專(zhuān)利名稱(chēng)：唇香草指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種唇香草指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，指紋圖譜已成為國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的有效手段，指紋圖譜技術(shù)已成為當(dāng)前中藥界關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。國(guó)際上采用指紋圖譜質(zhì)控技術(shù)對(duì)植物藥進(jìn)行質(zhì)量控制的國(guó)家有韓國(guó)、日本、德國(guó)等，如德國(guó)用指紋圖譜技術(shù)控制銀杏制劑的質(zhì)量；美國(guó)FDA對(duì)植物藥的質(zhì)量控制則要求必須控制指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。用指紋圖譜制定注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也被納入藥典，但在我國(guó)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中，中藥材、中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)大量?jī)H限于外觀鑒另O、性狀檢查，很少對(duì)其中有效成分進(jìn)行檢查。即使在建立成分測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)中，所測(cè)成分大部分僅為ー個(gè)或幾個(gè)指標(biāo)成分，而不是直接與療效相關(guān)的有效成分。在常規(guī)檢查中，外觀、 性狀的鑒別以及化學(xué)鑒別項(xiàng)中，存在大量普適性?xún)?nèi)容，有效成分的專(zhuān)屬性不強(qiáng)，很難對(duì)藥材或制劑的特性有ー個(gè)全面的描述。中藥指紋圖譜可從整體上分析中藥的生物、理化特征，又具有一定的可量化參數(shù)，充分體現(xiàn)了中藥整體性和模糊性的特點(diǎn)。因此，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格試驗(yàn)獲得重現(xiàn)性良好的指紋圖譜用于中藥質(zhì)量控制，對(duì)中醫(yī)現(xiàn)代化和國(guó)際化具有重大意義。一般常用于植物藥材指紋圖譜的鑒定方法有顯微鑒定、性狀鑒定、理化鑒定。唇香草{Ziziphora clinopodioides Lam.)為唇形科新塔花屬植物唇香草的干燥地上部分，維吾爾名稱(chēng)為蘇則。本品為多年生半灌木狀草本，喜生于低山坡、草地及干旱坡地上，分布于新疆、前蘇聯(lián)、蒙古及中亞地區(qū)亦有分布。性味辛涼、微苦，具有強(qiáng)心利濕、理氣化痰、消炎散結(jié)的功效，維吾爾醫(yī)將唇香草長(zhǎng)期用于臨床治療冠心病、心絞痛、氣管炎、肺膿腫的復(fù)方中?，F(xiàn)代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，唇香草對(duì)急性缺血的心肌和氧化損傷的心肌細(xì)胞均有明顯的保護(hù)作用。文獻(xiàn)報(bào)道唇香草的有效成分有揮發(fā)油類(lèi)，有機(jī)酸類(lèi)，黃酮類(lèi)等多種成分，并僅對(duì)其進(jìn)行定性、定量分析缺乏全面反映唇香草質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)控制手段。單靠測(cè)定某種有效成分考查質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，難以達(dá)到對(duì)唇香草質(zhì)量的有效控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了ー種唇香草指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的唇香草的指紋圖譜，以此達(dá)到完善其質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，有效控制唇香草藥材質(zhì)量的目的。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案
唇香草指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟；
(I)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備
分別稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液溶解并定容，使地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮的濃度分別為O. 0122-0. 1708mg/ml、O. 0276-0. 3804mg/ml,0. 0063-0. 0879mg/ml 的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液；(2)供試品溶液的制備
稱(chēng)取唇香草粉末，每Ig加入含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液8-15ml，浸泡O. 5-1. 5h，超聲提取O. 5-lh，過(guò)濾，用含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液定容，用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液；
(3)高分離度快速液相色譜(RRLC)法分析
色譜條件XDB-C18 色譜柱，50_X4. 6mm，I. 8 m，流速 O. 9 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 270nm，柱溫30°C，進(jìn)樣量6ml，流動(dòng)相A為1%ν/νこ酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，采用梯度洗脫0 - 4min,こ酸水溶液由77%降低到58% ；4 - 10 min,こ酸水 溶液由58%降低到50% ；
分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，注入高分離度快速液相色譜儀中進(jìn)行高分離度快速液相色譜檢測(cè)，按照上述條件操作，得到唇香草的RRLC指紋圖譜。該指紋圖譜中的共有特征峰為地奧司明(12)、蒙花苷(15)、胡薄荷酮(16)三個(gè)峰，其保留時(shí)間分別為29. 617min、40. 522min和46. 897min。進(jìn)ー步地，本發(fā)明方法中得到的唇香草的RRLC指紋圖譜中的共有特征峰還包括(I)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(18)十五個(gè)峰，其保留時(shí)間分別為 I. 405 min、2. 015min、2. 472 min,3. 132 min,3. 571 min,5. 972 min、7. 548 min、12.637 min、15.548 min、2L 309 min、22.846 min、34. 362 min、36.636 min、55. 02 min 和 56. 42 min。按照本發(fā)明所述的方法，在制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液時(shí)，優(yōu)選地
分別稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亞砜為25%v/v的甲醇溶液溶解并定容，使地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮的濃度分別為0.0122-0. 1708mg/ml、
O.0276-0. 3804mg/ml,0. 0063-0. 0879mg/ml 的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。按照本發(fā)明所述的方法，在制備供試品溶液時(shí)，優(yōu)選地
稱(chēng)取唇香草粉末，每Ig加入含_■甲基亞諷為25%v/v的甲醇溶液IOml,浸泡Ih,超聲提取O. 5h，過(guò)濾，用含ニ甲基亞砜為25%v/v的甲醇溶液定容，用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。本發(fā)明中的唇香草藥材中主要有效成分地奧司明和蒙花苷難溶于一般提取溶剤，本方法首次在提取溶劑中加入助溶劑ニ甲基亞砜(DMSO)幫助有效成分的溶出。首次運(yùn)用了快速高分離液相(RRLC)優(yōu)于顯微鑒定、性狀鑒定、理化鑒定，具有更高的靈敏度、分離度和分析速度，是ー種全面快速的分析鑒定方法用于唇香草藥材的鑒定檢測(cè)。按照本發(fā)明，通過(guò)指紋圖譜中共有峰的有無(wú)，能有效地監(jiān)控唇香草的質(zhì)量，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。將唇香草藥材作為ー個(gè)整體對(duì)待，通過(guò)比較其共有峰可以找出不同藥材之間的細(xì)
微差異。


附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)ー步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中
圖I是本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖；圖2是本發(fā)明實(shí)施例I中2號(hào)樣品供試品溶液的色譜 圖3是利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件(2004A版)處理所得到的本發(fā)明唇香草共有模式特征指紋圖譜；
圖4是按本發(fā)明方法獲得的唇香草的RRLC指紋圖譜。其中，1-18為唇香草的RRLC指紋圖譜中的共有峰，Sl-SlO為不同產(chǎn)地的唇香草的RRLC指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.唇香草指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 分別稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液溶解并定容制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液； (2)供試品溶液的制備 稱(chēng)取唇香草粉末，每Ig加入含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液8-15ml，浸泡O. 5-1. 5h，超聲提取O. 5-lh，過(guò)濾，用含ニ甲基亞砜為20%-30%v/v的甲醇溶液定容，用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液； (3)高分離度快速液相色譜法分析 色譜條件XDB-C18 色譜柱，50_X4. 6_，I. 8 m，流速 O. 9 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 270nm，柱溫30°C，進(jìn)樣量/6ml，流動(dòng)相A為1%ν/νこ酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，采用梯度洗脫0-4 min,こ酸水溶液由77%降低到58% ；4 - 10 min,こ酸水溶液由58%降低到50% ； 分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，注入高分離度快速液相色譜儀中進(jìn)行高分離度快速液相色譜檢測(cè)，按照上述條件操作，得到唇香草的高分離度快速液相指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的唇香草指紋圖譜的建立方法，其特征在于得到的唇香草的高分離度快速液相指紋圖譜中的共有特征峰為地奧司明(12)、蒙花苷(15)、胡薄荷酮(16)三個(gè)峰，其保留時(shí)間分別為29. 617min、40. 522min和46. 897min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的唇香草指紋圖譜的建立方法，其特征在于得到的唇香草的高分離度快速液相指紋圖譜中的共有特征峰還包括(I)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(18)十五個(gè)峰，其保留時(shí)間分別為 I. 405 min,2. 015min、2.472 min、3. 132 min、3. 571 min、5.972 min、7. 548 min、12.637 min、15.548 min、21.309 min、22.846 min、34. 362 min、36.636 min、55.02 min 和 56.42 min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的唇香草指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述步驟(I)中用含ニ甲基亞砜為25%v/v的甲醇溶液溶解并定容。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的唇香草指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述步驟(2)供試品溶液的制備 稱(chēng)取唇香草粉末，每Ig加入含_■甲基亞諷為25%v/v的甲醇溶液IOml,浸泡Ih,超聲提取O. 5h，過(guò)濾，用含ニ甲基亞砜為25%v/v的甲醇溶液定容，用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種唇香草指紋圖譜的建立方法以及所得到的唇香草指紋圖譜，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品地奧司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含二甲基亞砜的甲醇溶液溶解并定容，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；(2)供試品溶液的制備用二甲基亞砜的甲醇溶液唇香草粉末，超聲提取，過(guò)濾，定溶，微孔濾膜過(guò)濾，得供試品溶液；(3)RRLC分析XDB-C18色譜柱，50mm×4.6mm,1.8mm，流速0.9ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量6ml，流動(dòng)相為乙酸水溶液—甲醇，采用梯度洗脫，得到唇香草的HPLC指紋圖譜。通過(guò)本發(fā)明指紋圖譜中共有峰的有無(wú)，能有效地監(jiān)控唇香草的質(zhì)量，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102662019SQ201110366670
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月6日
發(fā)明者于謙, 劉宏炳, 周曉英, 哈木拉提·吾甫爾, 田樹(shù)革, 葛亮 申請(qǐng)人:新疆醫(yī)科大學(xué)