專利名稱：測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中維生素ade的含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中維生素ADE的含量的方法。
背景技術(shù)：
維生素A(retinoL)、維生素 D(VitaminD2 和 VitaminD3)和維生素 Ε( α -Ε、y -E 和 δ-Ε)是機(jī)體維持正常代謝和機(jī)能必需的脂溶性維生素[1]。維生素A又稱為視黃醇，具有促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)、維持表皮完整、生殖、骨骼及視覺等功能；維生素D主要包括維生素込(麥角鈣化醇)和D3 (膽鈣化醇)，它們對(duì)哺乳動(dòng)物有促進(jìn)鈣磷代謝及成骨作用；維生素E又稱為生育酚，主要包括α-Ε、γ-E和δ-Ε，其中以α-生育酚的生物效應(yīng)最高，具有促進(jìn)生育、 抗衰老的作用。由于這6種維生素在食品工業(yè)的生產(chǎn)加工過程廣泛運(yùn)用，而在外界環(huán)境中不穩(wěn)定，很容易受光、氧等影響而被氧化破壞生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存中易對(duì)這6種維生素造成破壞，影響因素較多，因此維生素A、D和E的同時(shí)測(cè)定十分重要，但目前的檢驗(yàn)技術(shù)仍存在眾多難點(diǎn)，科研工作者一直在努力尋找合適的測(cè)定方法來得到準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的結(jié)果。目前報(bào)道的反相HPLC測(cè)定法[2-4]樣品經(jīng)提取后，涉及到多次蒸發(fā)、溶解等步驟，前處理較麻煩、 費(fèi)時(shí)，易造成待測(cè)成份的破壞，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低，而且只能同時(shí)測(cè)維生素A和Ε，不能用來同時(shí)測(cè)6種脂溶性維生素，對(duì)樣品種類也有限制?，F(xiàn)行的食品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413. 9-2010 嬰幼兒食品和乳制品中維生素A、D、E的測(cè)定，采用硅膠柱凈化待測(cè)液，回收餾分的方法測(cè)定維生素D。國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)方法不能對(duì)這6種維生素進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，且測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)、方法繁瑣，可能導(dǎo)致樣品中脂溶性維生素?fù)p失而使回收率下降。不僅在檢測(cè)時(shí)間和人力方面的大量消耗，也為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性增添了諸多影響因素，不利于檢驗(yàn)結(jié)果的系統(tǒng)分析，同時(shí)也是對(duì)有限資源的一種浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中維生素ADE含量的方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，其具體步驟為
1)準(zhǔn)確稱取嬰幼兒食品或乳品樣品，置于棕色碘量瓶中，加入焦性沒食子酸乙醇溶液， 震搖，使各組分混合均勻后，加入KOH水溶液，所述KOH水溶液中的KOH與水體積比為1 2，搖勻，放置在70-100°C水浴鍋中回流皂化完全后，迅速冷卻后將樣品置于棕色分液漏斗中，接著用石油醚與乙醚體積比為2 1的醚溶液蕩洗碘量瓶，洗液移入棕色分液漏斗，振搖、靜置至完全分層，分有機(jī)層和水層，水層置于盛有石油醚與乙醚體積比為2 1的醚溶液的另一棕色分液漏斗中再次萃取，有有機(jī)層和水層，合并上述兩次有機(jī)層；用去離子水反復(fù)清洗有機(jī)層，直至不顯堿性，有機(jī)層提取液經(jīng)無水硫酸鈉除水、過濾，置于圓底燒瓶中， 35-50°C水浴下氮?dú)獯抵两珊笥眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至刻度試管中，用氮吹儀吹至lmL，再用甲醇定容2mL，經(jīng)過微孔濾膜過濾，上色譜柱分離；2)采用體積比為8 92的10%乙腈甲醇流動(dòng)相分離；流速為0. 3 mL/min ；3) ^6nm、264nm、325nm三波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)維生素A、維生素D和維生素E，維生素A、維生素D和維生素E的檢測(cè)質(zhì)量濃度分別在1. 0-100. 0 μ g/L、
31. 0-100. 0μ g/L、0. 50-50. O mg/L 之間。所述色譜柱ACQUITYUPLC BEH ShieLd RP18 2. ImmX 150mm 1.7 μπι ； 液相系統(tǒng)沃特世ACQUITY UPLC配ACQUITY TUV紫外檢測(cè)器；
柱溫:35°C ； 流動(dòng)相A 10%乙腈； 流動(dòng)相B:甲醇；
檢測(cè)波長(zhǎng)325 nm、265 nm>290 nm ； 分析時(shí)間8 min ； 進(jìn)樣量3 uL； 采用梯度洗脫。本發(fā)明的檢測(cè)方法的主要技術(shù)特點(diǎn)
本發(fā)明采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中維生素A(retin0l)、維生素 D (Vitamin D2和Vitamin D3)和維生素E ( α-Ε、γ-E和δ-Ε)的方法，樣品處理簡(jiǎn)單，方法簡(jiǎn)便易行。并用建立的方法對(duì)奶粉及乳制品中維生素A、D和E進(jìn)行了測(cè)定，在保證原有檢出限的基礎(chǔ)上大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間及耗材，最重要的是能確保較高的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性，并能同時(shí)進(jìn)行Y-E和δ-E的定量檢測(cè)，從而提供更為準(zhǔn)確、可靠性高的檢驗(yàn)結(jié)果。為生產(chǎn)實(shí)踐中的廣泛運(yùn)用，提供進(jìn)行生產(chǎn)工藝分析和大批量檢驗(yàn)的可能。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)為本發(fā)明采用C18色譜柱，流動(dòng)相為10%乙腈和甲醇，流速為0. 3 mL/min, 296 nm、264 nm、325 nm三波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)在1根Cw柱上同時(shí)分離奶粉及乳制品中維生素A、D2、D3、α-Ε、γ-E和δ-E六種脂溶性維生素；維生素Α、維生素D和維生素E的質(zhì)量濃度分別在1. 0-100. 0 μ g/L、l. 0-100. 0 μ g/L、0. 50-50. 0 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限分別為0.8 ng.1.5 ng、90.7 ng，平均回收率分別為99. 1 %、96. 3%、 97. 1%。


圖1五種維生素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖，柱溫35°C ；流動(dòng)相A 10%乙腈；流動(dòng)相B 甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng):325 nm、265 nm、290 nm ；分析時(shí)間8 min ；進(jìn)樣量3 μ L。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明 1. 1材料與方法
1. 1主要儀器和試劑
維生素A、D2、D3、α-Ε、Υ-Ε、和δ-E標(biāo)準(zhǔn)品(含量> 99%)，來自美國(guó)Sigma公司；乙腈、 甲醇為色譜純，石油醚和乙醚為分析純，其他試劑除注明外均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為18.2 M Ω · cm超純水。Waters超高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱反向C18柱，2. 1X150 mm, 1.7 μπι ；Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國(guó)密理博公司)。1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
分別準(zhǔn)確稱取0. 025 g維生素A、D2, D3> α -Ε、γ -E和δ -E于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，配成1 mg/mL維生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，放置于-4°C的冰箱中備用。工作液 測(cè)定前用甲醇稀釋維生素A、D2、D3、α-Ε、γ-E和31儲(chǔ)備液，使?jié)舛确謩e為25、0.5、0.5、 250,250,250 μ g/mL。應(yīng)用液測(cè)定時(shí)先用紫外分光光度法標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度，用脫醛乙醇將工作液稀釋成一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。1.3色譜條件
液相系統(tǒng)沃特世ACQUITY UPLC配ACQUITY TUV紫外檢測(cè)器色譜柱ACQUITY UPLC BEH shieLd RP18 2. ImmX 150mm 1. 7 um 柱溫:35°C 流動(dòng)相A :10%乙腈流動(dòng)相B:甲醇
檢測(cè)波長(zhǎng)325nm、265nm、290nm 分析時(shí)間8min 進(jìn)樣量3 UL0表1梯度洗脫表
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中維生素ADE的含量的方法，1)準(zhǔn)確稱取嬰幼兒食品或乳品樣品，置于棕色碘量瓶中，加入焦性沒食子酸乙醇溶液，震搖，使各組分混合均勻后， 加入KOH水溶液，所述KOH水溶液中的KOH與水體積比為1 :2，搖勻，放置在70-100°C水浴鍋中回流皂化完全后，迅速冷卻后將樣品置于棕色分液漏斗中，接著用石油醚與乙醚體積比為2 1的醚溶液蕩洗碘量瓶，洗液移入棕色分液漏斗，振搖、靜置至完全分層，分有機(jī)層和水層，水層置于盛有石油醚與乙醚體積比為2 1的醚溶液的另一棕色分液漏斗中再次萃取，有有機(jī)層和水層，合并上述兩次有機(jī)層；用去離子水反復(fù)清洗有機(jī)層，直至不顯堿性，有機(jī)層提取液經(jīng)無水硫酸鈉除水、過濾，置于圓底燒瓶中，35-50°C水浴下氮?dú)獯抵两珊笥眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至刻度試管中，用氮吹儀吹至lmL，再用甲醇定容2mL，經(jīng)過微孔濾膜過濾， 上色譜柱分離；2)采用體積比為8 92的10%乙腈甲醇流動(dòng)相分離；流速為0. 3 mL/min ； 3) 296nm,264nm,325nm三波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)維生素A、維生素D和維生素E，維生素A、維生素D 和維生素E的檢測(cè)質(zhì)量濃度分別在1. 0-100. 0 μ g/L、1. 0-100. 0 μ g/L、0. 50-50. 0 mg/L之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嬰幼兒食品和乳品中維生素ADE的含量的方法，其特征在于所述色譜柱:ACQUITY UPLC BEH shieLd RP18 2. ImmX 150mm 1.7 μπι ；液相系統(tǒng)沃特世ACQUITY UPLC配ACQUITY TUV紫外檢測(cè)器；柱溫:35°C ；流動(dòng)相A 10%乙腈；流動(dòng)相B:甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng):325nm>265nm>290nm ；分析時(shí)間:8min ；進(jìn)樣量3 uL；采用梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開一種測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中維生素ADE的含量的方法，包括如下步驟準(zhǔn)確稱取樣品，加入焦性沒食子酸乙醇溶液，加入KOH水溶液皂化完全后，迅速冷卻后將樣品置于棕色分液漏斗中，接著用石油醚與乙醚體積比為21的醚溶液蕩洗碘量瓶，洗液移入棕色分液漏斗，振搖、靜置至完全分層，水層再用裝有醚溶液的另一棕色分液漏斗中再次萃取，合并有機(jī)層；用去離子水反復(fù)清洗有機(jī)層，直至不顯堿性，有機(jī)層除水、過濾，氮?dú)獯抵两珊笥眉状既芙?，用氮吹儀吹至1mL，再用甲醇定容2mL，經(jīng)濾膜過濾，上色譜柱分離；采用10%乙腈∶甲醇流動(dòng)相分離；流速為0.3mL/min；296nm、264nm、325nm三波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)維生素A、維生素D和維生素E，檢測(cè)質(zhì)量濃度分別在1.0-100.0μg/L、1.0-100.0μg/L、0.50-50.0mg/L之間。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102435700SQ201110284680
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月22日
發(fā)明者林玉宙, 陳光耀 申請(qǐng)人:明一(福建)嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)品有限公司