專利名稱:乳品中β-內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及生物分析技術(shù),更具體涉及一種乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方 法,適用于各類液態(tài)食品中酶或酶底物,尤其是乳品中的β -內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)分析。
背景技術(shù):
目前,直接檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的方法主要是基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測(cè)試劑盒。 檢測(cè)費(fèi)用高(百元/每樣品),且抗體的特異性不好,容易受到其它成分的干擾,精度不夠。 另一種方法是應(yīng)用色譜間接的測(cè)量?jī)?nèi)酰胺酶的活性,該方法測(cè)試精度高,但測(cè)試費(fèi)用 更加昂貴,且測(cè)試周期相對(duì)較長(zhǎng),無法現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。所有的現(xiàn)有方法都不能快速和現(xiàn)場(chǎng)(如采 奶站)進(jìn)行測(cè)試,因?yàn)樗鼈兌夹枰獙?duì)奶樣品進(jìn)行預(yù)處理。本發(fā)明所涉及的乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法是基于酶熱生物分析儀技 術(shù)(Enzyme Thermistor)。它集成了酶技術(shù)、微流體分析技術(shù)、微熱傳感技術(shù)等。它不需要 對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理、具有很高的測(cè)量精度、快速、檢測(cè)費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)。該檢測(cè)儀由兩大部件 構(gòu)成酶熱生物反應(yīng)和傳感器以及信號(hào)放大與處理器。酶熱生物分析儀是基于這一原理,即,將特異性的酶催化反應(yīng)(如,奶中β “內(nèi)酰 胺酶催化青霉素)與一種普遍的流動(dòng)量熱分析結(jié)合起來,從而實(shí)現(xiàn)獨(dú)一無二的、萬能的生 物分析和測(cè)量。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種乳品中內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法,適用于對(duì)各 類液態(tài)食品中酶或酶底物,尤其是對(duì)乳品中的內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)分析。本發(fā)明的主要內(nèi)容為發(fā)展了一種β “內(nèi)酰胺酶的快速測(cè)定方法。該方法將待測(cè) 樣品,如奶液中含有的β -內(nèi)酰胺酶與其底物,如青霉素以兩組獨(dú)立的流動(dòng)相在一反應(yīng)器 進(jìn)行混合并進(jìn)行催化反應(yīng),將其生物催化產(chǎn)生的熱量轉(zhuǎn)化成溫度的變化,并通過測(cè)量其溫 度的相對(duì)變化來確定其待測(cè)物的成分、濃度或活性等。該內(nèi)酰胺酶測(cè)定儀為酶熱生物 分析儀,能定量分析和定性分析液態(tài)樣品中的內(nèi)酰胺酶含量和活性。適合于食品分析 中尤其是乳制品、飲料等中的內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè),并具有檢測(cè)價(jià)格低、操作簡(jiǎn)便、無 需對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理和很高的靈敏度和精度?!N乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法,其步驟如下B.將磷酸二氫鈉(NaH2PO4) 2_6g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 17_24g (購于 sigma 公司) 混合,然后去離子水定容至IOOOmL得到50-200mM磷酸鹽溶液,pH為7-7. 4。C.用配制好的IOOmM磷酸鹽溶液配置濃度為1000U/mL的青霉素酶原液(青霉素 原液為青霉素酶與IOOmM磷酸鹽溶液的混合液)。青霉素酶PeniciIlinase (360U/mg)購于 sigma公司。再用IOOmM濃度磷酸鹽溶液稀釋濃度1000U/mL青霉素酶原液,得到青霉素酶 濃度為10U/mL的青霉素酶原液。繼續(xù)用IOOmM磷酸鹽溶液,按相同方法梯度稀釋,制備青 霉素酶濃度為5U/mL,2U/mL,lU/mL,0. 5U/mL,0. 25U/mL的青霉素酶標(biāo)準(zhǔn)液。
D.用經(jīng)梯度稀釋的青霉素酶標(biāo)準(zhǔn)液(10U/mL,5U/mL,2U/mL,lU/mL,0. 5U/mL,0U/ mL)與牛奶(脂肪含量0. 5-3. 3% )混合(體積比1 1),得到青霉素酶濃度分別為5U/mL, 2U/mL, lU/mL,0. 5U/mL,0. 25U/mL 以及 0U/mL(空白對(duì)照)的牛奶樣品。Ε.用磷酸鹽溶液配制底物,濃度為IOOmM的青霉素溶液(青霉素Penicillin G購 于sigma公司),稀釋到所需的底物濃度ImM。F.裝配,調(diào)節(jié)儀器(采用歐米克生物科技(武漢)有限公司生產(chǎn)的酶熱生物分析 儀Enzyme Thermistor)將蠕動(dòng)泵校準(zhǔn)為所需的流速(0. 25-1. OmL/min),接入進(jìn)樣閥(樣 品量為100-500 μ L),并將儀器信號(hào)放大旋鈕調(diào)至50-200 (信號(hào)放大50-200倍),然后將安 培表指針調(diào)至中央0點(diǎn)位置。最后將記錄儀(或市場(chǎng)購買的通用色譜工作站)連接信號(hào)輸 出端,記錄檢測(cè)的電壓信號(hào)。G.待基線穩(wěn)定后,向進(jìn)樣閥中分別注射含青霉素酶濃度分別為5U/mL,2U/mL,IU/ mL,0. 5U/mL,0. 25U/mL以及OU/mL的牛奶樣品。然后將進(jìn)樣閥由“加樣”端轉(zhuǎn)切至“進(jìn)樣” 端。檢測(cè)一個(gè)樣品需時(shí)5 10分鐘。當(dāng)一個(gè)樣品的反應(yīng)峰回落至基線時(shí),將進(jìn)樣閥調(diào)回至 “加樣”端,注射下一個(gè)樣品。H.在檢測(cè)青霉素酶濃度為OU/mL的牛奶樣品時(shí),由于混合熱和牛奶粘稠度的關(guān) 系,會(huì)出現(xiàn)微小的非信號(hào)峰值。在在處理檢測(cè)含有青霉素酶牛奶樣品的數(shù)據(jù)時(shí),需要用其被 測(cè)樣品的峰值減去空白樣品的峰值,從而得到校正數(shù)據(jù),校正數(shù)據(jù)為所要求得的數(shù)據(jù)。校正 數(shù)據(jù)依檢測(cè)樣品的濃度呈線性比例關(guān)系。I.檢測(cè)結(jié)束之后,泵入70 75%濃度酒精溶液,清洗儀器及樣品環(huán)(約30分鐘)。一種乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法,它包括以下步驟本發(fā)明所涵蓋檢測(cè)和分析的范圍和分析對(duì)象包括Α、所有乳制品中的β -內(nèi)酰胺酶。此處所有乳制品定義為包括原料乳和成品乳, 液態(tài)乳和固態(tài)乳,百分之百成分乳或部分含乳成分制成品,中國或外國乳產(chǎn)品;B、本發(fā)明可擴(kuò)展至其它非含乳成分的液態(tài)食品、飲料、藥品、化妝品、化學(xué)制劑、發(fā) 酵制劑、廢水等;C、β _內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)定義為β -內(nèi)酰胺酶的活性、含量、定性分析或定量分析、 連續(xù)分析或非連續(xù)分析、制動(dòng)分析或手動(dòng)分析、直接分析或間接分析、預(yù)處理或未經(jīng)處理的 樣品分析等。本發(fā)明的檢測(cè)和分析方法包括D、基于生物酶催化其底物(待測(cè)分析物)所產(chǎn)生熱焓變化的原理;Ε、測(cè)量由該熱焓變化所產(chǎn)生的反應(yīng)系統(tǒng)的溫度變化為檢測(cè)信號(hào)。該溫度信號(hào)可以 差分或非差分方式測(cè)定;F、流動(dòng)注射進(jìn)樣分析與酶熱生物分析相結(jié)合;G、含β _內(nèi)酰胺酶的待測(cè)樣品(如奶液)與含其底物(如青霉素)的緩沖液(詳 見如下)分別在兩個(gè)獨(dú)立的流動(dòng)腔進(jìn)入反應(yīng)系統(tǒng),在反應(yīng)器混合后產(chǎn)生催化反應(yīng);H、該酶-底物催化反應(yīng)可包含單一酶對(duì)單一底物的催化、單一酶同時(shí)對(duì)多底物 的催化、多酶對(duì)單一底物的催化、多酶同時(shí)對(duì)多底物的催化等。本發(fā)明的β -內(nèi)酰胺酶分析儀的權(quán)利包括I、雙通道流動(dòng)控制系統(tǒng)及其混合器、反應(yīng)器和檢測(cè)器;
J、檢測(cè)傳感器為溫度傳感器,包括熱敏電阻、熱電偶、熱電堆、感溫晶體管等;K、酶熱分析電極包括流動(dòng)系統(tǒng),反應(yīng)柱和溫度傳感器。反應(yīng)器為可置換和不可置 換兩種,以及可填充和非填充兩種方式;L、測(cè)量體系可為單測(cè)量酶熱電極和多測(cè)量酶熱電極方式;M、測(cè)量體系可為全自動(dòng)型或手動(dòng)型,集成或非集成流動(dòng)控制,信號(hào)報(bào)警或非報(bào)警 系統(tǒng);N、電子測(cè)量為惠斯通電橋,差分溫度測(cè)量方式。其檢測(cè)靈敏度可達(dá)10_5°C。檢測(cè)方法與步驟0、兩獨(dú)立的流動(dòng)腔通過一個(gè)蠕動(dòng)泵同時(shí)將磷酸鹽緩沖液(如0. 1Μ,ρΗ7. 0-7. 4)和 含青霉素(如ImM Penicillin G)的相同緩沖液以如,0. 5mL/分鐘的流速分別注入到酶熱 生物分析儀(ENZYME THERMISTOR INSTRUMENT)的輸入端,且在該分析儀的反應(yīng)器中進(jìn)行混 合并經(jīng)過熱敏傳感器流出輸出端;P、待測(cè)樣品(如含β -內(nèi)酰胺酶奶液)通過樣品進(jìn)樣閥將如,350 μ L樣品量混入 僅含磷酸鹽緩沖液的流動(dòng)腔,并與其含青霉素的磷酸鹽緩沖液在反應(yīng)器混合,其催化反應(yīng) 產(chǎn)生的熱量通過溫度傳感器測(cè)量。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)直接對(duì)乳品中的β -內(nèi)酰胺酶進(jìn)行分析;方法簡(jiǎn)單、儀器操作方便。待測(cè)奶樣品無 需特殊預(yù)處理,可直接進(jìn)樣分析;測(cè)量快速(約5分鐘/每樣品);檢測(cè)成本低(約幾元人 民幣/每樣品);靈敏度高(低于0.5U酶活性/mL奶樣品,或低于2ppm酶含量);奶樣品適 合原料奶、奶制品和其他液態(tài)食品中的內(nèi)酰胺酶的檢測(cè),也可用于其它酶的檢測(cè)或酶 底物的分析。
圖1為記錄儀所示測(cè)試樣品信號(hào)峰值記錄圖。圖中顯示的是使用酶熱生物分析儀(Enzyme Thermistor)分別檢測(cè)牛奶中活性為 0U/mL、0. 25U/mL、0. 5U/mL、l. 0U/mL、2. OU/mL 及 5. OU/mL 的 β -內(nèi)酰胺酶樣品檢測(cè)響應(yīng)。每 種樣品重復(fù)檢驗(yàn)兩次。通過這個(gè)檢測(cè),可以得知該方法檢測(cè)方法速度快,檢測(cè)穩(wěn)定且精度高
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法,其步驟是一 .材料準(zhǔn)備磷酸氫二鈉(Na2HPO4)(購買自sigma),磷酸二氫鈉(NaH2PO4)(購買自sigma), 青霉素酶(Penicillinase from bacillus cereus, 360U/mg 購買自 sigma),青霉素 (Penicillin G potassium salt,購買自 sigma),牛奶(脂肪含量 3% ),4°C冰箱儲(chǔ)藏。二.配置樣品1.配制 IOOmM 磷酸鹽溶液(pH = 7. 4)稱量 NaH2PO4 2 6g,Na2HPO4 17_24g,用 去離子水定容至IOOOmL ;2.用配制好的IOOmM磷酸鹽溶液配置濃度為1000U/mL的青霉素酶原液(青霉素 原液為青霉素酶與IOOmM磷酸鹽溶液的混合液)。4°C冰箱儲(chǔ)存。(注意,酶溶液易失活,凍 干品2 8°C可穩(wěn)定一周。);
3.再用IOOmM濃度磷酸鹽溶液稀釋濃度1000U/mL青霉素酶原液,得到青霉素酶濃 度為10U/mL的青霉素酶原液;4.繼續(xù)用IOOmM磷酸鹽溶液,按相同方法梯度稀釋,制備青霉素酶濃度為5U/mL, 2U/mL, lU/mL,0. 5U/mL,0. 25U/mL 的青霉素酶原液;5.用青霉素酶原液濃度分別為 10U/mL、5U/mL、2U/mL、lU/mL、0. 5U/mL、0U/mL 與牛 奶(脂肪含量3% )混合(體積比1 1),得到青霉素酶濃度分別為5U/mL,2U/mL,lU/mL, 0. 5U/mL,0. 25U/mL以及OU/mL(空白對(duì)照)的牛奶樣品。6.用磷酸鹽溶液配制底物,濃度為IOOmM的青霉素溶液(青霉素Penicillin G potassium salt,購買自sigma),稀釋到所需的底物濃度為ImM。7.用濃度為IOOmM的青霉素溶液與IOOmM磷酸鹽溶液梯度稀釋為濃度10mM,5mM, ImM的青霉素溶液。三.操作步驟一種乳品中β -內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)方法,其步驟是1.裝配儀器(歐米克生物科技公司生產(chǎn)的酶熱生物分析儀Enzyme Thermistor), 將蠕動(dòng)泵校準(zhǔn)為0. 5mL/min。2.安裝350 μ L樣品環(huán)(樣品環(huán)為市場(chǎng)通用非親水透明塑料管制成)。3.將儀器信號(hào)放大旋鈕調(diào)至100 (信號(hào)放大100倍),然后將安培表指針調(diào)至中央 0點(diǎn)位置。4.將記錄儀(市場(chǎng)購買通用型記錄儀)電壓調(diào)至1伏,記錄紙滾動(dòng)速度IOcm/ hour ο5.待基線穩(wěn)定后,向進(jìn)樣閥中分別注射青霉素酶濃度分別為5U/mL,2U/mL,lU/ mL,0. 5U/mL,0. 25U/mL以及OU/mL的牛奶樣品。然后,將進(jìn)樣閥由“加樣”檔調(diào)至“進(jìn)樣”檔。 檢測(cè)一個(gè)樣品需時(shí)5 10分鐘。當(dāng)一個(gè)樣品的響應(yīng)峰回落至基線時(shí),將進(jìn)樣閥調(diào)回“進(jìn)樣” 檔,注射下一個(gè)樣品。6.在檢測(cè)青霉素酶濃度為OU/mL的牛奶樣品時(shí),由于混合熱和牛奶粘稠度的關(guān) 系,會(huì)出現(xiàn)非信號(hào)峰值。在處理檢測(cè)含有青霉素酶牛奶樣品的數(shù)據(jù)時(shí),需要用含有青霉素酶 的牛奶樣品的峰值減去青霉素酶濃度為OU/mL的牛奶樣品峰值,從而得到校正數(shù)據(jù),校正 數(shù)據(jù)為所要求得的數(shù)據(jù)。校正數(shù)據(jù)依檢測(cè)樣品的濃度呈線性比例關(guān)系。7.檢測(cè)結(jié)束之后,泵入70 75%濃度酒精溶液,達(dá)到清洗儀器及樣品閥的目的。下表1中是測(cè)試的數(shù)值(每樣品檢測(cè)二次),通過測(cè)試可以得出結(jié)論該方法可以 較為準(zhǔn)確的檢測(cè)出樣品中的青霉素酶的活性。
權(quán)利要求
一種乳品中β 內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)方法,其步驟是A、將磷酸二氫鈉2 6g、磷酸氫二鈉17 24g混合,然后去離子水定容至1000mL得到100mM磷酸鹽溶液,pH為7 8.6;B、用配制好的100mM磷酸鹽溶液配置濃度為1000U/mL的青霉素酶原液,再用100mM濃度磷酸鹽溶液稀釋濃度1000U/mL青霉素酶原液,得到青霉素酶濃度為10U/mL的青霉素酶原液,繼續(xù)用100mM磷酸鹽溶液,按相同方法梯度稀釋,制備青霉素酶濃度為5U/mL,2U/mL,1U/mL,0.5U/mL,0.25U/mL的青霉素酶原液;C、經(jīng)梯度稀釋的青霉素酶原液為10U/mL,5U/mL,2U/mL,1U/mL,0.5U/mL,0U/mL與牛奶混合,得到青霉素酶濃度分別為5U/mL,2U/mL,1U/mL,0.5U/mL,0.25U/mL以及0U/mL的牛奶樣品;D、用磷酸鹽溶液配制底物,濃度為100mM的青霉素溶液,稀釋到所需的底物濃度為1mM;E、將蠕動(dòng)泵校準(zhǔn)為所需的流速為0.5mL/min,安裝樣品環(huán),并將儀器信號(hào)放大旋鈕調(diào)至100倍,然后將安培表指針調(diào)至中央0點(diǎn)位置,最后將記錄儀電壓調(diào)至1伏,記錄紙滾動(dòng)速度10cm/hour;F、待基線穩(wěn)定后,向注射閥中分別注射青霉素酶濃度分別為5U/mL,2U/mL,1U/mL,0.5U/mL,0.25U/mL以及0U/mL的牛奶樣品,然后將注射閥由注射檔調(diào)至上樣檔,檢測(cè)樣品5~7分鐘,樣品的峰回落至基線時(shí),將注射閥調(diào)回注射檔,注射下一個(gè)樣品;G、在檢測(cè)青霉素酶濃度為0U/mL的牛奶樣品時(shí),記錄儀記錄峰值信號(hào),在處理檢測(cè)含有青霉素酶牛奶樣品的數(shù)據(jù)時(shí),用峰值減去空白樣品的峰值,得到校正數(shù)據(jù);H、檢測(cè)結(jié)束之后,泵入70~75%濃度酒精溶液,清洗儀器及樣品環(huán)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種乳品中內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)方法,所涵蓋檢測(cè)和分析的 范圍和分析對(duì)象包括Α、所有乳制品中的內(nèi)酰胺酶。此處所有乳制品定義為包括原料乳和成品乳,液態(tài) 乳和固態(tài)乳,百分之百成分乳或部分含乳成分制成品,中國或外國乳產(chǎn)品;B、本發(fā)明可擴(kuò)展至其它非含乳成分的液態(tài)食品、飲料、藥品、化妝品、化學(xué)制劑、發(fā)酵制 劑、廢水等;C、β_內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)定義為β -內(nèi)酰胺酶的活性、含量、定性分析或定量分析、連續(xù) 分析或非連續(xù)分析、制動(dòng)分析或手動(dòng)分析、直接分析或間接分析、預(yù)處理或未經(jīng)處理的樣品 分析等。
3.如權(quán)利要求1所述的一種乳品中內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)方法,檢測(cè)和分析方法包括Α、基于生物酶催化其底物(待測(cè)分析物)所產(chǎn)生熱焓變化的原理;B、測(cè)量由該熱焓變化所產(chǎn)生的反應(yīng)系統(tǒng)的溫度變化為檢測(cè)信號(hào)。該溫度信號(hào)可以差分 或非差分方式測(cè)定;C、流動(dòng)注射進(jìn)樣分析與酶熱生物分析相結(jié)合;D、含內(nèi)酰胺酶的待測(cè)樣品(如奶液)與含其底物(如青霉素)的緩沖液(詳見如 下)分別在兩個(gè)獨(dú)立的流動(dòng)腔進(jìn)入反應(yīng)系統(tǒng),在反應(yīng)器混合后產(chǎn)生催化反應(yīng);Ε、該酶-底物催化反應(yīng)可包含單一酶對(duì)單一底物的催化、單一酶同時(shí)對(duì)多底物的催化、多酶對(duì)單一底物的催化、多酶同時(shí)對(duì)多底物的催化等。
4.如權(quán)利要求1所述的一種乳品中β-內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)方法,β -內(nèi)酰胺酶分析儀 包括Α、雙通道流動(dòng)控制系統(tǒng)及其混合器、反應(yīng)器和檢測(cè)器;B、檢測(cè)傳感器為溫度傳感器,包括熱敏電阻、熱電偶、熱電堆、感溫晶體管等;C、酶熱分析電極包括流動(dòng)系統(tǒng),反應(yīng)柱和溫度傳感器。反應(yīng)器為可置換和不可置換兩 種,以及可填充和非填充兩種方式;D、測(cè)量體系可為單測(cè)量酶熱電極和多測(cè)量酶熱電極方式;Ε、測(cè)量體系可為全自動(dòng)型或手動(dòng)型,集成或非集成流動(dòng)控制,信號(hào)報(bào)警或非報(bào)警系統(tǒng);F、電子測(cè)量為惠斯通電橋,差分溫度測(cè)量方式。其檢測(cè)靈敏度可達(dá)10_5°C。
5.如權(quán)利要求1所述的一種乳品中β-內(nèi)酰胺酶的快檢測(cè)方法,檢測(cè)方法與步驟Α、兩獨(dú)立的流動(dòng)腔通過一個(gè)蠕動(dòng)泵同時(shí)將磷酸鹽緩沖液(如0. 1Μ,ρΗ7. 0-7. 4)和含青 霉素(如ImM Penicillin G)的相同緩沖液以如,0. 5mL/分鐘的流速分別注入到酶熱生物 分析儀(ENZYME THERMISTOR INSTRUMENT)的輸入端,且在該分析儀的反應(yīng)器中進(jìn)行混合并 經(jīng)過熱敏傳感器流出輸出端;B、待測(cè)樣品(如含內(nèi)酰胺酶奶液)通過樣品進(jìn)樣閥將如,350 μ L樣品量混入僅含 磷酸鹽緩沖液的流動(dòng)腔,并與其含青霉素的磷酸鹽緩沖液在反應(yīng)器混合,其催化反應(yīng)產(chǎn)生 的熱量通過溫度傳感器測(cè)量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種β-內(nèi)酰胺酶的快速測(cè)定的方法。該方法將待測(cè)樣品,如奶液中含有的β-內(nèi)酰胺酶與其底物,如青霉素以兩組獨(dú)立的流動(dòng)相在一反應(yīng)器進(jìn)行混合并進(jìn)行催化反應(yīng),將其生物催化產(chǎn)生的熱量轉(zhuǎn)化成溫度的變化,并通過測(cè)量其溫度的相對(duì)變化來確定其待測(cè)物的成分、濃度或活性等。該β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定儀為酶熱生物分析儀(Enzyme Thermistor),能定量分析和定性分析液態(tài)樣品中的β-內(nèi)酰胺酶含量和活性。適合于食品分析中尤其是乳制品、飲料等中的β-內(nèi)酰胺酶的快速檢測(cè)(5分鐘/樣品),并具有檢測(cè)價(jià)格低(約幾元人民幣/樣品)、操作簡(jiǎn)便、無需對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理和很高的靈敏度和精度(可測(cè)量低于0.5活性單位/mL)。
文檔編號(hào)G01N25/48GK101928748SQ20091006285
公開日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月26日
發(fā)明者謝斌 申請(qǐng)人:謝斌