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戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的制作方法

文檔序號(hào):5920431閱讀:442來源:國(guó)知局
專利名稱:戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本實(shí)用新型涉及一種抗體檢測(cè)試劑盒,具體涉及戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)
戊型肝炎病毒(h印atitis E virus,戊型肝炎)是非甲非乙型急性肝炎的病原體, 主要經(jīng)糞口途徑傳播,也有報(bào)道可以通過血液傳播。人對(duì)戊型肝炎普遍易感,病人發(fā)病癥狀嚴(yán)重,病死率高,青壯年戊肝病死率可達(dá)1 % 2 %,遠(yuǎn)較其它各型肝炎高,孕婦戊肝病的死亡率可高達(dá)20%左右,給人類健康造成嚴(yán)重威脅。ELISA檢測(cè)法是目前用于檢測(cè)血清戊型肝炎抗體最常用的一種方法,其中以間接 ELISA用途最廣,現(xiàn)在已有商品化的試劑盒。用于檢測(cè)戊型肝炎的抗原有3種即組織培養(yǎng)全病毒抗原,合成肽抗原和表達(dá)抗原,目前最受關(guān)注的是表達(dá)抗原。常用的表達(dá)抗原有 0RF22的表達(dá)抗原,0RF23的表達(dá)抗原以及同時(shí)含有0RF22和0RF23編碼產(chǎn)物的重組表達(dá)抗原。Uchida等應(yīng)用結(jié)構(gòu)基因0RF22區(qū)中部的一段重組表達(dá)蛋白作為抗原的抗戊型肝炎 ELISA法檢測(cè)52例戊肝病人血清,戊型肝炎陽性率為67. 31% .Tsarve等構(gòu)建了含有巴基斯坦戊型肝炎SAR255株完整戊型肝炎0RF22基因組的重組桿狀病毒63222IV22,ELISA法監(jiān)測(cè)接種戊型肝炎的8種靈長(zhǎng)類動(dòng)物的血清學(xué)轉(zhuǎn)變,證實(shí)應(yīng)用此法檢測(cè)戊型肝炎具有高度靈敏性和特異性。國(guó)內(nèi)何志強(qiáng)等利用大腸桿菌表達(dá)的部分0RF22蛋白,建立的雙抗原夾心EL ISA方法,該方法與利用同一抗原的間接ELISA比較,結(jié)果符合良好,且s/co (OD/cutoff) 比值較間接法更高。但ELISA法操作復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),需要對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行稀釋、溫育、分離、洗滌和顯色等操作,大概需要用兩個(gè)小時(shí)以上。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷,提供了一種可以快速定性檢測(cè)血清樣本中的戊型肝炎病毒IgG抗體的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒。為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本實(shí)用新型提供的技術(shù)方案為戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)試劑盒由盒體和盒蓋組成,盒體內(nèi)設(shè)置有鋁箔袋;所述鋁箔袋內(nèi)設(shè)置有試紙條;所述試紙條由反應(yīng)板切割而成;所述試紙條寬4mm ;所述反應(yīng)板由膠板、反應(yīng)膜、 鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊、粗纖維濾紙和樣品墊組成;所述反應(yīng)膜是由用磷酸鹽緩沖液稀釋過的重組HEV-^Vg和用磷酸鹽緩沖液稀釋過的羊抗鼠IgG抗體包被的;所述反應(yīng)膜設(shè)置在膠板上;所述膠板上部設(shè)置有1. 5cm寬的粗纖維濾紙;粗纖維濾紙的下部壓住反應(yīng)膜;所述膠板下部依次設(shè)置有鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊和樣品墊;所述鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊寬0. 9cm ;所述鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊的上部壓住反應(yīng)膜;所述樣品墊位于鼠抗人 IgG單抗金結(jié)合物墊的下部;所述樣品墊的上部壓住鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊。本實(shí)用新型的有益效果為戊型肝炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒具有快速、簡(jiǎn)便、 準(zhǔn)確和靈敏度高的特點(diǎn),整個(gè)操作時(shí)間僅需20分鐘就可以判讀結(jié)果。膠體金快速檢測(cè)試紙條,以多表位的重組抗原為原料,具有操作更加簡(jiǎn)便,成本低廉,特異性好,靈敏度高的特點(diǎn),可單份檢測(cè),易于普及,對(duì)于戊型肝炎病毒IgG的檢測(cè)和控制效果明顯。

圖1為本實(shí)用新型提供的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的盒體示意圖。圖2為本實(shí)用新型提供的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的鋁箔袋示意圖。圖3為本實(shí)用新型提供的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的未切割前的反應(yīng)板示意圖。圖4為本實(shí)用新型提供的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒的切割后試紙條的示意圖。其中,1為膠板,2為反應(yīng)膜,3為粗纖維濾紙,4為鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊,5為
樣品墊。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)試劑盒由盒體和盒蓋組成,盒體內(nèi)設(shè)置有鋁箔袋;鋁箔袋內(nèi)設(shè)置有試紙條;試紙條由反應(yīng)板切割而成;試紙條寬4mm ;反應(yīng)板由膠板1、反應(yīng)膜2、鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊4、粗纖維濾紙3和樣品墊5組成;反應(yīng)膜2是由用磷酸鹽緩沖液稀釋過的重組HEV-Ag和用磷酸鹽緩沖液稀釋過的羊抗鼠IgG 抗體包被的;反應(yīng)膜2設(shè)置在膠板1上;膠板1上部設(shè)置有1. 5cm寬的粗纖維濾紙3 ;粗纖維濾紙3的下部壓住反應(yīng)膜2 ;膠板1下部依次設(shè)置有鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊4和樣品墊5 ;鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊4寬0. 9cm ;鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊4的上部壓住反應(yīng)膜2 ;樣品墊5位于鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊4的下部;樣品墊5的上部壓住鼠抗人 IgG單抗金結(jié)合物墊4。一、生產(chǎn)工藝條件的確定1、反應(yīng)膜包被條件的優(yōu)化1. 1檢測(cè)線包被濃度和膠體金標(biāo)記鼠抗人IgG稀釋比例的選擇按照上述確定好的標(biāo)記條件進(jìn)行標(biāo)記,將其體積濃縮至原體積(原體積以膠體金體積計(jì)算)的1/10,再以不同的稀釋比例稀釋濃縮液,用稀釋液浸泡金標(biāo)墊,1.5ml/條,干燥后與以不同檢測(cè)線包被濃度,0. 1 μ 1/mm的包被量包被好的戊型肝炎反應(yīng)膜進(jìn)行配對(duì),檢測(cè)內(nèi)控血清。實(shí)驗(yàn)方案如表1,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2、3:表1實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)[0019]
權(quán)利要求1.戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)試劑盒由盒體和盒蓋組成,其特征在于盒體內(nèi)設(shè)置有鋁箔袋;所述鋁箔袋內(nèi)設(shè)置有試紙條;所述試紙條由反應(yīng)板切割而成;所述試紙條寬4mm ;所述反應(yīng)板由膠板、反應(yīng)膜、鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊、粗纖維濾紙和樣品墊組成;所述反應(yīng)膜是由用磷酸鹽緩沖液稀釋過的重組HEV-Ag和用磷酸鹽緩沖液稀釋過的羊抗鼠IgG抗體包被的;所述反應(yīng)膜設(shè)置在膠板上;所述膠板上部設(shè)置有1. 5cm 寬的粗纖維濾紙;粗纖維濾紙的下部壓住反應(yīng)膜;所述膠板下部依次設(shè)置有鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊和樣品墊;所述鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊寬0. 9cm ;所述鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊的上部壓住反應(yīng)膜;所述樣品墊位于鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊的下部;所述樣品墊的上部壓住鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測(cè)試劑盒,包括硝酸纖維素膜檢測(cè)線包被的重組抗原HEV-Ag、質(zhì)控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標(biāo)墊上包被的由膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單抗,所述重組戊型肝炎病毒抗原濃度大于2mg/ml,用SDS-PAGE測(cè)定;所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于4mg/ml;所述鼠抗人IgG單抗?jié)舛却笥?mg/ml,用SDS-PAGE測(cè)定,上樣量在10μl條件下為兩條帶。本實(shí)用新型的有益效果為戊型肝炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高的特點(diǎn),整個(gè)操作時(shí)間僅需20分鐘就可以判讀結(jié)果。膠體金快速檢測(cè)試紙條,以多表位的重組抗原為原料,具有操作更加簡(jiǎn)便,成本低廉,特異性好,靈敏度高的特點(diǎn),可單份檢測(cè),易于普及,對(duì)于戊型肝炎病毒IgG的檢測(cè)和控制效果明顯。
文檔編號(hào)G01N33/531GK202196065SQ20112027511
公開日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2011年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月29日
發(fā)明者李習(xí)榮 申請(qǐng)人:北京中檢安泰診斷科技有限公司
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