專利名稱：涼粉草藥材指紋圖譜的建立及其指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及涼粉草藥材高效液相色譜法指紋圖譜的構(gòu)建方法和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
背景技術(shù)：
涼粉草(Mesonei Blume)又名仙人草、仙草、仙人凍、薪草，為唇形科仙草屬一年生草本植物，目前中國有 3 種，分別為i/· chinensisBenth，Μ. paruifsota (Benth)Brea, Μ. procum-bens Hemsl，分布于我國的廣東、福建、廣西、江西、海南、浙江、臺灣和云南等地，其他國家如印度、印度尼西亞、馬來西亞也有分布。涼粉草可入藥，據(jù)《本草求原》記載，涼粉草清暑熱，解藏府結(jié)熱毒，治酒風(fēng)。可治中暑、關(guān)節(jié)炎、高血壓、糖尿病、急性傳染性肝炎、痢疾、腹瀉、結(jié)合膜炎等癥。涼粉草也可作為食品工業(yè)的原材料，如涼粉草的莖、葉加水煎汁可制成涼粉凍，以涼粉草為原料制成各種飲料，還可從涼粉草中提取涼粉草膠、綠色素等?？傊瑳龇鄄莸膽?yīng)用極為廣泛。然而，在涼粉草藥材質(zhì)量控制方面，目前為止沒有一種能全面表征涼粉草藥材質(zhì)量的方法。因此，為了使涼粉草能夠進一步的得到充分利用，規(guī)范涼粉草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 保證涼粉草藥材的質(zhì)量，解決涼粉草藥材質(zhì)量參差不齊的問題，對涼粉草藥材的質(zhì)量控制方法有待于開發(fā)建立。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為涼粉草藥材的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供一個新的方法，通過建立涼粉草藥材指紋圖譜的方法，并由此方法得到?jīng)龇鄄菟幉墓灿心Ｊ降闹讣y圖譜。為達到本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案用高效液相色譜法建立涼粉草藥材指紋圖譜的方法，具體包括如下步驟
①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續(xù)濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；
③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；紫外檢測波長為300 360nm ；
④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。進一步優(yōu)選的方法可以通過下述步驟實施
①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉(二號篩)1.0 5. Og,置于100 500mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 250mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；
③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為 1. 0% 3. 0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；柱溫20 40°C ；紫外檢測波長為300 360nm ；流速0. 5 1. 2mL · mirT1 ；時間90min 120min ；
④、測定精密吸取供試品溶液10 20μ L注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。本發(fā)明最佳的檢測方法可以通過下述步驟實施
步驟②供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉(二號篩)l.og，置于IOOmL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液適量，以0. 22 μ m微孔濾膜濾過， 即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相為1甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫25°C ；檢測波長為320nm ；流速為0. SmL · mirT1 ；分析時間為 95min。在步驟③中，所述的梯度洗脫，優(yōu)選梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行 0分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的21的甲酸溶液；
18分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 25分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 60分鐘時，流動相A為24%的乙腈溶液、流動相B為76%的m的甲酸溶液； 65分鐘時，流動相A為34%的乙腈溶液、流動相B為66%的m的甲酸溶液； 80分鐘時，流動相A為45%的乙腈溶液、流動相B為55%的m的甲酸溶液； 90分鐘時，流動相A為60%的乙腈溶液、流動相B為40%的m的甲酸溶液； 95分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的m的甲酸溶液。具體見下表
權(quán)利要求
1.一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續(xù)濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為300 360nm ；④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟②供試品溶液的制備，采用精密稱取涼粉草藥材粗粉1. 0 5. Og,置于100 500mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 250mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；所述步驟③色譜條件，采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為1. 0% 3. 0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；柱溫20 40°C ；紫外檢測波長為 300 360nm ；流速0. 5 1. 2mL · mirT1 ；時間90min 120min ；所述步驟④測定，采用精密吸取供試品溶液10 20 μ L注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟②供試品溶液的制備，采用精密稱取涼粉草藥材粗粉1. 0g，置于IOOmL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液適量，以0. 22 μ m微孔濾膜濾過， 即得供試品溶液；所述步驟③色譜條件中流動相為2、甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫25°C ；檢測波長為320nm ；流速為0. 8mL · mirT1 ；分析時間為95min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟③色譜條件中所述的梯度洗脫，梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行 0分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的21的甲酸溶液；18分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 25分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 60分鐘時，流動相A為24%的乙腈溶液、流動相B為76%的m的甲酸溶液； 65分鐘時，流動相A為34%的乙腈溶液、流動相B為66%的m的甲酸溶液； 80分鐘時，流動相A為45%的乙腈溶液、流動相B為55%的m的甲酸溶液； 90分鐘時，流動相A為60%的乙腈溶液、流動相B為40%的m的甲酸溶液； 95分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的m的甲酸溶液。
5.一種涼粉草藥材的指紋圖譜，其特征在于涼粉草藥材指的紋圖譜的建立，具體包括如下步驟①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續(xù)濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為300 360nm ；④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜；所述指紋圖譜中有10個特征共有峰，其中1號色譜峰為咖啡酸參照峰，最強峰為7號色譜峰，圖譜總長度為90min，具體如下1號峰，平均保留時間RT為15. 58min，RSD為0. 03%,峰面積為448. 251，RSD為57. 12% ； 2號峰，平均保留時間RT為27. 63min, RSD為0. 03%,峰面積為968. 365，RSD為41. 74% ； 3號峰，平均保留時間RT為29. 27min, RSD為0. 03%,峰面積為209. 201，RSD為44. 44% ； 4號峰，平均保留時間RT為34. 67min，RSD為0. 03%,峰面積為831. 631，RSD為67. 58% ； 5號峰，平均保留時間RT為38. 77min，RSD為0. 02%,峰面積為551. 551，RSD為40. 45% ； 6號峰，平均保留時間RT為43. 75min, RSD為0. 03%,峰面積為1946. 438，RSD為 40. 97% ；7號峰，平均保留時間RT為48. 02min, RSD為0. 02%,峰面積為2觀3. 524，RSD為 57. 81% ；8號峰，平均保留時間RT為51. 03min,RSD為0. 02%,峰面積為637. 764，RSD為41. 03% ； 9號峰，平均保留時間RT為58. 26min，RSD為0. 02%,峰面積為815. 393，RSD為41. 34% ； 10號峰，平均保留時間RT為69. 94min，RSD為0. 00%，峰面積為307. 076，RSD為46. 52%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立及其指紋圖譜，涉及中藥藥材的質(zhì)量控制方法，具體是建立HPLC指紋圖譜以檢測涼粉草藥材提取液的方法。本發(fā)明步驟為，先對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為1.0%～3.0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫20～40℃，紫外檢測波長為300～360nm，時間90min～120min；高效液相色譜法測得指紋圖譜。本發(fā)明的有益效果能有效表征涼粉草藥材的質(zhì)量，有利于監(jiān)控藥材的質(zhì)量；具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好；可快速、準(zhǔn)確地鑒別藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。
文檔編號G01N30/14GK102269748SQ20111009452
公開日2011年12月7日 申請日期2011年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月15日
發(fā)明者丁婕, 賴小平, 黃松 申請人:東莞廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院