專利名稱：一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條、谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種干化學(xué)測試試條及測試方法，尤其涉及一種轉(zhuǎn)氨酶的干化學(xué)測試試條及檢測方法。
背景技術(shù)：
干化學(xué)測試中的干擾物很多，比如氧化還原反應(yīng)測定中的尿酸、抗壞血酸等的干擾，轉(zhuǎn)氨酶檢測中的丙酮酸干擾，尤其以轉(zhuǎn)氨酶中的丙酮酸干擾較為嚴(yán)重。轉(zhuǎn)氨酶的種類很多，其中以谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)最為重要。谷丙轉(zhuǎn)氨酶又稱丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用；谷草轉(zhuǎn)氨酶又稱門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，是催化谷氨酸與草酰乙酸之間的轉(zhuǎn)氨作用。臨床上，全血、 血清、血漿、組織液中這兩種轉(zhuǎn)氨酶的測定，是心臟病、肌肉疾病、尤其是肝病診斷中非常重要的指標(biāo)。臨床上測定上述兩種轉(zhuǎn)氨酶的方法，主要是使用生化分析儀的液體試劑的方法， 此方法是利用乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶分別催化谷丙轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)物丙酮酸和谷草轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)物草酰乙酸脫氫，消耗煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，引起吸光值在340nm的變化。此變化率與谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有比例關(guān)系，從而得出酶活性。上文提到的反應(yīng)如下谷丙轉(zhuǎn)氨酶
L一丙氨酸+ α一酮戊二酸棚龍_ >丙酮酸+ L—谷氨酸(1)
丙酮酸+ NADH + H+兌麵· L一乳酸+ NAD+(2)谷草轉(zhuǎn)氨酶
L一門冬氨酸+α—酮戊二酸谷I車專草酰乙酸+L—谷氨酸(3)
草酰乙酸+NADH+ H+腹酶 L 一蘋果酸+NAD+(4)此方法耗時、操作復(fù)雜、需要比較大型的儀器；并且在該方法中，隨著反應(yīng)的進行， NADH不斷消耗，340nm的吸光度不斷減少。因為儀器等方面的原因，初始的NADH不能太高， 這使得該方法的測試范圍受到影響，在測試轉(zhuǎn)氨酶高值樣品時容易出現(xiàn)假陰性。干化學(xué)方法具有方便、靈活、污染小、操作簡便等特點。目前，干化學(xué)方法大致可以分為以下幾類以雅培為代表的電化學(xué)方法(如美國專利US6565738)。富士、柯達、強生為代表的多層膜片法(如美國專利US4897347、US5508173、US5462858)。以羅氏為代表的橫向流動干化學(xué)法(如美國專利US4591553、US5508173、US466502;3)。然而，前述方法都存在部分缺陷，比如雅培電化學(xué)法測試谷丙轉(zhuǎn)氨酶，采用谷氨酸氧化酶法氧化反應(yīng)(1)產(chǎn)生谷氨酸，但是存在內(nèi)源性的丙氨酸干擾(比內(nèi)源性的丙酮酸更為常見)，影響測試結(jié)果。而富士為代表的多層膜片法、羅氏為代表的干化學(xué)方法，均采用偶聯(lián)丙酮酸氧化酶法。采用偶聯(lián)丙酮酸氧化酶方法的反應(yīng)過程如下谷丙轉(zhuǎn)氨酶，在反應(yīng)(1)后偶聯(lián)
丙酮酸+ PO43- +O2 + H2O _同_七鸕乙酰磷酸+ H2O2 +CO2 (5)
H2O2+還原態(tài)顯色劑魏側(cè)_ 氧化態(tài)顯色劑+H2O(6)谷草轉(zhuǎn)氨酶，在反應(yīng)(3)后偶聯(lián)
草酰乙酸■姆I臓丙酮酸+CO2(7)
丙酮酸 + PO43- +O2 + H2O _同_七-乙酰磷酸 + H2O2 +CO2 (5)
H2O2+還原態(tài)顯色劑魏側(cè)_ 氧化態(tài)顯色劑+H2O(6)根據(jù)專利US4665023，其試條的結(jié)構(gòu)如圖1所示，血液樣品加在擴散層1上，經(jīng)過濾血膜3濾血后，血漿流到流動墊5上。加樣后lmin，下壓透明的保護層9，試劑層6和酶結(jié)合墊4與流動墊相接觸。固定在試劑層6上的顯色劑、酶底物和固定在酶結(jié)合墊4上的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶復(fù)溶到樣品中，從而產(chǎn)生可檢測的顏色信號。從測試原理中可以清晰地看出，該方法存在內(nèi)源性丙酮酸的干擾。提供顏色信號的丙酮酸，既有酶催化產(chǎn)生的，也有樣品中本身存在的內(nèi)源性丙酮酸。而采用速率法(即測試顯色的變化率)，去除內(nèi)源性干擾需要比較復(fù)雜的光學(xué)儀器，常常采用積分球等光學(xué)器件，并且轉(zhuǎn)氨酶的正常值一般很低，谷丙轉(zhuǎn)氨酶為5U/L 40U/L，谷草轉(zhuǎn)氨酶為8U/L 40U/L，而丙酮酸的正常參考值相對較高，為65 μ mol/L (相當(dāng)于65U/L轉(zhuǎn)氨酶在Imin產(chǎn)生的丙酮酸)，在較短的干化學(xué)測試時間Omin ;3min)內(nèi)，顯色劑顯色的變化率也會在一定程度上受內(nèi)源性丙酮酸的影響，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種測量結(jié)果準(zhǔn)確、制備簡單、測試成本低、檢測操作方便的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條及特別針對谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試試條，還提供一種操作簡便、測試成本較低、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、檢測精度高的用該谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試試條定量檢測血液中谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，所述測試試條包括底襯，所述底襯上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)，所述底襯上還設(shè)置一固定有信號提供試劑和測試反應(yīng)啟動試劑的啟動區(qū)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)是以在通常狀態(tài)下保持非接觸、在測試狀態(tài)下可互相接觸的方式布設(shè)在所述測試試條上。所述的去干擾試劑主要是指能夠去除待測樣品中內(nèi)源性干擾物質(zhì)的反應(yīng)試劑，所述信號提供試劑是指能夠基于內(nèi)源性干擾物質(zhì)的反應(yīng)進而提供背景信號的相應(yīng)試劑，所述的測試反應(yīng)啟動試劑則優(yōu)選包括有能夠啟動分析物反應(yīng)的反應(yīng)試劑、信號產(chǎn)生試劑以及分析反應(yīng)需要的一些生物酶試劑等。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第一種改進，所述加樣區(qū)直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)通過一粘結(jié)件連接在所述底襯上，該粘結(jié)件具有足夠的高度使所述啟動區(qū)的大部分區(qū)域懸置于所述加樣區(qū)上方。在該優(yōu)選的技術(shù)方案中，由于啟動區(qū)懸置于加樣區(qū)上方，因此在通常情況下，加樣區(qū)和啟動區(qū)是以非接觸的狀態(tài)存在；在用該測試試條進行檢測時，只需將啟動區(qū)向下按壓，便可使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸，以啟動相應(yīng)的檢測反應(yīng)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第二種改進，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)被一分隔層隔開，該分隔層設(shè)置為可抽離式的連接方式，以使得該分隔層抽離出測試試條后所述加樣區(qū)和啟動區(qū)能保持接觸。在該優(yōu)選的技術(shù)方案中，由于啟動區(qū)和加樣區(qū)分設(shè)于分隔層的正反面上，因此在通常情況下，加樣區(qū)和啟動區(qū)之間通過分隔層隔離并以非接觸的狀態(tài)存在；在用該測試試條進行檢測時，只需將該分隔層單獨抽離出測試試條，便可使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸，以啟動相應(yīng)的檢測反應(yīng)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第三種改進，所述加樣區(qū)可直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)則通過一鉸接件鉸接于所述底襯的一端，所述鉸接件的轉(zhuǎn)軸軸向與水平面平行或垂直，以使得啟動區(qū)通過旋轉(zhuǎn)后能與所述的加樣區(qū)保持接觸。當(dāng)轉(zhuǎn)軸軸向與水平面平行時，所述啟動區(qū)是通過在豎直平面內(nèi)的翻轉(zhuǎn)實現(xiàn)與加樣區(qū)由非接觸到接觸；當(dāng)轉(zhuǎn)軸軸向與水平面垂直時，所述啟動區(qū)是通過在水平面內(nèi)的旋轉(zhuǎn)實現(xiàn)與加樣區(qū)由非接觸到接觸，此時鉸接件的高度應(yīng)當(dāng)適當(dāng)，以便于啟動區(qū)在旋轉(zhuǎn)平移后能夠剛好接觸到加樣區(qū)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第四種改進，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)分別固定在所述底襯同一面的不同區(qū)域(相互保持一定距離)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)中間的底襯上設(shè)有一折痕線，以使得所述底襯沿折痕線彎折后能使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸。上述的各種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條中，啟動區(qū)可以設(shè)置一試劑層，其作用是啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，優(yōu)選的材料為聚碳酸酯或尼龍，也可以將試劑層上物質(zhì)直接固定在纖維材料中作為試劑層，此時可根據(jù)需要在試劑層上增設(shè)一層透明的保護層，所述保護層優(yōu)選用透明的聚碳酸酯或聚氯乙烯材料制作。上述的各種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條中，具體到加樣區(qū)和啟動區(qū)的結(jié)構(gòu)， 所述加樣區(qū)可以根據(jù)待檢測樣品的需要，由樣品流動墊、擴散層、樣品墊、濾血膜、酶結(jié)合墊中的全部或者幾種構(gòu)成，所述加樣區(qū)優(yōu)選包括固定于底襯上的流動墊和固定于流動墊上的酶結(jié)合墊，所述酶結(jié)合墊上設(shè)有濾血膜、樣品墊、擴散層中的一種或疊加設(shè)置其中的多種。 例如，所述的酶結(jié)合墊上可依次疊加設(shè)置濾血膜、樣品墊和擴散層，又如，在用該測試試條檢測血清時，便可取消濾血膜層。所述啟動區(qū)也可以根據(jù)待檢測樣品的需要，包含試劑層、 酶結(jié)合墊、保護層中的一種或者多種。上述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條中，所述底襯可以采用(透明或者不透明的)高分子聚合材料(如聚乙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯等)制作，但優(yōu)選采用聚氯乙烯 (PVC)、聚碳酸酯、聚酰胺高分子聚合材料制作，底襯的厚度優(yōu)選為50 μ m 300 μ m。所述流動墊可以采用的材料包括玻璃纖維、聚酯纖維、硝酸纖維素膜、聚砜膜、聚醚砜膜等，優(yōu)選采用玻璃纖維、硝酸纖維素膜、聚酯纖維膜或濾紙制作，其厚度優(yōu)選為0. 04mm 0. 2mm。所述酶結(jié)合墊優(yōu)選采用玻璃纖維、纖維素濾紙、聚酯纖維或濾紙制作。所述濾血膜的作用是過濾血細胞，如果待測試樣品為血漿、血清則可不設(shè)置該層，其材料可以是各種玻璃纖維和一些廠家提供的專用濾血膜，優(yōu)選采用不對稱聚砜膜或玻璃纖維制作。所述樣品墊的作用為保持樣品，不讓樣品溢流出來(非必要設(shè)置)，其材料可以為玻璃纖維、聚酯纖維等，優(yōu)選采用玻璃纖維制作。所述擴散層的作用是使待測樣品均勻地滲濾到下層中(非必要設(shè)置)，優(yōu)選采用聚酯纖維或尼龍纖維制成的網(wǎng)布形式，網(wǎng)布孔徑優(yōu)選為40目 150目，纖維直徑優(yōu)選為100 μ π! 500 μ m,網(wǎng)布優(yōu)選為親水性的或親水處理的。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種用上述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條檢測生物酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區(qū)， 所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)與待測樣品液中的去干擾試劑開始進行反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后(通常保持Imin 即可)，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的信號提供試劑和測試反應(yīng)啟動試劑復(fù)溶到待測樣品液中，并開始啟動分析物的測試反應(yīng)，測試反應(yīng)啟動后生成的產(chǎn)物再與所述信號提供試劑進行信號反應(yīng)，根據(jù)信號反應(yīng)測得的信號值，測算出待測生物酶的含量。上述的檢測方法中，所述信號反應(yīng)所產(chǎn)生的可識別信號包括顯色信號、熒光信號、化學(xué)發(fā)光信號中的一種，最優(yōu)選為顯色信號，尤其是采用吸收波長為600nm 700nm的顯色信號。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條，該定量測試試條是由上述的干化學(xué)定量測試試條制成，所述啟動區(qū)上固定的測試反應(yīng)啟動試劑主要是指能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物，所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶(CAT)，所述啟動區(qū)或加樣區(qū)上還固定有過氧化物酶(POD)，所述啟動區(qū)上固定的信號提供試劑包括適用于所述過氧化物酶的顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物。 此外根據(jù)樣品情況，所述加樣區(qū)上可以添加抗壞血酸氧化酶或尿酸氧化酶等物質(zhì)。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種用上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條檢測谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法(不設(shè)置濾血膜、樣品墊和擴散層的情形)，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區(qū)，所述加樣區(qū)上固定的丙酮酸氧化酶、 過氧化氫酶均復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸與待測樣品液中的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的底物復(fù)溶到待測樣品液中，啟動區(qū)或加樣區(qū)上固定的過氧化物酶也已經(jīng)復(fù)溶到待測樣品液中，此時開始啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)啟動后生成的丙酮酸參與偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)反應(yīng)后生成的雙氧水與所述顯色底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色底物顯色的反射率值并通過終點法或速率法測定出谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供另一種谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條， 所述定量測試試條是由上述具有特定加樣區(qū)結(jié)構(gòu)的(該加樣區(qū)內(nèi)包括酶結(jié)合墊、濾血膜、 樣品墊和擴散層)干化學(xué)定量測試試條制成，所述啟動區(qū)上固定的測試反應(yīng)啟動試劑主要是指能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物，所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶，所述啟動區(qū)或加樣區(qū)上還固定有過氧化物酶，所述啟動區(qū)上固定的信號提供試劑包括適用于所述過氧化物酶的顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物；所述酶結(jié)合墊上設(shè)有濾血膜，所述濾血膜上設(shè)有樣品墊，所述樣品墊上設(shè)有擴散層。擴散層、樣品墊和濾血膜中可添加緩沖體系、表面活性劑、防溶血試劑(如糖類)、鹽類(如氯化鈉)等。作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供用上述第二種的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條檢測谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液滴加到所述測試試條加樣區(qū)的擴散層上，使待測樣品液依次流經(jīng)樣品墊和濾血膜并逐漸浸潤到所述酶結(jié)合墊上，所述加樣區(qū)上固定的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶均復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸與待測樣品液中的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的底物復(fù)溶到待測樣品液中，啟動區(qū)或加樣區(qū)上固定的過氧化物酶也已經(jīng)復(fù)溶到待測樣品液中，此時開始啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)啟動后生成的丙酮酸參與偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)反應(yīng)后生成的雙氧水與所述顯色底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色底物顯色的反射率值并通過終點法或速率法測定出谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條中，所述丙酮酸氧化酶的濃度優(yōu)選為 30KU/L 300KU/L。上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條中，所述過氧化物酶的濃度優(yōu)選為30KU/L 200KU/L。上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條中，所述過氧化氫酶的濃度為1KU/L 200KU/L。上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條中，所述顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物的濃度優(yōu)選為ImM 50mM。上述技術(shù)方案中，顯色劑的選用可根據(jù)實際需要進行確定(已有US4591553、US5274095、US5162200、US4666023等美國專利文獻提及)。 如果顯色劑體系只包括一種組分，則該組分固定在啟動區(qū)的試劑層上即可，如果顯色劑體系包含多種組分，則至少有一種組分固定在啟動區(qū)的試劑層上。上述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條中，所述啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物優(yōu)選包括 α -酮戊二酸，所述α -酮戊二酸的濃度優(yōu)選為5mM 300mM ；所述啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物還優(yōu)選包括用于檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶的L-丙氨酸或者用于檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶的L-門冬氨酸。事實上，如果固定于啟動區(qū)的啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物包括了 α -酮戊二酸，那么諸如L-丙氨酸、L-門冬氨酸等物質(zhì)也可以固定在加樣區(qū)上。如無特別提及，本發(fā)明中試條上所附著物質(zhì)的濃度均是指在制備該試條時用于潤濕載體膜所選用的該物質(zhì)溶液的濃度，例如上述的顯色劑濃度即是指在制備試條時用于潤濕載體膜所選用的該顯色劑溶液的濃度。綜上所述，本發(fā)明的測試試條中反應(yīng)體系可以包括緩沖體系、轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)底物、 防溶血試劑、丙酮酸氧化酶(濃度優(yōu)選為30KU/L 300KU/L)、過氧化物酶(濃度優(yōu)選為 30KU/L 200KU/L)、轉(zhuǎn)氨酶激活劑、焦磷酸硫胺素(ΤΡΡ，濃度優(yōu)選為0. 4mg/ml lmg/ml)、 黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD，濃度優(yōu)選為0. lmg/ml 0. 2mg/ml)、表面活性劑、顯色劑、丙酮酸激活劑(如Mg2+、Mn2+，優(yōu)選為0. OlM 0. IM的Mg2+)、谷丙、谷草轉(zhuǎn)氨酶激活劑(優(yōu)選為 ImM 500mM的5’ -磷酸吡哆醛)、穩(wěn)定劑等。其中，包括緩沖體系在內(nèi)的各非主要組分的選擇、濃度及酶的活性均可以由本領(lǐng)域人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)自行確定(可參考US427U65、 US4666832、US4591553等美國專利文獻)。TPP、FAD、表面活性劑、激活劑等物質(zhì)均可固定在加樣區(qū)上。本發(fā)明的上述谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條及檢測方法主要基于以下原理在偶聯(lián)丙酮酸氧化酶的基礎(chǔ)上，通過再加入過氧化氫酶可以非常有效地去除內(nèi)源性物質(zhì)丙酮
8酸的干擾，因為內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸產(chǎn)生的H2O2(參見上述反應(yīng)(5))均已被過氧化氫酶通過下述反應(yīng)(8)去除掉，因此參與后續(xù)顯色反應(yīng)的H2O2 (參見上述反應(yīng)(6))均是由轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化而來。
H2O2 賄德酶_ H2O + O2(8)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于通過采用本發(fā)明的測試試條和檢測方法可以更加準(zhǔn)確、便捷地對谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶進行定性檢測和定量分析，而且本發(fā)明的測試試條結(jié)構(gòu)簡單，便于制作，檢測方法操作方便、快捷，無需新增其他儀器或設(shè)備，符合床邊的診斷(POCT)的要求，適合醫(yī)院急診、病房、用戶自己、社區(qū)醫(yī)院等使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1為現(xiàn)有技術(shù)中干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本發(fā)明實施例1提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為本發(fā)明實施例2提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖4為本發(fā)明實施例3提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖5為本發(fā)明實施例4提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖6為本發(fā)明實施例5提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖7為本發(fā)明實施例6提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖(俯視)。圖8為本發(fā)明實施例6提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的結(jié)構(gòu)示意圖(主視)。圖9為本發(fā)明實施例2提供的去干擾的干化學(xué)定量測試試條的另一變換形式。圖10為本發(fā)明實施例7中給出的對比例2對谷丙轉(zhuǎn)氨酶進行定量測試時建立的直線回歸方程。圖11為本發(fā)明實施例7和對比例1中反射率值的對比圖。圖12為本發(fā)明對比例4中對谷草轉(zhuǎn)氨酶進行定量測試時建立的直線回歸方程。圖13為本發(fā)明實施例8和對比例3中反射率值的對比圖。圖例說明1、擴散層；2、樣品墊；3、濾血膜；4、酶結(jié)合墊；5、流動墊；6、試劑層；7、底襯；8、粘結(jié)件；9、保護層；10、鉸接件；11、折痕線；12、分隔層；13、加樣區(qū)；14、啟動區(qū)。
具體實施例方式以下結(jié)合說明書附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步描述。實施例1 一種如圖2所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，該測試試條包括底襯7，底襯 7上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)13 (本實施例中具體包括擴散層1、樣品墊2、濾血膜 3、酶結(jié)合墊4和流動墊幻，加樣區(qū)13直接固定在底襯7上；底襯7上還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)14，啟動區(qū)14包括一試劑層6，試劑層6通過一粘
9結(jié)件8連接在底襯7的一端，該粘結(jié)件8具有足夠的高度使試劑層6的大部分區(qū)域懸置于加樣區(qū)13的上方。加樣區(qū)13和啟動區(qū)14在通常狀態(tài)下保持非接觸，在測試狀態(tài)下可通過向下按壓啟動區(qū)14 (試劑層6)使其與加樣區(qū)13 (具體為加樣區(qū)13的流動墊幻互相接觸。本實施例中，加樣區(qū)13包括固定于底襯7上的流動墊5，流動墊5的一端固定酶結(jié)合墊4，酶結(jié)合墊4的上方依次設(shè)置濾血膜3、樣品墊2和擴散層1，且擴散層1、樣品墊2、濾血膜3、酶結(jié)合墊4和流動墊5的一側(cè)通過粘結(jié)件8相互連接，并最終固定在底襯7上。啟動區(qū)14的試劑層6具體設(shè)置在加樣區(qū)13的流動墊5上方。去干擾試劑固定在酶結(jié)合墊4 或流動墊5上，測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑固定在試劑層6上。一種用上述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條檢測生物酶的方法(適合全血測試、血清、血漿等)，包括以下步驟首先將待測樣品液(如全血)添加到測試試條加樣區(qū) 13的擴散層1上，經(jīng)過樣品墊2、濾血膜3以過濾血細胞，血漿復(fù)溶酶結(jié)合墊4或流動墊5 上的去干擾試劑，最后滲透到流動墊5上，待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)與復(fù)溶的去干擾試劑開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過Imin左右的孵化過程后，再使測試試條的啟動區(qū)14 的試劑層6與加樣區(qū)13的流動墊5相接觸，啟動區(qū)14上固定的測試反應(yīng)啟動試劑(包括反應(yīng)底物)和信號提供試劑等復(fù)溶到待測樣品液中，并開始啟動分析物的測試反應(yīng)，測試反應(yīng)啟動后生成的產(chǎn)物再與信號提供試劑進行信號反應(yīng)，根據(jù)信號反應(yīng)測得的反射率值， 測算出待測生物酶的含量。實施例2 一種如圖3所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，該測試試條包括底襯7，底襯 7上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)13 (本實施例中具體包括擴散層1、樣品墊2、濾血膜 3、酶結(jié)合墊4和流動墊幻，加樣區(qū)13直接固定在底襯7上；底襯7上還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)14，啟動區(qū)14包括一試劑層6，試劑層6通過一粘結(jié)件8連接在底襯7的一端，該粘結(jié)件8具有足夠的高度使試劑層6的大部分區(qū)域懸置于加樣區(qū)13的上方。加樣區(qū)13和啟動區(qū)14在通常狀態(tài)下保持非接觸，在測試狀態(tài)下可通過向下按壓啟動區(qū)14 (試劑層6)使其與加樣區(qū)13 (具體指加樣區(qū)13中的酶結(jié)合墊4)互相接觸。本實施例中，加樣區(qū)13包括固定于底襯7上的流動墊5，流動墊5的一端(靠近啟動區(qū)14的一端)固定有酶結(jié)合墊4，另一端固定有濾血膜3，濾血膜3的上方依次設(shè)置有樣品墊2和擴散層1，且擴散層1、樣品墊2、濾血膜3和流動墊5的一側(cè)通過粘結(jié)件8相互連接，并最終固定在底襯7上。啟動區(qū)14的試劑層6具體設(shè)置在加樣區(qū)13的酶結(jié)合墊4上方。去干擾試劑固定在酶結(jié)合墊4或流動墊5上，測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑固定在試劑層6上。由上可見，相比于實施例1，實施例2僅僅是將酶結(jié)合墊4的位置作了調(diào)整和優(yōu)化， 即將酶結(jié)合墊4固定在流動墊5靠近啟動區(qū)14的一端，在進行檢測時，通過向下按壓啟動區(qū)14可以使其先與酶結(jié)合墊4接觸，本實施例可以很好地避免酶釋放的不同引起的偏差。 除此之外，酶結(jié)合墊4還可設(shè)置在試劑層6的下方，如圖9所示，使其成為啟動區(qū)14的一部分，此時去干擾試劑應(yīng)固定在流動墊5上。實施例3 一種如圖4所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，相比于實施例1提供的測試試條，本實施例的測試試條不設(shè)酶結(jié)合墊4，其余的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用方式與實施例1相同。由于不設(shè)酶結(jié)合墊4，原先固定在酶結(jié)合墊4上的物質(zhì)(例如各種催化反應(yīng)酶)可以直接固定在加樣區(qū)13的其他結(jié)構(gòu)(例如流動墊5)上。實施例4 一種如圖5所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，該測試試條包括底襯7，底襯 7上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)13 (包括流動墊5、酶結(jié)合墊4、濾血膜3、樣品墊2 和擴散層1等)，加樣區(qū)13直接固定在底襯7上；底襯7上還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)14，啟動區(qū)14包括一試劑層6，試劑層6也直接固定在底襯 7上，加樣區(qū)13和啟動區(qū)14通過一分隔層12相互隔離。分隔層12設(shè)置為可抽離式的連接方式，加樣區(qū)13和啟動區(qū)14在通常狀態(tài)下保持非接觸，在測試狀態(tài)下可通過抽離分隔層 12使位于其正、反面的加樣區(qū)13與啟動區(qū)14互相保持接觸。本實施例中，加樣區(qū)13的流動墊5 —部分直接固定于底襯7上的，一部分則位于分隔層12上方，流動墊5的一端上方設(shè)置有酶結(jié)合墊4，酶結(jié)合墊4的上方依次設(shè)置有濾血膜3、樣品墊2和擴散層1。去干擾試劑固定在酶結(jié)合墊4上，測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑固定在試劑層6上。本實施例的測試試條用于檢測時的操作方法與實施例1相似，即首先將待測樣品液(全血)添加到測試試條加樣區(qū)13的擴散層1上，經(jīng)過樣品墊2、濾血膜3以過濾血細胞，血漿復(fù)溶酶結(jié)合墊4 (或流動墊幻上的去干擾試劑，最后滲透到流動墊5上，待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)與復(fù)溶的去干擾試劑開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過Imin左右的孵化過程后，再抽離分隔層12使測試試條的啟動區(qū)14的試劑層6與加樣區(qū)13的流動墊5 相接觸，啟動區(qū)14上固定的測試反應(yīng)啟動試劑(包括反應(yīng)底物)和信號提供試劑等復(fù)溶到待測樣品液中，并開始啟動分析物的測試反應(yīng)，測試反應(yīng)啟動后生成的產(chǎn)物再與信號提供試劑進行信號反應(yīng)，根據(jù)信號反應(yīng)測得的反射率值，測算出待測生物酶的含量。實施例5 —種如圖6所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，該測試試條包括透明的底襯 7，底襯7上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)13(包括擴散層1、樣品墊2、濾血膜3、酶結(jié)合墊4、流動墊5等)，加樣區(qū)13直接固定在底襯7上的一端；底襯7上還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)14，啟動區(qū)14包括一試劑層6，試劑層6直接固定在底襯7的另一端。加樣區(qū)13和啟動區(qū)14相互隔開一定距離，使加樣區(qū)13和啟動區(qū)14 在通常狀態(tài)下保持非接觸，加樣區(qū)13和啟動區(qū)14中間的底襯7上還設(shè)有一折痕線11，在測試狀態(tài)下可沿該折痕線11翻折，使位于一端的啟動區(qū)14與另一端的加樣區(qū)13互相接觸。 本實施例中，加樣區(qū)13的流動墊5直接固定于底襯7上，流動墊5上依次設(shè)置有酶結(jié)合墊 4、濾血膜3、樣品墊2和擴散層1。去干擾試劑固定在酶結(jié)合墊4上，測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑固定在試劑層6上。實施例6:—種如圖7和圖8所示的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，該測試試條包括底襯 7，底襯7上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)13(包括擴散層1、樣品墊2、濾血膜3、酶結(jié)合墊4、流動墊5等)，加樣區(qū)13直接固定在底襯7上；底襯7上還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)14，啟動區(qū)14包括一試劑層6和保護層9，保護層9位于試劑層6的上方，試劑層6通過一鉸接件10連接在底襯7的一端，該鉸接件10具有適當(dāng)?shù)母叨?，使啟動區(qū)14經(jīng)水平旋移后試劑層6的大部分區(qū)域能剛好與加樣區(qū)13相接觸。在通常狀態(tài)下，啟動區(qū)14旋轉(zhuǎn)偏離于加樣區(qū)13 (如圖7所示)，與加樣區(qū)13保持非接觸狀態(tài)， 在測試狀態(tài)下可通過繞鉸接件10旋轉(zhuǎn)啟動區(qū)14使其與加樣區(qū)13互相接觸。本實施例中，加樣區(qū)13的流動墊5直接固定于底襯7上，流動墊5的一端固定有酶結(jié)合墊4，酶結(jié)合墊4的上方依次設(shè)置有濾血膜3、樣品墊2和擴散層1。酶結(jié)合墊4、濾血膜3、樣品墊2和擴散層1均設(shè)置于流動墊5的一側(cè)，另一側(cè)余出的空間便于與啟動區(qū)14 的試劑層6進行接觸。去干擾試劑固定在流動墊5上，測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑固定在試劑層6上。實施例7 —種本發(fā)明的谷丙轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條(GPT測試試條)，該定量測試試條是由上述實施例5的干化學(xué)定量測試試條制成。該測試試條包括底襯7，底襯7采用透明的聚碳酸酯(PC)板，其厚度為0. 3mm。底襯7上方的中部設(shè)有流動墊5，本實施例中流動墊5的制作方法為將含有0. 5M 的L-丙氨酸PBS溶液(濃度為0. 1M，pH = 7. 2)噴涂在約10 μ m孔徑的硝酸纖維素膜上，干燥。流動墊5上方的一端設(shè)有酶結(jié)合墊4，本實施例中酶結(jié)合墊4的制作方法為將含有100KU/L過氧化物酶、200KU/L丙酮酸氧化酶、100KU/L的過氧化氫酶的PBS溶液(濃度為0. 1M，pH = 7. 2)噴涂在0. 09mm厚的聚酯纖維膜上，干燥。酶結(jié)合墊4上設(shè)有濾血膜3，材料為玻璃纖維，不處理。濾血膜3上設(shè)有樣品墊2，本實施例中樣品墊2的制作方法為將含1 % (w/w) NaCl 溶液噴涂在厚為0. 36mm的玻璃纖維上，干燥。樣品墊2上還設(shè)有擴散層1，擴散層1為聚酯纖維制成的網(wǎng)布形式，孔徑為80目。上述底襯7上的一端還設(shè)有一試劑層6，本實施例中試劑層6的制作方法為將含有0. IMa-酮戊二酸、5mM 4_氨基安替比林(第一顯色劑)、2mM THBHA (色原劑)的溶液噴涂在厚度為0. 175mm的單面磨砂的聚碳酸酯薄片上，干燥。該試劑層6是通過粘合的方式組裝在底襯7的一端。由圖6可見，該試劑層6位于流動墊5的一側(cè)，且在常態(tài)下(即未用于檢測前)加樣區(qū)13和啟動區(qū)14相互隔開一定距離，試劑層6與流動墊5保持非接觸方式，由于加樣區(qū)13和啟動區(qū)14中間的底襯7上還設(shè)有一折痕線11，在進行檢測過程中，當(dāng)待測樣品液滲透到流動墊5上時，試劑層6可通過包括翻折之類的任何方式與流動墊5相接觸。其中，啟動區(qū)14固定的測試反應(yīng)啟動試劑主要是指能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物， 具體到本實施例中，試劑層6上固定有適用于過氧化物酶的顯色劑和能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物(即上述的a -酮戊二酸)。加樣區(qū)13上固定的去干擾試劑主要包括上述酶結(jié)合墊 4上固定的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶等。將一系列不同濃度的谷丙轉(zhuǎn)氨酶使用生化分析儀試劑盒定值(濃度值見下表1)， 然后分別取30 μ L不同濃度的谷丙轉(zhuǎn)氨酶溶液作為待測樣品，各待測樣品中均含有干擾物丙酮酸(濃度為100 μ Μ)，通過上述的本實施例的測試試條和以下方法步驟測試待測樣品中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量待測樣品液首先滴加到測試試條的擴散層1上，使待測樣品液依次流經(jīng)樣品墊2和濾血膜3并逐漸浸潤到酶結(jié)合墊4上，酶結(jié)合墊4上固定的催化反應(yīng)酶(包括上述的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶和過氧化氫酶等)復(fù)溶到待測樣品液中，待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸與前述的催化反應(yīng)酶進行反應(yīng)，待測樣品液繼續(xù)滲透到流動墊5上，經(jīng)過一段孵化過程(通常為lmin)后，使測試試條的試劑層6與流動墊5相接觸， 試劑層6上固定的底物(α-酮戊二酸)和顯色劑等復(fù)溶到待測樣品液中，并開始啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)啟動后生成的丙酮酸參與偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)反應(yīng)后生成的雙氧水與顯色劑進行顯色反應(yīng)，2min后根據(jù)顯色劑顯色的反射率值并通過終點法(或速率法)測定出谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量(反射率值如下表1所示)。在上述的檢測方法中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶還沒有啟動反應(yīng)之前，內(nèi)源性干擾物丙酮酸已經(jīng)通過催化反應(yīng)去除。同樣取以上系列不同濃度的谷丙轉(zhuǎn)氨酶溶液作為待測樣品液，但各待測樣品液中不含干擾物丙酮酸，同樣采用上述的測試試條及測試方法對這些待測樣品液進行測試，測試結(jié)果如下表1所示，作為上述實施例的對比例1。同樣取以上系列不同濃度的谷丙轉(zhuǎn)氨酶溶液作為待測樣品液，但各待測樣品液中不含干擾物丙酮酸，同樣采用上述的測試試條(但測試試條的酶結(jié)合墊上不含有過氧化氫酶)及測試方法對這些待測樣品液進行測試，測試結(jié)果如下表1所示，作為上述實施例的對比例2。表1 實施例7與其對比例測得的不同濃度待測樣品液的反射率值
權(quán)利要求
1.一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，所述測試試條包括底襯，所述底襯上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)，所述底襯上還設(shè)置一固定有信號提供試劑和測試反應(yīng)啟動試劑的啟動區(qū)，其特征在于所述加樣區(qū)和啟動區(qū)是以在通常狀態(tài)下保持非接觸、在測試狀態(tài)下可互相接觸的方式布設(shè)在所述測試試條上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于所述加樣區(qū)直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)通過一粘結(jié)件連接在所述底襯上，該粘結(jié)件具有足夠的高度使所述啟動區(qū)的大部分區(qū)域懸置于所述加樣區(qū)上方，且該啟動區(qū)可通過下壓與所述加樣區(qū)保持接觸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于所述加樣區(qū)和啟動區(qū)被一分隔層隔開，該分隔層為可抽離式連接方式，以使得該分隔層被抽離出測試試條后所述加樣區(qū)和啟動區(qū)能保持接觸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于所述加樣區(qū)直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)通過一鉸接件鉸接于所述底襯的一端，所述鉸接件的轉(zhuǎn)軸軸向與水平面平行或垂直，以使得啟動區(qū)通過旋轉(zhuǎn)后能與所述的加樣區(qū)保持接觸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于所述加樣區(qū)和啟動區(qū)分別固定在所述底襯同一面的不同區(qū)域，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)中間的底襯上設(shè)有一折痕線，以使得所述底襯沿折痕線彎折后能使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于 所述啟動區(qū)上方覆蓋有一保護層，所述保護層選用透明的聚碳酸酯或聚氯乙烯材料制作。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，其特征在于 所述加樣區(qū)包括固定于底襯上的流動墊、酶結(jié)合墊、濾血膜、樣品墊、擴散層中的一種或疊加設(shè)置其中的多種。
8.一種用權(quán)利要求1 7中任一項所述的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條檢測生物酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區(qū)，所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)與待測樣品液中的去干擾試劑開始進行反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的信號提供試劑和測試反應(yīng)啟動試劑復(fù)溶到待測樣品液中， 并開始啟動分析物的測試反應(yīng)，測試反應(yīng)啟動后生成的產(chǎn)物再與所述信號提供試劑進行信號反應(yīng)，根據(jù)信號反應(yīng)測得的信號值，測算出待測生物酶的含量；所述信號反應(yīng)所產(chǎn)生的可識別信號包括顯色信號、熒光信號、化學(xué)發(fā)光信號中的一種。
9.一種谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條，其特征在于所述定量測試試條是由權(quán)利要求1 6中任一項所述的干化學(xué)定量測試試條制成，所述啟動區(qū)上固定的測試反應(yīng)啟動試劑主要是指能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物，所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶，所述啟動區(qū)或加樣區(qū)上還固定有過氧化物酶，所述啟動區(qū)上固定的信號提供試劑包括適用于所述過氧化物酶的顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物。
10.一種谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條，其特征在于所述定量測試試條是由權(quán)利要求7所述的干化學(xué)定量測試試條制成，所述啟動區(qū)上固定的測試反應(yīng)啟動試劑主要是指能夠啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物，所述加樣區(qū)上固定的去干擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶，所述啟動區(qū)或加樣區(qū)上還固定有過氧化物酶，所述啟動區(qū)上固定的信號提供試劑包括適用于所述過氧化物酶的顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物；所述酶結(jié)合墊上設(shè)有濾血膜，所述濾血膜上設(shè)有樣品墊，所述樣品墊上設(shè)有擴散層。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條，其特征在于所述丙酮酸氧化酶的濃度為30KU/L 600KU/L，所述過氧化氫酶的濃度為1KU/L 1000KU/L， 所述過氧化物酶的濃度為30KU/L 600KU/L，所述顯色底物、熒光底物或化學(xué)發(fā)光底物的濃度為ImM 50mM。
12.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條，其特征在于所述啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物包括α -酮戊二酸，所述α -酮戊二酸的濃度為5mM 300mM ；所述啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)的底物還包括用于檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶的L-丙氨酸或者用于檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶的L-門冬氨酸，所述L-丙氨酸的濃度為0. OlM 1M，所述L-門冬氨酸的濃度為0. OlM 1M。
13.一種用權(quán)利要求9所述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條檢測谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區(qū)，所述加樣區(qū)上固定的丙酮酸氧化酶、過氧化氫酶均復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸與待測樣品液中的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的底物復(fù)溶到待測樣品液中，啟動區(qū)或加樣區(qū)上固定的過氧化物酶也已經(jīng)復(fù)溶到待測樣品液中，此時開始啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)啟動后生成的丙酮酸參與偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)反應(yīng)后生成的雙氧水與所述顯色底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色底物顯色的反射率值并通過終點法或速率法測定出谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。
14.一種用權(quán)利要求10所述的谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶定量測試試條檢測谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液滴加到所述測試試條加樣區(qū)的擴散層上，使待測樣品液依次流經(jīng)樣品墊和濾血膜并逐漸浸潤到所述酶結(jié)合墊上，所述加樣區(qū)上固定的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶均復(fù)溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內(nèi)源性干擾物質(zhì)丙酮酸與待測樣品液中的丙酮酸氧化酶和過氧化氫酶開始進行去干擾反應(yīng)，經(jīng)過一段孵化過程后，再使所述測試試條的啟動區(qū)與加樣區(qū)相接觸，啟動區(qū)上固定的底物復(fù)溶到待測樣品液中，啟動區(qū)或加樣區(qū)上固定的過氧化物酶也已經(jīng)復(fù)溶到待測樣品液中，此時開始啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)啟動后生成的丙酮酸參與偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)反應(yīng)后生成的雙氧水與所述顯色底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色底物顯色的反射率值并通過終點法或速率法測定出谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，包括底襯，其上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)，還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)，加樣區(qū)和啟動區(qū)是以在通常狀態(tài)下保持非接觸、在測試狀態(tài)下可互相接觸的方式布設(shè)在測試試條上。測試方法是將待測樣品液添加到加樣區(qū)，加樣區(qū)上固定的物質(zhì)復(fù)溶到待測樣品液中，開始進行去干擾反應(yīng)；再使啟動區(qū)與加樣區(qū)接觸，啟動區(qū)上固定的物質(zhì)復(fù)溶，開始進行測試反應(yīng)，產(chǎn)物再進行信號反應(yīng)，根據(jù)測得的信號值測算出待測生物酶的含量。本發(fā)明的檢測方法操作簡便、測試成本較低、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、檢測精度高，能夠具體用于谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試。
文檔編號G01N21/78GK102419366SQ201110240460
公開日2012年4月18日 申請日期2011年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月19日
發(fā)明者吉翔, 李宗祥, 謝光, 車宏莉 申請人:長沙三諾生物傳感技術(shù)股份有限公司