專利名稱：：一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種牛奶及其制品中納他霉素的含量的測定方法，特別是涉及一種通過效液相色i普儀對牛奶中納他霉素的含量進(jìn)行檢測的方法。
背景技術(shù)：
：納他霉素(Natamycin)也稱游鏈霉素(Pimaricin),商品名為霉克(Natamycin)是一種重要的多烯類大環(huán)內(nèi)酯抗菌素，能有效的抑制酵母菌和霉菌的生長，阻止絲狀真菌中黃曲霉素的形成。1996年我國食品添加劑委員會會對納他霉素進(jìn)行評價并建議批準(zhǔn)使用，現(xiàn)已列入食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)我國《食品添加劑食用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760)規(guī)定，食品中最大殘留量是IO.Omg/kg。納他霉素已經(jīng)被作為食品的防腐劑而得到廣泛的應(yīng)用，不僅在牛奶中，牛奶制品如酸奶、干酪中也常常添加已起到防腐作用，但是目前還沒有制定牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，因此建立一種快速、準(zhǔn)確、方便和經(jīng)濟(jì)的檢測方法，有利于監(jiān)控奶制品生產(chǎn)廠家納他霉素的添加使用量，從而保障食品安全。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，克服前處理沉降蛋白技術(shù)上的缺陷，通過摸索提取液最佳配比，最佳的提取時間和最佳色i普條件而提供一種牛奶及其制品中納他霉素的含量測定方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計方案本發(fā)明的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法包括如下步驟充分混勻待測試樣2.0g加入曱醇和水(9+1)8.Oml,充分渦動提取10min,稱重，z使試樣和所加甲醇水溶液總重量在10.OOOO士O.1g(試樣重量和提取液總重量控制在1:4左右)，記錄稱重數(shù)據(jù)后，在4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液；稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲備液，然后進(jìn)一步用曱醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜4義對標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行;險測；計算結(jié)果，試樣中納他霉素的計算公式為cx附i式中X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);m2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。優(yōu)選地，所述^是耳又:容劑為曱醇和水，比例為9:1。4尤選;也，渦動l是耳又時間為10min。優(yōu)選地，所述待測試樣在整個的制備過程中采用質(zhì)量濃度進(jìn)行操作和計算。優(yōu)選地，4。C的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白。優(yōu)選地，利用高效液相色i普儀對試樣處理液進(jìn)行檢測，檢測條件為.-色^普;)i:AgilentC185.0|um,250x4.6mm流動相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動進(jìn)樣器；進(jìn)樣量lOpl;溫度30°C;并根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。本發(fā)明的優(yōu)點是采用本發(fā)明的方法檢測牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，快速有效，誤差率小于5%，檢出限為1.Omg/kg。由此可見，本發(fā)明的方法，為檢測牛奶中納他霉素的含量，提供了一種可靠的便于實施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。具體實施例方式實施例1,液體奶中納他霉素含量的精密度和回收率4企測稱取充分混勻的待測試樣2.0024g，(精確稱量至0.0001克)，置于50ml的離心管中，加入曱醇和水(9+1)6.0ml,充分渦動提取10min,稱重，^使試才羊和所加曱醇水溶液總重量在10.019g(試樣重量和曱醇水溶液總重量控制在l:4左右)，記錄稱重數(shù)據(jù)后，在4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.5°/。美國Aldrick)10.00mg,用曱醇溶解并稱重至10.OOOOg,濃度為1000mg/kg的儲備液，然后進(jìn)一步用曱醇稀釋50倍作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，再稀釋為0.1、0.5、1.0、20.Omg/kg的標(biāo)準(zhǔn)使用液。檢測儀器為現(xiàn)有的島津-20A高效液相色語儀檢測條件為色i普;f主AgilentC185.0|um，250x4.6mm流動相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動進(jìn)樣器；進(jìn)樣量lOpl;溫度30°C;根據(jù)其質(zhì)譜峰定性，外標(biāo)法定量。計算結(jié)果，試樣中納他霉素的計算公式為:式中X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);柳2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。經(jīng)過計算，結(jié)果為試樣中納他霉素的含量按公式(1)進(jìn)行計算，結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2,固體干酪中納他霉素精密度和回收率的檢測稱取充分混勻的待測試樣2.0001g,(精確稱量至0.0001克)，置于50ml的離心管中，加入曱醇和水(9+1)6.0ml,充分渦動提取10min,稱重，使試樣和所加曱醇水溶液總重量在10.0340g(試樣重量和甲醇7水溶液重量控制在l:4左右)，記錄稱重數(shù)據(jù)后，在4.0。C的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.5%美國Aldrick)10.00mg,用甲醇溶解并稱重至10.0000g,濃度為1000mg/kg的儲備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋50倍作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，再稀釋為0.1、0.5、1.0、20.0mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)4吏用液。檢測儀器為現(xiàn)有的島津-20A高效液相色語儀檢測條件為色語柱AgilentC185.0jum，250x4.6mm流動相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動進(jìn)樣器；進(jìn)樣量10|li1;溫度30°C;根據(jù)其質(zhì)鐠峰定性，外標(biāo)法定量。計算結(jié)果，試樣中納他霉素的計算公式為式中-.X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);附2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。經(jīng)過計算，結(jié)果為試樣中納他霉素的含量按公式(1)進(jìn)行計算，結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>顯而易見，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，可以用發(fā)明的一種通過高效液相色譜儀對牛奶及其制品中納他霉素含量進(jìn)行測定。上述實施例僅供說明本發(fā)明之用，而并非是對本發(fā)明的限制，有關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的技術(shù)方案也應(yīng)屬于本發(fā)明的范疇，本發(fā)明的專利保護(hù)范圍應(yīng)由各權(quán)利要求限定。權(quán)利要求1、一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于所述測定方法包括如下步驟稱取充分混勻的待測試樣2.0000+±0.1g，加入甲醇和水(9+1)8.0ml，充分渦動提取10min，稱重，使試樣和所加提取液總重量在10.0000±0.0100g(試樣重量和提取液總重量控制在1∶4左右)，記錄稱重數(shù)據(jù)后，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液，。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜儀對標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行檢測；計算結(jié)果，試樣中納他霉素的計算公式為2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于所述曱醇和水(9+1)提取，理想的提取液配比，很好的控制了雜質(zhì)的千擾，并保證了回收率。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于渦動提取時間為10min,此條件下具有最好的混合提耳又效率。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于所述試樣重量和提取液總重量控制在1:4左右，此條件下具有最佳提取和沉降蛋白效率。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白，具有很好的沉降效果。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于所述利用高效液相色譜4義對試樣處理液進(jìn)行檢測的條件為色譜柱AgilentC185.0fim,250x4.6mm流動相甲醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動進(jìn)樣器；進(jìn)樣量10^1;溫度30°C;此條件下具有4艮好的分離效果7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法，其特征在于利用較為普遍、適用的高效液相色語儀對牛奶及其制品中納他霉素的含量進(jìn)行檢測。全文摘要本發(fā)明涉及一種通過高效液相色譜儀對牛奶及其制品中納他霉素含量的測定方法。即待測試樣中加入甲醇和水(9+1)，充分渦動提取，稱重后高速冷凍離心沉降蛋白，然后過濾凈化獲得試樣液；稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜儀對試樣處理液進(jìn)行檢測；然后便可計算出結(jié)果。采用本發(fā)明的方法檢測牛奶中納他霉素的含量，快速有效，相對平均偏差小于5.0％，由此可見，本發(fā)明的方法，為牛奶及其制品中納他霉素含量的檢測，提供了一種可靠的便于實施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。文檔編號G01N30/00GK101221154SQ200810057140公開日2008年7月16日申請日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2008年1月30日發(fā)明者薇宋申請人:譜尼測試科技(北京)有限公司