專(zhuān)利名稱(chēng)：一種具有抗新城疫病毒活性的鵝源基因rig-i及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種具有抗新城疫病毒(Newcastle diseasevirus, NDV)活性的鵝源基因序列，以及該基因的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
新城疫是一種對(duì)禽類(lèi)有高度傳染性和致死性的傳染病，由于雞是最易感的鳥(niǎo)類(lèi)，所以該病常對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的損失。該病由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起，NDV為副黏病毒科腮腺炎病毒屬的成員，為單股負(fù)鏈不分節(jié)段有囊膜RNA病毒。模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors, PRR)是宿主重要的天然免疫系統(tǒng)，可識(shí)別多種微生物成分，如病毒的核酸等，迅速啟動(dòng)多種信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，合成一系列的細(xì)胞因子，包括I型干擾素和炎性細(xì)胞因子，在抗病毒先天性免疫中發(fā)揮重要的作用。其中，RIG-1 樣受體(RIG-1 like receptor, RLR)為一類(lèi)存在與胞內(nèi)的 PRR(包括RIG-1，MDA5,LGP2)，主要負(fù)責(zé)識(shí)別RNA病毒，激活信號(hào)通路產(chǎn)生I型IFNs以及炎性細(xì)胞因子。鵝在中國(guó)作為一種重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物， 在我國(guó)各地均有飼養(yǎng)。鵝作為水禽雖然近年來(lái)不斷有發(fā)生新城疫的報(bào)道，但相對(duì)于陸生禽類(lèi)，其對(duì)NDV有較強(qiáng)的抵抗力，但對(duì)其抗病毒先天性的免疫研究還較少。鵝是否存在RLR以及其是否發(fā)揮生物學(xué)功能并不清楚。本發(fā)明首次對(duì)鵝的RIG-1基因進(jìn)行擴(kuò)增，并通過(guò)將鵝RIG-1轉(zhuǎn)染293T及DFl細(xì)胞，觀察對(duì)NDV復(fù)制的影響，以及對(duì)NDV感染導(dǎo)致的鵝內(nèi)源性RIG-1的變化進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)鵝RIG-1在抗NDV先天性免疫中具有一定作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有鵝源抗新城疫病毒基因RIG-1。本發(fā)明的再一目的在于抗新城疫病毒基因RIG-1的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明所述的一種具有鵝源抗新城疫病毒基因RIG-1，其鵝源基因RIG-1 mRNA的序列如SEQ ID N0.1所示，全長(zhǎng)2805bp。其中，本發(fā)明由所述基因RIG-1編碼的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。具有鵝源抗新城疫病毒基因gRIG-1結(jié)構(gòu)域(gRIG-1 CARD)的核苷酸序列如SEQID N0.3 所示。由所述基因gRIG-1結(jié)構(gòu)域(gRIG-1 CARD)編碼的蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDN0.4所示。RIG-1核苷酸序列，如SEQ ID N0.1所示:
atgacggcggacgagaagcggagcctgcagtgctaccggcggtacatcgagcggagcctcaaccccgtctacgtgctgggcaacatggcggactggctgcccgacgagctgcgggagaggatccgcaaggaggaggagaggggggtgagcggcgccgccgcgctctttctggacgccgtcctgcagctggaggcccgcggctggttccgagggatgctggacgcaatgctggccgcaggtcacacaggactggcagaagcaattgagaactgggacttcagcaaactggaaaaactggagttacacagacagctgttgaagcggatagaggcaacaatgttagaagtcgacccagtagtgctcattccctacataaacac
權(quán)利要求
1.一種具有抗新城疫病毒活性的鵝源基因RIG-1，其特征在于，鵝源基因RIG-1 mRNA的序列如SEQ ID N0.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基因RIG-1編碼的蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛋白，其氨基酸序列如SEQID N0.2所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有鵝源抗新城疫病毒基因RIG-1，其特征在于，所述基因gRIG-1結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述基因RIG-1編碼的蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求2
7.含有權(quán)利要求1
8.含有權(quán)利要求7
9.根據(jù)權(quán)利要求1NDV產(chǎn)品中的應(yīng)用。所述的蛋白，其氣基酸序列如SEQ ID N0.4所不?；?所述基因的重組載體質(zhì)粒。所述的重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。-6任意一項(xiàng)所述具有鵝源抗新城疫病毒`基因RIG-1在用于制備抗
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有抗新城疫病毒活性的鵝源基因RIG-I，其基于鴨源RIG-I基因，擴(kuò)增了鵝源RIG-I基因mRNA序列，發(fā)現(xiàn)兩者同源性達(dá)到93.8%。本發(fā)明將全長(zhǎng)gRIG-I(gRIG-Ifull)和gRIG-ICARD結(jié)構(gòu)域(gRIG-ICARD)，轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行過(guò)表達(dá)，證實(shí)外源表達(dá)的gRIG-I可發(fā)揮抗NDV效應(yīng)。用3種NDV病毒分別感染原代鵝胚成纖維細(xì)胞(GEF)和2周齡的揚(yáng)州鵝檢測(cè)gRIG-ImRNA水平；發(fā)現(xiàn)GEF感染NDV后gRIG-ImRNA水平均出現(xiàn)了上調(diào)。感染NDV后鵝的肺和氣囊組織中g(shù)RIG-ImRNA水平均出現(xiàn)了上調(diào)，并且體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中病毒生長(zhǎng)均受到了抑制。
文檔編號(hào)C12N1/19GK103173455SQ20121028189
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2012年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月9日
發(fā)明者丁鏟 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所