專利名稱：用于單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及單細胞凝膠電泳實驗裝置，適用于單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備及
保存。
背景技術(shù)：
單細胞凝膠電泳技術(shù)(single cell gel electrophoresis, SCGE)，是一種80年 代末發(fā)展起來的在細胞水平上快速檢驗真核細胞DNA的損傷與修復的新技術(shù)。在誘變劑的 作用下，細胞的DNA受到損傷，將分離出的細胞與低熔點瓊脂糖混合，鋪于載玻片上電泳， 斷裂的DNA會在電場力的作用下從核內(nèi)移出。熒光染料染色后，在熒光顯微鏡下，可觀察到 受損細胞核的彗星狀圖像——明亮的頭部為細胞核與一系列的DNA斷片組成的彗尾，尾巴 的長度和熒光強度與誘變劑導致的DNA斷裂數(shù)成正比，未受損細胞只有不動的細胞核(彗 核)而無彗尾。通過對彗星圖像進行測量與分析即可判斷細胞DNA的損傷程度，廣泛應用 于毒理學、生物學、醫(yī)學、環(huán)境生物監(jiān)測等領(lǐng)域。
單細胞凝膠電泳實驗的基本步驟包括(1)制膠；(2)裂解；(3)解旋與電泳；(4)
中和洗滌；(5)熒光染色。制備好的玻片樣品即可利用熒光顯微鏡拍照分析，從而對細胞 DNA損傷程度進行進行評價。長期以來，單細胞凝膠電泳樣品制備過程中制膠工藝比較復 雜，對操作環(huán)境的避光要求高，操作不慎會導致樣品DNA損傷；每批次處理樣品數(shù)量少且制 得的膠體易在后續(xù)過程中脫落，實驗效率低，平行性差；制備過程中有毒試劑使用量較大， 成本高，同時對環(huán)境存在污染；另外，制備后樣品保存環(huán)境要求較高，需避光、保濕條件，同 時要易于查找。以上幾點不足限制了單細胞凝膠電泳技術(shù)的進一步推廣應用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有樣品制備過程中存在的不足，提供一種快速、高效、操 作簡單、集單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備和保存于一體的單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置。 本發(fā)明的單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置，包括盒體、盒蓋，盒體中有網(wǎng)格狀支 架，支架的每個網(wǎng)格中放置玻璃載玻片，玻璃載玻片由水平底板、垂直于底板的兩個側(cè)板和 分別設在兩個側(cè)板上端平行于底板且向外延的平板構(gòu)成，盒蓋上設由與盒體中支架網(wǎng)格相 對應的進樣孔，進樣孔封有供進樣槍頭穿透的隔墊。 本發(fā)明的的成套裝置可用于單細胞凝膠電泳實驗中樣品制膠、細胞裂解、解旋與 電泳、中和洗滌以及熒光染色。使用方法如下 (1)制膠關(guān)閉盒蓋。將吸取有1%常熔點瓊脂糖凝膠的進樣槍頭穿透盒蓋上隔 墊，快速滴加在載玻片上，左右搖晃盒體，使常熔點瓊脂糖在載玻片上均勻鋪開，放置于室 溫下固化，得到鋪有第一層瓊脂糖凝膠的玻片；再將含有待測細胞的培養(yǎng)液與0. 7%低熔
點瓊脂糖凝膠在37t:溫度下預熱并混勻，滴加在所述鋪有第一層瓊脂糖凝膠的玻片上，左
右搖晃盒體，使低熔點瓊脂糖在載玻片上均勻鋪開，并置于4°C固化，得到鋪有兩層瓊脂糖凝膠的玻片。 (2)細胞裂解載玻片上加入lmL 4。C細胞裂解液，浸沒瓊脂糖凝膠，60分鐘后得 到細胞裂解后的玻片。 (3)解旋與電泳將細胞裂解后的載玻片連同支架一起從盒體中提出，用電泳液 沖洗，然后置于裝有預冷電泳液的電解槽中靜置20分鐘，再進行電泳。
(4)中和洗滌將電泳后的載玻片連同支架一起放入盒體中，載玻片中加入lmL Tris緩沖液(0. 4M，pH = 7. 5)浸洗。浸洗完成后取出，蒸餾水反復沖洗后，放回盒體，載玻 片中加入lmL無水乙醇脫水。 (5)熒光染色在載玻片中加入0. 5mL EB染料染色。 制備好后的單細胞凝膠電泳樣品放置于盒體中，蓋上盒蓋，密封、避光、冷藏保存。
本發(fā)明有如下優(yōu)點 1、高效性可同時對大量樣品進行處理，提高了樣品制備的效率。 2、穩(wěn)定性制得的瓊脂糖凝膠較薄，與載玻片貼合緊密，不易脫落，且瓊脂糖凝膠
中細胞分散均勻，樣品間平行性好。
3、避光性樣品均置于盒體中避光制備，避免了紫外線對細胞的額外損傷。 4、經(jīng)濟環(huán)保使用本發(fā)明成套裝置可節(jié)約大量試劑，節(jié)省成本，減少有毒試劑排
放，降低對環(huán)境的危害。 5、樣品保存本發(fā)明成套裝置集單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備和保存于一體， 可有效保存制備后的樣品，避免保存過程中環(huán)境因素給樣品帶來損傷。


圖1是單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置縱向局部剖視圖；
圖2是單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置俯視局部剖視圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合附圖和實例對本發(fā)明進一步詳細說明。 參照圖1、圖2，用于單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置，包括盒體1、盒蓋2，盒體1 中有網(wǎng)格狀支架3，支架3的每個網(wǎng)格中放置玻璃載玻片4，玻璃載玻片4由水平底板、垂直 于底板的兩個側(cè)板和分別設在兩個側(cè)板上端平行于底板且向外延的平板構(gòu)成，這樣玻璃載 玻片利用外延的平板支承在支架的網(wǎng)格中，盒蓋2上設由與盒體1中網(wǎng)格相對應的進樣孔 5，進樣孔封有供進樣槍頭7穿透的隔墊6。
權(quán)利要求
用于單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置，其特征是包括盒體(1)、盒蓋(2)，盒體中有網(wǎng)格狀支架(3)，支架的每個網(wǎng)格中放置玻璃載玻片(4)，玻璃載玻片(4)由水平底板、垂直于底板的兩個側(cè)板和分別設在兩個側(cè)板上端平行于底板且向外延的平板構(gòu)成，盒蓋(2)上設由與盒體(1)中支架網(wǎng)格相對應的進樣孔(5)，進樣孔封有供進樣槍頭穿透的隔墊(6)。
全文摘要
本發(fā)明公開的單細胞凝膠電泳試驗的成套裝置，包括盒體、盒蓋，盒體中有網(wǎng)格狀支架，支架的每個網(wǎng)格中放置玻璃載玻片，玻璃載玻片由水平底板、垂直于底板的兩個側(cè)板和分別設在兩個側(cè)板上端平行于底板且向外延的平板構(gòu)成，盒蓋上設由與盒體中支架網(wǎng)格相對應的進樣孔，進樣孔封有供進樣槍頭穿透的隔墊。該裝置集單細胞凝膠電泳實驗的樣品制備和保存于一體，使用方便，凝膠不易脫落，可實現(xiàn)樣品批量化制備，加快樣品制備速度，提高成功率，從而確保單細胞凝膠電泳實驗的高效性與準確性。
文檔編號G01N1/30GK101788527SQ20101012034
公開日2010年7月28日 申請日期2010年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月9日
發(fā)明者張聰愷, 施積炎, 曾躍春, 沈超峰, 陳英旭, 陳蕾 申請人:浙江大學