
[0009]本發(fā)明的方法，其流動(dòng)相正己烷-低級(jí)醇溶液體積比為80:20?50:50。[0010]本發(fā)明所述的分離測(cè)定方法，可按以下方法實(shí)現(xiàn):
1)取泊沙康唑(posa-14)或含泊沙康唑的制劑適量，用無(wú)水乙醇或甲醇溶解樣品，并配制成每Iml中含泊沙康唑0.2~5mg的樣品溶液；
2)設(shè)置流動(dòng)相的流速為0.5~1.5ml/min，流動(dòng)相的流速優(yōu)選為1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為200~250nm，最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為2IOnm ;色譜柱柱溫箱溫度為20~50°C，最佳柱溫為35°C ；
3)取I)的樣品溶液2~50μ 1，注入高效液相色譜儀，完成泊沙康唑與光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定。
[0011]其中:
高效液相色譜儀:戴安U3000型高效液相色譜儀 色譜柱:DAICEL OD ( 4.6mmX 250mm)手性色譜柱 柱溫:35°C
流動(dòng)相:正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10)
流量:0.9ml/min
檢測(cè)波長(zhǎng):210nm
進(jìn)樣體積:20 μ I 最優(yōu)選的方法為:用纖維素_3，5-二甲苯基氨基甲酸酯為填料的手性色譜柱，優(yōu)選為DAICEL OD ( 4.6mmX 250mm)色譜柱，以正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10)為流動(dòng)相，柱溫為35°C,檢測(cè)波長(zhǎng)2IOn m,流速為0.9ml/min。取泊沙康唑?qū)φ掌?posa-14)及異構(gòu)體對(duì)照品(iso-l、3、4、7、8)各適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中各約含1.0mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。再取泊沙康唑原料藥或制劑適量(含泊沙康唑200mg)，置200ml量瓶中，加無(wú)水無(wú)水乙醇適量，振搖使主藥溶解，再加無(wú)水無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液適量，加無(wú)水無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，作為對(duì)照溶液。
[0012]精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品主峰與對(duì)映異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定，理論板數(shù)按泊沙康唑峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。取對(duì)照溶液20 μ I注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%~25% ;再分別精密量取供試品溶液及對(duì)照溶液各20 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。按自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算對(duì)映異構(gòu)體的含量，應(yīng)不得過(guò)1.0%。
[0013]
本發(fā)明采用DAICEL OD手性色譜柱，能夠有效分離測(cè)定泊沙康唑的光學(xué)異構(gòu)體；選用無(wú)水無(wú)水乙醇溶解樣品，確保了溶液的穩(wěn)定性；選用進(jìn)樣體積為20μ 1，柱溫為35°C，提高了色譜峰的對(duì)稱性。本發(fā)明解決了分離測(cè)定泊沙康唑的光學(xué)異構(gòu)體的測(cè)定問(wèn)題，從而保證了泊沙康唑及其制劑的質(zhì)量可控。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖為泊沙康唑(posa-14)與泊沙康唑5個(gè)光學(xué)異構(gòu)體iso-l、iso-8、iso-4、iso_3、iso-7的分離色譜峰?！揪唧w實(shí)施方式】
[0015]以下以具體的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此: 實(shí)施例1
試驗(yàn)儀器與條件:
Shimadzu LClO型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；自動(dòng)進(jìn)樣；以DAICEL OD手性色譜柱(250mmX4.6mm)為分離柱。
[0016]檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):210nm ;流動(dòng)相:正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10);柱溫35°C ;流速為0.9ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0017]試驗(yàn)步驟:
以正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10)為流動(dòng)相，柱溫為35°C，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，流速為0.9ml/min ;取泊沙康唑?qū)φ掌?posa-14)及異構(gòu)體對(duì)照品(iso_l、3、4、7、8)各適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中各約含1.0mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；再取泊沙康唑原料藥或制劑適量(含泊沙康唑200mg)，置200ml量瓶中，加無(wú)水無(wú)水乙醇適量，振搖使主藥溶解，再加無(wú)水無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加無(wú)水無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，作為對(duì)照溶液；
精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品主峰與對(duì)映異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定，理論板數(shù)按泊沙康唑峰計(jì)算應(yīng)不低于1000 ;取對(duì)照溶液20 μ I注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%?25% ;再分別精密量取供試品溶液及對(duì)照溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；按自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算對(duì)映異構(gòu)體的含量，應(yīng)不得過(guò)
1.0%οο
[0018]分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖。
[0019]實(shí)施例2
試驗(yàn)儀器與條件:
Shimadzu LClO型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；自動(dòng)進(jìn)樣；以CHIRALPAK AD-H D手性色譜柱(250_X4.6mm)為分離柱。
[0020]檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):200nm;流動(dòng)相:正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(20:70:10);柱溫20°C ;流速為0.5ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0021]試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
[0022]實(shí)施例3 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):250nm;流動(dòng)相:正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(30:60:10);柱溫50°C ;流速為1.5ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0023]測(cè)儀器及試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
[0024]實(shí)施例4 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;流動(dòng)相:正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(50:40:10);柱溫30°C ;流速為1.0ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0025]測(cè)儀器及試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
[0026]實(shí)施例5 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):2IOnm ;流動(dòng)相:正己烷一甲醇-丙醇(36:54:10);柱溫35 V ；流速為
0.9ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0027]實(shí)施例6 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):200nm ;流動(dòng)相:正己烷一甲醇-丙醇(20:70:10);柱溫20°C ;流速為
0.5ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0028]測(cè)儀器及試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
[0029]實(shí)施例7 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):250nm ;流動(dòng)相:正己烷一甲醇-丙醇(30:60:10);柱溫50°C ;流速為
1.5ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0030]測(cè)儀器及試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
[0031]實(shí)施例8 檢測(cè)條件:
紫外檢測(cè)波長(zhǎng):230nm ;流動(dòng)相:正己烷一甲醇-丙醇(50:40:10);柱溫30°C ;流速為
1.0ml/min ;進(jìn)樣體積為20 μ I。
[0032]測(cè)儀器及試驗(yàn)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別取試劑空白溶液和供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。
【權(quán)利要求】
1.液相色譜法分離測(cè)定沙康唑及其其光學(xué)異構(gòu)體的方法，其特征在于:以纖維素-3，5- 二甲苯基氨基甲酸酯為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級(jí)醇溶液為流動(dòng)相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于低級(jí)醇選自以甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇中的任兩種。
3.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于低級(jí)醇優(yōu)選為乙醇或異丙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于正己烷-低級(jí)醇溶液體積比為20:80?50:50。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于正己烷-低級(jí)醇溶液體積比為36:64。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的方法，其特征在于所述的方法包含以下步驟: 1)取泊沙康唑或含泊沙康唑的制劑適量，用無(wú)水乙醇或甲醇溶解樣品，并配制成每Iml中含泊沙康唑0.2?5mg的樣品溶液； 2)設(shè)置流動(dòng)相流速為0.5?1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為200?250nm，色譜柱柱溫箱溫度為 20 ?50°C ； 3)取I)的樣品溶液2?50μ l，注入高效液相色譜儀，完成泊沙康唑與光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定。
7.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，步驟2)所說(shuō)的流動(dòng)相的流速為0.9ml/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，步驟2)所說(shuō)的色譜柱柱溫箱溫度為35°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，步驟2)所說(shuō)的檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。
10.液相色譜法分離測(cè)定沙康唑及其其光學(xué)異構(gòu)體的方法，其步驟如下:用纖維素-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯為填料的手性色譜柱，以正己烷一無(wú)水乙醇-異丙醇(36:54:10)為流動(dòng)相，柱溫為35°C，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，流速為0.9ml/min ;取泊沙康唑?qū)φ掌?posa-14)及異構(gòu)體對(duì)照品(iso-l、3、4、7、8)各適量,加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中各約含1.0mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；再取泊沙康唑原料藥或制劑適量(含泊沙康唑200mg)，置200ml量瓶中，加無(wú)水無(wú)水乙醇適量，振搖使主藥溶解，再加無(wú)水無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加無(wú)水無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，作為對(duì)照溶液； 精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品主峰與對(duì)映異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定，理論板數(shù)按泊沙康唑峰計(jì)算應(yīng)不低于1000 ;取對(duì)照溶液20 μ l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%?25% ;再分別精密量取供試品溶液及對(duì)照溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；按自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算對(duì)映異構(gòu)體的含量，應(yīng)不得過(guò).1.0%。
【文檔編號(hào)】G01N30/38GK103512969SQ201210220675
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月29日
【發(fā)明者】習(xí)超鵬, 王正澤, 楊曉兵, 鐘雪彬, 吳云登, 丁楠楠, 李戰(zhàn), 霍立茹 申請(qǐng)人:南京長(zhǎng)澳醫(yī)藥科技有限公司