專利名稱：采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及乳品質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及的是一種采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法。
背景技術(shù)：
我國(guó)目前的乳業(yè)與乳制品加工業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量和衛(wèi)生狀況不容樂(lè)觀。乳中摻假、疫情控制、衛(wèi)生管理等方面存在的諸多問(wèn)題，使乳類食品安全性存在重大隱患。由于缺乏有效的控制和檢測(cè)技術(shù)，乳制品質(zhì)量安全事件屢屢發(fā)生，空殼奶粉、回收奶、形形色色的乳制品摻假事件的發(fā)生，嚴(yán)重?fù)p害了消費(fèi)者對(duì)于乳制品安全的信任，大大的削弱了市場(chǎng)需求。因此，為了保證乳制品的質(zhì)量，出現(xiàn)了各種各樣的檢測(cè)方法。目前我國(guó)檢測(cè)乳制品中乳糖的標(biāo)準(zhǔn)方法有GB/T5413. 5-2010《嬰幼兒配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和總糖的測(cè)定》以及SN/T 0871-2000《進(jìn)出口乳及乳制品中乳糖的測(cè)定方法》。GB/T 5413. 5-2010方法中規(guī)定了兩種針對(duì)乳糖的測(cè)定方法高壓液相色譜法和萊因-埃農(nóng)氏法，SN/T 0871-2000采用分光光度法直接測(cè)定乳粉中乳糖的含量。萊因-埃農(nóng)氏法與分光光度法，一次只能測(cè)定小批量的樣品，不適合多個(gè)樣品的測(cè)定。高效液相色譜法也只能檢測(cè)出牛奶中是否摻假或摻雜，如果想要確定摻假、摻雜物質(zhì)，還是需要聯(lián)用質(zhì)譜或者是用試劑盒等化學(xué)方法來(lái)確定具體摻假、摻雜物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法，包括以下步驟(1)按照酶的固定方法處理鉬電極和玻碳電極；(2)把空白溶液配好，放置到樣品杯中；(3)打開(kāi)微電流測(cè)定儀，預(yù)熱IOmin ；(4)根據(jù)空白溶液調(diào)整微電流測(cè)定儀零點(diǎn)；(5)待微電流測(cè)定儀調(diào)零后打開(kāi)樣品杯蓋，把待測(cè)溶液加入樣品杯中，其液面高度不低于電極的裸露部分；(6)加入待測(cè)溶液后電流即發(fā)生變化，蓋上樣品杯蓋，待電流穩(wěn)定時(shí)止；(7)從微電流測(cè)定儀顯示器中讀出微電流的值X,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 15. 153X+1. 5131，乳糖含量為y，電流值為X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；即可得到乳糖的含量。所述的方法，所述酶的固定方法為將適量的混合液A沉積于玻碳電極的探頭部位后將該電極置于戊二醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物，之后，取等量的混合液B沉積于玻碳電極的探頭部位并將傳感器置于戊二醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物；將適量的混合液A沉積于鉬電極的探頭部位并將其置于戊二醛蒸汽中放置Ih,使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物；混合液A :取2. 5 ii L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和 5 ii L甘油，40 ii L pH為7. 5的磷酸鹽緩沖液混勻；混合液B :取2. 5 y L的@ -半乳糖苷酶， 2. 5mg殼聚糖和5 ii L甘油，40 ii L pH為7. 5的磷酸鹽緩沖液混勻。在自然界里乳糖只在哺乳動(dòng)物的奶液中存在，S卩乳糖是原料乳中的特有成分，只要乳源一定，乳糖的含量只在一定范圍之內(nèi)有微量的變化，加入摻假物后原料中乳糖的含量也會(huì)隨之變化，通過(guò)測(cè)定原料乳中乳糖的含量，可以直接判斷原料乳是否摻假。本發(fā)明對(duì)比目前原料牛乳中乳糖測(cè)定方法，首次推出ー種電化學(xué)生物傳感器在原料乳質(zhì)量監(jiān)測(cè)中最優(yōu)測(cè)定條件以及方法的可靠性。本發(fā)明的目的即采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖，將該方法應(yīng)用于低乳糖牛乳生產(chǎn)過(guò)程中乳糖的測(cè)定，首次研究了電化學(xué)生物傳感器的最優(yōu)測(cè)定條件以及方法的可靠性，從而建立了快捷有效的電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖的方法，達(dá)到鑒別牛乳中是否摻假或摻雜，同時(shí)可進(jìn)行多個(gè)樣品測(cè)定。


圖I為實(shí)驗(yàn)裝置示意圖(I鉬電極；2玻碳電極；3微電流測(cè)定儀)圖2為標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖3為恒電位儀電路原理圖；圖4微電流測(cè)定儀電路原理圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I(I)酶的固定方法在儀器中測(cè)定乳糖濃度變化是因?yàn)殡S著葡萄糖氧化酶(GOD)和P -半乳糖苷酶的活性來(lái)測(cè)定乳糖濃度的的雙酶生物傳感器，本儀器采用殼聚糖交聯(lián)戊ニ醛來(lái)固定酶，具有均一穩(wěn)定性，受外界影響因素小。將適量的混合液A (混合液A :取2. 5 ii L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和5 y L甘油，40ii L pH為7. 5的磷酸鹽緩沖液混勻。)沉積(將玻碳電極浸泡在混合液A中30min 即可)于玻碳電極的探頭部位后將該電極(圖I中兩電極I為鉬電扱，電極2為玻碳電極) 置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物。之后，取等量的混合液B (混合液B:取2.5iiL的@-半乳糖苷酶，2.511^殼聚糖和511し甘油，4011しpH為7. 5的磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻。)沉積(將玻碳電極浸泡在混合液B中30min即可)于玻碳電極的探頭部位并將傳感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物。為了排除葡萄糖的干擾，將適量的混合液A沉積(將鉬電極浸泡在混合液A中30min即可)于鉬電極的探頭部位并將傳感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物。(2)突變電壓的確定取pH值為7. 5的磷酸鹽緩沖液置于電解池中，放入已固定好酶的玻碳電極及鉬電極，接通電源，再取PH值為7. 5磷酸鹽緩沖液、乳糖標(biāo)準(zhǔn)液置于電解池中，放入已固定好酶的玻碳電極及鉬電極，接通電源，調(diào)節(jié)電壓為0. 1-2. 0V,待輸出電流穩(wěn)定后，記錄對(duì)應(yīng)的電流值，得出突變電壓為1.2V。(3)測(cè)定電流條件實(shí)驗(yàn)在突變電壓確定的情況下，選取反應(yīng)溫度、酶固定量、pH值3個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)。單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)。根據(jù)單因素的水平條件，測(cè)定突變電壓。并在在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。根據(jù)單因素的水平條件，測(cè)定突變電壓。并在在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I。表I正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果
權(quán)利要求
1.ー種采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法，其特征在于，包括以下步驟(I)按照酶的固定方法處理鉬電極和玻碳電極；(2)把空白溶液配好，放置到樣品杯中；(3)打開(kāi)微電流測(cè)定儀，預(yù)熱IOmin；(4)根據(jù)空白溶液調(diào)整微電流測(cè)定儀零點(diǎn)；(5)待微電流測(cè)定儀調(diào)零后打開(kāi)樣品杯蓋，把待測(cè)溶液加入樣品杯中，其液面高度不低于電極的裸露部分；(6)加入待測(cè)溶液后電流即發(fā)生變化，蓋上樣品杯蓋，待電流穩(wěn)定時(shí)止；(7)從微電流測(cè)定儀顯示器中讀出微電流的值X,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y= 15. 153x+l. 5131, 乳糖含量為1，電流值為X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；即可得到乳糖的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述酶的固定方法為將適量的混合液A 沉積于玻碳電極的探頭部位后將該電極置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物，之后，取等量的混合液B沉積于玻碳電極的探頭部位并將傳感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物；將適量的混合液A沉積于鉬電極的探頭部位并將其置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其與酶和殼聚糖形成網(wǎng)狀物；混合液A :取2. 5 y L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和5 y L甘油，40 y L pH為7. 5的磷酸鹽緩沖液混勻；混合液B 取2. 5 ii L的P -半乳糖苷酶，2. 5mg殼聚糖和5 y L甘油，40 y LpH為7. 5的磷酸鹽緩沖液混勻。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種采用電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖含量的方法，包括以下步驟(1)按照酶的固定方法處理鉑電極和玻碳電極；(2)配制空白溶液；(3)打開(kāi)微電流測(cè)定儀，預(yù)熱10min；(4)根據(jù)空白溶液調(diào)整微電流測(cè)定儀零點(diǎn)；(5)待微電流測(cè)定儀調(diào)零后打開(kāi)樣品杯蓋，把待測(cè)溶液加入樣品杯中；(2)加入待測(cè)溶液后電流即發(fā)生變化，蓋上樣品杯蓋，待電流穩(wěn)定時(shí)止；(3)讀出微電流的值x，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y＝15.153x+1.5131，乳糖含量為y，電流值為x，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；即可得到乳糖的含量。建立了快捷有效的電化學(xué)生物傳感器測(cè)定牛乳中乳糖的方法，達(dá)到鑒別牛乳中是否摻假或摻雜，同時(shí)可進(jìn)行多個(gè)樣品測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N27/36GK102608178SQ20121006600
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月14日
發(fā)明者林芳棟, 蔣珍菊 申請(qǐng)人:西華大學(xué)