專利名稱：一種新城疫病毒免疫膠體金測試卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及養(yǎng)殖場、防疫檢疫部門以及醫(yī)療機構(gòu)等單位診斷或檢測新城疫病毒的 技術(shù)，具體涉及快速檢測新城疫病毒的測試卡。
背景技術(shù)：
新城疫病毒(Newcastle disease, ND)是一種急性、敗血性、高度接觸性傳染病， 其傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高。 一旦爆發(fā)，會給養(yǎng)雞業(yè)造成不可估量的經(jīng)濟損失。因此 養(yǎng)殖場、防疫檢疫部門以及醫(yī)療機構(gòu)等單位經(jīng)常需要診斷或檢測結(jié)果。國家質(zhì)檢總局在
2001年下發(fā)文件，要求對食肉出n企業(yè)進行每兩個月一次的定期監(jiān)測，該規(guī)定要求用雞胚
病毒分離方法。雞胚病毒分離方汰是-種敏感特異方法，但是耗時較長，約需3周左右， 且操作煩瑣，只能起監(jiān)測作用，不能作快速檢測用，不利于快速通關(guān)和控制禽肉攜帶病毒。 C隨7775A (專利屮請?zhí)枮?00510008997.6)"檢測新城病毒的核苷序列、試劑盒及檢驗 方法"，該發(fā)明選擇新城疫病毒F基岡(合成F蛋白)作為靶區(qū)域，選擇能夠反映裂解位 點特性且缺乏二級結(jié)構(gòu)的保守區(qū)設(shè)計多對引物和探針，建立熒光PCR檢測新城疫病毒，該 方法比傳統(tǒng)的P(:R方法靈敏度高100 1000倍，但從樣品處理到出結(jié)果需要4小時左右， 該方法的實施還需熒光定量PCR儀等昂貴儀器，不宜在基層推廣。
目前，現(xiàn)有技術(shù)對新城疫病毒的診斷或檢測主要包括血凝抑制(HI)試驗檢測抗血凝 素(HA)抗體；酶聯(lián)免疫吸附測定(KL:[SA)方法檢測新城疫病毒共有的特異性抗體或抗原。 其中HI試驗雖然比較敏感，但受外界因素影響較大而削弱了其實用價值；ELISA檢出陽性 血清時間曱，敏感度高，與H1試驗相比更適合于大批量血清學(xué)調(diào)查，但因其條件要求高， 操作不便，在實際應(yīng)用中未能發(fā)揮其應(yīng)有作用。而免疫熒光技術(shù)(IFT)存在假陽性(非特異 性熒光)問題。禾擁基因擴增(PCR)方法可直接檢出病毒的基因，農(nóng)業(yè)部動物檢驗所新城 疫檢測實驗室在國內(nèi)旨先建立-歩法PT PCR快速檢測強毒新城疫，將新城疫的檢測時間 縮短到12小時之內(nèi)。但所需的設(shè)備昂貴，在臨床檢測方面受到了很大的限制。可見研究 一種快速檢測新城疫病毒的診斷試劑以便對疫情進行現(xiàn)場及時監(jiān)控，已經(jīng)是目前畜牧生產(chǎn) 中急需解決的問題。

實用新型內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本實用新型的目的是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、操作方便、 快速，而且敏感和特異性好的新城疫病毒免疫膠體金測試卡。
本實用新型的目的是這樣實現(xiàn)的 一種新城疫免疫膠體金測試卡，由試劑條和測試卡 盒構(gòu)成；其中，試劑條由背襯、樣品墊、結(jié)合墊、NC膜和吸水墊組成，背襯上平面中部設(shè) 有NC膜，NC膜的兩端分別相鄰連接結(jié)合墊和吸水墊；樣品墊設(shè)于結(jié)合墊的上方；結(jié)合墊 上噴有金標(biāo)抗體Abl; NC膜上噴有線寬為lmm的捕獲抗體Ab2和質(zhì)控抗體Ab3;結(jié)合墊放 在金標(biāo)抗體與樣品中NDV結(jié)合的位置；
測試卡盒由盒體和盒蓋組成，盒蓋上設(shè)有一個加樣孔和一個閱讀窗口，加樣孔正對樣 品墊；閱讀窗口正對NC膜；盒體的中部設(shè)有用于固定所述試劑條的凹槽，凹槽的兩側(cè)均 勻設(shè)有用于與盒蓋連接的凸柱。
相比現(xiàn)有技術(shù)，本實用新型具有如下優(yōu)點
本實用新型采用膠體金標(biāo)記技術(shù)原理，即用膠體金作為示蹤標(biāo)記物，依據(jù)新城疫抗原
抗體反應(yīng)的特異性；根據(jù)膠體金的高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)等物理特性， 加上結(jié)合物所具有的免疫牛物學(xué)特性，對新城疫病毒血凝素蛋白單克隆抗體進行標(biāo)記。 再利用免疫膠體金層析技術(shù)制成膠體金試劑條，該試紙條可以檢測患病動物血液、糞便中 的新城疫病毒。這種技術(shù)具有操作方便、快速的特點，而且敏感和特異性好。
新城疫免疫膠體金測試卡結(jié)構(gòu)簡單，易于掌握使用；并且成本低廉，適用于基層或臨 床檢測新城疫病毒；可以檢測禽類血液、糞便的新城疫病毒，10rain左右出結(jié)果，敏感性 達10ng/ml，可用干新城疫的快速診斷，適用于涉及需要新城疫快速診斷或檢測的養(yǎng)殖場、 防疫檢疫部門以及醫(yī)療機構(gòu)等。


圖1是本實用新型試劑條的結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2是本實用新型測試卡盒的結(jié)構(gòu)示意圖； 圖3是本實用新型測試卡盒體的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對木實用新型作進一步說明。
如圖1所示， 一種新城疫免疫膠體金測試卡，由試劑條和測試卡盒構(gòu)成；其中，試劑 條由背襯:l、樣品墊2、結(jié)合墊3、硝酸纖維NC膜4和吸水墊5組成；背襯l、樣品墊2、
結(jié)合墊3、硝酸纖維NC膜4和吸水墊5均為寬度相當(dāng)?shù)谋∑瑮l形結(jié)構(gòu)，背襯1上平面的中 部設(shè)有NC膜4 (即硝酸纖維NC膜)，硝酸纖維NC膜4的兩端分別相鄰連接結(jié)合墊3和吸 水墊5;樣品墊2設(shè)于結(jié)合墊3的上方；結(jié)合墊3上噴有金標(biāo)抗體Abl (新城疫病毒單克 隆抗體)；硝酸纖維NC膜4上噴有線寬為1 mm的捕獲抗體Ab2 (羊抗NDV抗體)和質(zhì)控抗 體Ab3 (兔抗Balb/C球蛋白抗體)；結(jié)合墊3放在金標(biāo)抗體與樣品中NDV結(jié)合的位置。
如圖2和圖3所示，測試卡盒由盒體11和盒蓋8扣合(卡接)而成，盒蓋8上設(shè)有 一個加樣孔9和一個閱讀窗口 10，加樣孔9正對樣品墊2，是加樣品的位置；閱讀窗口 10 正對硝酸纖維NC膜4，閱讀窗口 10旁印有T和C字母，分別代表NC膜檢測線的位置和質(zhì) 控線的位置。盒體U的中部設(shè)有用于固定所述試劑條的凹槽12，凹槽12的兩外側(cè)均勻設(shè) 有用于與盒蓋8連接的凸柱13;圖中，14是起支撐作用的凸塊。
使用本實用新型快速檢測新城疫病毒的方法，步驟如下
1、 本實用新型利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和膠體金免疫層析簡單快速原理，建立了 新城疫病毒單克降抗體(Abl.， Antibody 1)和羊抗新城疫病毒多克隆抗體(Ab2， Antibody 2) 以及羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗體(Ab3， Antibody 3);
2、 確定結(jié)合華設(shè)《i::處卵.液(80mM Na2B4O710H2O， 0.1% PVA, 0.1% Tween-20， 0.3%BSA，所述百分比均為重量百分比濃度)，將結(jié)合墊(玻璃纖維膜)浸泡于處理液中， 在4。C條件下過夜(約12小時)；然后干37'C條件下烘千(4一5h);再將Abl標(biāo)記膠體金 并噴在結(jié)合墊上；然后在硝酸纖維NC膜上噴有線寬為1咖的捕獲抗體Ab2 (羊抗NDV抗 體)和質(zhì)控抗體Ab3 (兔抗Ba]b/C球蛋白抗體)；最后通過結(jié)合墊、樣品墊、背襯、塑料 卡等分別組裝成試劑條和測試卡。
3、 將待檢測的杼品加在樣品墊上過濾后，樣品中的NDV與結(jié)合墊中的金標(biāo)抗體Abl 結(jié)合，通過層析作用先與NC膜上的Ab2結(jié)合形成可見的結(jié)合線(檢測線，簡稱T線)，未 結(jié)合完的金標(biāo)抗休繼續(xù)層析與Ab3結(jié)合，形成第二條結(jié)合線(質(zhì)控線，簡稱C線)；
4、 觀察結(jié)果陽性則出現(xiàn)兩條結(jié)合線；陰性則僅出現(xiàn)一條.C線；試劑條無效則不出
現(xiàn)線條。
以上實施方式僅用f-幫助木領(lǐng)域技術(shù)人員更加全面的理解本實用新型，但并不對本實用
新型作任何PL:制。凡依照本實用新型的內(nèi)容所做出的任何本領(lǐng)域等同的替換均屬于本實用新
型保護的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求1、一種新城疫免疫膠體金測試卡，由試劑條和測試卡盒構(gòu)成；其中，試劑條由背襯(1)、樣品墊(2)、結(jié)合墊(3)、NC膜(4)和吸水墊(5)組成，背襯(1)上中部設(shè)有NC膜(4)，NC膜(4)的兩端分別相鄰連接結(jié)合墊(3)和吸水墊(5)；樣品墊(2)設(shè)于結(jié)合墊(3)的上方；結(jié)合墊(3)上噴有金標(biāo)抗體Ab1；NC膜(4)上噴有線寬為1mm的捕獲抗體Ab2(6)和質(zhì)控抗體Ab3(7)；結(jié)合墊(3)放在金標(biāo)抗體與樣品中NDV結(jié)合的位置；測試卡盒由盒體(11)和盒蓋(8)組成，盒蓋(8)上設(shè)有一個加樣孔(9)和一個閱讀窗口(10)，加樣孔(9)正對樣品墊(2)；閱讀窗口(10)正對NC膜(4)；盒體(11)的中部設(shè)有用于固定所述試劑條的凹槽(12)，凹槽(12)的兩側(cè)均勻設(shè)有用于與盒蓋(8)連接的凸柱(13)。
專利摘要本實用新型提供一種新城疫免疫膠體金測試卡，由試劑條和測試卡盒構(gòu)成；其中，試劑條由背襯、樣品墊、結(jié)合墊、NC膜和吸水墊組成，背襯上中部設(shè)有NC膜，NC膜的兩端分別相鄰連接結(jié)合墊和吸水墊；樣品墊設(shè)于結(jié)合墊的上方；結(jié)合墊上噴有金標(biāo)抗體Ab1；NC膜上噴有線寬為1mm的捕獲抗體Ab2和質(zhì)控抗體Ab3。測試卡盒由盒體和盒蓋組成，盒蓋上設(shè)有一個加樣孔和一個閱讀窗口，盒體的中部設(shè)有用于固定所述試劑條的凹槽，凹槽的兩側(cè)均勻設(shè)有用于與盒蓋連接的凸柱。它具有結(jié)構(gòu)簡單，測試操作方便、快速等特點，而且成本較低；適用于基層或臨床檢測新城疫病毒；10min左右出結(jié)果，敏感性達10ng/ml。
文檔編號G01N33/558GK201203618SQ20082009843
公開日2009年3月4日 申請日期2008年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月29日
發(fā)明者吳勝昔, 胡仁建, 蔡家利 申請人:重慶工學(xué)院