專利名稱：一種多重檢測(cè)免疫層析芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種多重檢測(cè)免疫層析芯片
發(fā)明領(lǐng)域本實(shí)用新型屬于免疫診斷技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種多重檢測(cè)免疫層析芯片，將免疫層 析技術(shù)與芯片技術(shù)有機(jī)融合，可以實(shí)現(xiàn)一份樣品中多種目標(biāo)被檢物的同時(shí)檢測(cè)。
背景技術(shù)：
免疫層析技術(shù)是一種成熟的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)，其物理結(jié)構(gòu)包括以下幾個(gè)部分 粘性底襯、樣品墊、結(jié)合墊、分析膜以及吸水墊，其中結(jié)合墊中固定有示蹤物-生物活性分 子的結(jié)合物，而分析膜上則固定有不同種類的生物分子作為檢測(cè)帶和質(zhì)控帶。樣品墊、結(jié) 合墊、分析膜以及吸水墊按照一定的重疊關(guān)系固定于粘性底襯，從而保證了液體在層析試 紙內(nèi)部流動(dòng)的連續(xù)性。檢測(cè)的過(guò)程中操作者只需將液體樣品滴加于樣品墊上，樣品滲透入 結(jié)合墊使其中固定的結(jié)合物重新溶解游離，并在吸水墊以及毛細(xì)作用的帶動(dòng)下，通過(guò)檢測(cè) 帶與質(zhì)控帶向吸水墊的方向移動(dòng)，在這一過(guò)程中將根據(jù)樣品中目標(biāo)被檢物的有無(wú)，在檢測(cè) 帶與質(zhì)控帶上發(fā)生特異的免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。由于所有檢測(cè)所需的生物試 劑已經(jīng)全部固定于成品試紙，操作者只需完成滴加液體樣品的過(guò)程，且整個(gè)檢測(cè)流程只需 10-15分鐘，因而免疫層析是最為簡(jiǎn)便、快捷的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)手段，但其通常只能對(duì)一種靶標(biāo)進(jìn) 行分析，高通量檢測(cè)未能實(shí)現(xiàn)。芯片技術(shù)的產(chǎn)生便是順應(yīng)了生物分析對(duì)于靶標(biāo)(核酸或蛋白)高通量檢測(cè)的需 求，其通過(guò)點(diǎn)樣儀將作為檢測(cè)探針的核酸或蛋白固定于玻璃片基的不同區(qū)域構(gòu)成相對(duì)分離 的檢測(cè)矩陣，矩陣中的每個(gè)區(qū)域?qū)?yīng)于一種靶標(biāo)的檢測(cè)。將樣品直接滴加于芯片的檢測(cè)矩 陣區(qū)域，經(jīng)過(guò)孵育(使核酸雜交或免疫反應(yīng)得以發(fā)生)、清洗、示蹤等步驟，在芯片上將根據(jù) 靶標(biāo)的有無(wú)從而在特定區(qū)域產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。與免疫層析的均相反應(yīng)(homogeneous)只 需的一步加樣有所不同，芯片技術(shù)尤其是蛋白芯片技術(shù)屬于異相反應(yīng)(heterogeneous)，其 操作過(guò)程不可避免的需要反復(fù)的孵育、清洗等過(guò)程，且對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化以及操作的環(huán)境有 極為嚴(yán)格的要求，無(wú)法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)甚至是一線實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)需求。免疫層析技術(shù)和芯片技術(shù) 的區(qū)別特征詳見(jiàn)附圖1所示若能將免疫層析的快速便捷與芯片技術(shù)的高通量有機(jī)融合，研制可在現(xiàn)場(chǎng)以簡(jiǎn)便 的操作實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)目的的新型技術(shù)，則可更好的滿足疾控系統(tǒng)等現(xiàn)場(chǎng)檢監(jiān)測(cè)部門對(duì)于 高通量快速篩查的需求。

實(shí)用新型內(nèi)容為了克服上述缺陷，本實(shí)用新型公開(kāi)了一種多重檢測(cè)免疫層析芯片，其可克服在 先技術(shù)中，免疫層析技術(shù)無(wú)法高通量檢測(cè)以及芯片技術(shù)操作復(fù)雜無(wú)法現(xiàn)場(chǎng)使用的缺點(diǎn)，通 過(guò)將免疫層析反應(yīng)模式與芯片檢測(cè)矩陣設(shè)置有機(jī)融合，最終實(shí)現(xiàn)了以現(xiàn)場(chǎng)簡(jiǎn)便操作為前提 的高通量檢測(cè)，即一次加樣實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)被檢物的同步檢測(cè)。本實(shí)用新型的技術(shù)方案為—種免疫層析芯片，其結(jié)構(gòu)組成包括[0008]粘性底襯[1]、樣品墊[2]、結(jié)合墊[3]、分析膜[4]和吸水墊[5]。(如附圖2所 示)其中，結(jié)合墊[3]中固定有若干種檢測(cè)結(jié)合物[6]與一種質(zhì)控結(jié)合物[7]；檢測(cè)結(jié)合物 [6]由示蹤物[8]和液相檢測(cè)探針[9]連接而成，并與被檢靶標(biāo)[10]特異性的一一對(duì)應(yīng)； 質(zhì)控結(jié)合物[7]由示蹤物[8]和液相質(zhì)控探針[11]連接而成。分析膜[4]上設(shè)置有一個(gè) 檢測(cè)矩陣單元[12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[12]包括一個(gè)檢測(cè)區(qū)[13]與一個(gè)質(zhì)控區(qū)[14]；檢 測(cè)區(qū)[13]由多種固相檢測(cè)探針[15]構(gòu)成，質(zhì)控區(qū)[14]由一種固相質(zhì)控探針[16]構(gòu)成；檢 測(cè)區(qū)[13]中的每種固相檢測(cè)探針[15]位置明確固定，對(duì)應(yīng)于一種被檢靶標(biāo)[10]的特異性 檢測(cè)，質(zhì)控區(qū)[14]中的固相質(zhì)控探針[16]位置也明確固定，可與質(zhì)控結(jié)合物[7]內(nèi)的液相 質(zhì)控探針[11]直接結(jié)合。樣品墊[2]、結(jié)合墊[3]、分析膜[4]和吸水墊[5]依次粘貼于作 為粘性底襯[1]的PVC板上，其中，分析膜[4]貼于粘性底襯[1]的中間，吸水墊[5]貼于 分析膜W]的一側(cè)，兩者重合部分為吸水墊[5]長(zhǎng)度的1/15-1/6 ；結(jié)合墊[3]貼于分析膜 [4]的另一側(cè)，兩者重合部分為結(jié)合墊[3]長(zhǎng)度的1/10-1/5 ；樣品墊[2]貼于結(jié)合墊[3]的 另一側(cè)，兩者重合部分為樣品墊[2]長(zhǎng)度的1/5-1/2。本實(shí)用新型免疫層析芯片的制備方法為A.結(jié)合墊[3]制備將質(zhì)控結(jié)合物[7]和檢測(cè)結(jié)合物[6]混合得結(jié)合物混合液， 將結(jié)合物混合液加于作為結(jié)合墊[3]的玻璃纖維、聚酯膜或無(wú)紡布上，烘干備用；B.分析膜[4]制備將作為固相檢測(cè)探針[15]與固相質(zhì)控探針[16]的抗原、抗 體以圓形斑點(diǎn)形式點(diǎn)在硝酸纖維素膜或尼龍膜上，每種探針位置明確固定，分別形成檢測(cè) 區(qū)[13]與質(zhì)控區(qū)[14]，構(gòu)成一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[12]中，固相檢測(cè) 探針[15]及其明確固定位置與被檢靶標(biāo)[10] —一對(duì)應(yīng)，固相質(zhì)控探針[16]只需一種且也 具有明確固定位置；在分析膜[4]上連續(xù)噴點(diǎn)若干個(gè)檢測(cè)矩陣單元[12]，烘干備用；(見(jiàn)附 圖3)C.本實(shí)用新型免疫層析芯片粘貼剪切成型將樣品墊[2]、結(jié)合墊[3]、分析膜[4] 和吸水墊[5]依次粘貼于作為粘性底襯[1]的PVC板上，確保相互之間的重疊關(guān)系；自檢測(cè) 矩陣單元[12]之間的分割點(diǎn)[17]將免疫層析芯片剪切為單獨(dú)可用的成品，得免疫層析芯 片；成型的免疫層析芯片可直接使用或置入塑料外殼中使用。(見(jiàn)附圖4)使用本實(shí)用新型免疫層析芯片進(jìn)行生物靶標(biāo)檢測(cè)的方法A.添加樣品將液體樣品或經(jīng)過(guò)預(yù)處理的液體樣品滴加至本實(shí)用新型免疫層析 芯片的樣品墊[2]上；B.層析反應(yīng)靜置數(shù)分鐘待層析反應(yīng)完成；C.結(jié)果判讀對(duì)于帶有顏色的示蹤物[8]可直接肉眼觀察判定結(jié)果，對(duì)于產(chǎn)生光、 電或磁信號(hào)的示蹤物[8]需儀器進(jìn)行結(jié)果判讀；由于針對(duì)特定被檢靶標(biāo)[10]的固相檢測(cè)探 針[15]在分析膜[4]上的位置明確固定，因而對(duì)明確固定位置上示蹤物[8]的信號(hào)，包括 顏色、光、電或磁，進(jìn)行判讀即可實(shí)現(xiàn)某種被檢靶標(biāo)[10]的定性定量檢測(cè)。在傳統(tǒng)技術(shù)中，免疫層析技術(shù)無(wú)法高通量檢測(cè)，而芯片技術(shù)操作復(fù)雜無(wú)法現(xiàn)場(chǎng)使 用。針對(duì)這些問(wèn)題，在本實(shí)用新型中通過(guò)將免疫層析反應(yīng)模式與芯片檢測(cè)矩陣設(shè)置有機(jī)融 合，設(shè)計(jì)了一種免疫層析芯片，最終實(shí)現(xiàn)了以現(xiàn)場(chǎng)簡(jiǎn)便操作為前提的高通量檢測(cè)，即一次加 樣實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)被檢物的同步檢測(cè)。
圖1 免疫層析技術(shù)與芯片技術(shù)比較；a 粘性底襯，b 樣品墊，c 結(jié)合墊，d 分析膜，e 吸水墊，f 結(jié)合物，g 檢測(cè)帶，h 質(zhì)控帶，i 液體樣品流動(dòng)方向，j 可檢測(cè)信號(hào)，k 玻璃片基，1 靶標(biāo)1檢測(cè)區(qū)，m 靶標(biāo)2檢 測(cè)區(qū)，η:液體樣品擴(kuò)散方向。圖2 免疫層析芯片結(jié)構(gòu)組成圖；1、粘性底襯、2、樣品墊、3、結(jié)合墊、4、分析膜、5、吸水墊、6、檢測(cè)結(jié)合物、7、質(zhì)控結(jié) 合物、8、示蹤物、9、液相檢測(cè)探針、10、被檢靶標(biāo)、11、液相質(zhì)控探針、12、檢測(cè)矩陣單元、13、 檢測(cè)區(qū)、14、質(zhì)控區(qū)、15、固相檢測(cè)探針、16、固相質(zhì)控探針；ο 特異檢測(cè)，ρ 系統(tǒng)質(zhì)控。圖3:分析膜制備示意圖；圖4 免疫層析芯片粘貼剪切成型示意圖；17、分割點(diǎn)。圖5 雙抗原夾心模式免疫層析芯片結(jié)構(gòu)組成圖；Al、粘性底襯、Α2、樣品墊、A3、結(jié)合墊、Α4、分析膜、Α5、吸水墊、Α6、檢測(cè)結(jié)合物、Α7、 質(zhì)控結(jié)合物、Α8、示蹤物、Α9、液相檢測(cè)抗原、Α10、被檢抗體、All、液相質(zhì)控抗原、Α12、檢測(cè)矩 陣單元、A13、檢測(cè)區(qū)、A14、質(zhì)控區(qū)、A15、固相檢測(cè)抗原、A16、固相質(zhì)控抗體；0 特異檢測(cè)，ρ 系統(tǒng)質(zhì)控。圖6 間接模式免疫層析芯片結(jié)構(gòu)組成圖；B1、粘性底襯、Β2、樣品墊、Β3、結(jié)合墊、Β4、分析膜、Β5、吸水墊、Β6、檢測(cè)結(jié)合物、Β7、 質(zhì)控結(jié)合物、Β8、示蹤物、Β9、羊抗人IgG、B10、被檢人抗體、Β11、羊抗兔IgG、B12、檢測(cè)矩陣 單元、B13、檢測(cè)區(qū)、B14、質(zhì)控區(qū)、B15、固相檢測(cè)抗原、B16、固相質(zhì)控抗體；0 特異檢測(cè)，ρ 系 統(tǒng)質(zhì)控。圖7 競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片結(jié)構(gòu)組成圖； Cl、粘性底襯、C2、樣品墊、C3、結(jié)合墊、C4、分析膜、C5、吸水墊、C6、檢測(cè)結(jié)合物、C7、 質(zhì)控結(jié)合物、C8、示蹤物、C9、液相檢測(cè)抗原、C10、被檢抗原、C11、地高辛、C12、檢測(cè)矩陣單 元、C13、檢測(cè)區(qū)、C14、質(zhì)控區(qū)、C15、固相檢測(cè)抗體、C16、固相質(zhì)控抗體；0 特異檢測(cè)，ρ 系統(tǒng)質(zhì)控。
以下結(jié)合附圖進(jìn)一步說(shuō)明本實(shí)用新型。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 雙抗原夾心模式免疫層析芯片雙抗原夾心模式免疫層析芯片用于對(duì)血清樣品中的特定抗體進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)合 物為示蹤物與被檢抗體的特異性抗原連接而成。如附圖5所示，雙抗原夾心模式免疫層析芯片由粘性底襯[Al]、樣品墊[Α2]、結(jié) 合墊[A3]、分析膜[Α4]以及吸水墊[Α5]構(gòu)成。結(jié)合墊[A3]中固定有若干種檢測(cè)結(jié)合物 [Α6]與一種質(zhì)控結(jié)合物[Α7]；檢測(cè)結(jié)合物[Α6]由示蹤物[Α8]以及液相檢測(cè)抗原[Α9]連 接而成，并與被檢抗體[Α10]特異性的一一對(duì)應(yīng)；質(zhì)控結(jié)合物[Α7]由示蹤物[Α8]以及液相 質(zhì)控抗原[All]連接而成。分析膜[A4]上設(shè)置有一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[A12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[A12]包括一個(gè)檢測(cè)區(qū)[A13]與一個(gè)質(zhì)控區(qū)[A14]；檢測(cè)區(qū)[A13]由多種固相檢測(cè)抗 原[A15]構(gòu)成，質(zhì)控區(qū)[A14]由一種固相質(zhì)控抗體[A16]構(gòu)成；檢測(cè)區(qū)[A13]中的每種固相 檢測(cè)抗原[A15]位置明確固定對(duì)應(yīng)于一種被檢抗體[A10]的特異性檢測(cè)，而質(zhì)控區(qū)[A14] 中的固相質(zhì)控抗體[A16]位置也明確固定，可與質(zhì)控結(jié)合物[A7]內(nèi)的液相質(zhì)控抗原[All] 直接結(jié)合；樣品墊[A2]、結(jié)合墊[A3]、分析膜[A4]和吸水墊[A5]依次粘貼于作為粘性底襯 [Al]的PVC板上，其中，分析膜[A4]貼于粘性底襯[Al]的中間，吸水墊[A5]貼于分析膜 [A4]的一側(cè)，兩者重合部分為吸水墊[A5]長(zhǎng)度的1/6 ；結(jié)合墊[A3]貼于分析膜[A4]的另 一側(cè)，兩者重合部分為結(jié)合墊[A3]長(zhǎng)度的1/5 ；樣品墊[A2]貼于結(jié)合墊[A3]的另一側(cè)，兩 者重合部分為樣品墊[A2]長(zhǎng)度的1/2。雙抗原夾心模式免疫層析芯片的制備方法為A.結(jié)合墊[A3]制備將質(zhì)控結(jié)合物[A7]和檢測(cè)結(jié)合物[A6]混合得結(jié)合物混合 液，將結(jié)合物混合液加于作為結(jié)合墊[A3]的玻璃纖維上，烘干備用；B.分析膜[A4]制備將固相檢測(cè)抗原[A15]以及固相質(zhì)控抗體[A16]以圓形斑 點(diǎn)形式點(diǎn)在硝酸纖維素膜上，每種抗原和抗體的位置明確固定可以準(zhǔn)確尋址，分別形成檢 測(cè)區(qū)[A13]與質(zhì)控區(qū)[A14]，構(gòu)成一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[A12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[A12]中，固 相檢測(cè)抗原[A15]及其明確固定位置與被檢抗體[A10] —一對(duì)應(yīng)，固相質(zhì)控抗體[A16]只 需一種且也具有明確固定位置；在分析膜[A4]上連續(xù)噴點(diǎn)若干個(gè)檢測(cè)矩陣單元[A12]，烘 干備用；C.本實(shí)用新型免疫層析芯片粘貼剪切成型將樣品墊[A2]、結(jié)合墊[A3]、分析膜 [A4]和吸水墊[A5]依次粘貼于作為粘性底襯[Al]的PVC板上，確保相互之間的重疊關(guān)系； 自檢測(cè)矩陣單元[A12]之間的分割點(diǎn)[17]將本實(shí)用新型免疫層析芯片剪切為單獨(dú)可用的 成品，得本實(shí)用新型免疫層析芯片；成型的免疫層析芯片可直接使用或置入塑料外殼中使用。使用上述本實(shí)用新型雙抗原夾心模式免疫層析芯片進(jìn)行生物靶標(biāo)檢測(cè)的方法A.添加樣品將液體樣品或經(jīng)過(guò)預(yù)處理的液體樣品滴加至本實(shí)用新型免疫層析 芯片的樣品墊[A2]上；B.層析反應(yīng)靜置數(shù)分鐘待層析反應(yīng)完成；C.結(jié)果判讀對(duì)于帶有顏色的示蹤物[A8]可直接肉眼觀察判定結(jié)果，對(duì)于產(chǎn)生 光、電或磁信號(hào)的示蹤物[A8]需儀器進(jìn)行結(jié)果判讀；由于針對(duì)特定被檢抗體[A10]的固相 檢測(cè)抗原[A15]在分析膜[A4]上的位置明確固定，因而對(duì)明確固定位置上示蹤物[A8]的 信號(hào)，包括顏色、光、電或磁，進(jìn)行判讀即可實(shí)現(xiàn)某種被檢抗體[A10]的定性定量檢測(cè)。實(shí)施例2 間接模式免疫層析芯片間接模式免疫層析芯片用于對(duì)血清樣品中的特定抗體進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)合物為示 蹤物與被檢抗體的二抗連接而成。在此以對(duì)人血清樣品進(jìn)行檢測(cè)為例，進(jìn)行說(shuō)明。如附圖6所示，間接模式免疫層析芯片由粘性底襯[Bi]、樣品墊[B2]、結(jié)合墊 [B3]、分析膜[B4]以及吸水墊[B5]構(gòu)成。結(jié)合墊[B3]中固定有一種檢測(cè)結(jié)合物[B6]與 一種質(zhì)控結(jié)合物[B7]；檢測(cè)結(jié)合物[B6]由示蹤物[B8]以及羊抗人IgG[B9]連接而成，可 與被檢人抗體[B10]特異性反應(yīng)；質(zhì)控結(jié)合物[B7]由示蹤物[B8]以及羊抗兔IgG[Bll]連 接而成。分析膜[B4]上設(shè)置有一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[B12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[B12]包括一個(gè)檢測(cè)區(qū)[B13]與一個(gè)質(zhì)控區(qū)[B14]；檢測(cè)區(qū)[B13]由多種固相檢測(cè)抗原[B15]構(gòu)成，質(zhì)控 區(qū)[B14]由一種固相質(zhì)控抗體[B16]即兔IgG構(gòu)成；檢測(cè)區(qū)[B13]中的每種固相檢測(cè)抗原 [B15]位置明確固定對(duì)應(yīng)于一種被檢人抗體[B10]的特異性檢測(cè)，而質(zhì)控區(qū)[B14]中的固 相質(zhì)控抗體[B16]位置也明確固定，可與質(zhì)控結(jié)合物[B7]內(nèi)的液相質(zhì)控抗原[B11]直接結(jié) 合。樣品墊[B2]、結(jié)合墊[B3]、分析膜[B4]和吸水墊[B5]依次粘貼于作為粘性底襯[Bi] 的PVC板上，其中，分析膜[B4]貼于粘性底襯[Bi]的中間，吸水墊[B5]貼于分析膜[B4] 的一側(cè)，兩者重合部分為吸水墊[B5]長(zhǎng)度的1/10 ；結(jié)合墊[B3]貼于分析膜[B4]的另一側(cè)， 兩者重合部分為結(jié)合墊[B3]長(zhǎng)度的1/7 ；樣品墊[B2]貼于結(jié)合墊[B3]的另一側(cè)，兩者重 合部分為樣品墊[B2]長(zhǎng)度的1/3。間接模式免疫層析芯片的制備方法為A.結(jié)合墊[B3]制備將質(zhì)控結(jié)合物[B7]和檢測(cè)結(jié)合物[B6]混合得結(jié)合物混合 液，將結(jié)合物混合液加于作為結(jié)合墊[B3]的聚酯膜上，烘干備用；B.分析膜[B4]制備將固相檢測(cè)抗原[B15]以及固相質(zhì)控抗體[B16]以圓形斑點(diǎn) 形式點(diǎn)在尼龍膜上，每種抗原和抗體的位置明確固定可以準(zhǔn)確尋址，分別形成檢測(cè)區(qū)[B13] 與質(zhì)控區(qū)[B14]，構(gòu)成一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[B12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[B12]中，固相檢測(cè)抗原 [B15]及其明確固定位置與被檢人抗體[B10] —一對(duì)應(yīng)，固相質(zhì)控抗體[B16]只需一種且也 具有明確固定位置；在分析膜[B4]上連續(xù)噴點(diǎn)若干個(gè)檢測(cè)矩陣單元[B12]，烘干備用；C.本實(shí)用新型免疫層析芯片粘貼剪切成型將樣品墊[B2]、結(jié)合墊[B3]、分析膜 [B4]和吸水墊[B5]依次粘貼于作為粘性底襯[Bi]的PVC板上，確保相互之間的重疊關(guān)系； 自檢測(cè)矩陣單元[B12]之間的分割點(diǎn)[17]將本實(shí)用新型免疫層析芯片剪切為單獨(dú)可用的 成品，得本實(shí)用新型免疫層析芯片；成型的免疫層析芯片可直接使用或置入塑料外殼中使 用。使用上述本實(shí)用新型間接模式免疫層析芯片進(jìn)行生物靶標(biāo)檢測(cè)的方法A.添加樣品將液體樣品或經(jīng)過(guò)預(yù)處理的液體樣品滴加至本實(shí)用新型免疫層析 芯片的樣品墊[B2]上；B.層析反應(yīng)靜置數(shù)分鐘待層析反應(yīng)完成；C.結(jié)果判讀對(duì)于帶有顏色的示蹤物[B8]可直接肉眼觀察判定結(jié)果，對(duì)于產(chǎn)生 光、電或磁信號(hào)的示蹤物[B8]需儀器進(jìn)行結(jié)果判讀；由于針對(duì)特定被檢人抗體[B10]的固 相檢測(cè)抗原[B15]在分析膜[B4]上的位置明確固定，因而對(duì)明確固定位置上示蹤物[B8] 的信號(hào)，包括顏色、光、電或磁，進(jìn)行判讀即可實(shí)現(xiàn)某種被檢人抗體[B10]的定性定量檢測(cè)。實(shí)施例3 競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片用于對(duì)只有一個(gè)抗原決定簇的半抗原等小分子物質(zhì)進(jìn)行 檢測(cè)。如附圖8所示，競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片由粘性底襯[Cl]、樣品墊[C2]、結(jié)合墊 [C3]、分析膜[C4]以及吸水墊[C5]構(gòu)成；結(jié)合墊[C3]中固定有若干種檢測(cè)結(jié)合物[C6]與 一種質(zhì)控結(jié)合物[C7]；檢測(cè)結(jié)合物[C6]由示蹤物[C8]以及液相檢測(cè)抗原[C9]連接而成， 并與被檢抗原[C10]特異性的一一對(duì)應(yīng)具有完全一致的抗原決定簇；質(zhì)控結(jié)合物[C7]由示 蹤物[C8]以及地高辛[C11]連接而成。分析膜[C4]上設(shè)置有一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[C12]；每 個(gè)檢測(cè)矩陣單元[C12]包括一個(gè)檢測(cè)區(qū)[C13]與一個(gè)質(zhì)控區(qū)[C14]；檢測(cè)區(qū)[C13]由多種固相檢測(cè)抗體[C15]構(gòu)成，質(zhì)控區(qū)[C14]由一種固相質(zhì)控抗體[C16]構(gòu)成；檢測(cè)區(qū)[C13]中 的每種固相檢測(cè)抗體[C15]位置明確固定對(duì)應(yīng)于一種被檢抗原[C10]的特異性檢測(cè)，而質(zhì) 控區(qū)[C14]中的固相質(zhì)控抗體[C16]即兔抗地高辛位置也明確固定，可與質(zhì)控結(jié)合物[C7] 內(nèi)的地高辛[C11]直接結(jié)合。樣品墊[C2]、結(jié)合墊[C3]、分析膜[C4]和吸水墊[C5]依次 粘貼于作為粘性底襯[Cl]的PVC板上，其中，分析膜[C4]貼于粘性底襯[Cl]的中間，吸水 墊[C5]貼于分析膜[C4]的一側(cè)，兩者重合部分為吸水墊[C5]長(zhǎng)度的1/15 ；結(jié)合墊[C3]貼 于分析膜[C4]的另一側(cè)，兩者重合部分為結(jié)合墊[C3]長(zhǎng)度的1/10 ；樣品墊[C2]貼于結(jié)合 墊[C3]的另一側(cè)，兩者重合部分為樣品墊[C2]長(zhǎng)度的1/5。競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片的制備方法為A.結(jié)合墊[C3]制備將質(zhì)控結(jié)合物[C7]和檢測(cè)結(jié)合物[C6]混合得結(jié)合物混合 液，將結(jié)合物混合液加于作為結(jié)合墊[C3]的無(wú)紡布上，烘干備用；B.分析膜[C4]制備將固相檢測(cè)抗體[C15]以及固相質(zhì)控抗體[C16]以圓形斑 點(diǎn)形式點(diǎn)在尼龍膜上，每種抗體的位置明確固定可以準(zhǔn)確尋址，分別形成檢測(cè)區(qū)[C13]與 質(zhì)控區(qū)[C14]，構(gòu)成一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[C12]；每個(gè)檢測(cè)矩陣單元[C12]中，固相檢測(cè)抗體 [C15]及其明確固定位置與被檢抗原[C10] —一對(duì)應(yīng)，固相質(zhì)控抗體[C16]只需一種且也具 有明確固定位置；在分析膜[C4]上連續(xù)噴點(diǎn)若干個(gè)檢測(cè)矩陣單元[C12]，烘干備用；C.本實(shí)用新型免疫層析芯片粘貼剪切成型將樣品墊[C2]、結(jié)合墊[C3]、分析膜 [C4]和吸水墊[C5]依次粘貼于作為粘性底襯[Cl]的PVC板上，確保相互之間的重疊關(guān)系； 自檢測(cè)矩陣單元[C12]之間的分割點(diǎn)[17]將本實(shí)用新型免疫層析芯片剪切為單獨(dú)可用的 成品，得本實(shí)用新型免疫層析芯片；成型的免疫層析芯片可直接使用或置入塑料外殼中使 用。使用上述本實(shí)用新型競(jìng)爭(zhēng)模式免疫層析芯片進(jìn)行生物靶標(biāo)檢測(cè)的方法A.添加樣品將液體樣品或經(jīng)過(guò)預(yù)處理的液體樣品滴加至本實(shí)用新型免疫層析 芯片的樣品墊[C2]上；B.層析反應(yīng)靜置數(shù)分鐘待層析反應(yīng)完成；C.結(jié)果判讀對(duì)于帶有顏色的示蹤物[C8]可直接肉眼觀察判定結(jié)果，對(duì)于產(chǎn)生 光、電或磁信號(hào)的示蹤物[C8]需儀器進(jìn)行結(jié)果判讀；由于針對(duì)特定被檢抗原[C10]的固相 檢測(cè)抗體[C15]在分析膜[C4]上的位置明確固定，因而對(duì)明確固定位置上示蹤物[C8]的 信號(hào)，包括顏色、光、電或磁，進(jìn)行判讀即可實(shí)現(xiàn)某種被檢抗原[C10]的定性定量檢測(cè)。
權(quán)利要求1. 一種多重檢測(cè)免疫層析芯片，其特征在于該免疫層析芯片的結(jié)構(gòu)組成為 粘性底襯[1]、樣品墊[2]、結(jié)合墊[3]、分析膜[4]和吸水墊[5]；其中，結(jié)合墊[3]中 固定有若干種檢測(cè)結(jié)合物[6]與一種質(zhì)控結(jié)合物[7]；檢測(cè)結(jié)合物W]由示蹤物[8]和液 相檢測(cè)探針[9]連接而成，并與被檢靶標(biāo)[10]特異性的一一對(duì)應(yīng)；質(zhì)控結(jié)合物[7]由示蹤 物[8]和液相質(zhì)控探針[11]連接而成；分析膜[4]上設(shè)置有一個(gè)檢測(cè)矩陣單元[12]；每個(gè) 檢測(cè)矩陣單元[12]包括一個(gè)檢測(cè)區(qū)[13]與一個(gè)質(zhì)控區(qū)[14]；檢測(cè)區(qū)[13]由多種固相檢 測(cè)探針[15]構(gòu)成，質(zhì)控區(qū)[14]由一種固相質(zhì)控探針[16]構(gòu)成；檢測(cè)區(qū)[13]中的每種固相 檢測(cè)探針[15]位置明確固定，對(duì)應(yīng)于一種被檢靶標(biāo)[10]的特異性檢測(cè)，質(zhì)控區(qū)[14]中的 固相質(zhì)控探針[16]位置也明確固定，可與質(zhì)控結(jié)合物[7]內(nèi)的液相質(zhì)控探針[11]直接結(jié) 合；樣品墊[2]、結(jié)合墊[3]、分析膜[4]和吸水墊[5]依次粘貼于作為粘性底襯[1]的PVC 板上，其中，分析膜[4]貼于粘性底襯[1]的中間，吸水墊[5]貼于分析膜[4]的一側(cè)，兩者 重合部分為吸水墊[5]長(zhǎng)度的1/15-1/6 ；結(jié)合墊[3]貼于分析膜W]的另一側(cè)，兩者重合 部分為結(jié)合墊[3]長(zhǎng)度的1/10-1/5 ；樣品墊[2]貼于結(jié)合墊[3]的另一側(cè)，兩者重合部分 為樣品墊[2]長(zhǎng)度的1/5-1/2。
專利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種多重檢測(cè)免疫層析芯片，該免疫層析芯片的結(jié)構(gòu)組成為粘性底襯、樣品墊、結(jié)合墊、分析膜和吸水墊。其可克服在先技術(shù)中，免疫層析技術(shù)無(wú)法高通量檢測(cè)以及芯片技術(shù)操作復(fù)雜無(wú)法現(xiàn)場(chǎng)使用的缺點(diǎn)，通過(guò)將免疫層析反應(yīng)模式與芯片檢測(cè)矩陣設(shè)置有機(jī)融合，最終實(shí)現(xiàn)了以現(xiàn)場(chǎng)簡(jiǎn)便操作為前提的高通量檢測(cè)，即一次加樣實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)被檢物的同步檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N33/558GK201867413SQ20102029794
公開(kāi)日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者周蕾, 楊瑞馥, 郭兆彪 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所