專利名稱：：篩選方法、純化非擴散A-β寡聚體的方法、抗所述非擴散A-β寡聚體的選擇性抗體以及制備...的制作方法篩選方法、純化非擴散A-p寡聚體的方法、抗所述非擴散A-卩寡聚體的逸擇性抗體以及制備所述抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體("球寡聚體"(globulomer))或其衍生物、富集所迷球寡聚體或衍生物的方法、包含所述球寡聚體或衍生物的組合物、對所述球寡聚體或衍生物具有特異性的抗體及適體、制備這種抗體及適體的方法、所述球寡聚體或衍生物或者所述抗體或適體用于診斷、治療及其他目的的用途、以及使用所述球寡聚體或衍生物或者所述抗體或適體的相應(yīng)方法。阿爾茨海默氏病(AD)是一種常見的神經(jīng)變性癡呆病癥，其特征在于認(rèn)知能力的漸進性喪失以及還在于特征性神經(jīng)病理學(xué)特征，該特征包括在數(shù)個腦區(qū)域中的細胞外淀粉狀蛋白沉積、細胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元的損孝毛(Mattson，MP.PathwaystowardsandawayfromAlzheimer'sdisease.Nature430，631-639(2004);Hardy,J.&Selkoe,D丄TheamyloidhypothesisofAlzheimer'sdisease:progressandproblemsontheroadtotherapeutics.Science297,353-356(2002))。所述淀粉狀蛋白沉積的主要組分是淀粉狀蛋白P肽。阿爾茨海默氏病的一個病理學(xué)標(biāo)志是淀粉狀蛋白卩(Ap)卜42的過度形成，所述淀粉狀蛋白P(Ap)l-42聚集并且是特征性斑的主要成分。A卩(l-42)來源于淀粉狀蛋白前體蛋白(APP)，以及APP的反常加工，導(dǎo)致Ap(l-42)的增產(chǎn)，其在過去已經(jīng)是一種深入研究的物質(zhì)。Hardy及Higgins的淀粉狀蛋白級聯(lián)假說(Hardy,J.A.&Higgins,G,A.Alzheimer'sdisease:theamyloidcascadehypothesis.Science256,184-185(1992))推定增加的AI3(l-42)生產(chǎn)導(dǎo)致其聚集為增長尺寸的原纖維(從所謂的初原纖維開始)并最終形成斑塊樣沉積，以及所述原纖維的A)3沉積是阿爾茨海默氏病中神經(jīng)病理學(xué)癥狀的原因。該假說直到最近都是最被贊成的，盡管癡呆病與淀粉狀蛋白斑塊負(fù)荷的相關(guān)性在AD病人中是相當(dāng)差的(Katzman,R.等人.Clinical,pathological,andneurochemicalchangesindementia:asubgroupwithpreservedmentalstatusandnumerousneocorticalplaques.AnnNeurol23，138-144(1988);Naslund，丄等人.Correlationbetweenelevatedlevelsofamyloidbeta-peptideinthebrainandcognitivedecline.JAMA283，1571-1577(2000))。值得注意的是類似的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)在唐氏綜合癥中找到，表示涉及相同的機理。近來已經(jīng)討論寡聚體作為AD病理學(xué)的重要毒性物質(zhì)，其第一次僅描述為原纖維以及斑塊形成過程的中間體?？扇堋⒐丫鄣腁卩在AD病人腦中的出現(xiàn)(Kuo，Y.M.等人.Water-solubleAbeta(N-40,N-42)oligomersinnormalandAlzheimerdiseasebrains.JBiolChem271，4077-4081(l996))與AD癥狀的相關(guān)性比斑塊負(fù)荷好(Kuo,Y.M.等人.Water-solubleAbeta(N-40，N-42)oligomersinnormalandAlzheimerdiseasebrains.JBiolChem271，4077-4081(1996);McLean,C.A.等人.SolublepoolofAbetaamyloidasadeterminantofseverityofneurodegenerationinAlzheimer'sdisease.AnnNeurol46,860-866(1999))。這已經(jīng)導(dǎo)致修改的淀粉狀蛋白級聯(lián)假說(Hardy,J.&Selkoe，D.J.TheamyloidhypothesisofAlzheimer'sdisease:progressandproblemsontheroadtotherapeutics.Science297,353-356(2002))。如所述Ap(l-42)球寡聚體的可溶集合體而非不溶的原纖維聚集體可在AD中引起早期神經(jīng)元改變的可能性已經(jīng)獲得了許多關(guān)注，這因為前原纖維(prefibrillary)可溶的皮層水平與神經(jīng)元喪失的程度及認(rèn)知損傷的嚴(yán)重性之間的強相關(guān)的最初觀察。(McLean,C.A.等人.SolublepoolofAbetaamyloidasadeterminantofseverityofneurodegenerationinAlzheimer'sdisease.AnnNeurol46,860-866(1999);Lue,L.F.等人.SolubleamyloidbetapeptideconcentrationasapredictorofsynapticchangeinAlzheimer'sdisease.AmJPathol.155，853-862(1999);Wang,J.,Dickson，D.W.，Trojanowski，J,Q.&Lee,V.M.ThelevelsofsolubleversusinsolublebrainAbetadistinguishAlzheimer'sdiseasefromnormalandpathologicaging.ExpNeurol158,328-337(1999))。最近的工作表明體外生成A卩的可溶、寡聚形式的可能性(Lambert,MP.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbeta1-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins,Proc.Natl,Acad.SciU,S,A95,6448-6453(1998);Walsh，D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002))。A卩的這些可溶、寡聚形式的一些被證明對神經(jīng)元是有害的，因為特異結(jié)合突觸頭(Lacor，P.N.等人.SynaptictargetingbyAlzheimer's-relatedamyloid卩oligomers.JNeurosci24,10191-10200(2004))。這種特異相互作用可能是所觀察到抑制海馬長時程增強(LTP)(—個突觸可塑性及記憶的試驗性范例)的原因(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibrilarligandsderivedfromAbeta1-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95，6448-6453(1998);Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416，535-539(2002))。對于可溶A卩形式在AD發(fā)病機理中的關(guān)鍵作用的進一步證據(jù)來自在人類APP轉(zhuǎn)基因小鼠中不溶A卩沉積以前認(rèn)知損傷發(fā)展的報道(Buttini,M等人，ModulationofAlzheimer-likesynapticandcholinergicdeficitsintransgenicmicebyhumanapolipoproteinEdependsonisoform,aging，andoverexpressionofamyloidbetapeptidesbutnotonplaqueformation.JNeurosci22，10539-10548(2002);Hsia,A.Y.等人.Plaque-independentdisruptionofneuralcircuitsinAlzheimer'sdiseasemousemodels.Proc.Natl.AcadSciU.S.A96,3228-3233(1999);Mucke，L.等人.High-levelneuronalexpressionofabeta1-42inwild-typehumanamyloidproteinprecursortransgenicmice:synaptotoxicitywithoutplaqueformation.JNeurosci20,4050-40S8(2000))。從那以后，許多研究者已經(jīng)將合成A卩制品使用到可溶A(3-介導(dǎo)的神經(jīng)毒性模型(在Walsh，D.M&Selkoe,D丄DecipheringthemolecularbasisofmemoryfailureinAlzheimer'sdisease.Neuron44，18"193(2004)中綜述)。然而，A|3肽(特別是Ap(l-42))在含水溶液中迅速聚集為各種聚合結(jié)構(gòu)，包括可溶寡聚體、初原纖維及原纖維的固有習(xí)性(Stine，W.B.，Jr.，Dahlgren，K.N.,Krafft,G.A.&LaDu,M丄Invitrocharacterizationofconditionsforamyloid-betapeptideoligomerizationandfibrillogenesis.JBiolChem278,11612-11622(2003))，使得不可能將所觀察的神經(jīng)毒作用歸因于多聚A(3締合的一種特定形式。因此，數(shù)個研究組近來已經(jīng)試著去分離可溶A卩(l-42)集合體以及試驗它們的神經(jīng)毒活性。Lambert及合作者(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbetal-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95,6448-6453(1998))描述了一種小的可溶A|3(l-42)聚集體(在SDS-PAGE上4-18kDa)的混合物，他們稱其為"AP-衍生的可擴散配體"(ADDL)。它們能夠顯示濃度低到500nm的ADDL在細胞培養(yǎng)物中引起神經(jīng)元死亡并且?guī)缀鯊氐鬃钄郘TP(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbeta1-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95，6448-6453(1998);Wang，H.W.等人，Solubleoligomersofbetaamyloid1-42inhibitlong-termpotentiationbutnotlong-termdepressioninratdentategyrus.BrainRes924，133-140(2002))。在另一種非合成的方法中，將A卩寡聚體通過表達突變型人類APP的細胞系釋放入培養(yǎng)基(Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002);Podlisny，M.B.等人.Aggregationofsecretedamyloidbeta-proteinintosodiumdodecylsulfate-stableoligomersincellculture.JBiolChem270，9564-9570(1995))。含有未表征Ap(l-42)寡聚體的該條件培養(yǎng)基的等分試樣在低納摩爾濃度在體內(nèi)及體外阻斷LTP(Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416，535-539(2002);Wang,Q.,Walsh，D.M.,Rowan,M丄，Selkoe,D丄&Anwyl，R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin-dependentkinase5,andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5.JNeurosci24,3370-3378(2004))。WO98/33815及WO01/10900(G.A.Krafft等人)描述了特定的、可擴散的淀粉狀蛋白P1-40-或-1-42衍生的癡呆型配體(dementingligand),作為神經(jīng)毒原則的所謂ADDL(淀粉狀蛋白卩(A卩)-衍生的可擴散配體)，其選擇性阻斷長時程增強(LTP)。根據(jù)WO98/33815及WO01/10900,已經(jīng)建議ADDL是所述神經(jīng)毒物質(zhì)以及ADDL在腦中的存在是阿爾茨海默氏病(AD)主要癥狀發(fā)生及發(fā)展的病因和因此是其主要風(fēng)險因素。A卩寡聚體對于AD病理學(xué)的相關(guān)性已經(jīng)通過它們在AD病人腦中的檢測得到強調(diào)(Gong，Y.等人.Alzheimer'sdisease-affectedbrain:presenceofoligomericA卩Hgands(ADDL)suggestsamolecularbasisforreversiblememoryloss.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A100，10417-10422(2003))。如在Lambert等人.1998,Walsh等人.2002,Gong等人.2003，WO98/33815及WO01/10900中所用的術(shù)語"可擴散的"，指ADDL(寡聚A卩(l-42)或A卩(l-40))的特征在于當(dāng)注入到大鼠海馬時它們迅速擴散，而與寡聚-或多聚-AI3(l-42)或Ap(l-40)原纖維保留在所述注射軌道中相反(A.M.Manelli等人.，JournalofMolecularNeuroscience，2004,Vol.23，235-246)。同樣地，腦室內(nèi)注射之后，觀察到"可擴散的"寡聚體在所述液體內(nèi)擴展并滲透入CNS的次表層。盡管這些報道，對于AP寡聚體的病理學(xué)及功能的試驗性方法仍然是困難的，因為迄今為止沒有明確定義的、純的且穩(wěn)定的制品可用，這使得基本病理結(jié)構(gòu)的確認(rèn)不可能。在WO2004/067561(AbbottGmbH&Co.KG)之前沒有神經(jīng)病理學(xué)效果可歸因于單個獨特的寡聚AP物質(zhì)的觀點，所述文獻描述了一種新的且高度穩(wěn)定的A(3(l-42)寡聚體物質(zhì)。由于該寡聚Ap物質(zhì)的均一性以及特征性球狀立體結(jié)構(gòu)，其被命名為"AP(I-42)球寡聚體"。A(3(l-42)球寡聚體可容易地且可再生產(chǎn)地在體外從合成Ap肽生成。物理化學(xué)的表征顯示為大約60kDa大小的高度溶于水的球狀A(yù)p(l-42)寡聚體("A卩(l-42)球寡聚體"),其是在小鼠及兔中引起Ap(l-42)球寡聚體-特異抗體生成的強有力抗原，該特異抗體不與淀粉狀蛋白前體蛋白交叉反應(yīng)。令人驚訝且出乎意料地，描述于WO2004/067561(AbbottGmbH&Co.KG)的所述可溶球狀A(yù)p(l-42)寡聚體("球寡聚體")特異地結(jié)合神經(jīng)元的樹狀突，而不結(jié)合海馬細胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)膠質(zhì)。與組織的結(jié)合非常堅固并且導(dǎo)致在大鼠中i.c.v.注射之后立即去除。因此，在當(dāng)前檢測限度之內(nèi)，AJ3(l-42)球寡聚體沒有在AD病人的腦脊液中檢測到。這意味著，令人驚訝且出乎意料地，根據(jù)WO2004/067561(AbbottGmbH&Co.KG)的所述癡呆型A卩(l-42)球寡聚體具有非擴散(non-diffusible)的性質(zhì)以及對阿爾茨海默氏病的發(fā)生及發(fā)展負(fù)責(zé)的毒性原則的特征在于以"非擴散"代替"可擴散"的特征，所述"可擴散"如WO98/33815以及以上所討論的類似公開物所假定。所述非擴散A卩(l-42)球寡聚體的記憶損害能力通過在大鼠海馬切片中長時程增強(LTP)的完全阻斷顯示。因此，預(yù)料A卩(l-42)球寡聚體的選擇性中和具有治療AD的高可能性。目前，本發(fā)明人假定該特定的、非擴散球狀寡聚體沿新的聚集路徑生成而不依賴于A卩原纖維形成并且代表一種新的阿爾茨海默氏病病理學(xué)實體。因為它存在于AD病人及APP轉(zhuǎn)基因小鼠的腦中，以及還特異結(jié)合神經(jīng)元并阻斷LTP，本發(fā)明人相信特征在于新的結(jié)構(gòu)表位的該球狀A(yù)卩寡聚體將提供一種闡明與AP寡聚體有關(guān)的神經(jīng)病理學(xué)以及通過特定治療在臨床上解決AD病人缺陷的空前可能性。進一步地，本發(fā)明人目前能夠顯示通過在體內(nèi)使用抗AP球寡聚體抗體如多克隆抗體5598或單克隆抗體8F5，交叉反應(yīng)性物質(zhì)不局限于所述A卩(l-42)序列，而且擴展至其他A卩(x-y)物質(zhì)，例如A卩(l-40)及A卩(l-38)。因此，本發(fā)明涉及非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體("球寡聚體")或它們的衍生物，其中X選自數(shù)字1..24。當(dāng)在此使用時，省略符號A..B表示包括所有的從A到B的自然數(shù)的組，包括二者在內(nèi)，例如，"7,.20"因而表示數(shù)字17、8、19及20的組。短線表示氨基酸的拼接序列，即，"X-Y"包括氨基酸X到氨基酸Y的序列，包括二者在內(nèi)。因此，"A..B-C..D"包括這兩組的成員之間所有可能的組合，例如，"17..20-40..42"包括以下所有17-40、17-41、17-42，18-40、18-41、18-42、19-40、19-41、19-42、20-40、20-41及20-42。除非另有說明，所有數(shù)字是指成熟肽的開始，l表示N-末端氨基酸。術(shù)語"AP(X-A..B)"是術(shù)語"Ap(X-A/B)"的同義詞并且可以與其互換使用。根據(jù)一個具體實施方案，所迷非擴散球狀寡聚體或它們的衍生物選自非擴散球狀A(yù)p(X-40)寡聚體以及非擴散球狀A(yù)卩(X-42)寡聚體或者它們的衍生物，其中X選自數(shù)字8..24，優(yōu)選自數(shù)字12，.24,更優(yōu)選自數(shù)字12,.20并且最優(yōu)選自數(shù)字17..20。根據(jù)進一步的具體實施方案，所述非擴散球狀寡聚體或者它們的衍生物選自非擴散球狀A(yù)p(X-38)寡聚體、非擴散球狀A(yù)p(X-39)寡聚體以及非擴散球狀A(yù)J3(X-41)寡聚體，或者它們的衍生物。根據(jù)還進一步的具體實施方案，所述非擴散球狀寡聚體或者它們的衍生物選自非擴散球狀A(yù)p(X-43)寡聚體，或者它們的衍生物。所述非擴散球狀A(yù)p(X-38.，43)寡聚體的衍生物特別地包括交聯(lián)的，優(yōu)選化學(xué)上交聯(lián)的，更優(yōu)選醛交聯(lián)的，最優(yōu)選戊二醛交聯(lián)的非擴散球狀A(yù)卩(X-38.,43)寡聚體。所述非擴散球狀A(yù)(3(X-38,.43)寡聚體的進一步衍生物包括通過共價連接至促進檢測的基團而標(biāo)記的非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體，所述促進檢測的基團優(yōu)選焚光團，例如，異疏氰酸焚光素、藻紅蛋白、Je《wore"v/'c/o〃'<3焚光蛋白、Z)zc(yojcw"焚光蛋白或4壬1可纟且合或者它們的熒光活性衍生物；生色團；化學(xué)發(fā)光團(chemolummophore)，例如，焚光素酶、優(yōu)選尸/zo""us/^"fe熒光素酶、K^z'o/^c/eW熒光素酶、或任何組合或者它們的化學(xué)發(fā)光活性衍生物；酶活性基團，例如過氧化物酶，例如辣根過氧化物酶，或它們的任何酶活性衍生物；電子密集基團，例如含有重金屬的基團，例如含金的基團；半抗原，例如苯酚衍生的半抗原；強抗原性結(jié)構(gòu)，例如預(yù)見是抗原性的肽序列，例如通過Kolaskar及Tongaonkar的算法預(yù)見是抗原性的；對于另一分子的適體；螯合基團，例如六聚組氨酸基；介導(dǎo)進一步特異蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的天然或天然-衍生的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，例如fos/jun對的成員；磁性基團，例如鐵磁性基團；放射性基團，例如，含有'H、14C、32P、3、或1251的基團或者它們的任何組合。這種標(biāo)記基團以及將它們連接至蛋白質(zhì)的方法是本領(lǐng)域已知的。在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，所述非擴散球狀A(yù)(3(X-38..43)寡聚體的衍生物是包括至少一個單體亞單位的非擴散球狀A(yù)(3(X-38..43)寡聚體，所述單體亞單位通過共價或非共價高親合性相互作用而附加標(biāo)志(flagged),優(yōu)選共價連接至促進滅活、螯合、降解和/或沉淀的基團，優(yōu)選以在體內(nèi)促進降解的基團附加標(biāo)志，更優(yōu)選以泛素附加標(biāo)志。如果該附加標(biāo)志的寡聚體是在體內(nèi)組裝，其是特別優(yōu)選的。所述非擴散球狀A(yù)J3(X-38,.43)寡聚體的進一步衍生物包括交聯(lián)且標(biāo)記的或者交聯(lián)且附加標(biāo)志的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述寡聚體或它們的衍生物是可溶的。制備數(shù)個A(3(l-42)及Ap(X-42)寡聚體以及它們的衍生物的方法描述于WO2004/067561。本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物可以以類似的方法制備。因此，本發(fā)明還涉及一種制備非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或尤其是它們的交聯(lián)的、標(biāo)記和/或附加標(biāo)志-衍生物的方法，該方法包括將合適的A卩蛋白或它們的衍生物的制品與去垢劑接觸，接著減少所述去垢劑濃度以及獲得所述非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體。所迷方法的詳細說明公開于WO2004/067561中，其內(nèi)容在此引入作為參考。衍生和/或截短可以在寡聚化之前或之后進行。因此，適于在所述方法中使用的AB蛋白或它們的衍生物包括任選衍生的Ap(X-38,.43)單體，X優(yōu)選自數(shù)字1..24，更優(yōu)選自數(shù)字1..22以及最優(yōu)選自數(shù)字1..20。可選地，并且特別是可用于體外診斷方法，本發(fā)明的"非擴散"球狀A(yù)卩(l-42)寡聚體("球寡聚體")還可從人類或動物神經(jīng)細胞提取，包括但不限于APP-或淀粉狀蛋白p-表達重組或非重組衍生細胞系和/或液體，尤其是腦或脊髄組織和/或液體，然后在如此獲得的提取物或加工提取物中通過使用具有抗所述"非擴散"球狀A(yù)p(l-38.，43)寡聚體("球寡聚體，，)或它們的衍生物如相應(yīng)的截短型Ap(X-38,.43)寡聚體和/或它們的衍生物特異性的抗體直接檢測。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，然后將所得到的非擴散球狀A(yù)P(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物經(jīng)歷一或多個另外的純化步驟，例如，沉淀及再溶解，通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)。因此，本發(fā)明還涉及一種在包含所述寡聚體或衍生物的制品中富集非擴散球狀A(yù)P(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物的方法，該方法包括捕獲所述寡聚體或衍生物以及以富集的形式("主動的"或"正面的"富集)獲得所述寡聚體或衍生物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，富集所迷寡聚體或衍生物的方法包括將所述制品與結(jié)合所述寡聚體或衍生物的試劑接觸。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述試劑被固定。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述試劑是對所述寡聚體或衍生物具有特異性的抗體。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，以富集的形式獲得所述寡聚體或衍生物包括將所捕獲的寡聚體或衍生物解除吸附，優(yōu)選以這樣的方式，即將所捕荻的寡聚體或衍生物解除吸附包括將所捕獲的寡聚體或衍生物與高鹽緩沖液或酸性溶液接觸。本發(fā)明還涉及一種在包含所述寡聚體或衍生物的制品中富集非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物的方法，該方法包括從所述制品除去至少一種不是所述寡聚體或衍生物的物質(zhì)("被動的"或"負(fù)面的"富集)。如果不是所述寡聚體或衍生物的物質(zhì)是A(3單體或A卩原纖寡聚體(fibrillomer)，則這是優(yōu)選的，優(yōu)選二者，以及如果除去所迷物質(zhì)包括將所述制品與特異結(jié)合所述物質(zhì)的試劑接觸，這也是優(yōu)選的。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述試劑被固定。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)逸的實施方案中，所迷試劑是特異結(jié)合所述物質(zhì)的抗體，優(yōu)選以高親合力?？捎糜诔シ乔蚬丫垠wA|3物質(zhì)的抗體包括對C-末端Ap(l-42)物質(zhì)特異的抗Ap(33-42)抗體，例如來自SignetCat,No.9135的抗A卩(33-42)多克隆抗體，以及它們的單克隆等價物，例如來自Signet,Cat.No9142的mAb12F4或抗-A卩(l畫42)mAb、C-末端克隆BDI780;經(jīng)純化的、經(jīng)冷凍千燥的；BiodesignCat.No.Q67780M。在本發(fā)明的一個更優(yōu)選的實施方案中，除去所迷物質(zhì)包括將所迷制品與結(jié)合所述物質(zhì)的抗體接觸，然后將已結(jié)合所述抗體的物質(zhì)進行親合色譜法處理從而去除抗體-抗原復(fù)合物，優(yōu)選進行蛋白A親合色謙法處理。因此，本發(fā)明還涉及一種經(jīng)純化的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，經(jīng)純化的非擴散球狀A(yù)卩(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物是通過如上所定義的富集非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物的方法而可獲得的。在另一個方面，經(jīng)純化的非擴散球狀A(yù)(3(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物具有超過以重量計99%，優(yōu)選超過以重量計99.9%,優(yōu)選超過以重量計99.99%的純度。本發(fā)明還涉及一種包含通過本發(fā)明的方法可獲得的非擴散球狀A(yù)卩(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物的組合物，優(yōu)選包含非擴散球狀A(yù)卩(X-3S.,43)寡聚體或它們的衍生物的組合物，其中所述寡聚體或衍生物的量以重量計是所述組合物的至少99%,優(yōu)選以重量計是所述組合物的至少99.9%以及更優(yōu)選以重量計是所述組合物的99.99%。本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)P(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物，特別以純化形式，具有許多用途，其中一些描述于下。在一個方面，本發(fā)明涉及非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物制備對所述寡聚體或衍生物具有特異性的抗體的用途。因此，本發(fā)明還涉及一種制備對如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的抗體的方法，該方法包括-提供包含所述寡聚體或衍生物的抗原；-將抗體譜(repertoire)或潛在的抗體i普暴露于所述抗原；以及-從所述語選擇特異結(jié)合所述寡聚體或它們的衍生物的抗體。在此將理解的是"潛在的抗體譜"是指氨基酸或相應(yīng)核酸序列的任何庫、集合、集合體或組或者氨基酸序列的這種庫、集合、集合體或組的任何產(chǎn)生者，其可用于在體內(nèi)或在體外產(chǎn)生抗體謙。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述產(chǎn)生者是動物的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，尤其是哺乳動物免疫系統(tǒng)的抗原-產(chǎn)生部分，其通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的重組過程產(chǎn)生抗體多樣性。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，所迷產(chǎn)生者是隨機核酸序列大量產(chǎn)生(spawning)的系統(tǒng)，然后可通過插入合適的抗體框架將其用于在體外產(chǎn)生抗體譜。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，通過用所述抗原使生物體免疫而將所述抗體謙或潛在抗體語在體內(nèi)暴露于所述抗原。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，所述潛在抗體謙是合適核酸的庫，其通過如本領(lǐng)域所述的體外親合性篩選，例如噬菌體展示及淘選系統(tǒng)而暴露于所述抗體。在另一方面，所述發(fā)明還涉及對如上所定義的非擴散球狀A(yù)|3(X-38..43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的抗體。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體是通過包括從如上所迷的鐠或潛在譜選擇所述抗體的方法可獲得的。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體對所迷寡聚體或衍生物的親合力是所述抗體對單體Ap(l-42)結(jié)合親合力的至少2倍，例如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，例如至少20倍，至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，例如至少200倍，至少300倍或至少500倍，以及更加優(yōu)選至少1000倍，例如至少2000倍，至少3000倍或至少5000倍，更加優(yōu)選至少10000倍，例如至少20000倍，至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是所述抗體對單體Ap(l-40)結(jié)合親合力的至少2倍，例如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，例如至少20倍，至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，例如至少200倍，至少300倍或至少500倍，以及更加優(yōu)選至少IOOO倍，例如至少2000倍，至少3000倍或至少5000倍，更加優(yōu)選至少10000倍，例如至少20000倍，至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。有利地，本發(fā)明的抗體結(jié)合具有低親合力，最優(yōu)選具有l(wèi)xl(^M的Ko或更小親合力，例如，具有3xlO'SM的Ko或更小親合力，具有l(wèi)xl0'7M的Ko或更小親合力，例如，具有3xl(V7M的Ko或更小親合力，或具有l(wèi)xl(T6M的Ko或更小親合力，例如，具有3xlO'5M的Kd或更小親合力，或具有l(wèi)xl(T5M的Ko或更小親合力的一種或者更優(yōu)選地兩種單體。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是所述抗體對原纖寡聚的(fibrillomeric)A卩(l-42)結(jié)合親合力的至少2倍，例如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，例如至少20倍，至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，例如至少200倍，至少300倍或至少500倍，以及更加優(yōu)選至少1000倍，例如至少2000倍，至少3000倍或至少5000倍，更加優(yōu)選至少10000倍，例如至少20000倍，至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是所述抗體對原纖寡聚的A卩(l-40)結(jié)合親合力的至少2倍，例如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，例如至少20倍，至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，例如至少200倍，至少300倍或至少500倍，以及更加優(yōu)選至少1000倍，例如至少2000倍，至少3000倍或至少5000倍，更加優(yōu)選至少0000倍，例如至少20000倍，至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。有利地，本發(fā)明的抗體結(jié)合具有低親合力，最優(yōu)選具有l(wèi)xlO"M的Ko或更小親合力,例如，具有3xlO—SM的KD或更小親合力，具有l(wèi)xlO-7M的Ko或更小親合力，例如，具有3xl(T7M的Ko或更小親合力，或具有l(wèi)xl(T6M的Ko或更小親合力，例如，具有3xl(T5M的Kd或更小親合力，或具有l(wèi)xl(T5M的KD或更小親合力的一種或者更優(yōu)選地兩種原纖維。根據(jù)一個特別優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明涉及球寡聚體-特異的抗體。這些尤其包括對Ap的單體及原纖寡聚的形式二者比對所述AP球寡聚體具有相對更小親合力的抗體。術(shù)語"更大的親合力"在此是指相互作用的程度，其中一方面未結(jié)合抗體及未結(jié)合球寡聚體與另一方面抗體-球寡聚體復(fù)合物之間的平衡是更加有利于所述抗體-球寡聚體復(fù)合物。同樣地，術(shù)語"更小的親合力"在此是指相互作用的程度，其中一方面未結(jié)合抗體及未結(jié)合球寡聚體與另一方面抗體-球寡聚體復(fù)合物之間的平衡是更加有利于所述未結(jié)合抗體及未結(jié)合球寡聚體。本發(fā)明還涉及如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物制備對所述寡聚體或衍生物具有特異性的適體的用途。本發(fā)明還涉及一種制備對如權(quán)利要求書中所定義的非擴散球狀A(yù)(3(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的適體的方法，該方法至少包括以下步驟-提供包含所述寡聚體或衍生物的結(jié)合目標(biāo)物；-將適體語或潛在的適體譜暴露于所述結(jié)合目標(biāo)物；以及-從所述語選擇特異結(jié)合所述寡聚體或它們的衍生物的適體。"適體"在此是指能夠特異、非共價結(jié)合其目標(biāo)物，優(yōu)選結(jié)合肽、DNA或RNA序列，更優(yōu)選結(jié)合大約3至100個單體，尤其是大約5至30個單體的肽、DNA或RNA序列，最優(yōu)選結(jié)合大約5至30個氨基酸的肽的任何小分子，其可以在一端或兩端連接至大分子，優(yōu)選介導(dǎo)生物化學(xué)功能的大分子，更優(yōu)選引起滅活和/或降解的大分子，最優(yōu)選泛素，或者優(yōu)選促進破壞的大分子，更優(yōu)選酶或熒光蛋白。在此將理解的是"潛在的適體i普"是指氨基酸序列或相應(yīng)核酸序列的任何庫、集合、集合體或組或者氨基酸序列的這種庫、集合、集合體或組的任何產(chǎn)生者，其可用于在體內(nèi)或在體外產(chǎn)生適體i普。本發(fā)明還涉及一種對如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38.，43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的適體，該適體是通過如所述的方法可獲得的。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述適體通過共價連接至促進檢測的基團而標(biāo)記，所述促進檢測的基團優(yōu)選熒光團，例如，異硫氰酸熒光素、藻纟工蛋白、Jeyworeav/'"o〃'"熒光蛋白、Z)/c/yo5wwa焚光蛋白或任何組合或者它們的熒光活性衍生物；生色團；化學(xué)發(fā)光團，例如，熒光素酶、優(yōu)選尸/io""iw/^ra/^熒光素酶、r/6n.o/i^c/zen'熒光素酶、或孑壬何組合或者它們的化學(xué)發(fā)光活性衍生物；酶活性基團，例如過氧化物酶，或它們的任何酶活性衍生物；重金屬，例如金；半抗原，例如苯酚衍生的半抗原；抗原性結(jié)構(gòu)，例如預(yù)見是抗原性的肽序列；其他適體；介導(dǎo)進一步特異蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的天然或天然-衍生的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，例如fos/jun對的成員；或放射性基團，例如，含有^、14C、32P、"S或|251的基團或者它們的任何組合。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，所述適體通過被共價或非共價高親合性鍵合而附加標(biāo)志，當(dāng)所述適體被結(jié)合至其目標(biāo)物時優(yōu)選共價連接至促進滅活、螯合、降解和/或沉淀的基團，優(yōu)選以在體內(nèi)促進降解的基團附加標(biāo)志，更優(yōu)選以泛素附加標(biāo)志。本發(fā)明還涉及如權(quán)利要求所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物制備治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的藥物組合物的用途。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所迷藥物組合物是用于主動免疫的疫苗。因此，本發(fā)明還涉及一種在需要的受試者中治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的方法，其包括將所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或衍生物給藥給所述受試者。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，給藥非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物是用于主動免疫所述受試者抵抗阿爾茨海默氏病。如果所述組合物的非擴散球狀八^(乂-38..43)寡聚體或其衍生物不能以顯著的量進入患者的CNS，則這是特別優(yōu)選的。如果包含所迷非擴散球狀A(yù)J3(X-38,.43)寡聚體或其衍生物的藥物組合物能夠引起強烈的抗A卩球寡聚體免疫響應(yīng)，優(yōu)選強烈的僅僅抗A卩球寡聚體的免疫響應(yīng)，更優(yōu)選強烈的基于非炎性抗體的僅僅抗Ap球寡聚體的免疫響應(yīng)，則這還是特別優(yōu)選的。因此，在本發(fā)明的一個最優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物包含免疫佐劑，優(yōu)選佐劑及信號分子，例如細胞因子，其引導(dǎo)所述免疫響應(yīng)朝向所述非炎性、基于抗體的類型。這種佐劑及信號分子是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。如果所述用于主動免疫的藥物組合物經(jīng)由選自靜脈內(nèi)途徑、肌內(nèi)途徑以及皮下途徑的途徑給藥，則這是特別優(yōu)選的。如果所述組合物通過選自注射、快速濃注(bolusinfusion)以及連續(xù)輸注的方法給藥，其每個可一次進行、重復(fù)進行或定期進行，則這還是特別優(yōu)選的。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，長期連續(xù)輸注通過使用可移植裝置實現(xiàn)。在本發(fā)明的進一步具體實施方案中，所迷組合物被作為可移植的持續(xù)釋放或控制釋放儲存劑型而施用。合適的劑型及裝置是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。用于任何給藥途徑的方法的細節(jié)將取決于所述疾病的階段及嚴(yán)重性以及所述受試者的整個醫(yī)學(xué)參數(shù)并且優(yōu)選分別地基于所述治療醫(yī)師或獸醫(yī)的判斷而決定。在本發(fā)明的一個尤其優(yōu)選的實施方案中，所迷用于主動免疫的藥物組合物包含一或多種選自藥學(xué)上可接受的防腐刑、藥學(xué)上可接受的著色劑、藥學(xué)上可接受的保護性膠體、藥學(xué)上可接受的pH調(diào)節(jié)劑以及藥學(xué)上可接受的滲透壓調(diào)節(jié)劑的物質(zhì)。這種物質(zhì)已在本領(lǐng)域描述過。本發(fā)明的抗體及適體還具有許多潛在的用途，其中一些描迷于下。它們尤其可用于篩選目的，即，檢測以及，如果需要，還用于在懷疑或已知含有這種寡聚體或衍生物的制品中測定非擴散球狀A(yù)卩(X-3&.43)寡聚體或它們的衍生物的量。因此，本發(fā)明的抗體能夠在體外及在體內(nèi)檢測它們要結(jié)合的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物。因此，所述抗體可用于檢測所述寡聚體或衍生物，例如在制品中，例如來自懷疑患有淀粉樣變性病的受試者的樣品，或在懷疑患有淀粉樣變性病的受試者中，例如人類個體或其他哺乳動物。因此，本發(fā)明還涉及一種檢測制品中的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物的方法，該方法包括使本發(fā)明的抗體作用于寡聚體或衍生物從而結(jié)合所述寡聚體或它們的衍生物(以及由此優(yōu)選形成包含所述抗體及所述寡聚體或衍生物的復(fù)合物)。例如，所迷寡聚體可在體外檢測。例如，可將本發(fā)明的抗體加至制品中，例如來自受試者或含有或懷疑含有所迷寡聚體或衍生物的細胞培養(yǎng)物的樣品，從而檢測在所迷制品中的所述寡聚體或衍生物。可選地，所迷寡聚體或衍生物可在個體體內(nèi)檢測。本發(fā)明還涉及對如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的抗體用于制備治療或預(yù)防淀粉樣變性病的藥物組合物的用途。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物是用于被動免疫。因此，本發(fā)明還涉及一種在需要其的受試者中治療或預(yù)防淀粉樣變性病的方法，其包括將對如權(quán)利要求中所定義的非擴散球狀A(yù)I3(X-38..43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的抗體給藥給所述受試者。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，給藥所述抗體用于被動免疫。術(shù)語"淀粉樣變性病，，在此表示以在身體的各種組織中特定蛋白質(zhì)(淀粉狀蛋白、纖維蛋白質(zhì)以及它們的前體)的異常折疊、叢生、聚集和/或蓄積為特征的許多病癥。在阿爾茨海默氏病及唐氏綜合癥中，神經(jīng)組織被影響，以及在腦的淀粉狀蛋白血管疾病(CAA)中，血管被影響。根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，淀粉樣變性病選自阿爾茨海默氏病(AD)及唐氏綜合癥的淀粉樣變性病。使用本發(fā)明的抗體的一個結(jié)果是對阿爾茨海默氏病或者具有增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的診斷不能容易地在檢測限之內(nèi)依賴于在受試者中測定所述非擴散可溶球狀A(yù)(3(l-42)和/或Ap(l-40)寡聚體("球寡聚體")。然而，令人驚訝且出乎意料地，已發(fā)現(xiàn)所述診斷可與確定特異結(jié)合本發(fā)明非擴散可溶球狀A(yù)(3(l-42)寡聚體("球寡聚體")的自體抗體的存在相關(guān)。令人驚訝地但與所迷球寡聚體假說相一致，已發(fā)現(xiàn)所迷球寡聚體表位是引起內(nèi)源性免疫響應(yīng)的內(nèi)源性抗原。該內(nèi)源性免疫響應(yīng)的特征至少在于三個獨立的特征1.抗Ap球寡聚體自體抗體的含量隨阿爾茨海默氏病增加。特別地，令人驚訝的是這些自體抗體在AD患者的血清中升高。迄今為止，數(shù)個研究者已經(jīng)報道在AD患者血清中的自體抗體。根據(jù)三篇論文(S.Brettschneider等人.，"DecreasedSerumAmyloid1-42AutoantibodyLevelsinAlzheimer'sDisease,DeterminedbyaNewlyDevelopedImmuno-PredpitationAssaywithRadiolabeledAmyloid1-42Peptide,BiolPsychiatry2005,57，813-816,ME.Weksler，等人.，"PatientswithAlzheimerdiseasehavelowerlevelsofserumantiamyloidpeptideantibodiesthanhealthyelderlyindividuals,,Exp.Gerontology37，(2002),943-948andY,Du等人.，"Reducedlevelsofamyloid^-peptideantibodyinAlzheimerdisease",Neurology57,801-805(2001))通常報告抗Ap抗體的水平在阿爾茨海默氏病患者中稍微而不是顯著地降低。2.抗AP球寡聚體自體抗體主要結(jié)合在抗原-復(fù)合物中。還令人驚訝地檢出在此所述的自體抗體作為抗原-抗體-復(fù)合物的部分具相當(dāng)?shù)牧?，如通過如實施例7中所描述的用酸性緩沖液預(yù)處理血清所表明的。這是所述免疫系統(tǒng)通過復(fù)合至內(nèi)源性抗體而主動嘗試消除所述錯誤折疊的球寡聚體表位的強有力證據(jù)。3.抗AP球寡聚體自體抗體水平顯著高于抗A|3單體自體抗體的水平。在此如實施例7及圖24中所描述的，與所述單體AP肽相比，它們大約高5-10倍。除抗原-抗體-復(fù)合物的高比值之外，這是另一個表明通過所述內(nèi)源性免疫系統(tǒng)而正將球寡聚體主動消除的參數(shù)。因此，本發(fā)明還涉及如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物制備在受試者中檢測對所述寡聚體或衍生物具有特異性的自體抗體的組合物的用途。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述受試者懷疑患有任何形式的淀粉樣變性病，例如，阿爾茨海默氏病，以及檢測自體抗體是用于在所述受試者中診斷任何形式的淀粉樣變性病，例如，阿爾茨海默氏病的存在或不存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，使用如上所迷的非擴散球狀寡聚體或交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物檢測所述抗體。本發(fā)明還涉及如上所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物在樣品中檢測對所述寡聚體或衍生物具有特異性的自體抗體的用途。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述樣品來自懷疑患有淀粉樣變性病，例如，阿爾茨海默氏病的受試者，以及檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所述淀粉樣變性病，例如，阿爾茨海默氏病的存在或不存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，使用如上所述的非擴散球狀寡聚體或交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物檢測所迷抗體。本發(fā)明還涉及一種在受試者中檢測對非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的自體抗體的方法，該方法包括將如上所定義的非擴散球狀A(yù)P(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物給藥給所述受試者以及檢測所迷抗體與所述寡聚體或衍生物形成的復(fù)合物，所迷復(fù)合物的存在表明所迷自體抗體的存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述方法包括使用如上所述的非擴散球狀寡聚體或其交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述受試者懷疑患有淀粉樣變性病以及檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所迷淀粉樣變性病的存在或不存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，使用如上所述的非擴散球狀寡聚體或交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物檢測所迷抗體。本發(fā)明還涉及一種在樣品中檢測對非擴散球狀A(yù)P(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物具有特異性的自體抗體的方法，該方法包括將所述樣品與如上所定義的非擴散球狀A(yù)(3(X-38,.43)寡聚體或它們的衍生物接觸以及檢測所述抗體與所述寡聚體或衍生物形成的復(fù)合物，所述復(fù)合物的存在表明所迷自體抗體的存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所迷方法包括使用如上所述的非擴散球狀寡聚體或其交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述樣品來自懷疑患有淀粉樣變性病的受試者以及檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所述淀粉樣變性病的存在或不存在。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，使用如上所述的非擴散球狀寡聚體或交聯(lián)衍生物的標(biāo)記衍生物檢測所述抗體。病或具有,限患所^1^粉樣變性病的增長風(fēng)險的受試;，則這是特別優(yōu)選的。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述樣品是可通過上述方法檢驗的生物液體。這些包括血漿、全血、干燥的全血、血清、腦脊液或者組織及細胞的含水或有機-含水提取物。根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，如上所述的自體抗體的檢測進一步包括所述制品(樣品)的預(yù)處理，其引起自體抗體/抗原復(fù)合物的解離。因此，包括這種預(yù)處理的方法可用于測定在所述制品(樣品)中存在的自體抗體的總量，而不包括所述預(yù)處理的方法可用于測定仍可結(jié)合所述抗原的自體抗體的量。進一步地，兩種方法將允許間接測定復(fù)合的自體抗體的量。適于引起自體抗體/抗原復(fù)合物解離的條件是技術(shù)人員已知的。例如，用酸處理所述制品(樣品)，例如，使用緩沖液使得所得到的制品(樣品)的pH值在1至5的范圍之內(nèi)，優(yōu)選在2至4的范圍內(nèi)以及特別地在2至3的范圍內(nèi)，可以是有利的。合適的緩沖液包括生理學(xué)濃度的鹽，例如NaCl以及乙酸。所述用于分離抗體/抗原復(fù)合物的方法已經(jīng)描述于WO2005/037209中，其在此以其整體的形式引入。簡要地，在所述抗體/抗原復(fù)合物中從所迷抗原解離所迷抗體包括以下步驟將含有抗體/抗原復(fù)合物的樣品與解離緩沖液接觸；將所述樣品孵育；以及任選地濃縮所述樣品。所述解離緩沖液可以是具有如上所指出范圍的pH值的PBS緩沖液。例如，含有大約1.5。/。BSA及pH值2.5的0.2M甘氨酸-乙酸鹽或者140mMNaCl及0.58%乙酸的PBS緩沖液是合適的。已經(jīng)證明賻育數(shù)分鐘，例如在20到40。C的范圍內(nèi)的溫度下10至30分鐘，例如，20分鐘，是充足的。濃縮可以本身已知的方法實現(xiàn)，例如通過將所述樣品經(jīng)CentriprepYM30(AminconInc.)處理。在本發(fā)明的一個實施方案中，將所述Ap(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物涂敷在固相上。然后將所述樣品(例如，全血、腦脊液、血清，等等)與所述固相接觸。如果自體抗體存在于所述樣品中，這種抗體結(jié)合在所迷固相上的Ap(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物，然后通過直接法或者間接法檢測到。所述直接法包括簡單地檢測所述復(fù)合物本身的存在以及因此檢測所述自體抗體的存在。在所述間接法中，將偶聯(lián)物加至所結(jié)合的自體抗體。所述偶聯(lián)物包含已連接到信號產(chǎn)生化合物或標(biāo)記物的第二抗體，其結(jié)合所述第一已結(jié)合的自體抗體。如果第二抗體結(jié)合已結(jié)合的第一自體抗體，則所述信號產(chǎn)生化合物產(chǎn)生可測量信號。這種信號則表明所述第一自體抗體在樣品中的存在。料、膠乳顆粒、磁性顆粒、微粒(參見U.S.專利No.5,705:330)、珠粒、膜、微量孔及塑料管。所述固相材料以及標(biāo)記存在于所述偶聯(lián)物中的抗原或抗體的方法的選擇(如果需要)基于所需試驗形式性能特征而決定。如上所述，所述偶聯(lián)物(或指示試劑)將包含已連接到信號產(chǎn)生化合物或"標(biāo)記物"的抗體(或許抗-抗體，取決于所述試驗)。該信號產(chǎn)生化合物或標(biāo)記物本身是可檢測出的或者可與一或多種另外的化合物反應(yīng)從而產(chǎn)生可檢測出的產(chǎn)物。信號產(chǎn)生化合物的例子如上所述以及特別地包括生色團、放射性同位素(例如1251、131I、32P、3H、"S及"C)、化學(xué)發(fā)光化合物(例如，吖啶錯)、顆粒(可見的或焚光的)、核酸、絡(luò)合劑、或者催化刑例如酶(例如，堿性磷酸酯酶、酸性磷酸酯酶、辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶以及核糖核酸酶)。在酶應(yīng)用(例如，堿性磷酸酯酶或辣根過氧化物酶)的情況下，加入生色的、產(chǎn)生焚光的、或產(chǎn)生光的底物導(dǎo)致生成可檢測的信號。其他檢測系統(tǒng)例如時間分辨焚光、內(nèi)部-反射焚光、擴增(例如，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))以及拉曼光鐠測定法也是有用的。試劑盒也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。更具體地，本發(fā)明包括用于在受試者中測定自體抗體的存在的試劑盒。特別地，用于在樣品中測定自體抗體的存在的試劑盒包括a)A卩(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物，如在此所定義的；以及b)包含已連接到能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物的抗體的偶聯(lián)物。所述試刑盒還可含有對照物或校準(zhǔn)物，其包括結(jié)合所述抗原的試劑。本發(fā)明還包括用于在試驗樣品中檢測自體抗體的另一類型試劑盒。所述試劑盒可包括a)對所感興趣的自體抗體特異的抗-抗體，以及b)如上所定義的AJ3(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物。也可以包括包含結(jié)合所述Ap(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物的試劑的對照物或校準(zhǔn)物。更具體地說，所述試劑盒可以包括a)對所述自體抗體特異的抗-抗體以及b)包含所述A(3(X-38,.43)球寡聚體或它們的衍生物的偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物已連接至能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物。此外，所迷試劑盒還可包含對照物或校準(zhǔn)物，其包含結(jié)合所述抗原的試劑。所述試劑盒還可包括一個容器例如管瓶、瓶或窄條，其中每個容器具有預(yù)置的固相，以及含有所述相應(yīng)的偶聯(lián)物的其他容器。這些試劑盒還可含有進行所迷檢測所需的其他試劑例如洗滌、加工及指示試劑的管瓶或容器。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，這種自體抗體還可從商業(yè)免疫球蛋白制品^口Octagam(OctapharmaInc.Vienna,Austria)提取，并進一步純化用于治療用途。令人驚訝且出乎意料地，除如上所述制品以外的制品的篩選顯示這種制品可以含有與對本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)p(X-38.，43)寡聚體或衍生物具有特異性的抗體反應(yīng)的物質(zhì)。對所述抗體具有一定結(jié)合性親合力但不能被認(rèn)為對應(yīng)于本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)(3(X-3&.43)寡聚體或衍生物的這種物質(zhì)，以下簡稱為球狀A(yù)p(X-38,.43)寡聚體("球寡聚體")表位或球狀A(yù)卩(X-38,.43)寡聚體("球寡聚體")結(jié)構(gòu)表位。由于它們與對本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)(3(X-38,.43)寡聚體或衍生物具有特異性的抗體的結(jié)合性親合力，可在懷疑含有表位的制品中檢測包含A卩(X-38,.43)寡聚體表位的所述物質(zhì)，可在所述制品中確定它們的量，并且它們可以被富集。因此，本發(fā)明還涉及一種用于在懷疑或已知包含這種表位的制品中檢測A(3(X-38..43)寡聚體表位、確定A(3(X-38..43)寡聚體表位的量和/或用于富集A(3(X-38,.43)寡聚體表位的篩選方法。一旦被檢測及富集，所述物質(zhì)可以具有類似于如上所述根據(jù)本發(fā)明的非擴散球狀A(yù)p(X-38.,43)寡聚體或衍生物的那些潛在用途。在附圖中圖1:顯示A|3加工路徑的示意圖。A(3(l-42)寡聚體以兩種不同的形式存在原纖維類型寡聚體("原纖寡聚體")以及球狀類型寡聚體("球寡聚體")。該模型圖解兩條引導(dǎo)從單體到原纖維或球寡聚體的互斥路徑。通過以單體水平的構(gòu)象轉(zhuǎn)變來作出對于球寡聚體路徑而不是原纖維路徑的"決定"，這被認(rèn)為是由脂肪酸輔助的。圖2:顯示在以不同溫度儲存之后單體及球寡聚體的Western印跡從而在體外比較A)A(3(l-42)球寡聚體(泳道1:標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)志蛋白；泳道2:l天之后，PBS，RT;泳道3:1天之后，PBS,37°C;泳道4:4天之后，PBS，RT;泳道5:4天之后，PBS,37。C)與B)A卩(l-42)單體(泳道l:標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)志蛋白；泳道2:l天之后，PBS，-20°C;泳道3:l天之后，PBS，-0°C°C;泳道4:l天之后，PBS，RT;泳道5:1天之后，PBS,37°C)的穩(wěn)定性；圖3:給出以AJ3(l-42)球寡聚體、AI3(12-42)球寡聚體及A|3(20-42)球寡聚體免疫的兔及小鼠的抗體滴度；圖4:顯示在AD-及TG2576腦中A卩(l-42)球寡聚體表位的檢測結(jié)果A)3個AD腦樣品及l(fā)個由Brain-Net，Munich提供的老齡對照樣品的數(shù)據(jù)；B)AJ3(l-42)球寡聚體、A卩(l-42)單體及A卩(l-40)單體在AD腦中的水平；C)帶有AJ3(l-42)球寡聚體特異抗體8C5的AD腦斑塊的免疫染色；D)A(3(l-42)球寡聚體、A卩(卜42)單體及A卩(l-40)單體在TG2576及對照野生型小鼠腦中的水平；圖5:顯示CNS中A卩(l-42)球寡聚體表位的檢測結(jié)果A)在夾心式ELISA中2個AD及4個MCI患者的CSF樣品與抗血清5598(捕荻抗體)及單克隆無選擇性抗AP(1-42)球寡聚體抗體6B1(初級抗體)的反應(yīng)性，B)在大鼠中icv注射A卩(卜42)球寡聚體之后Ap(l-42)球寡聚體的免疫染色；C)在大鼠海馬中注射Ap(l-42)球寡聚體之后Ap(l-42)球寡聚體的免疫染色；圖6:顯示A卩(33-42)指向的PAb(Signet9135)與各種A卩制品的反應(yīng)性從而特征化A(3(l-42)球寡聚體表位。所述抗體僅僅與溶解于氨緩沖溶液的A(3(i-42)單體反應(yīng)，但不與溶解于氨援沖溶液的AP球寡聚體及A卩(l-40)反應(yīng)，顯示與原纖化傾向(fibrilprone)的A卩(l-42)單體相比在所述球寡聚體中不可接近的或者改變了的表位；圖7:顯示抗A卩(20-42)球寡聚體衍生的抗體5598在夾心式ELISA中的反應(yīng)性。兔抗A卩(l-42)球寡聚體親合-純化的PAb5598與其它A卩形式相比顯示對于A卩(l-42)球寡聚體的選擇性。圖8:顯示用在以下ELISA中測量的抗A卩球寡聚體特異的PAb5598預(yù)處理A|3(l-42)球寡聚體及A|3O40)單體標(biāo)準(zhǔn)制品的效果-A卩(l-42)球寡聚體，±5598耗竭，A卩球寡聚體ELISA:〉10倍轉(zhuǎn)變(黑色至灰色)；-A卩(l-40)單體，土5598耗竭，A卩(30-40)ELISA:無影響(深綠至淡綠)；-A卩(卜40)單體，±5598耗竭，Ap球寡聚體ELISA:IO倍轉(zhuǎn)變(深藍色至淺藍)；顯示A卩球寡聚體表位也在Ap(l-40)中可檢測出；圖9:顯示根據(jù)實施例5生成的AP(20-42)球寡聚體的SDS-PAGE色譜圖10:顯示根據(jù)實施例6生成的Ap(12-42)球寡聚體的SDS-PAGE色傳圖11:總結(jié)關(guān)于Ap(l-42)球寡聚體生成的數(shù)據(jù)。從合成AP(l-42)開始，可以生成一種具有球狀結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定且明確定義的寡聚體，38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體。作為生成38/48kDaAp(l-42)球寡聚體的第一個步驟，將合成A卩(1-42)肽溶解于HFIP，接著蒸發(fā)并再懸浮在DMSO中。在含有0.2°/。SDS的PBS中孵育得到中間體16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體。進一步在水中稀釋并孵育得到成熟38/48Ap(l-42)kDa球寡聚體，可將其在甲醇/乙酸中透析或沉淀以更換緩沖液；所述38/48kDaAp(l-42)球寡聚體生成的數(shù)個步驟都在Coomassie染色的420%丁1^-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上顯現(xiàn)。泳道(1)中間體16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體，(2)戊二酪交聯(lián)的中間體16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體，(3)38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體，(4)戊二醛交聯(lián)的38/48kDaA(3(l-42)球寡聚體，(5)在95。C下在SDS樣品緩沖液中熱變性5分鐘之后的38/48kDaAp(l-42)球寡聚體，(6)在95。C下在SDS樣品緩沖液中熱變性5分鐘之后的戊二醛交聯(lián)的38/48kDaAp(l-42)球寡聚體，(7)根據(jù)Lambert，MP.等人.Diffusible,nonfibrillaryligandsderivedfromAbetal-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95,6448-6453(1998)制備的A卩寡聚體。A卩形式以m-單體、i-中間體16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體、g=38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體及f-原纖維Ap(l-42)而標(biāo)記；通過在不同溫度下在PBS中孵育來比較所述38/48kDaA(3(l-42)球寡聚體與所述Ap(l-42)單體的時間穩(wěn)定性。泳道l4:在室溫及37。C孵育1天之后(1、2)以及在室溫及37。C孵育4天之后(3、4)的M/48kDaA(3(-42)球寡聚體。泳道58:在-2(TC、0。C、室溫及37。C下1天之后的A(3(l-42)NH4OH制品；在S叩erose12柱上的空間排阻層析A卩(l-42)球寡聚體(頂部區(qū)域)、戊二醛交聯(lián)的Ap(l-42)球寡聚體(中間區(qū)域)以及溶解之后在室溫下聘育5分鐘的A(3(1-42)NH40H制品(下部區(qū)域)；所述A|3(1-42)球寡聚體的有限蛋白酶解以及通過.SDS-PAGE分離且通過Coomassie染色顯現(xiàn)所得到的截短片段(以t-g標(biāo)記)。所得到的C-末端片段(通過SELDIMS分析)表示在括號中。泳道(1)未消化的A卩(l-42)球寡聚體(AA142,4514Da)(2)木瓜蛋白酶(n.d.),(3)彈性酶(n.d.),(4)嗜熱菌蛋白酶(AA442，4200Da，AA2042,2218Da;AA2442,1756Da)，(5)糜蛋白酶(AA2142，2067Da),(6)胰蛋白酶(AA642，3897Da;AA1742，2578Da)(7)嗜熱菌蛋白酶消化之后的經(jīng)分離的可溶Ap-i9肽濾液；通過嗜熱菌蛋白酶將AP(卜42)球寡聚體(頂部區(qū)域)及戊二醛交聯(lián)的Ap(l-42)球寡聚體(下部區(qū)域)蛋白酶解以及通過SELDI-MS分析所得到的肽片段；圖12:在斑點印跡(dot-blot)及ELISA技術(shù)中顯示具有高親合性及特異性的Ap(l-42)球寡聚體特異抗體的反應(yīng)性關(guān)于A(3表位結(jié)合性和親合性的抗AP抗體的對比。Ap(l-42)球寡聚體特異的多克隆兔抗體5598及小鼠單克隆抗體8F5識別亞單位間表位而非特異的抗A卩小鼠單克隆抗體6G1及6E10識別A卩亞單位內(nèi)表位。通過來自ELISA的Scatchard分析確定8F5及6G1的親合性；通過斑點印跡免疫測定法確定抗Ap(l-42)球寡聚體抗體抗各種Ap-形式的特異性。AP(卜42)球寡聚體特異的抗體5598及8F5(下部區(qū)域)主要識別Ap(l-42)球寡聚體形式且不識別A(3mo或包括聚集A(3(l-42)的A卩(l-42)的標(biāo)準(zhǔn)制品，與非特異的抗體6G1及6E10(上部區(qū)域)相反；通過三種不同的夾心式ELISA定量分析在標(biāo)準(zhǔn)制品中的Ap-形式的識別力分別以5598作為捕獲抗體以及6G1作為檢測抗體定量分析A卩(l-42)球寡聚體，以及以6E10作為捕獲抗體以及9132(識別AA30-40)和9135(識別AA33-42)作為檢測抗體定量分析A卩(l-40)或Ap(l-42)水平；特異的Ap-形式的標(biāo)準(zhǔn)品是與其它AP-形式交叉污染的。將數(shù)值計算為通過合適的ELISA測量的以％的球寡聚體與非-球寡聚體形式之間的比例。先前所描述的體外產(chǎn)生的A卩寡聚體(*根據(jù)Lambert,MP.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbetal-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95,6448-6453(1998))以及在條件培養(yǎng)基中的基于細胞培養(yǎng)物的AP寡聚體(峙沖艮據(jù)Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002))都包括在本實驗中；圖13:顯示Ap(l-42)球寡聚體存在于阿爾茨海默氏患者及APP轉(zhuǎn)基因小鼠的腦中。(a-f)在阿爾茨海默氏病患者的皮層截面(a-c)以及12個月大的Tg2576小鼠的皮層橫截面(d-f)中以硫黃素S(a、d)、A卩(l-42)球寡聚體特異的抗體8F5(b、e)或者二者(c、f)將淀粉狀蛋白斑塊染色。標(biāo)尺(對于a-f):20nm。(g-h)Ap(l-42)球寡聚體或單體Ap物質(zhì)在阿爾茨海默氏病患者(n-3)(g)或12個月大Tg2576小鼠(n-8)(h)的皮層的可溶部分中的濃度。年齡-匹配的對照人(g)或C57B16對照小鼠(n=4)(h)的腦不具有檢測限以上的A卩物質(zhì)濃度(<dl.),所述檢測限由水平線表示。(i)Ap(l-42)球寡聚體或單體Ap物質(zhì)在患有輕度認(rèn)知損傷的患者(灰色條；n-4)或阿爾茨海默氏病患者(黑色條；n-2)的腦脊液中的濃度。在任一組中都沒發(fā)現(xiàn)在10pg/ml的檢測限(水平線)之上的A卩球寡聚體。圖14:顯示Ap(l-42)球寡聚體生成可由某些脂肪酸誘導(dǎo)。按照A卩(l-42)球寡聚體生成的一般步驟，將聚合步驟中的SDS替換為各種中性pH值的脂肪酸。泳道(l)不含誘導(dǎo)劑的對照，(2)含有0.2。/。SDS的陽性對照，(3)0.5%月桂酸(12:0),(4)0.5%油酸(18:1)，(5)亞油酸(18:3),(6)二十碳五烯酸(20:5)，(7)二十二碳四烯酸(22:4),(8)二十二碳六烯酸(22:6)，(9)含有0.2。/。SDS的陽性對照，(10)1%花生四烯酸。A卩(M2)球寡聚體(g，以箭頭表示)的收率在各種脂肪酸之間不同；圖15:顯示A(3(I-42)球寡聚體特異結(jié)合海馬神經(jīng)元，這取決于所迷培養(yǎng)時間。將經(jīng)培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元用200nMAp形式(基于單體濃度=17nMAp(l-42)球寡聚體)孵育并使用抗Ap6E10抗體通過免疫熒光法顯現(xiàn)(使用A|3非特異的6E10從而允許A卩(l-42)單體及A卩(-42)球寡聚體結(jié)合的定量比較)；(a)在孵育15分鐘(37。C，5%C02)之后，與不含A|3及A卩(l-42)單體的對照相反，Ap(l-42)球寡聚體在海馬神經(jīng)元表面上顯示點狀結(jié)合'(b)在體外不同天數(shù)時(DIV)檢測結(jié)合海馬培養(yǎng)物的Ap(1-42)球寡聚體。在DIV8時，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)所述AP0-42)球寡聚體的結(jié)合(~1%),而在DIVll及DIV15時，幾乎所有的海馬神經(jīng)元結(jié)合A|3142球寡聚體(~90%)。在樣品DIV15中的插圖顯示所述點狀結(jié)合沿著所述樹突并隔開一定距離(箭頭)；(c)將海馬培養(yǎng)物用作為神經(jīng)元標(biāo)記物的抗-MAP2以及作為神經(jīng)膠質(zhì)-細胞標(biāo)記物的抗-GFAP進行雙重-染色。與MAP2陽性細胞相反，GFAP陽性的細胞顯示沒有Ap(l-42)球寡聚體結(jié)合。對于Ap信號的顯微鏡設(shè)置在各個實驗之間保持恒定。標(biāo)尺40nm(插圖-10pm);圖16(I):顯示Ap(l-42)球寡聚體由于高結(jié)合而具有有限的組織滲透性在大鼠腦中i.c.v.輸注之后以特異性抗體8F5(Cy3;紅色)將Aj3(l-42)球寡聚體染色。細胞核以DAPI(藍色)復(fù)染色。標(biāo)尺100(b-c)在皮層內(nèi)輸注入大鼠皮層之后l天(b)或7天(c)將A卩(l-42)球寡聚體染色(紅色)。細胞核以DAPI(藍色)復(fù)染色。標(biāo)尺(對于b-c):200圖16(n):顯示Ap(l-42)球寡聚體由于高結(jié)合而具有有限的組織滲透性(a)在大鼠腦中i.c.v.輸注之后以特異性抗體8F5(Cy3)將A卩(l-42)球寡聚體染色。細胞核以DAPI復(fù)染色。標(biāo)尺100(b)在皮層內(nèi)輸注入大鼠皮層之后7天將A(3(l-42)球寡聚體染色。細胞核以DAPI復(fù)染色。標(biāo)尺200(c)在將可比量的Ap(l-42)球寡聚體(填充了的圓)注射入同一大鼠的右側(cè)皮層以及Ap(l-42)單體(空心圓)注射入同一大鼠的左側(cè)皮層之后的標(biāo)記體積(平均值土S.E.M.)的時間進程。在注射之后1天(n-2)、4天(n-3)及7天(n-2),將所述特異性抗體8F5用于檢測AJ3(l-42)球寡聚體，以及將所述抗體6G1用于檢測Ap(l-42)單體；圖17:顯示A(3(l-42)球寡聚體在體外徹底阻斷長時程增強在對照(正方形；n=9)以及42nMA卩(l-42)球寡聚體-處理(菱形；n-6)的大鼠腦切片中的LTP誘導(dǎo)。所述場EPSP斜率表示為相對于基準(zhǔn)值的百分?jǐn)?shù)(平均值土S.E.M.);在強直之前(1)、在強直之后立刻(2)、在強直之后卯分鐘(3)所取的對照(上排)以及Ap(l-42)球寡聚體-處理(下排)的切片的代表性跡線。輸入/輸出-關(guān)系在對照(正方形；n-11)以及A卩(l-42)球寡聚體(菱形；n-5)組中是類似的。橫線2ms;豎線1mV;圖18:顯示AP-肽多聚化的兩種路徑機理的建議模型。初始步驟是通過APP的(3-以及"分泌酶裂解生成Ap-單體?？赡苋Q于固有的或環(huán)境的因素，可以出現(xiàn)Ap(l-42)肽多聚化的兩種獨立路徑。經(jīng)充分描述的原纖維路徑(Lomakin，A"Chung,D.S.,Benedek，G.B.，Kirschner，D.A.imdTeplow,DB.,Onthenucleationandgrowthofamyloidbeta-proteinfibrils:detectionofnucleiandquantisationofrateconstants,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,A93,1125-1129(1996))遵循經(jīng)典的聚合動力學(xué)。A卩(l-42)單體聚合經(jīng)由亞穩(wěn)的成核結(jié)構(gòu)(原纖寡聚體)以及單體進一步締合為初原纖維及由P折疊二級結(jié)構(gòu)組成的穩(wěn)定的Ap-原纖維。所述A卩(l-42)球寡聚體路徑的特征在于多聚化為具有不同AP-肽數(shù)目的結(jié)構(gòu)。作為第一步驟，形成A(3(l-42)球寡聚體中間體，其進一步自身締合為穩(wěn)定的、具有獨特Ap-肽數(shù)目(n=12)的A卩(l-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)。所迷Ap(l-42)球寡聚體不具有進一步聚合為原纖維的傾向。在所述A卩(l-42)球寡聚體中，所迷疏水性C末端延伸至球狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)部，因此避免暴露于所述水相。更親水的N末端暴露于外表面。所述AJ3(l-42)2球寡聚體通過(3折疊二級結(jié)構(gòu)而穩(wěn)定。所述AJ3(卜42)球寡聚體的高溶解度以及明確定義且穩(wěn)定的特征可歸因于該特定的球狀結(jié)構(gòu)；圖19:顯示A卩(l-42)球寡聚體的圓二色謙。在7.2mg/ml以新近交換緩沖液為PBS的球寡聚體針對所述AI3(l-42)球寡聚體采集譜圖，如所述的(參見補充方法)。所述光電倍增器電壓(HTS)作為波長的函數(shù)顯示在所迷插圖中。在216nm處觀察到強烈的最小值，表示高卩折疊含量。在208nm或222nm處沒有最小值是可見的，表示很少，如果有，為a螺》炎含量；圖20:顯示100pmol與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(A行)；10pmol與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(B行)；以及1pmol與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(C行)；A卩(l-42)球寡聚體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(1歹'J);在0.1°/oPluronicF58中的A卩(l-42)單體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(2列)；Ap(20-42)球寡聚體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(3列)；戊二醛-交聯(lián)的Ap(l-42)球寡聚體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(4列)；在4。C或室溫或37。C下根據(jù)M.P.Lambert等人.，J.Neurochem.79,595-605(2001)制備的ADDL與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(5歹'J);A卩(12-42)球寡聚體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(6列)；A卩(l-40)單體與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(7列)；溶解于0.1。/。NH4OH的Ap(l-42)與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(8列);A卩(l-42)原纖維制品與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(9列);以及來自Sigma的PBS-稀釋的APP與A)人血漿以及B)CSF的反應(yīng)性的斑點印跡(10列)；圖21:是指在經(jīng)主動免疫的APP/Lo小鼠中的新的目標(biāo)識別任務(wù)對于以所述A卩(l-42)單體(n=7)、以A卩(20-42)球寡聚體(n=9)或以A(3(l-42)球寡聚體(n=8)免疫的小鼠組或者以栽體(n=8)注射的小鼠組顯示調(diào)查新目標(biāo)相對于已知目標(biāo)的偏好。數(shù)據(jù)是平均值±S.E.M.。在首次免疫之后，將小鼠每三周進行加強免疫，持續(xù)三個月。以球寡聚體免疫導(dǎo)致顯著增加的識別指標(biāo)，即，在所述檢查試驗期間對于所述新目標(biāo)的偏好(p<0.01，在其后接著post-hoct-檢驗的ANOVA中)；圖22:顯示小鼠識別指標(biāo)的直條圖，所述小鼠用鹽水(對照)、抗體8F5以及抗體6G1處理(數(shù)據(jù)顯示平均值+SEM,每組8個動物，與3小時前引入的目標(biāo)相比新目標(biāo)所花費時間的相對量；在每個檢驗中允許調(diào)查10分鐘)；圖23:顯示來自AD腦提取物的SELDI質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)，所迷提取物被抗體8F5免疫沉淀。可以看出，該抗體不僅識別Ap(l-42)(m/z-4514)而且識別A卩(l-40)物質(zhì)(m/z=4329.9)以及A卩(l-38)物質(zhì)(m/z=4131.6);抗體水平(a)所有的反射密度值取自100pMol抗原濃度；游離部份值取自未經(jīng)處理的血清/血漿總部份值取自經(jīng)酸處理的血清/血漿結(jié)合部份值=總值-游離值；(b)抗球寡聚體自體抗體水平高于抗AP單體自體抗體水平并且與健康對照相比在AD患者中是最高的。發(fā)明詳述貫穿本說明書、權(quán)利要求書及附圖使用以下縮寫AD,阿爾茨海默氏??；AP,淀粉狀蛋白|3肽；APP,淀粉狀蛋白前體蛋白；BSA,牛血清白蛋白；CD,圓二色i普法；DIV，體外天數(shù)；DMSO,二曱亞砜；GABA，"氨基丁酸；HFIP,1,U,3,3,3-六氟-2-丙醇；LTP，長時程增強；NaH2P04,磷酸二氫鈉(Natriumphosphat);PBS，磷酸鹽緩沖鹽水；SDS，十二烷基硫酸鈉；SELDI-MS,表面增強激光解吸離子化-質(zhì)語；TBS,三羥甲基氨基曱烷緩沖鹽水。近來已經(jīng)討論淀粉狀蛋白|3(1-42)(Ap(l-42))寡聚體在阿爾茨海默氏病(AD)病理學(xué)及相關(guān)病癥例如唐氏綜合癥中作為中間毒性物質(zhì)以及假定的致病因素和危險因素，以及它們與脂肪酸的關(guān)聯(lián)，討論如下，表示它們還可能在某些代謝失調(diào)的癡呆效應(yīng)中起作用。特別地，本發(fā)明涉及一種高度穩(wěn)定的AP(l-42)寡聚體物質(zhì)，可以在體外容易地制備其并且其存在于AD患者及Ap(l-42)-過度生產(chǎn)型轉(zhuǎn)基因小鼠的腦中。物理化學(xué)表征顯示是一種純的、高度溶于水的60kDa大小的球狀寡聚體，本發(fā)明人將其命名為"A(3(l-42)球寡聚體"。在此所提供的數(shù)據(jù)顯示所述AI3(l-42)球寡聚體是一種持久的結(jié)構(gòu)實體，其形成與所述原纖聚集路徑無關(guān)。它是一種在小鼠及兔中的引起A卩(l-42)球寡聚體表位-特異的抗體生成的強有力的抗原，所述抗體不與淀粉狀蛋白前體蛋白、A卩(l-40)及Ap(l-42)單體、以及A卩原纖維顯著地發(fā)生交叉反應(yīng)。Ap(l-42)球寡聚體特異地結(jié)合神經(jīng)元的樹狀突而不結(jié)時禾iit強。在此所提供的數(shù)據(jù)進、一步提示所述AP(l-42)'球i聚體表位表示一種可能提出的基礎(chǔ)致病結(jié)構(gòu)因素，其將至少以低豐度存在于先前描迷的寡聚體制品中，并且其形成在AD中是一早期病理學(xué)事件。逸擇性中和所述Ap(l-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)表位被預(yù)料非常可能用于治療AD。在本領(lǐng)域已經(jīng)描述過A卩肽阻斷LTP的能力。以低至大約40nm的濃度的AP(1-42)球寡聚體時發(fā)現(xiàn)LTP的類似阻斷。然而，與先前所描述的可溶寡聚體相反，根椐本發(fā)明的制品不含有低分子Ap(l-42)寡聚體的混合物，而僅由一種均勻且穩(wěn)定的物質(zhì)組成。因此，對于所述球寡聚體所要求的有效濃度與對先前所描迷的制品所報告的有效濃度相比較降低了一個數(shù)量級的事實可表明僅僅所述制品的次要部分實際上發(fā)揮任何有害作用。先前所描述的AB寡聚體制品的主要特征在于功能，即，它們在給定濃度時的神經(jīng)毒作用。除了這些神經(jīng)毒作用之外，本發(fā)明的Ap(l-42)球寡聚體的固有高穩(wěn)定性及確定的化學(xué)性質(zhì)和空間排列允許朝著均一性、分子量、以及球狀特征和結(jié)構(gòu)拓樸的方向特征化。A卩(l-42)球寡聚體的體外生成從合成Ap(l-42)的解折疊開始，這可以通過破壞氫鍵的試刑來誘導(dǎo)，以及接著再折疊為新的構(gòu)象。盡管該構(gòu)象轉(zhuǎn)化幾乎是完全的，如SDS-PAGE所分析的，所述A卩(l-42)球寡聚體顯示具有38/48kDa表觀分子量的特征性雙重i普帶。然而，與戊二醛的交聯(lián)將這兩個謙帶合并為一個，表示Ap(l-42)球寡聚體僅僅以一種構(gòu)象存在。在交聯(lián)之后，還通過空間排阻層析顯示均一性，其中Ap(l-42)球寡聚體產(chǎn)生一個峰，盡管是寬峰，其變得更明確，即，較窄的。因此，在自然條件下交聯(lián)A|3(1-42)球寡聚體的空間排阻層析顯示具有最小方差的-60kDa的分子量，其還通過分析超離心法而確定。計算認(rèn)為所述A卩(卜42)球寡聚體由大約12至14個，優(yōu)選12個A卩亞單位組成，以及進一步的試驗數(shù)據(jù)提示其可以經(jīng)由不穩(wěn)定的四聚中間體而形成。數(shù)個實驗提出所述Ap(l-42)球寡聚體的球狀特征及結(jié)構(gòu)拓樸學(xué)。對于成熟Ap(l-42)球寡聚體，已確定熔融的球狀結(jié)構(gòu)，當(dāng)交聯(lián)時其進一步凝結(jié)為幾乎完全呈球狀的結(jié)構(gòu)。首先，具有窄的洗脫輪廓的Ap(l-42)球寡聚體的空間排阻層析，尤其是所述交聯(lián)形式，建議一種球狀特征。此外，可從這些數(shù)據(jù)計算流體動力學(xué)體積并與氨基酸的總數(shù)相關(guān)聯(lián)，得到對于折疊程度的測量(Tcherkasskaya,0.&Uversky，V.N,Denaturedcollapsedstatesinproteinfolding:exampleofapomyoglobin.Proteins44，244-254(2001);Uversky,V.N.Nativelyunfoldedproteins:apointwherebiologywaitsforphysics.ProteinSci11,739-756(2002))。第二，用各種非特異的蛋白酶消化所述Ap(l-42)球寡聚體從N-末端位點裂解掉大約20個氨基酸，同時保持耐蛋白酶的C-末端核心的寡聚結(jié)構(gòu)。該結(jié)果還表示一種均一的結(jié)構(gòu)拓樸學(xué)，形成所述Aj3(l-42)球寡聚體的12個單個A(3亞單位的每個指向相同的方向。第三，質(zhì)謙分析確定所述均一的球狀特征以及所述結(jié)構(gòu)拓樸學(xué)，因為交聯(lián)僅僅發(fā)生在所述N-末端的氨基與Lys-16之間，同時不涉及Lys-28。第四，且最后，對Ap(33-42)及Ap(33-40)的選擇性抗體不與A卩(l-42)球寡聚體反應(yīng)，再一次顯示所述C-末端是不可接近的，所述抗體在常規(guī)ELISA中用于確定A卩(1-42)及Ap(1-40)的濃度。CD光譜學(xué)建議相當(dāng)部份的Ap(l-42)球寡聚體，估計可能是C-末端，存在于卩結(jié)構(gòu)中(參見圖11),即淀粉狀蛋白在它們的病理學(xué)聚合形成中的一種常見特征(Rochet，J.C.&Lansbury,P.T.,Jr.Amyloidfibrillogenesis:themesandvariations,CurrOpinStruct.Biol10，60-68(2000))。在所得到的Ap(l-42)球寡聚體模型中，疏水性C-末端(Ap(24-42))形成內(nèi)部核心，而所迷親水性N-末端(AP(1-19~23))暴露在所述外表面，因此使得所述AI3(l-42)球寡聚體高度可溶于水(參見圖18)。概括地說，本發(fā)明的Ap(l-42)球寡聚體是一種均勻的、明確定義的且穩(wěn)定的物質(zhì)，其對LTP具有相當(dāng)?shù)纳窠?jīng)病理學(xué)作用，如先前對于可溶A卩寡聚體所描述的(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibr川arligandsderivedfromAbeta"42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciUS.A95,6448-6453(1998);Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002);Wang，H.W.等人.Solubleoligomersofbetaamyloidi.42inhibitlong-termpotentiationbutnotlong-termdepressioninratdentategyrus.BrainRes924，133-140(2002);Wang，Q.,Walsh，D,M.，Rowan，M丄，Selkoe，D.J.&Anwyl，R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin陽dependentkinase5,andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5.JNeurosci24,3370-3378(2004)),通過不擴散而區(qū)分。為了理解可擴散的及非擴散的配體的概念，重要的是理解存在兩種通常獨立的路徑用于加工原位形成的由APP-書f生的A卩(卜42)單體a)所述原纖維路徑；b)所述球寡聚體路徑。其中，所述原纖維路徑作為數(shù)量上占主導(dǎo)的用于體外及體內(nèi)AJ3加工的路徑已經(jīng)被良好地表征超過二十年。人們良好接受的是Ap(1-40)以及尤其A卩(l-42)或相關(guān)衍生物，例如A卩(l-38)、A卩(l-39)、A卩(l畫41)或A卩(l-43),容易地從單體單元開始聚合并經(jīng)由寡聚體(二至二十四個單體的締合)及初原纖維(多于二十四個單體的締合)連續(xù)生長，最終成為不可溶的原纖維，其在腦組織或血管壁中體外或體內(nèi)沉積。該原纖維形成是顯著的以致于早期的研究人員將AP導(dǎo)致癡呆的作用歸因于其。應(yīng)意識到本發(fā)明人所建議命名為"原纖寡聚體"的寡聚體特定子集(參見圖1),不同于所述球寡聚體，在此作為中間體出現(xiàn)。本發(fā)明在此描述一種穩(wěn)定原位形成的亞穩(wěn)AP的新途徑，其包括在單體水平上將其結(jié)構(gòu)構(gòu)象轉(zhuǎn)換為可選的三維結(jié)構(gòu)，其接著導(dǎo)致不同類型的締合，申請人已經(jīng)將該締合命名為"球寡聚合"(globulomerisation)。特征性地，由于經(jīng)變化的Ap(l-42)立體結(jié)構(gòu)，所迷加工導(dǎo)致末端球狀類型寡聚體核心結(jié)構(gòu)("球寡聚體")，其完全不同于非-末端原纖類型寡聚體核心結(jié)構(gòu)("原纖寡聚體")。"末端"在此是指，不同于原纖寡聚體，球寡聚體不進一步組裝為原纖維。因為所述A(3(l-42)球寡聚體是穩(wěn)定的并且不是更高的-分子聚集體的中間體，則提出它們的形成反映一種形成原纖聚集體的替代途徑。假定可溶寡聚體對神經(jīng)元是有毒的或者另外對于神經(jīng)元功能是有害的，則可能的是沿所述原纖維途徑的那些通過進一步聚合為成熟原纖維而被"自然地，，滅活(Caughey，B.&Lansbury，P.T.Protofibrils,pores,fibrils,andneurodegeneration:separatingtheresponsibleproteinaggregatesfromtheinnocentbystanders.Amiu.RevNeurosci26，267-298(2003))，這甚至可表示一種通過螯合作用而清除A卩的固有企圖。相反，所述A卩(l-42)球寡聚體作為在生理條件下具有長期穩(wěn)定性的神經(jīng)毒性AP0-42)多聚體是替代途徑的終點(參見圖18)。對于所述Ap(l-42)球寡聚體的相關(guān)性，要求其存在于AD病人的腦中。因此，已經(jīng)提出選擇性單克隆抗體以及Ap(l-42)球寡聚體表位已經(jīng)在AD患者及人類APP轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦斑塊沉積中隨原纖的A卩一起檢出。類似于這些發(fā)現(xiàn)，ADDL也已經(jīng)在AD病人的腦中檢出(Lacor,P.N.等人.SynaptictargetingbyAlzheimer's-relatedamyloidbetaoligomers.JNeurosci24，10191-10200(2004);Gong，Y.等人.Alzheimer'sdisease-affectedbrain:presenceofoligomericAbetaligands(ADDL)suggestsamolecularbasisforreversiblememoryloss.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A100,10417-10422(2003))。將理解的是，根據(jù)以上所給出的定義，ADDL本質(zhì)上不同于球寡聚體，因為將它們描述為是可擴散的；然而，正如以上所討論的，它們的至少一部分作用實際上可歸因于存在于所述ADDL制品中的迄今未檢測到量的物質(zhì)，其與球寡聚體-特異的抗體交叉反應(yīng)。因此可認(rèn)為ADDL包含低量的AP(卜42)球寡聚體表位。使用A卩(l-42)球寡聚體-特異的抗體，可確定所述表位的量在大約5%。這樣的量還可在某種程度上解釋所觀察到的所述制品的神經(jīng)毒性作用。假定Ap(l-42)球寡聚體天然存在于AD腦中，仍然不清楚的是所述A(3(l-42)球寡聚體如何可在體內(nèi)形成，至今僅在體外被證明如何形成。該問題已經(jīng)通過以天然存在的脂肪酸替換SDS而提出，所述SDS使用于原始Aj3(l-42)球寡聚體制備過程。數(shù)種脂肪酸的存在還導(dǎo)致聚集為A卩(l-42)球寡聚體。還預(yù)期以陰離子去垢劑(例如，SDS)或多陰離子試劑(例如，糖胺多糖肝素)產(chǎn)生相同的作用，其單獨使用或者與脂肪酸結(jié)合。這些化學(xué)上獨特的試劑共享通過提供陰離子負(fù)荷的表面用于誘導(dǎo)和穩(wěn)定構(gòu)象變化以及用于成核而誘導(dǎo)淀粉狀蛋白質(zhì)聚集的能力，表示陰離子表面(以膠束或嚢泡的形式)實際上能夠誘導(dǎo)A(3(l-42)球寡聚體形成。陰離子膜或脂膜我可在體內(nèi)起到該作用。這表示由某種代謝失調(diào)，特別是由脂類代謝失調(diào)誘導(dǎo)的癡呆還可涉及球寡聚體形成，并且本發(fā)明因此也可用于診斷及治療這種病況。A卩(l-42)球寡聚體在體內(nèi)作用的方式及位點目前是未知的。盡管借助于它們的親水性殼其是可溶的，但它們在腦脊液中是不可檢測出的，但緊密且牢固地結(jié)合所述組織，特別當(dāng)與A卩(l-42)單體相比較時。A卩(l-42)球寡聚體的該結(jié)合似乎具生理相關(guān)性，因為它在原代培養(yǎng)物中特異靶向于海馬神經(jīng)元，表明結(jié)合的特異方式。數(shù)個觀察排除了親水性Ap(l-42)球寡聚體與海馬神經(jīng)元相互作用是非特異的且可能基于如已知的Ap肽插入脂質(zhì)雙分子層的現(xiàn)象的可能性。(McLaurin，J.&Chakrabartty,A.MembranedisruptionbyAlzheimerbeta-amyloidpeptidesmediatedthroughspecificbindingtoeitherphospholipidsorgangliosides.Implicationsforneurotoxicity.JBiolChem271,26482-26489(1996);Verdier,Y.，Zarandi，M.&Penke,B.Amyloidbeta-peptideinteractionswithneuronalandglialcellplasmamembrane:bindingsitesandimplicationsforAlzheimer'sdisease.JPeptSci10，229-248(2004))。最重要地，單體Ap(l-42)(已知是無害的并且甚至暗示具有抗-癡呆作用)顯示沒有可檢測出的對神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的結(jié)合(Plant,L.D.等人.Theproductionofamyloidbetapeptideisacriticalrequirementfortheviabilityofcentralneurons.J.Neurosci.23,5531-5535)。那么，A卩(l-42)球寡聚體結(jié)合強烈依賴于細胞培養(yǎng)的階段并且僅限于神經(jīng)元細胞，保持神經(jīng)膠質(zhì)未標(biāo)記。AJ3(l-42)球寡聚體沿樹突的點狀結(jié)合類型類似于ADDL的，后者已經(jīng)顯示結(jié)合神經(jīng)元并且與突觸后的標(biāo)記物如PSD-95共局部化(Lacor，P.N.等人.SynaptictargetingbyAlzheimer's-relatedamyloidbetaoligomers.JNeurosci24,10191-10200(2004))。因此，看來是將已結(jié)合的Ap(l-42)球寡聚體特異地局部化在突觸后過程，并且其結(jié)合可局限于樹突剌?？赏茰y在那里其結(jié)合它仍未表征的受體，干擾電化學(xué)信息處理而非所述細胞的基本管家生物化學(xué)。這將說明LTP的特異阻斷，而保持基本神經(jīng)生理學(xué)以及短時程增強不變。所述LTP的抑制(而不是基本膜生理學(xué)的)還表示AI3(l-42)球寡聚體可以在體內(nèi)特異地干擾認(rèn)知及記憶，表明所述A|3(1-42)球寡聚體是AD病人中所觀察到的記憶喪失的原因。在本發(fā)明中，"神經(jīng)毒性"理解為表示神經(jīng)元和/或突觸功能的任何顯著的喪失，不考慮其對各個細胞的活力的影響。盡管發(fā)現(xiàn)所述Ap(l-42)球寡聚體在體外在生理條件下是穩(wěn)定的，但在體內(nèi)條件下降解是可能的。以非特異蛋白酶進行的試驗顯示從所迷球狀結(jié)構(gòu)伸出的親水性N-末端可被裂解，留下截短的Ap(l-42)球寡聚體。最近已經(jīng)報道各種N-末端截短的Ap物質(zhì)在AD中的存在(Sergeant,N.等人.Truncatedbeta-amyloidpeptidespeciesinpre-clinicalAlzheimer'sdiseaseasnewtargetsforthevaccinationapproach.JNeurochem85，1581-"91(2003))表明N-末端截短實際上是一種可能的腦中生理學(xué)現(xiàn)象。LTP的阻斷似乎是A卩(l-42)球寡聚體以及先前所描述的A卩寡聚體制品的一種常見病理生理學(xué)特征(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbetal-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95，6448-6453(1998);Walsh,DM.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416，535-539(2002);Wang，H.W.等人.Solubleoligomersofbetaamyloid1-42inhibitlong-termpotentiationbutnotlong-termdepressioninratdentategyrus.BrainRes924，133－14(X2002);Wang,Q.，Walsh，D.M.,Rowan,M丄,Selkoe,D丄&Anwyl，R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin-dependentkinase5，andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5.JNeurosci24,3370-3378(2004))。完全可能的是幾種類型的可溶性寡聚體發(fā)生于AD早期中，靶向于相同的神經(jīng)元功能。特別地，其他經(jīng)官能表征的通過表達突變型人類APP的細胞系制得的A卩(l-42)寡聚體(Walsh,D.M等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002);Wang，Q.，Walsh,D.M.，Rowan，MJ.，Selkoe，D.J.&Anwyl，R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin-dependentkinase5，andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5,JNeurosci24,3370-3378(2004))正是前原纖維類型的。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在所述A卩寡聚體中沒有Ap(l-42)球寡聚體表位由類似的細胞系釋放。然而，從該細胞系獲得的Ap(l-42)寡聚體(Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416，535-539(2002);Wang,Q.，Walsh,DM.,Rowan,M丄，Selkoe，D丄&Anwyl,R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin-dependentkinase5，andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5.JNeurosci24,3370-3378(2004))有效地阻斷LTP，由此表示不同的可溶A卩(l-42)寡聚體物質(zhì)是神經(jīng)毒性的(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbeta1-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95,6448-6453(1998);Wash,D,M.等人，Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002);Wang,H.W.等人.Solubleoligomersofbetaamyloid1-42inhibitlong-termpotentiationbutnotlong-termdepressioninratdentategyrus.BrainRes924，133-140(2002);Wang,Q.,Walsh，D.M.,Rowan,M丄，Selkoe,D.J.&Anwyl,R.Blockoflong-termpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbeta-peptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasesc-JunN-terminalkinase,cyclin-dependentkinase5,andp38mitogen-activatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5.JNeurosci24，3370-3378(2004))。但是，還可能的是，Ap(l-42)球寡聚體表位的殘留污染，作為含有所述ADDL的可溶AP(1-42)寡聚體混合物的病理屬性的故障點，是少量的但是ADDL的關(guān)鍵部分。不考慮此點，以所述A(3(l-42)球寡聚體操作具有重大的優(yōu)點，其具有Ap(l-42)多聚體的經(jīng)明確定義的同質(zhì)群。當(dāng)引出抗體用于科學(xué)或治療目的時，這是顯而易見的。本發(fā)明還涉及具有抗各種球寡聚體表位的不同特異性的單克隆及多克隆抗體。所述一級單克隆小鼠抗體6G1顯示結(jié)合典型的混雜N-末端所在的線性A(3表位，其由A(3(l-X)物質(zhì)的所有結(jié)構(gòu)類型共享。因此，發(fā)現(xiàn)6G1是非常強有力的，但具有類似于6E10的免疫類型輪廓。相反，兩種其它的抗體，小鼠單克隆抗體8F5及經(jīng)親合-純化的多克隆兔子抗體PAb5598，與Ap單體或原纖維相比對Ap(l-42)球寡聚體具選擇性。然而，它們兩種都與截短型Ap(20-42)寡聚體交叉反應(yīng)，因此定位在超過氨基酸20外的位置。由于這些抗體在天然SDSWestern印跡法之后接近所述球寡聚體而在變性SDSWestern印跡法之后不接近(數(shù)椐未顯出)，則可能的是兩種抗體識別在氨基酸20及30的區(qū)域中的亞單位內(nèi)-間的結(jié)構(gòu)非線性表位。最近已經(jīng)討論這種結(jié)構(gòu)表位被具有不同一級序列的各種淀粉狀蛋白共享，因此通過所共享的普通結(jié)構(gòu)引起它們的4申經(jīng)毒4乍用。(Kayed,R.等人.Commonstructureofsolubleamyloidoligomersimpliescommonmechanismofpathogenesis.Science300,486-489(2003);Glabe，C.G.Conformation-dependentantibodiestargetdiseasesofproteinmisfolding.TrendsBiochemSci29，542-547(2004))。這些抗體提供在AD患者及人類APP轉(zhuǎn)基因小鼠的腦中探求A卩(l-42)球寡聚體的工具。最初，曾關(guān)心相對于A卩(l-42)單體制品的低選擇性。后來，人們發(fā)現(xiàn)在AD患者的CSF樣品以及APP過度表達細胞的條與最初;確定的相比對于Ap(l-42)球寡聚體的更高選擇'^。實際上，A卩(卜42)單體的體外標(biāo)準(zhǔn)制品含有AP(l-42)球寡聚體表位污染，所述Ap(l-42)球寡聚體選擇性抗體現(xiàn)在能夠確定污染的程度。因此，Ap(l-42)球寡聚體表位被證明是人工38/48kDa球寡聚體制品中的主要成分，但在另一種先前所描述的A卩寡聚體制品中是次要成分(Lambert,M.P.等人.Diffusible,nonfibr川arligandsderivedfromAbeta1-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad.SciU.S.A95,6448-6453(1998))?？笰(3(l-42)球寡聚體抗體不僅允許用于在各種體外制品中以及在體內(nèi)檢測該物質(zhì)，而且提供一種選擇性滅活明確定義的寡聚體物質(zhì)的方法。除研究特定神經(jīng)毒性蛋白在AD發(fā)生中的作用的可能性之外，預(yù)期這種識別結(jié)構(gòu)表位的特異性抗體對于治療是具優(yōu)勢的，因為可以避免與對其他常見但更低毒性的A卩(l-42)物質(zhì)的抗體反應(yīng)有關(guān)的任何副作用。在這點上，感興趣的是注意到Ap(l-42)球寡聚體導(dǎo)致了一種導(dǎo)致高抗體滴度的極好的免疫反應(yīng)，提供抗Ap(l-42)球寡聚體的主動及被動免疫的可能性。因此，預(yù)期AP(l-42)球寡聚體以及所產(chǎn)生抗它們的特異抗體，包括后者的衍生物例如重組的、經(jīng)人源化的和/或嵌合的抗體，可用于診斷以及治療阿爾茨海默氏病及其他涉及A|3球寡聚體的病況，和/或制造可用于診斷和/或治療阿爾茨海默氏病及其他涉及A卩球寡聚體的病況的物的高;旨血':所產(chǎn)生的癡呆,術(shù)語"AP(X-Y)"在此是指從包括X及Y二者的人類淀幹狀蛋白|3蛋白的氨基酸位置X至氨基酸位置Y的氨基酸序列，特別是指從所述氨基酸序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAT(相當(dāng)于氨基酸位置1至43)或者其天然存在的任何變體的氨基酸位置X至氨基酸位置Y的氨基酸序列，所述變體特別是那些具有至少一種選自A2T、H6R、D7N、A21G("Flemish")、E22G("Arctic")、E22Q("Dutch")、E22K("Italian")、D23N("Iowa")、A42T及A42V的突變，其中所述數(shù)字相對于所述Ap肽的開端，包括位置X及位置Y二者，或者具有至多三個另外的氨基酸替換且無一所述替換可阻止球寡聚體形成的序列，優(yōu)選在從氨基酸12或更高的數(shù)字X至氨基酸42或更低的數(shù)字Y的部分沒有另外的氨基酸替換，更優(yōu)選在從氨基酸20或更高的數(shù)字X至氨基酸42或更低的數(shù)字Y的部分沒有另外的氨基酸替換，以及最優(yōu)選在從氨基酸20或更高的數(shù)字X至氨基酸40或更低的數(shù)字Y的部分沒有另外的氨基酸替換的，"另外的"氨基酸替換在此是與正規(guī)序列的任何偏離，其在自然界未發(fā)現(xiàn)。更具體地，術(shù)語"Ap(l-42)"在此是指從包括1及42二者的人類淀粉狀蛋白P蛋白的氨基酸位置1至氨基酸位置42的氨基酸序列，特別是指所述氨基酸序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA或者其天然存在的任何變體，特別是那些具有至少一種選自A2T、H6R、D7N、A21G("Flemish")、E22G("Arctic")、E22Q("Dutch")、E22K("Italian")、D23N("Iowa")、A42T及A42V的突變，其中所迷數(shù)字相對于所述A卩肽的開端，包括1及42二者，或者具有至多三個另外的氨基酸替換且無一所迷替換可阻止球寡聚體形成的序列，優(yōu)選在從氨基酸20至氨基酸42的部分沒有另外的氨基酸替換的。同樣地，術(shù)語"A(3(l-40)"在此是指從包括1及40二者的人類淀粉狀蛋白P蛋白的氨基酸位置1至氨基酸位置40的氨基酸序列，特別是指所述氨基酸序歹'JDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV或者其天然存在的任何變體，特別是那些具有至少一種選自A2T、H6R、D7N、A21G("Flemish")、E22G("Arctic")、E22Q("Dutch")、E22K("Italian")及D23N("Iowa")的突變，其中所述數(shù)字相對于所述A卩肽的開端，包括1及40二者，或者具有至多三個另外的氨基酸替換且無一所述替換可阻止球寡聚體形成的序列，優(yōu)選在從氨基酸20至氨基酸40的部分沒有另外的氨基酸替換的。更具體地，術(shù)語"Ap(12-42)"在此是指從包括12及42二者的人類淀粉狀蛋白P蛋白的氨基酸位置12至氨基酸位置42的氨基酸序列，特別是指所述氨基酸序列VHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA或者其天然存在的任何變體，特別是那些具有至少一種選自A21G("Flemish")、E22G("Arctic")、E22Q("Dutch")、E22K("Italian")、D23N("Iowa")、A42T及A42V的突變，其中所述數(shù)字相對于所述A卩肽的開端，包括12及42二者，或者具有至多三個另外的氨基酸替換且無一所述替換可阻止球寡聚體形成的序列，優(yōu)選在從氨基酸20至氨基酸42的部分沒有另外的氨基酸替換的。更具體地，術(shù)語"Ap(20-42)"在此是指從包括20及42二者的人類淀粉狀蛋白P蛋白的氨基酸位置20至氨基酸位置42的氨基酸序列，特別是指所述氨基酸序列FAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA或者其天然存在的任何變體，特別是那些具有至少一種選自A21G("Flemish")、E22G("Arctic")、E22Q("Dutch")、E22K("Italian")、D23N("Iowa")、A42T及A42V的突變，其中所述數(shù)字相對于所述A卩肽的開端，包括20及42二者，或者具有至多三個另外的氨基酸替換且無一所述替換可阻止球寡聚體形成的序列，優(yōu)選不具有任何另外的氨基酸替換的。術(shù)語"A卩(X-Y)球寡聚體"(A卩(X-Y)球狀寡聚體)在此是指可溶、球狀、非共價締合的如上所定義的Ap(X-Y)肽，其具有均一性以及獨特的物理性質(zhì)。根據(jù)一個方面，Ap(X-Y)球寡聚體是AP(X-Y)肽的穩(wěn)定、非-原纖、寡聚集合體，其可通過以陰離子去垢劑孵育而獲得。與單體及原纖維相反，這些球寡聚體的特征在于明確定義的亞單位組合數(shù)目(例如，早期的集合體形式，n=4-6，"寡聚體A"，以及晚期的集合體形式，n=12-14,"寡聚體B"，如WO2004/067561中所述)。所述球寡聚體具有三維球狀類型結(jié)構(gòu)("熔球，，，參見Barghorn等人.，2OO5,JNeurochem，95,834-847)。它們可進一步以一個或多個以下特征表征-以混雜蛋白酶(例如嗜熱菌蛋白酶或內(nèi)切蛋白酶(endoproteinase)GluC)裂解N-末端氨基酸X-23得到截短形式的球寡聚體；-混雜蛋白酶及抗體與C-末端氨基酸24-Y的非-可接近性；-這些球寡聚體的截短形式保持所述球寡聚體的三維核心結(jié)構(gòu)且具有在其球寡聚體構(gòu)造中的核心表位Ap(20-Y)的更好可接近性。根據(jù)本發(fā)明以及特別是為評價本發(fā)明抗體的結(jié)合親合性的目的，術(shù)語"A卩(X-Y)球寡聚體"在此是指通過如WO2004/067561所述方法可得到的產(chǎn)物，WO2004/067561在此引入作為參考。所述方法包括將天然的、重組的或合成的Ap(X-Y)肽或其衍生物解折疊；將至少部分解折疊的Ap(X-Y)肽或其衍生物暴露于去垢劑，降低所述去垢作用并繼續(xù)孵育。出于將所述肽解折疊的目的，可使氫鍵-斷裂試劑例如六氟異丙醇(HFIP)作用于所述蛋白。當(dāng)作用溫度是大約20至50'C并且特別是大約35至4CTC時，幾分鐘的作用時間，例如大約10至60分鐘，是足夠的。隨后，于可與含水緩沖液混合的適宜有機溶刑，例如二甲亞砜(DMSO)中溶解蒸干的殘余物(優(yōu)選以濃縮形式)，從而得到至少部分解折疊的肽或其衍生物的混懸液，其可以接著使用。如果需要，所述儲備混懸液可在低溫，例如在大約-20。C臨時儲存。可選地，所述肽或其衍生物可以溶解在弱酸性，優(yōu)選含水的溶液中，例如大約10mM的HC1水溶液。在通常幾分鐘的孵育之后，通過離心除去不可溶組分。在10000g下數(shù)分鐘為宜。這些方法步驟優(yōu)選在室溫下進行，即20至3(TC范圍內(nèi)的溫度。離心之后所得到的上清液含有A)3(X-Y)肽或其衍生物并可在低溫下臨時儲存，例如在大約-20。C。接著暴露于去垢劑的步驟涉及所述肽或其衍生物的寡聚化從而得到寡聚體中間類型(在WO2004/067561中稱為寡聚體A)。出于該目的，允許去垢劑作用于至少部分解折疊的肽或其衍生物直到已經(jīng)產(chǎn)生足夠的中間寡聚體。優(yōu)選使用離子去垢劑，特別是陰離子去垢劑。根據(jù)一個具體實施方案，使用式(I)的去垢劑R-X，其中基團R是具有6至20個、優(yōu)選10至4個碳原子的無支鏈的或支鏈烷基或者具有6至20個且優(yōu)選10至14個碳原子的無支鏈的或支鏈烯基，基團x為酸性基團或其鹽，且x優(yōu)選自-COCTM+、-SCVM+,并且特別是-OSCVM+以及M+是氬陽離子或者無機或有機陽離子，優(yōu)選自堿金屬和堿土金屬陽離子以及銨陽離子。下述式(I)的去垢劑是有利的，在所述式(I)的去垢劑中R是無支鏈的烷基，其中必須特別提及的是l-烷基。特別優(yōu)選十二烷基疏酸鈉(SDS)。也可以有利地使用月桂酸和油酸。去垢劑十二烷酰肌氨酸的鈉鹽(亦稱肌氨酰NL-30或Gardo^)也特別有利。去垢作用的時間尤其依賴于進行寡聚化的肽或其衍生物是否解折疊，以及如果是，還有解折疊的程度。如果，根據(jù)所述解折疊步驟，所述肽或其衍生物已經(jīng)預(yù)先用氫鍵-斷裂試劑，即，特別是用六氟異丙醇處理，當(dāng)作用溫度在大約20至5(TC以及特別是大約35至40。C時，數(shù)小時范圍內(nèi)的作用時間是足夠的，有利地的為大約1至20以及特別是大約2至10小時。如果以較少解折疊的或基本上不解折疊的肽或其衍生物作為起點，以相對較長的作用時間為宜。如杲所述肽或其衍生物已經(jīng)預(yù)先處理，例如，根據(jù)以上指出的作為HFIP處理的備選方案的步驟或者所述肽或其衍生物直接進行寡聚化，當(dāng)作用溫度在大約20至5(TC以及特別是大約35至4(TC時，在大約5至30小時范圍內(nèi)以及特別是大約0至20小時的作用時間是足夠的。在賻育之后，有利地通過離心除去不可溶組分。在10000g下數(shù)分鐘為宜。所選擇的去垢劑濃度取決于所使用的去垢劑。如果使用SDS，濃度在以重量計O.Ol至1%，優(yōu)選以重量計0.05至0.5%的范圍內(nèi)，例如以重量計大約0.2%，經(jīng)證明是有利的。如果使用月桂酸或油酸，稍高的濃度是有利的，例如在以重量計0.05至2%，優(yōu)選以重量計O.l至0.5%的范圍內(nèi)，例如以重量計大約0.5%。所述去垢作用應(yīng)在接近于生理范圍的鹽濃度下發(fā)生。因此，尤其以50至500mM，優(yōu)選100至200mM范圍內(nèi)以及特別是約140mM的NaCl濃度為宜。接著降低去垢作用以及繼續(xù)孵育的步驟涉及進一步寡聚化從而得到本發(fā)明的A卩(X-Y)球寡聚體(在WO2004/067561中稱為寡聚體B)。因為從在前步驟中得到的混合物經(jīng)常含有去垢劑以及生理范圍內(nèi)的鹽濃度，則降低去垢作用以及，優(yōu)選地，也降低鹽濃度是有利的。這可以通過降低去垢劑以及鹽的濃度來而解決，例如，通過稀釋，適宜使用水或更低鹽濃度的緩沖液，例如Tris-HCl,pH7.3。已經(jīng)證明在大約2至IO范圍內(nèi)，有利地在大約3至8范圍內(nèi)，特別是大約4的稀釋因子是適宜的。也可以通過加入可中和所述去垢作用的物質(zhì)來實現(xiàn)去垢作用的降低。這些物質(zhì)的例子包括能夠絡(luò)合所述去垢劑的物質(zhì)，如能夠在純化及提取措施的過程中穩(wěn)定細胞的物質(zhì)，例如特定的EO/PO嵌段共聚物，特別是以商品名PluronicF68的嵌段共聚物。可同樣地使用烷氧基化以及特別是乙氧基化的烷基酚，例如TritonX系列的乙氣基化t-辛基酚，特別是TritonX100,3-(3-膽酰胺基丙基二曱銨基)-l-丙烷磺酸鹽(CHAPS)或者烷氧基化以及特別是乙氧基化的脫水山梨糖醇脂肪酸酯例如Tween⑧系列的那些，特別是Tween(g)20,在特定的臨界膠束濃度附近或以上的濃度范圍內(nèi)。接著，將所迷溶液孵育直到已經(jīng)產(chǎn)生足夠的本發(fā)明的AP(X-Y)球寡聚體。當(dāng)作用溫度是在大約20至5(TC并且特別是在大約35至4(TC時，數(shù)小時范圍內(nèi)的，優(yōu)選大約10至30小時范圍內(nèi)的以及特別是大約15至25小時范圍內(nèi)的作用時間是足夠的。然后可將該溶液濃縮，并可通過離心除去可能的殘余物。在此也證明以10000g數(shù)分鐘為宜。離心后所得到的上清液含有本發(fā)明的A(3(X-Y)球寡聚體。最后可以本身已知的方式回收本發(fā)明的AP(X-Y)球寡聚體，例如，通過超濾、透析、沉淀或離心。如果所迷AP(X-Y)球寡聚體在變性條件下的電泳分離，例如通過SDS-PAGE，產(chǎn)生雙語帶(例如對于A卩(l-42)具有38/48kDa的表觀分子量)，則是進一步優(yōu)選的，以及如果在分離之前進行戊二趑處理時，這些雙i普帶合并為一個，則是尤其優(yōu)選的。如果所述球寡聚體的空間排阻層析導(dǎo)致單峰(例如，對于Ap(l-42)相當(dāng)于大約60kDa的分子量)，則是優(yōu)選的。從A卩(l-42)肽、A(3(12-42)肽及Ap(20-42)肽開始，所述方法特別適用于荻得A(3(l-42)球寡聚體、A卩(12-42)球寡聚體及A卩(20-42)球寡聚體。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，其中X選自數(shù)字2..24以及Y如上所定義的AI3(X-Y)球寡聚體，是可通過將AP(1-Y)球寡聚體截短為其中X選自數(shù)字2..24，且X優(yōu)選是20或12，以及Y如上所定義的更短形式而得到的那些，這可通過用合適的蛋白酶處理來實現(xiàn)。例如，A卩(20-42)球寡聚體可通過將AP(l-42)球寡聚體進行嗜熱菌蛋白酶解作用而獲得，以及A(3(12-42)球寡聚體可通過將AP(l-42)球寡聚體進行內(nèi)切蛋白酶GluC蛋白酶解作用而獲得。當(dāng)?shù)竭_所要求的蛋白酶解程度時，將所述蛋白酶以通常已知的方式滅活。繼在此已經(jīng)描述的步驟之后，可將所得到的球寡聚體分離，并且，如果需要，通過進一步后處理和純化步驟而進一步地處理。所述方法的詳細描述公開于WO2004/067561,其在此引入作為參考。術(shù)語"Ap(X-Y)單體"在此是指AP(X-Y)肽的經(jīng)分離形式，優(yōu)選不與其他A卩肽產(chǎn)生基本上非共價相互作用的AP(X-Y)肽形式。實際上，所述AP(X-Y)單體通常以水溶液形式提供。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述單體水溶液含有0.05%至0.2%，更優(yōu)選大約0.1%NH4OH。在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述單體水溶液含有0.05%至0.2%，更優(yōu)選大約0.1%NaOH。當(dāng)使用(例如，用于確定本發(fā)明的抗體的結(jié)合親合性)時，將所述溶液以合適的方式稀釋是有利的。進一步地，將所述溶液在其制備后2小時之內(nèi)，特別在1小時之內(nèi)，以及尤其在30分鐘之內(nèi)使用通常是有利的。術(shù)語"原纖維"在此是指包括非-共價締合的、單個AP(X-Y)肽的集合體的分子結(jié)構(gòu)，其在電子顯微鏡下顯示原纖結(jié)構(gòu)，其結(jié)合剛果紅，然后在偏振光下顯示雙折射，其x射線衍射圖是交叉-p結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的另一方面，原纖維是可通過一種方法獲得的分子結(jié)構(gòu)，該方法包括合適的Ap肽在不存在去垢劑的情況下，例如在0.1MHC1中自誘導(dǎo)聚合性聚集從而導(dǎo)致多于24個，優(yōu)選多于100個單元的聚集體的形成。該方法在本領(lǐng)域是熟知的。有利地，Ap(X-Y)原纖維以水溶液的形式使用。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述含水原纖維溶液通過如下步驟制得將所述Ap肽溶解在0."/。NH40H中，將其用20mMNaH2P04，140mMNaCl，pH7.4進行1:4稀釋，接著將所述pH重調(diào)至7.4，將所述溶液在37'C下孵育20小時，接著在10000g離心IO分鐘并且在懸浮于20mMNaH2P04，140mMNaCl,pH7.4中。本發(fā)明進一步涉及以下教導(dǎo)。對于所述可溶球狀A(yù)(3(卜42)寡聚體得到的結(jié)果也是有效的并且適用于相應(yīng)的可溶球狀A(yù)卩(l-40)寡聚體以及相應(yīng)的截短型Ap(X-38)、Ap(X-39)、A卩(X-40)、A卩(X-41)、A卩(X-42)或Ap(X-43)，優(yōu)選Aj3(X-42)或A卩(X-40)寡聚體，和/或其相應(yīng)的交聯(lián)寡聚體。因此根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"可溶球狀A(yù)p(l-42)寡聚體("球寡聚體")"理解為包括例如"可溶球狀A(yù)卩(l-40)寡聚體，，以及"可溶球狀A(yù)p(X-42)寡聚體"以及"可溶球狀A(yù)卩(X-40)寡聚體，，和/或其交聯(lián)衍生物且"x每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字2..24，優(yōu)選自8.,24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20"以及最優(yōu)選自17..20,其中省略號的意思如上所述(即，l..24代表1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24，等等)。進一步地，已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的關(guān)于非擴散的水溶性球狀A(yù)p(l-42)寡聚體("球寡聚體")的結(jié)果也是有效的并且適用于相應(yīng)的Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體，且X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,及其交聯(lián)衍生物。在進一步研究以上篩選方法的過程中，本發(fā)明人還研究了如文獻中所述的化學(xué)制品。令人驚訝地，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)根據(jù)W098/33815(以及類似出版物)的寡聚體不是均一的可識別物質(zhì)或可識別物質(zhì)的均一混合物。出乎意料地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)根據(jù)W098/33815(以及類似出版物)的寡聚體實際上包括大約5%非擴散可溶球狀A(yù)p(l-42)寡聚體表位("球寡聚體表位")的混合物以及大約95%原纖化傾向的單體的混合物，所述原纖化傾向的單體包括在得到原纖維的途徑中作為原纖維前體("原纖寡聚體")的可擴散寡聚體。進一步地，令人驚訝地，還發(fā)現(xiàn)其他已知的A(3(l-42)寡聚體制品還包括大約5%量的非擴散可溶球狀A(yù)(3(l-42)寡聚體表位("球寡聚體表位，，)。計算表明本AJ3(l-42)球寡聚體由12個或大約12個Ap亞單位組成，但還可能以及提出具有相同表位結(jié)構(gòu)特征變化但具有更少個數(shù)的Ap鏈(例如，僅具有4個亞單位)的集合體存在。一般地，這是具有如WO2004/067561所述的"寡聚體A"的情況是如此(AbbottGmbH&Co.KG)(參見圖18)。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種在人類或動物患者體內(nèi)或體外定性地(-陽性地或陰性地)或定量地診斷阿爾茨海默氏病(AD)的存在或不存在或者診斷所述患者罹患AD的風(fēng)險的方法，其特征在于以下步驟確定在取自患者的一或多個代表性樣品中具有抗非擴散球狀的A(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A|3(X-40),和/或其交聯(lián)衍生物的特異性的自體抗體的存在(=陽性診斷結(jié)論)或不存在(=陰性診斷結(jié)論)或者量，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述樣品選自細胞、細胞集合體、身體組織(細胞)樣品、體液樣品以及身體組織(細胞)/液體樣品，每種所述樣品來自于動物體，優(yōu)選人類、非人類動物或非人類轉(zhuǎn)基因動物體。根據(jù)本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所迷寡^體("球寡聚^^")和/或其交聯(lián)^生物的從大約20至:約30的氨基酸位置之間的球寡聚體結(jié)構(gòu)類型特異的表位是選擇性的，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。單詞"大約"當(dāng)在以上使用或在本說明書及權(quán)利要求書的其他地方使用時，是用于表示所述確切位置可以在從O到1、2、或3個氨基酸位置的正常試驗及操作限度內(nèi)變化的事實。術(shù)語"從大約20至大約30的氨基酸位置"在本發(fā)明中以及無論在本說明書中何處使用將理解為至少包括，但不限于術(shù)語"從大約20至大約30的氨基酸位置"、"從大約21至大約30的氨基酸位置"、"從大約22至大約30的氨基酸位置"、"從大約23至大約30的氨基酸位置"、以及"從大約24至大約30的氨基酸位置"。術(shù)語"大約30",與術(shù)語"大約20"的意思無關(guān)，應(yīng)理解為至少包括，但不限于選自26..34的數(shù)字。術(shù)語"大約20",與術(shù)語"大約30"的意思無關(guān)，應(yīng)理解為至少包括，但不限于選自16..24的數(shù)字。根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述樣品選自細胞、細胞集合體、身體組織(細胞)樣品、體液樣品以及身體組織(細胞)/液體樣品，每種所述樣品來自動物體，優(yōu)選人類、非人類動物或非人類轉(zhuǎn)基因動物體。根據(jù)本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述單-或多克隆抗體對于位于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A(3(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，和/或其交聯(lián)衍生物的從大約20至大約30的氨基酸位置之間的球寡聚體結(jié)構(gòu)類型特異的表位是選擇性的，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自l..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A^(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的進一步方面，提供一種富集過程，其特征在于包括以下步驟通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟從所述制品選擇性地且可逆地捕獲非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物。根據(jù)本發(fā)明的進一步方面，提供一種用于確定至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Aj3(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，和/或其交聯(lián)衍生物，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物在人工或天然制品中的量的方法，其特征在于以下步驟將所述制品或其代表性部分與具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或AP(X-40)寡聚體，和/或其交聯(lián)衍生物特異性的特異單或多克隆抗體接觸，然后確定所得到的抗體-球寡聚體結(jié)合產(chǎn)物的量。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，所述過程是斑點印跡以及ELISA抗-A卩免疫測定，如下所述或如WO2004/067561中所述。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述單-或多克隆抗體對于位于所述非擴散可溶球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的從大約20至大約30的氨基酸位置或在其之間的球寡聚體結(jié)構(gòu)類型特異的表位是特異的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟富集包含于所述制品中的非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物的量。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的富集方法的特征在于非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物的量的富集，該量等于或高于以重量計50%，優(yōu)選等于或高于以重量計60%，更優(yōu)選等于或高于以重量計70%，更優(yōu)選等于或高于以重量計80%，更優(yōu)選等于或高于以重量計90%，更優(yōu)選等于或高于以重量計95%，更優(yōu)選等于或高于以重量計99%,更優(yōu)選等于或高于以重量計99.9%，更優(yōu)選等于或高于99.99%。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的富集方法的特征在于包括以下步驟通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟從所述制品選擇性地且可逆地捕獲非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A(3(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17.,20，和/或其交聯(lián)衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所迷的富集方法的特征在于包括以下步驟通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟從所述制品可逆地或不可逆地除去不是非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選AI3(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的那些物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的富集方法的特征在于確定非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A(3(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的量的步驟僅在已經(jīng)進行了一個或多個富集步驟之后進行。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的確定和/或富集方法的特征在于通過使用一或多個本身已知的交聯(lián)步驟將所得到的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")交聯(lián)，所迷交聯(lián)的步驟可在所述富集和/或確定步驟之前、期間和/或之后進行。可以，例如，通過以戊二醛處理來進行交聯(lián)。合適的交聯(lián)方法描述于WO2004/06756I。所述交聯(lián)步驟可在所述富集步驟之前、期間和/或之后進行。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的確定和/或富集方法的特征在于非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Aj3(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所述的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選AI3(X-42)和/或AP(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12,.20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物，其通過如上所述的方法獲得或可獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所述的非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選AI3(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物，其通過如上所述的方法獲得或可獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，所述經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所述的非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")的特征在于所述非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A(3(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種組合物，其包含經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所迷的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物，其通過如上所述的方法獲得或可獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述組合物的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物在需要其的患者中用作抗阿爾茨海默氏病(AD)主動免疫的疫苗。根椐本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如非擴散球狀A(yù)卩(X-3^/:3)寡聚體，優(yōu)選:卩&-42)和/或A:(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物用于制備在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)的特異適體。制備抗以上鑒別的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A)3(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)的合適的特異適體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見，例如，德國專利申請?zhí)朌E19916417Al所公開的。術(shù)語"主動"或"被動"免疫就患者的疾病治療而言將是指阿爾茨海默氏病(AD)的出現(xiàn)或發(fā)展或進程被阻止或拖延或者與神經(jīng)元損傷程度以及認(rèn)知缺損的嚴(yán)重性相關(guān)的AD發(fā)病被中止或減緩。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A(3(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1,.24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物用于制備在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)被動免疫的藥物。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)I3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物用于制備單克隆的或多克隆的、天然的或重組的人類或動物或嵌合抗體，其具有抗非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的特異性，可用于在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病被動免疫。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，任何如上所述的用途的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根椐本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種制備具有抗所述非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物的特異性的單克隆的或多克隆的、天然的或重組的人類、人源化、動物或嵌合抗體的方法，該方法特征在于以下步驟將具有免疫系統(tǒng)的生物體與通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)I3(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)和/或其交聯(lián)衍生物相接觸，以及將具有抗所述非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物特異性的抗體或者產(chǎn)生具有抗所迷非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或AP(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)和/或交聯(lián)衍生物特異性的抗體的細胞從所述生物體分離，并且任選地確定所得到抗體的化學(xué)序列和/或結(jié)構(gòu)。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人源化的、人類、動物或者嵌合抗體，其具有抗根據(jù)如上所述的方法荻得或可荻得的非擴散球狀A(yù)J3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自口..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性，用于在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)主動或被動免疫。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人源化的、人類、動物或者嵌合抗體的特征在于所述非擴散球狀A(yù))3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種組合物，該組合物包含單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人類、人源化的、動物或者嵌合抗體，該抗體具有抗根據(jù)如上所述的方法荻得或可獲得的非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性，用于在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)主動或被動免疫。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步的優(yōu)選實施方案，如上所述的組合物，特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種方法，該方法用于患者患有阿爾茨海默氏病(AD)或具有增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的陽性或陰性診斷，其特征在于以下步驟確定在取自所述患者的一或多個代表性樣品中抗非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物自體抗體的存在(陽性診斷結(jié)論)或不存在(陰性診斷結(jié)論)。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述樣品選自細胞、細胞集合體、身體組織(細胞)樣品、體液樣品以及身體組織(細胞)/液體樣品，每種所迷樣品來自于人類、動物或轉(zhuǎn)基因動物體。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將抗非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選A卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物的人源化的、人類、動物或者嵌合抗體在需要其的患者中用作確定阿爾茨海默氏病(AD)或增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的診斷標(biāo)示物。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，所述的抗非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體，，)的人源化的、人類、動物或者嵌合抗體的用途的特征在于所迷非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體,優(yōu)選A卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將一或多種降低患者腦中脂肪酸水平的藥物用于制備在需要其的患者中治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病或者相關(guān)病況如唐氏綜合癥的藥物。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種非擴散球狀A(yù)P(X-Y)寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,以及Y每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字38、39、41及43,和/或其交聯(lián)衍生物，其可用作在需要其的患者中確定阿爾茨海默氏病(AD)或增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的診斷標(biāo)示物。對于本發(fā)明包括說明書、權(quán)利要求書及附圖，術(shù)語"Ap(卜42)寡聚體"理解為包括Ap(X-42)寡聚體、A(3(X40)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。尤其貫穿本說明書、所有權(quán)利要求及所有附圖，以下定義均適用根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"可溶的"定義為，在存在蛋白質(zhì)(例如，HAS)或去垢劑(例如，pluriol、PluronicF68)的情況下在含水的生理緩沖液中，就AP(1-Y)球寡聚體而言具有高的或顯著的水溶性(親水性)，其至多大約15mg/ml或更高"以及就截短型Ap(X-Y)球寡聚體而言定義為具有低的、中等的或高的溶解度，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1,,24,優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，以及Y每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字38..43。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"Ap(X-38/43)寡聚體"定義為包括至少一種選自"A(3(X-38)寡聚體"、"A卩(X-39)寡聚體"、"A卩(X-40)寡聚體"、"A卩(X-41)寡聚體"、"Ap(X-42)寡聚體"及"Ap(X-43)寡聚體"的A卩寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根椐本發(fā)明，術(shù)語"A(3(X-38)寡聚體"定義為包括至少一種Ap(X-38)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"Ap(X-39)寡聚體"定義為包括至少一種Ap(X-39)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"A(3(X-40)寡聚體"定義為包括至少一種A|3(X-40)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"AI3(X-41)寡聚體"定義為包括至少一種AP(X-41)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"Ap(X-42)寡聚體"定義為包括至少一種AJ3(X-42)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"Ap(X-43)寡聚體"定義為包括至少一種AP(X-43)寡聚體和/或其交聯(lián)衍生物，其中X選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供一種在體外或在體內(nèi)定性地(=陽性地或陰性地)或定量地診斷人類或非人類動物受試者存在或不存在阿爾茨海默氏病(AD)或罹患AD的風(fēng)險的方法，其特征在于以下步驟確定在一或多個取自所述受試者的代表性樣品中具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)J3(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，和/或其交聯(lián)衍生物特異性的自體抗體的存在(=陽性診斷結(jié)論)或不存在(-陰性診斷結(jié)論)或其量，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所迷方法的特征在于所迷樣品選自細胞、細胞集合體、身體組織(細胞)樣品、體液樣品以及身體組織(細胞)/液體樣品，每種所述樣品來自于人類、非人類或轉(zhuǎn)基因動物體。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述單-或多克隆抗體對于至少一種位于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，和/或其交聯(lián)衍生物的從大約20至大約30的氨基酸位置之間的球寡聚體結(jié)構(gòu)類型特異的表位具有選擇性，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1.，24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種確定至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，和/或其交聯(lián)衍生物，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物在人工或天然制品中的量的方法，該方法的特征在于以下步驟將所述制品，或其代表性的部分與具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，和/或其交聯(lián)衍生物特異性的特異的單-或多克隆抗體接觸，然后確定所得到的抗體-球寡聚體結(jié)合產(chǎn)物的量。特別地，根椐最后方面的方法，其特征在于所述單-或多克隆抗體對位于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)J3(X-42)-和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的從大約20至大約30的氨基酸位置或在其之間的球寡聚體結(jié)構(gòu)類型特異性表位是特異的。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟富集包含于所迷制品中的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物的量。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述富集方法的特征在于非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物的量的富集，該量等于或高于以重量計50%,優(yōu)選等于或高于以重量計60%,更優(yōu)選等于或高于以重量計70%,更優(yōu)選等于或高于以重量計80%，更優(yōu)選等于或高于以重量計90%，更優(yōu)選等于或高于以重量計95%，更優(yōu)選等于或高于以重量計99%，更優(yōu)選等于或高于以重量計99.9%，更優(yōu)選等于或高于99.99%。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述富集方法的特征在于其包括以下步驟通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟從所述制品選擇性地且可逆地捕獲所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選Ap(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述富集方法的特征在于其包括以下步驟.'通過使用一或多個本身已知的肽純化過程步驟從所述制品可逆地或不可逆地除去不是非擴散球狀A(yù)I3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)(3(X-42)和/或A)3(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的那些物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述富集方法的特征在于確定非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)j3(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的量的步驟僅在已經(jīng)進行了一個或多個富集步驟之后進行。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述的確定和/或富集方法的特征在于通過使用一或多個本身已知的交聯(lián)步驟將所得到的非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)卩(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")交聯(lián)，所述交聯(lián)的步驟可在所述富集和/或確定步驟之前、期間和/或之后進行。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述的確定和/或富集方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選所述非擴散球狀A(yù)(3(X-42)-和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所迷的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)j3(X-42)和/或AJ3(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17.,20,和/或其交聯(lián)衍生物，其通過如上所述的方法獲得或可獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，所述經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所述的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)(3(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")的特征在于所述非擴散球狀A(yù)卩(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種組合物，其包含經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的如上所述的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)(3(X-42)或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物，其通過如上所述的方法獲得或可獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述組合物的特征在于所述非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如非擴散球狀A(yù)p(X-3:/:3)寡聚體，優(yōu)選非;廣^:球狀A(yù)p(X:4;)和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物在需要其的患者中用作抗阿爾茨海默氏病(AD)主動免疫的疫苗。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如非擴散球狀A(yù)卩(X-8/4。3)寡;體，優(yōu)選非;廣;球狀A(yù)p(x:4;)和/或AP(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1,,24，優(yōu)選自8..24,更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20,和/或其交聯(lián)衍生物用于制備在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)的特異適體。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物用于制備在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)被動免疫的藥物。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17.,20，和/或其交聯(lián)衍生物用于制備單克隆的或多克隆的、天然的或重組的人類或動物或嵌合抗體，其具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物的特異性。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述用途的特征在于所述非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A|3(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種制備具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或A(3(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24,優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物的特異性的單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人類、人源化、動物或嵌合抗體的方法，該方法特征在于以下步驟(i)將具有免疫系統(tǒng)的生物體與通過如上所述的方法獲得或可獲得的經(jīng)純化的或基本上純化的或高度純化的非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物相接觸，以及(ii)將具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選抗至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物特異性的抗體從所述生物體分離，并且(iii)任選地確定所得到抗體的化學(xué)序列和/或結(jié)構(gòu)或者，替代地，其特征在于以下步驟將具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選抗至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物特異性的抗體從產(chǎn)生具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選抗至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")和/或其交聯(lián)衍生物特異性的抗體的細胞或細胞系分離。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)卩(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人源化的、人類、動物或者嵌合抗體，其具有抗根據(jù)如上所述的方法獲得或可獲得的至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性，用于在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)主動或纟皮動免疫。根椐本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述的單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人源化的、人類、動物或者嵌合抗體的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種組合物，該組合物包含單克隆的或多克隆的，天然的或重組的，人類、人源化的、動物或者嵌合抗體，該抗體具有抗根據(jù)如上所迷的方法獲得或可獲得的至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24,更優(yōu)選自12..2Q以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性，用于在需要其的患者中抗阿爾茨海默氏病(AD)主動或被動免疫。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述組合物的特征在于所述非擴散球狀A(yù)(3(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A(3(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種方法，該方法用于人類或非人類動物受試者患有阿爾茨海默氏病(AD)或具有增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的陽性或陰性診斷，其特征在于以下步驟確定在取自所述患者的一或多個代表性樣品中具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或Ap(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性的自體抗體的存在(陽性診斷結(jié)論)或不存在(陰性診斷結(jié)論)。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述方法的特征在于所述樣品選自細胞、細胞集合體、身體組織(細胞)樣品、體液樣品以及身體組織(細胞)/液體樣品，每種所迷樣品來自于人類、非人類或轉(zhuǎn)基因動物體。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所迷方法的特征在于所述非擴散球狀A(yù)p(X-38/43)寡聚體，優(yōu)選非擴散球狀A(yù)p(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將具有抗至少非擴散球狀A(yù)J3(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)卩(X-42)和/或A卩(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，和/或其交聯(lián)衍生物特異性的人源化的、人類、動物或者嵌合抗體在需要其的患者中用作確定阿爾茨海默氏病(AD)或增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的診斷標(biāo)示物。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，如上所述的具有抗至少一種非擴散球狀A(yù)P(X-38/43)寡聚體結(jié)構(gòu)表位，優(yōu)選至少一種非擴散球狀A(yù)p(X-42)和/或AP(X-40)寡聚體結(jié)構(gòu)表位("球寡聚體")特異性的人源化的、寡聚體，優(yōu)^選非擴散球狀A(yù)(3(X-42)-和/或A卩(X-40)寡聚體("球寡聚體")是可溶的。根據(jù)本發(fā)明一個進一步方面，提供一種用途，該用途是將一或多種降低患者腦中脂肪酸水平的藥物用于制備在需要其的患者中治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病或者相關(guān)病況如唐氏綜合癥的藥物。根據(jù)本發(fā)明的一個進一步方面，提供一種非擴散球狀A(yù)Px-y寡聚體，其中X每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字1..24，優(yōu)選自8..24，更優(yōu)選自12..24，更優(yōu)選自12..20以及最優(yōu)選自17..20，以及Y每次出現(xiàn)獨立地選自數(shù)字38..43，和/或其交聯(lián)衍生物，其可用作在需要其的患者中確定阿爾茨海默氏病(AD)或增加的罹患阿爾茨海默氏病的風(fēng)險的診斷標(biāo)示物。與診斷應(yīng)用有關(guān)，本發(fā)明包括一種在懷疑患有此病的患者中診斷阿爾茨海默氏病的方法。該方法包括以下步驟a)從所述患者分離生物樣品；b)在足以形成球寡聚體/抗體復(fù)合物的一段時間和條件下將所述生物樣品與一種如上所述的抗體接觸；c)檢測樣品中所述球寡聚體/抗體復(fù)合物的存在，所述復(fù)合物的存在表示所述患者的阿爾茨海默氏病診斷結(jié)論。本發(fā)明的另一種方法包括在懷疑患有此病的患者中診斷阿爾茨海默氏病的方法，其包括以下步驟a)從所述患者分離生物樣品；b)在足以形成抗體/球寡聚體復(fù)合物的一段時間和條件下將所述生物樣品與球寡聚體接觸；c)在足以使得所述偶聯(lián)物結(jié)合所結(jié)合抗體的一段時間和條件下將偶聯(lián)物加至所得到的抗體/球寡聚體復(fù)合物，其中所述偶聯(lián)物包含已連接至能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物的抗體；以及d)通過檢測信號產(chǎn)生化合物產(chǎn)生的信號檢測可存在于所述生物樣品的抗體的存在，所述信號表示患者的阿爾茨海默氏病的診斷結(jié)論。本發(fā)明包括在懷疑患有阿爾茨海默氏病的患者中診斷阿爾茨海默氏病的進一步方法，該方法包括以下步驟a)從所迷患者分離生物樣品；b)在足以形成抗體/經(jīng)純化的球寡聚體復(fù)合物的一段時間和條件下將所述生物樣品與如上所述的球寡聚體接觸；c)檢測樣品中所述抗體/經(jīng)純化的球寡聚體復(fù)合物的存在，所述復(fù)合物的存在表示所述患者的阿爾茨海默氏病診斷結(jié)論。進一步地，本發(fā)明包括另一種在懷疑患有阿爾茨海默氏病的患者中診斷阿爾茨海默氏病的方法，其包括以下步驟a)從所述患者分離生物樣品；在足以使得抗-抗體/抗體復(fù)合物形成的一段時間和條件下將所述生物樣品與對所迷樣品中抗體特異的抗-抗體接觸；b)在足以使得所迷偶聯(lián)物結(jié)合所述已結(jié)合的抗體的一段時間和條件下將偶聯(lián)物加至所得到的抗-抗體/抗體復(fù)合物，其中所述偶聯(lián)物包含已連接至能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物的球寡聚體；以及c)檢測所述信號產(chǎn)生化合物所產(chǎn)生的信號，所述信號表示所述患者的阿爾茨海默氏病診斷結(jié)論。另外，本發(fā)明包括一種鑒別用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的化合物的方法。該方法包括以下步驟a)在足以使所述一或多種化合物結(jié)合或中和所述經(jīng)純化的球寡聚體的一段時間和條件下將一或多種所感興趣的化合物暴露于如上所述的經(jīng)純化球寡聚體；以及b)鑒別結(jié)合或中和所述經(jīng)純化的球寡聚體的那些化合物，所鑒別的化合物將可用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。此外，本發(fā)明包括一種設(shè)計可用于在患者中治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的小分子的方法。該方法包括以下步驟a)分析蛋白質(zhì)例如如上所迷的經(jīng)純化的球寡聚體、如上所述的經(jīng)分離的(3-淀粉狀蛋白質(zhì)組合物或所述經(jīng)分離的p-淀粉狀蛋白質(zhì)組合物的集合體的三維結(jié)構(gòu)；b)鑒別在所選擇的步驟a)的蛋白質(zhì)的表面上的一或多個表位；以及c)設(shè)計將結(jié)合所鑒別的步驟b)的一或多個表位的小分子，所述小分子將可用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。本發(fā)明還包括一種鑒別用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病的單克隆抗體的方法。該方法包括以下步驟a)在一或多種所迷單克隆抗體足以結(jié)合所述球寡聚體并形成球寡聚體/抗體復(fù)合物的一段時間和條件下將如上所述的經(jīng)純化的球寡聚體暴露于單克隆抗體庫；b)鑒別所迷球寡聚體/抗體復(fù)合物的存在；以及c)確定在所述復(fù)合物之內(nèi)的一或多種抗體的身份，所述一或多種抗體將用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。另外，應(yīng)注意本發(fā)明的球寡聚體(以及針對其的抗體)可以用于各種診斷檢測。在本發(fā)明的一個實施方案中，將所述球寡聚體，或其部分，涂覆在固相上(或存在于液相中)。然后將所述試驗或生物樣品(例如，全血、腦脊液、血清，等等)與所迷固相接觸。如果抗體存在于所述樣品中，這種抗體結(jié)合所述固相上的抗原，然后通過直接法或者間接法檢測到。所迷直接法包括簡單地檢測所述復(fù)合物本身的存在以及因此檢測所述抗體的存在。在所述間接法中，將偶聯(lián)物加至所述已結(jié)合的抗體。所述偶聯(lián)物包括第二抗體，其結(jié)合已連接到信號產(chǎn)生化合物或標(biāo)記物的第一已結(jié)合的抗體。如杲第二抗體結(jié)合已結(jié)合的第一抗體，則所迷信號產(chǎn)生化合物產(chǎn)生可測量信號。這種信號則表明第一抗體在所述試驗樣品中的存在。料、膠乳粒子、^磁性顆粒、微粒(參見U.S.專利No.5,705,330)、珠粒、膜、微量孔及塑料管。所述固相材料以及標(biāo)記存在于所述偶聯(lián)物中的抗原或抗體的方法的選擇，如果需要，基于所需試驗形式性能特征而決定。如上所述，所述偶聯(lián)物(或指示試劑)將包含已連接到信號產(chǎn)生化合物或"標(biāo)記"的抗體(或許抗-抗體，取決于所述試驗)。該信號產(chǎn)生化合物或"標(biāo)記，，本身是可檢測出的或者可與一或多種另外的化合物反應(yīng)從而產(chǎn)生可檢測出的產(chǎn)物。信號產(chǎn)生化合物的例子包括生色團、放射性同位素(例如，125I、131I、32P、3H、"S及"C)、化學(xué)發(fā)光化合物(例如，吖啶4翁)、顆粒(可見的或熒光的)、核酸、絡(luò)合劑、或催化劑例如酶(例如，堿性磷酸酯酶、酸性磷酸酯酶、辣根過氧化物酶、卩-半乳糖苷酶以及核糖核酸酶)。在使用酶(例如，堿性磷酸酯酶或辣根過氧化物酶)的情況下，加入生色-、產(chǎn)生焚光-、發(fā)光-底物導(dǎo)致生成可檢測信號。其它檢測系統(tǒng)例如時間分辨(time-resolved)熒光、內(nèi)部反射熒光、擴增(例如，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))以及拉曼光譜測定法也是有用的。可通過以上免疫測定法檢測的生物液體的例子包括血漿、全血、干燥的全血、血清、腦脊液或者組織及細胞的水提取物或有機-水提取物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，可將所述試驗樣品暴露于涂有本發(fā)明的特異性抗體(例如，人類或人源化的單克隆抗體、多克隆抗體，等等)的固相(或液相)。如上所述的球寡聚體以及，如果存在于所述樣品中，結(jié)合所述固相，然后可通過如上所述的直接法或間接法檢測。更具體地，所述間接法包括加入偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物包含已連接至標(biāo)記物或信號產(chǎn)生化合物的第二抗體(其結(jié)合至所述已結(jié)合的抗原)。當(dāng)?shù)诙贵w結(jié)合所述已結(jié)合的抗原時，則產(chǎn)生可檢測信號，表示阿爾茨海默氏病蛋白例如球寡聚體或其部分存在于所述試驗樣品中。本發(fā)明還包括用于檢測抗體在試驗樣品中的存在的第三方法。該方法包括以下步驟(a)在足以使得形成抗-抗體/抗原復(fù)合物的時間和條件下，將懷疑含有所述抗體的試驗樣品與對于所述抗原(例如，球寡聚體或其部分)特異的抗-抗體接觸；(b)在足以使得所述抗原結(jié)合所述結(jié)合的抗體的一段時間和條件下將抗原加至所得到的抗-抗體/抗原復(fù)合物，所述抗原包含球寡聚體或其部分，如在此所定義的；以及(c)將偶聯(lián)物加至所得到的抗-抗體/抗體/抗原復(fù)合物，所述偶聯(lián)物包含含有已連接至能夠檢測可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物的單克隆或多克隆抗體的組合物，所述單克隆或多克隆抗體針對所述抗原；以及(d)通過檢測所述信號產(chǎn)生化合物產(chǎn)生的信號檢測可存在于所述試驗樣品中的抗體的存在?？墒褂脤φ栈蛐?zhǔn)物，其包括對于所述抗-抗體的抗體。如果需要，所述抗原混合物可進一步地包括P30。試劑盒也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。更具體地，本發(fā)明包括用于確定抗體在患者中的存在的試劑盒。特別地，用于確定抗體在試驗樣品中的存在的試劑盒包括a)在此所定義的抗原(例如，球寡聚體或其部分；以及b)偶聯(lián)物，其包含已連接至能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物的抗體。所述試劑盒還可含有對照或校準(zhǔn)物，其包括結(jié)合所述抗原的試劑。本發(fā)明還包括用于檢測在試驗樣品中的抗體的另一類型的試劑盒。所述試劑盒可以包括a)對所感興趣的抗體特異的抗-抗體，以及b)如上所定義的抗原或其部分。還可以包括對照或校準(zhǔn)物，其包括結(jié)合所述抗原的試劑。更具體地，所述試劑盒可包括a)對所述抗體特異的抗-抗體以及b)偶聯(lián)物，其包含所迷抗原，所迷偶聯(lián)物已連接至能夠產(chǎn)生可檢測信號的信號產(chǎn)生化合物。此外，所述試劑盒還可含有對照或校準(zhǔn)物，其包括結(jié)合所述抗原的試劑。所迷試劑盒還可包括一個容器例如管瓶、瓶或窄條，每個容器具有預(yù)置的固相，以及含有相應(yīng)偶聯(lián)物的其他容器。這些試劑盒還可以含有進行所述試驗所需的其他試劑例如洗滌、加工及指示試劑的管瓶或容器?，F(xiàn)將本發(fā)明通過后面的實施例進一步解釋說明，其在各個方面都不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。實施例實施例1:制備原纖化傾向的單體將1mgAp(l-42)固體粉末，由Bachem化學(xué)合成(Bachem,WeilamRhein，Germany)，Cat.No.H-1368，溶解于0.5ml0.1%NH4OH水溶液(新鮮制備)中并在室溫下振搖30秒從而得到具有2mg/ml濃度的透明溶液。將所得到的A卩(l-42)單體制品用1.5ml20mMNaH2P04,140mMNaCl，pH7.4稀釋至0.5mg/ml的最終蛋白濃度。將該Ap(l-42)原纖化傾向的單體制品的pH用5。/。鹽酸調(diào)節(jié)至pH7.4，然后將所述制品放在冰浴上用于立即使用。所有步驟快速進行從而避免AP(1-42)在制備期間開始聚合。發(fā)現(xiàn)所述單體的最大穩(wěn)定性為4t:下1小時或者室溫下15分鐘?？蛇x地，可將樣品在-80。C立即冷凍并在-80'C儲存最多1-2周。如果儲存超過兩周，即使在該極端低的溫度下，所述A卩初原纖維及原纖維聚合過程開始，使得所述制品不能使用。實施例2:A卩(X-42)球寡聚體及原纖化傾向的單體的穩(wěn)定性如WO2004/067561的實施例5a所述，制備A卩(l-42)球寡聚體的溶液。簡要地，將A卩(l-42)合成肽(Cat.No,H-1368，Bachem，Switzerland)以—6mg/ml懸浮于1,1，1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)中并在振搖、37。C下孵育1.5小時以完全溶解。通過在SpeedVac中蒸發(fā)而除去HFIP并將A卩(l-42)以5mM濃度懸浮于二曱亞石風(fēng)(DMSO)中且超聲處理20秒。將所述HFIP預(yù)處理的A卩(l-42)在磷酸鹽緩沖溶液(PBS)(20mMNaH2P04,140mMNaCl,pH7.4)中稀釋至400nM并加入1/10體積2%SDS(在H20中)(最終濃度為0.2%十二烷基硫酸鈉(SDS))。在37°C下孵育6小時得到16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體中間體。所述38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體通過用三體積H20進一步稀釋并在37'C下孵育18小時而生成。在3,000xg下離心20分鐘之后，通過超濾(30kDa截止)濃縮所述樣品，對5mMNaH2P04，35mMNaCl，pH7.4透析，在10,000xg下離心10分鐘并將含有所迷38/48kDaAp(l-42)球寡聚體的上清液抽出。對于脂肪酸誘導(dǎo)的38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體，將所迷SDS替換為加入1/10體積的0.5%脂肪酸。對于交聯(lián)，所述38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體在濃縮和透析前用1mM戊二醛在室溫處理2小時，接著用乙醇胺(5mM)在室溫(RT)處理30分鐘。所述38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體的有限蛋白酶解使用1/50(mg/mg)相應(yīng)的蛋白酶進行并在室溫下孵育20小時，得到相應(yīng)的截短形式。濃度評估如下基于其試驗確定的分子量，所述A(3(l-42)球寡聚體大約由12個單體組成。因此，所聲明的指定濃度也是近似值。例如，42nM的指定Ap(l-42)球寡聚體濃度將相當(dāng)于500nM基于單體的Ap(l-42)球寡聚體濃度。將在20mMNaH2P04;140mMNaCl;pH7.4中的0.5mg/ml樣品在室溫和37。C下分別孵育l天和4天。通過SDS-PAGE分析所迷樣品的10pl等分試樣。將A卩(l-42)(Bachem,肽合成)以2mg/ml溶解于0.1%NH4OH中并在水中進行l(wèi):4稀釋(0.5mg/ml)，如實施例1所述。將該Ap(l-42)原纖化傾向的制品在以下的每個溫度下孵育24小時-20。C;0'C;室溫(相當(dāng)于大約20-22。C)及37。C。通過SDS-PAGE分析每個樣品的10pl等分試樣。結(jié)果示于圖2中。據(jù)發(fā)現(xiàn)所述AJ3(1-42)球寡聚體在PBS中在室溫及37。C下穩(wěn)定至少4天，而A(3(l-42)單體在PBS中甚至在0。C下1天后就顯示顯著的向兆-道爾頓聚集體的聚合，在室溫下1天后顯示廣泛的聚合以及在37。C下1天后幾乎完全聚合。實施例3:A(3(l-42)球寡聚體表位在體內(nèi)存在的驗證使用本發(fā)明的特異性抗體，可在阿爾茨海默氏病患者的腦中的淀粉狀蛋白斑塊中(參見圖13a-c)以及在APP轉(zhuǎn)基因Tg2576小鼠的腦中的淀粉狀蛋白斑塊中(參見圖13d-f)檢測AJ3(l-42)球寡聚體表位。所述免疫焚光的大部分與硫黃素S陽性斑塊相關(guān)(參見圖13a、d),其中所述AP(1-42)球寡聚體表位圍繞所述斑塊形成稠密的邊緣(參見圖13c、f)。對于腦提取物的PBS可溶部份，AJ3(l-42)球寡聚體表位的相對量的定量分析是可能的。在二者中，阿爾茨海默氏病患者(參見圖Ug)以及Tg2576小鼠(參見圖13h)，原來僅僅總A卩的少量是Ap(l-42)球寡聚體表位結(jié)構(gòu)的。A(3(l-42)球寡聚體表位不僅在斑塊中檢測到，而且已經(jīng)在年輕的、2.5個月大的Tg2576小鼠的腦中檢測到，其仍然具有低的總Ap(l-42)濃度。這在起始于11個月年齡的淀粉狀蛋白斑塊以及強烈增加的總A卩(l-42)含量的發(fā)展之前很久(參見圖13i),表明球寡聚體表位形成甚至在相對低的A(3(l-42)濃度下也是頻繁的。令人驚訝地，在患有輕度認(rèn)知損傷的患者的腦脊液中(參見圖13j，灰色條)或在患有阿爾茨海默氏病的患者的腦脊液中(參見圖13j，黑色條)沒有檢測到A卩(l-42)球寡聚體表位。然而，該負(fù)面發(fā)現(xiàn)可歸因于A卩(l-42)球寡聚體表位的濃度在檢測限以下，因為它們迅速且容易地結(jié)合神經(jīng)中樞結(jié)構(gòu)是球寡聚體的明顯特征，因此料想其由此被從所述腦脊液定量清除。所述檢測使用以下材料和方法進行。3.1在死后AD人類腦組織中提取及檢測Ap球寡聚體表位3.I.A.試劑列表-提取-緩沖液5mMNaH2P04;35mMNaCl;pH7.4-完全蛋白酶抑制劑混合體片；RocheDiagnosticsGmbHCat.No.:697498;儲存在4。C下。-提取-緩沖液+完全抑制劑混合體將1片完全抑制劑混合體溶解在1ml水中。將1/100完全抑制劑混合體溶液加至所述提取-緩沖液。3丄B.從人類AD腦中一步提取的步驟-80。C冷凍的死后人類AD腦組織樣品以及老年匹配對照腦組織樣品由Brain-Net，Munich提供。將9ml提取緩沖液及完全抑制刑混合體加至在50mlfalcon管中的1g冷凍腦組織材料中。用UltraTurrax均化器將所述樣品在冰上均化2分鐘并將所述經(jīng)均化的樣品填充在超速離心管中，在8。C下在150,000g離心1小時。小心地收集所迷上清液并在-80。C下儲存在15mlFalcon管中用于進一步ELISA試驗，如下所迷。3.1.C.夾心式ELISA:如3.2.B中所述。3.2在A卩過度產(chǎn)生的A卩轉(zhuǎn)基因小鼠TG2576的腦組織中提取及檢測A|3球寡聚體表位3.2.A.提取步驟(所需試劑如3丄A中所述)從Taconics(USA)購買數(shù)個3個月大的雌性Tg2576小鼠，它們攜帶并過度表達具有家族阿爾茨海默氏病的瑞典雙重突變(K670N;M671L)的人類APP基因，并將它們豢養(yǎng)在我們的動物照顧裝置中直到12個月大。將來自12個月大的APP過度表達的TG2576小鼠(TaconicsInc.)或3個月大的C57野生型小鼠的100mg冷凍皮層用2.5mlPBST+0.5%BSA-緩沖液+完全抑制劑混合體(10mg/0.25ml濕重)漂洗。將樣品在玻璃罐中預(yù)均化并用超聲波細胞粉碎機在O'C下在冰浴中超聲處理5次，每次l-2秒。將樣品的2ml等分試樣在37。C下在超速離心管中過夜孵育16小時并在8。C下在IOO，OOOg離心1小時。小心移去所述上清液并在-20'C下儲存，用于ELISA分析。3.2.B.夾心式ELISA:3.2.B.I.試劑列表F96Cert.MaxisorpNUNC-免疫培養(yǎng)板Cat.No.:439454捕獲抗體抗A|3pAb兔5598親合純化的(純化程序Labj.:1286/155);在PBS中的溶液;濃度0.24mg/ml;在-20。C儲存涂覆緩沖液100mM碳酸氬鈉；pH9.6用于ELISA的阻斷試劑；RocheDiagnosticsGmbHCat.No.:1112589PBST緩沖液20mMNaH2PO4;M0mMNaCl;0.05%吐溫20;pH7.4牛血清白蛋白第五組分，不含蛋白酶；ServaCat.No.:11926.03;在4。C儲存。PBST+0.5o/oBSA緩沖液20mMNaH2PO4;MOmMNaCl;0.05%吐溫20;pH7.4+0.5%BSAA卩(l-42)寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；在5mMNaH2P04中的溶液；35mMNaCl;pH7.4;濃度10.77mg/m；在-20。C儲存抗-A)3小鼠mAb克隆6Bl;在PBS中的溶液；濃度1.2mg/ml;在-8(TC儲存抗-小鼠-POD偶聯(lián)物；Fa.JacksonImmunoResearchCatNo.:715-035-150;顯影TMB;RocheDiagnosticsGmbHCat.No.:92817060;在DMSO中，42mM在水中的3%H202100mM乙酸鈉，pH4.912.終止溶液2M磺酸3.2.B.2.試劑的制備捕獲抗體通過根據(jù)WO2004/067561的實施例25中所描述的步驟將兔子免疫而獲得兔多克隆抗AP(20-42)球寡聚體抗體5598。在Sepharose固定的Ap(l-42)球寡聚體上通過親合色鐠法將5598從該兔抗血清中免疫純化。-八|3(1-42)球寡聚體Sepharose的制備A卩(l-42)球寡聚體的制備將9mgA卩(l-42)Fa.Bachem溶解于1.5mlHFIP(U,l,3,3,3-六氟-2-丙醇)中并在37。C下孵育1,5小時。將所述溶液在SpeedVac中蒸發(fā)并懸浮于396plDMSO(5mMA卩儲備溶液)。將所述樣品在超聲水浴中超聲20秒，振搖10分鐘并在-20。C下儲存過夜。將所述樣品用4554piPBS(20mMNaH2P04;140mMNaCl;pH7.4)稀釋并加入495^2%SDS-水溶液(0,2%SDS含量)。將所述混合物在37。C下孵育7小時，用16335piH20稀釋并在37'C下進一步孵育16小時。此后，將所述AI3(l-42)球寡聚體溶液在3000g離心20分鐘。將最終AI3(卜42)球寡聚體上清液排出，其用于固定。NHS-活化的Sepharose的制備將2.0gNHS-活化的SepharoseFastFlow,AmershamBiosciences,Cat.No.:17-0卯6-01用以下溶液順序洗滌2x25ml在1mMHCl中的異丙醇30%(水冷卻的)；2x25ml1mMHC1(冰冷卻的)；以及最后2x25ml50mMNaHC03pH7.5(水冷卻的)。固定將10mlA卩(l-42)球寡聚體-溶液與2.0gNHS-活化的Sepharose混合并在室溫下孵育2小時。將所述反應(yīng)混合物在4000g離心并將上清液排出。阻斷在加入10ml50mMNaHCO3;250mM乙醇胺；0.05%SDS,pH7.5之后將所述樹脂在室溫下孵育1小時。通過過濾收集所述Sepharose材料并將其用25ml5mMNaH2P04;35mMNaCl;0.05%SDS;pH7.4洗滌4次。交聯(lián)將Sepharose材料用10ml5mMNaH2P04;35mMNaCl;0.05%SDS;pH7.4再懸浮并與1ml40mM戊二醛水溶液(新鮮配制)混合。孵育(2小時，室溫)及離心(10分鐘，4000g)后，排出所述上清液并將所述Sepharose用10ml5mMNaH2P04;35mMNaCl;250mM乙醇胺；0.05%SDS;pH7.4再室溫下處理1小時。將所述混合物在4000g離心10分鐘并排出上清液。重復(fù)所述乙醇胺阻斷反應(yīng)，最后通過過濾收集所述Sepharose材料并將其用25ml5mMNaH2P04;35mMNaCl;0.05%SDS;pH7.4洗滌4次。用4.0ml5mMNaH2PO4;35mMNaCl;0.05%SDS;0.02%NaN3;pH7.4添加最終Ap(l-M)球寡聚體S印harose材料并儲存在4'C冰箱中(0.5gSepharose/ml)用于進一步的親合色語法。-親合色傳法通過過濾收集0.8gA卩(l-42)球寡聚體Sepharose材料并用10mlTBS緩沖液(25mMTris;150mMNaCl;pH7.5)洗滌4次。將兔血清5598用TBS緩沖液稀釋(1:1)。將40ml該樣品加至0.8gA卩(l-42)球寡聚體Sepharose中并在8。C下孵育過夜。然后將AJ3(l-42)球寡聚體-Sepharose填充入柱子并用25mlTBS緩沖液洗涂。洗脫使用在140mMNaCl中的0.58。/。乙酸進行并收集所洗脫的UV-活性級份。立即通過添加2MTris緩沖液，pH8.5將所述經(jīng)洗脫的級份(經(jīng)免疫純化的Pab5598儲備溶液)調(diào)節(jié)至pH7.5并在-8(TC下儲存。-抗體溶液的制備將所述5598PAb儲備溶液解凍并在涂覆緩沖液中進行1:240稀釋。阻斷試劑將阻斷試劑溶解于100ml水中從而制備所述阻斷儲備溶液并將10ml的等分試樣在-2(TC下儲存。將3ml阻斷儲備溶液用27ml水稀釋，用于每一培養(yǎng)板的阻斷。A卩(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品稀釋A-將1(ilAp(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液加至1076piPBST+0.5%BSA=10Mg/mlB-將5pl10pg/mlA)3(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品溶液加至4995^PBST+0.5%BSA=10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)曲線編號儲備液12mlB20.633ml(1)30.633ml(2)40.633ml(3)50.633ml(4)PBST+0.5%BSA0ml1.367ml1.367ml1.367ml1.367ml最終濃度10000pg/ml3160pg/ml1000pg/ml316pg/ml100pg/ml60.633ml(5)70.633ml(6)80ml沖羊品編號儲備液1mlS0,2ml(1)1.367ml1.367ml2ml31.6pg/ml10pg/ml0.0pg/mlPBST+0.5%BSA稀釋因子0ml直接0.8ml初級抗體6B1:小鼠單克隆抗體6B1通過經(jīng)由以AP(l-42)球寡聚體免疫的標(biāo)準(zhǔn)程序獲得。使用標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)⑺隹贵w從雜交瘤中純化。將經(jīng)濃縮的抗-A卩mAb克隆6B1在PBST+0.5%BSA-緩沖液中稀釋。所述稀釋因子為1/6000=0.2pg/ml。立即使用所述抗體。標(biāo)記試齊j:將抗-小鼠-POD偶聯(lián)凍千物在0.5ml水中重構(gòu)。添加500^甘油并將100^的等分試樣在-2(TC下儲存，用于進一步的應(yīng)用。將經(jīng)濃縮的標(biāo)記試劑在PBST援沖液中稀釋。所述稀釋因子為1/5000。立即使用。TMB溶液將20ml100mM乙酸鈉pH4.9與200piTMB溶液及29.5pi3%過氧化氫溶液混合。立即使用。3.2.B.3.樣品培養(yǎng)板設(shè)置(注意，所有的標(biāo)準(zhǔn)品及樣品都一式兩份操作)<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>Ul-U8=未知樣品3.2.B.4.步驟每孔施用100pi抗-ABpAb兔5598溶液并在4'C下賻育過夜。排出所述抗體溶液并用250piPBST緩沖液洗滌所述孔三次。每孔添加300pi阻斷溶液并在室溫下孵育2小時。排出所述阻斷溶液并用250plPBST緩沖液洗滌所述孔三次。在制備標(biāo)準(zhǔn)品及樣品之后，將每孔100pi的標(biāo)準(zhǔn)品及樣品施用至所述培養(yǎng)板。在室溫下孵育2小時且在4。C下過夜。排出所述標(biāo)準(zhǔn)品/樣品溶液并用250piPBST緩沖液洗滌所述孔三次。每孔添加200pl初級抗體溶液并在室溫下孵育1.5小時。排出所迷抗體溶液并用250nlPBST緩沖液洗滌所述孔三次。每孔添加200pl標(biāo)記溶液并在室溫下孵育1小時。排出所述標(biāo)記溶液并用250piPBST緩沖液洗滌所述孔三次。向每孔中添加100plTMB溶液并在室溫下孵育(5-15分鐘)。觀察顏色顯影并每孔施用50^1所迷終止溶液。在450nm處讀數(shù)。從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算結(jié)果。評價如果來自未知樣品的消光不在所述校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，則以合適的樣品稀釋重復(fù)ELISA。從這些數(shù)椐可推斷Ap(l-42)球寡聚體表位在阿爾茨海默氏病的非常早期就存在于體內(nèi)，在所有臨床表現(xiàn)之前。因此，認(rèn)為它們在AD及相關(guān)病癥的早期檢測和風(fēng)險評估中可以是具有價值的。實施例4:球狀A(yù)p(l-42)寡聚體的生成及表征在球狀A(yù)J3(l-42)寡聚體生成的程序(參見圖Ua)中的初始步驟為用HFIP預(yù)處理合成AP(l-42)肽從而消除之前存在的結(jié)構(gòu)不勻性(Stine,W.B.，Jr.,Dahlgren，K.N.,Krafft,G.A.&LaDu,M.J.Invitrocharacterizationofconditionsforamyloid-betapeptideoligomerizationandfibrillogenesis.JBiolChem278,11612-11622(2003))。在再懸浮于DMSO中之后，在0.2%SDS中的孵育首先產(chǎn)生中間體具有16/20kDa(在SDS-PAGE上兩個語帶的表觀質(zhì)量)的寡聚A卩形式。當(dāng)進一步稀釋并孵育時，該中間體自身締合為最終的38/48kDa寡聚Ap形式，發(fā)現(xiàn)其是球狀結(jié)構(gòu)，因此稱之為38/48kDa球狀A(yù)p(l-42)寡聚體或者在以下簡稱為Ap(l-42)球寡聚體(參見圖lib)。從所迷球寡聚體級份分離殘留的原纖化傾向的單體可以通過以下方法實現(xiàn)經(jīng)由親合色鐠法的耗竭，其中使用已結(jié)合固定化蛋白A的對原纖化傾向的Ap(l-42)單體特異的抗體，或者經(jīng)由原纖化傾向的A|3(l-42)單體的直接抗體耗竭(免疫沉淀或免疫吸附)。這些方法更詳細地描述于下。中間體16/20kDa及最終38/48kDaAP(l-42)球寡聚體二者的戊二醛交聯(lián)將SDS-PAGE上的兩個i普帶合并為一個，表明均一的A卩(l-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)。形成所述A(3(l-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)的Ap(l-42)肽相互作用僅僅是非共價的。熱變性使所述Ap(l-42)球寡聚體復(fù)原為單體的Ap(l-42)，而不使交聯(lián)的Ap(I-42)球寡聚體復(fù)原。盡管如此，所述非共價連接的A卩(l-42)球寡聚體在生理溫度(37°C)下顯示長期穩(wěn)定性。所述A卩0-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)在體外保持至多4天而無明顯的解裝配或進一步聚合為原纖維。相反，溶解于0.1%NH4OH的A卩(l-42)肽(Bachem,Switzerland)的標(biāo)準(zhǔn)單體制品(Ap(l-42)NH4OHprep.)在已孵育1天后顯示高度的聚集(參見圖lie)。根據(jù)它們的分子量分布使用Superose12HR10/30柱(AmershamBiosciences,Germany)以及PBS(pH7.4)作為操作緩沖液(running-buffer)來分析A(3-形式。將所述柱用一組標(biāo)準(zhǔn)蛋白校準(zhǔn)。使用H4蛋白芯片(CiphergenBiosystems,USA)以及在50%乙腈/0,5%三氟乙酸中的a-氰基-4-羥基-肉桂酸作為基質(zhì)通過SELDI-MS確定Ap-肽的質(zhì)量。所述Ap(l-42)球寡聚體在自然條件(PBS,pH7.4)下的空間排阻層析顯示在~100kDa處的單峰，盡管是寬峰(參見圖Ud)。類似于SDS-PAGE，所迷交聯(lián)的Ap(l-42)球寡聚體顯示在60kDa處具有窄峰的降低的表觀分子量，這表明AP(l-42)球寡聚體僅以單個的球狀形式存在，當(dāng)其戊二醛交聯(lián)時則凝結(jié)。相反，所述A卩(1-42)NH4OH制品是高度不穩(wěn)定的且具原纖化傾向。在再懸浮已大約5分鐘之后，可檢測出顯著的聚集(11kDa主鋒，74kDa次峰)，并且，在孵育1小時后，顯著的原纖維聚集阻止Aj3進入層析柱(數(shù)據(jù)未顯示)。用混雜的蛋白酶進行蛋白酶解將所述Ap(l-42)球寡聚體從N-末端向前直至~氨基酸20截斷，保持所述C-末端部分及所述球狀結(jié)構(gòu)完整(參見圖lie)。嗜熱菌蛋白酶裂解產(chǎn)物的SELDI-MS分析顯示A(3(l-42)球寡聚體的交聯(lián)導(dǎo)致所述Ap(4-42)裂解產(chǎn)物喪失，而保留A(3(20-42)(參見圖llf)。因此，交聯(lián)僅僅影響所述N-末端和Lys-16而不影響Lys-28，因此其一定被藏在所述Ap(l-42)球寡聚體的內(nèi)部。在下文中，描述了用于清理殘留的原纖化傾向的單體的Ap(l-42)球寡聚體溶液的合適方法。除了所列出的那些之外，所有這些還需要以下試劑-蛋白ASepharose4速流(ProteinASepharose4FastFlow)AmershamBiosciencesCat,No.:17-0974-01-PBS緩沖液20mMNaH2P04;140mMNaCl;0.05%PluronicF68;pH7.44丄通過經(jīng)由蛋白A結(jié)合的原纖化傾向的Ap(l-42)特異的抗體親合色語法耗竭Ap(l-42)原纖化傾向的單體在Ap(l-42)球寡聚體制品中的污染而純化Ap(l-42)球寡聚體4丄A.試劑列表-捕獲抗體抗-Ap(l-42)兔pAb;在含有50%甘油的PBS中的生物素化的IgG溶液；濃度0.5mg/ml;SignetCat,No.9135;在-80。C下儲存-A卩(l-42)寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品儲備液;在5mMNaH2P04;35mMNaCl;pH7.4中的溶液；濃度10.77mg/ml;在-20。C下儲存4丄B.試劑的制備1.捕荻抗體稀釋將濃縮的抗-AJ3(l-42)pAb在PBS中稀釋1:5至0.1mg/ml。2.在蛋白ASepharose上固定捕獲抗體用200plPBS-緩沖液平衡20pl蛋白ASepharose,接著在3000g離心5分鐘并排出上清液。重復(fù)操作4次。將100pi在PBS中經(jīng)稀釋1:5的抗-A卩(卜42)pAb加至蛋白ASepharose小J求并在室溫下振搖1小時。在3000g離心5分鐘。排出上清液并用200piPBS洗滌蛋白ASepharose三次，每次都接著在3000g離心5分鐘。排出上清液。3.AM2寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將50MlAp(l-42)寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品儲備液加至450piPBS=1.08mg/ml。4丄C.步驟將500iulA卩(-42)寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加至20pl蛋白ASepharose固定的抗-A(3(l-42)pAb樹脂。在室溫下振搖樣品2小時并進一步在4'C下16小時，接著在3000g離心5分鐘。將所述AP原纖化傾向的污染物(原纖寡聚體)與親合基質(zhì)反應(yīng)，并且所述上清液以球寡聚體表位純度>>95%含有經(jīng)純化的Ap球寡聚體。該樣品的純度通過重復(fù)該步驟兩次而進一步改善，其得到在上述上清液中的球寡聚體表位純度〉99%。4.2.通過經(jīng)由原纖化傾向的A卩(l-42)的直接耗竭而將A卩(l-42)原纖化傾向的單體在Ap(1-42)粗制制品中的污染耗竭從而純化Ap(1-42)球寡聚體4.2.A.試劑列表-F96Cert.MaxisorpNUNC-免疫培養(yǎng)板Cat.No.:439454-捕獲抗體抗-A卩(l-42)兔pAb;在含有50%甘油的PBS中的生物素化的IgG溶液；濃度0.5mg/ml;SignetCat.No.9135;在-80。C下儲存-涂覆緩沖液100mM碳酸氫鈉；pH9.6-用于Elisa的阻斷試劑;RocheDiagnosticsGmbHCat.No.:1112589-PBST緩沖液20mMNaH2PO4;140mMNaCl;0.05%吐溫20;pH7.4-A卩(l-42)寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；在5mMNaH2P04中的溶液；35mMNaCl;pH7.4;濃度10.77mg/ml;在-20'C下儲存4.2.B.試劑的制備1.捕獲抗體將濃縮抗-Ap(l-42)pAb在涂覆緩沖液中稀釋1:100。2.阻斷試劑將阻斷試劑溶解于100ml水中從而制備阻斷儲備溶液并在2(TC下儲存10ml的等分試樣。用27ml水稀釋3ml阻斷儲備溶液，用于每個培養(yǎng)板的阻斷。3.A(3(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將1plAp(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液加至1076piPBST=10ng/mlAp(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品溶液。4.2.C.步驟每孔施用100pl抗-AB(l-42)mAb克隆Signet9135溶液并在4'C下孵育過夜。排出所述抗體溶液并用250nlPBST緩沖液洗滌所述孔三次。每孔添加300pl阻斷溶液并在室溫下賻育2小時。排出所述阻斷溶液并用250plPBST緩沖液洗滌所述孔三次。在標(biāo)準(zhǔn)品制備之后，將100plAB(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品溶液施用至所述培養(yǎng)板的每孔。在室溫下脬育2小時并在4。C下過夜。收集所述A(3(l-42)球寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品溶液于15mlFalcon管中，其現(xiàn)在具有>95%的純度。在微孔板中重復(fù)以上免疫親合步驟兩次可進一步改善所述球狀表位的純度。在該步驟之后，所述A(3(l-42)球寡聚體溶液純度〉〉99%，相對于Ap原纖化傾向型結(jié)構(gòu)(單體及原纖寡聚體)而言。4.3.通過經(jīng)由蛋白A結(jié)合的原纖化傾向的Ap(l-42)特異的抗體親合色譜法耗竭A卩原纖化傾向的單體在AP(1-42)ADDL制品中的污染而富集A卩球寡聚體表位4.3.A.試劑列表-捕獲抗體抗-AB(l-42)兔pAb;在含有50%甘油的PBS中的生物素化的IgG溶液；濃度0.5mg/ml;SignetCat.No.9135;在-80。C下儲存-AB(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；在F12-介質(zhì)中的溶液；濃度0.12mg/ml;在-8(TC下儲存4.3.B.試劑制備1.蛋白A-Sepharose的平衡在柱中用200plPBS緩沖液平衡20pl蛋白ASepharose,接著用200Ml0.58%乙酸平衡并進一步用200^PBS緩沖液洗涂。將該經(jīng)平衡的蛋白A-S印harose放置在管中并向所述基質(zhì)加入同樣體積的PBS-緩沖液。2.AB(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將42plA卩(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液加至58plPBS-0.05mg/ml。4.3.C.步驟將20ul抗-AB(l-42)兔pAb;生物素化的IgG溶液加至100plAB(I-42)ADDL溶液。在室溫下振搖樣品2小時。將10ul經(jīng)平衡的蛋白ASepharose在PBS緩沖液中的混懸液加至所述樣品并在室溫振搖1小時，接著在3000g離心5分鐘。所述AP原纖化傾向的污染物(原纖寡聚體)與所迷親合基質(zhì)反應(yīng)，并且所述上清液顯示球寡聚體表位純度>>55%。通過重復(fù)該步驟兩次而將該樣品的純度進一步改善，其得到在所述上清液中球寡聚體表位純度〉95%。4.4.通過經(jīng)由蛋白A結(jié)合的原纖化傾向的A(3(l-42)特異的抗體親合色語法耗竭原纖化傾向的A卩在Ap(l-42)ADDL制品中的污染而富集AP球寡聚體表位4.4.A.試劑列表-捕獲抗體抗-A卩(l-42)mAbC-末端克隆BDI780;經(jīng)純化的，凍干的；BiodesignCat.No.Q67780M;在-20。C下儲存-A)3(l-42)-ADDL的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；在F12-介質(zhì)中的溶液；濃度0.12mg/ml;在-8(TC下存儲4.4.B.試劑制備1.蛋白A-Sepharose的平衡在柱中用200piPBS緩沖液平衡20pl蛋白ASepharose，接著用200pi0.58%乙酸平衡并進一步用200MlPBS緩沖液洗滌。將該經(jīng)平衡的蛋白A-Sepharose放置在管中并向所述基質(zhì)加入同樣體積的PBS-緩沖液。2.捕獲抗體重構(gòu)用1ml水重構(gòu)100pg抗體至0.1mg/ml。3.A卩(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將42plA卩(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液加至58piPBS=0.05mg/m。4.4.C.步驟將100pi抗-A卩(l-42)兔pAb;生物素化的IgG溶液加至100piA卩(1-42)ADDL溶液。在室溫下振搖樣品2小時。將10pi經(jīng)平衡的蛋白ASepharose在PBS緩沖液中的混懸液加至所述樣品并在室溫振搖1小時，接著在3000g離心5分鐘。所述Ap原纖化傾向的污染物(原纖寡聚體)與所迷親合基質(zhì)反應(yīng)，并且所述上清液顯示球寡聚體表位純度〉〉50%。通過重復(fù)該步驟兩次而將該樣品的純度進一步改善，其得到在所迷上清液中球寡聚體表位純度〉90%。4.5.通過經(jīng)由蛋白A結(jié)合的原纖化傾向的AJ3(l-42)特異的抗體親合色譜法耗竭A卩fibrilomers在Ap(l-42)NH4OH制品中的污染而富集A卩球寡聚體表位4.5.A.試劑列表-捕獲抗體抗-A卩(l-42)兔pAb;在含有50%甘油的PBS中的生物素化的IgG溶液；濃度0.5mg/ml;SignetCatNo.9135;在-80。C下儲存-A卩(1-42)NH40H標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；在0.1%NH4OH中的溶液；濃度2mg/ml;在-80'C下儲存4.5.B.試劑制備1.蛋白A-Sepharose的平衡在柱中用200plPBS緩沖液平衡20pl蛋白ASepharose，接著用200pl0.58%乙酸平衡并進一步用200plPBS緩沖液洗滌。將該經(jīng)平衡的蛋白A-Sepharose放置在管中并向所述基質(zhì)加入同樣體積的PBS-緩沖液。2.A卩(l-42)NH4OH標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將2.5plA卩(l-42)ADDL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液加至97.5plPBS-0.05mg/ml。4.5.C.步驟如4.3.C.下所述實施例5:從肽A(3(20-42)開始生成Ap(20-42)球寡聚體a)制備儲備球寡聚體溶液在Eppendorff管中將0.5mgp-淀粉狀蛋白(20-42)蛋白(凍干的，AnaspecInc.,Nr.:408/452-5055/33908)溶解于25pl1，1,1,3，3，3-六氟-2-丙醇中并在37。C下孵育1小時，接著在IO，OOOg離心IO分鐘。將所述上清液移出得到20mg/ml(9mM)A卩(20-42)儲備溶液，其可在-80。C下儲存。b)制備最終穩(wěn)定的Ap(20-42)球寡聚體將實施例5a)的4plAp(20-42)儲備溶液與196pl2mM磷酸鈉，14mMNaCl，pH7.4及20pl1%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液混合，接著在6。C下孵育20小時，最后在IO，OOOg離心IO分鐘。收集所述上清液為大約180nMAP(20-42)球寡聚體制品并可將其在-20。C下儲存。通過接著的SDS-PAGE分析所述樣品(圖9)，并且所述產(chǎn)物顯露在32kDa處?？赏ㄟ^實施例4中所描述的純化方式而實現(xiàn)進一步純化。實施例6:從肽Ap(12-42)開始生成Ap(12-42)球寡聚體a)制備儲備球寡聚體溶液以0.5mg卩-淀粉狀蛋白(10-42)蛋白(凍干的，AnaspecInc.,Nr.:408/452-5055/33907A)開始，所述步驟如實施例5a)所述，得到20mg/ml(6.2mM)Ap(12-42)儲備溶液，其可在-80'C下儲存。b)制備最終穩(wěn)定的Ap(12-42)球寡聚體如實施例5b)所迷處理4pi實施例6a)的Ap(12-42)儲備溶液從而得到大約120^MAp(12-42)球寡聚體制品，然后可將其在-2(TC下儲存。通過接著的SDS-PAGE分析所述樣品(圖10),并且所述產(chǎn)物以幾乎定量的產(chǎn)率顯露在大約12kDa處。可通過以實施例4所描述的方法進一步純化而得到超純的Ap(12-42)球寡聚體。實施例7:通過血漿或CSF的斑點印跡檢測人類體液中的抗-球寡聚體自體抗體血漿或血清樣品的處理a)自體抗體的游離部份的滴度從血清或血漿直接測量。b)總自體抗體的滴度通過按以下方法預(yù)處理血漿/血清樣品而測量將100pl血漿/血清與10ml140mMNaCl+0.58。/o乙酸混合，并孵育20分鐘，接著以CentriprepYM30(AmiconInc.)濃縮至1ml。然后將所述血漿/血清樣品用于抗-AP自體抗體評價。為此，進行在補充有0.2mg/mlBSA的PBS中的從100pmol/pl到0.0〗pmol/pl范圍的各個A(3(l-42)形式的系列稀釋。將每個樣品的1^U點至硝酸纖維膜上。為了檢測，使用相應(yīng)的小鼠血漿樣品(經(jīng)1:400稀釋的)。使用堿性磷酸酯酶偶聯(lián)的抗-小鼠-IgG以及染色劑NBT/BCIP進行免疫染色。用千斑點印跡的A0-標(biāo)準(zhǔn)品1.AI3(l-42)球寡聚體所述AP(l-42)寡聚體(在下面稱為Ap(l-42)球寡聚體)的制備描述于WO2004/067561中。2.A卩(l-42)單體在1.7mlEppendorff管中將3mg人類A卩(l-42)，(BachemInc.;Cat.No.H-1368)溶解于0.5mlHFIP(6mg/ml混懸液)中并在37。C下振搖(EppendorffThermo混合器，1400rpm)1.5小時直到得到透明溶液。將所迷樣品在SpeedVac濃縮器中干燥(1.5h)并再懸浮在13.2^DMSO中，振搖10秒，接著超聲處理(20秒)，并振搖(例如，在EppendorffThermo混合器中，1400rpm)10分鐘。加入6ml20mMNaH2P04;MOmMNaCl;0.1%PluronicF68，pH7.4并在室溫下攪拌1小時。將所述樣品在3000g離心20分鐘。排出所述上清液并將所述沉淀溶解于0.6ml20mMNaH2P04;140mMNaCl;1%PluronicF68,pH7.4中。加入3.4mlH20并在室溫下攪拌1小時，接著在3000g離心20分鐘。將每個0.5ml上清液的八個等分試樣在-20°下儲存，用于進一步的應(yīng)用。3.Ap(12-42)球寡聚體所述Ap(12-42)寡聚體(在下面稱為AJ3(12-42)球寡聚體)的制備描述于WO200傷7561中。4.A卩(12-42)單體制備在0.1%NaOH中的5mg/ml溶液(AnaspecInc.)并在-20。C下儲存。5.Ap(17-42)球寡聚體截短型Ap(17-42)球寡聚體的制備，從AP(l-42)寡聚體開始，通過使用胰蛋白酶裂解將0.1mlAp(l-42)球寡聚體(濃度12.5mg/ml，所述A(3(l-42)-球寡聚體的制備描述于WO2004/067561中)，與2,4ml緩沖液(20mMNaH2P〇4,140mMNaClpH7.4)及125pl在20mMNaH2P04，140mMNaClpH7,4中的0.2mg/ml胰蛋白酶溶液(RocheInc.)混合。將所述反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時。然后加入25pl100mM二異丙基氟磷酸水溶液并將所述混合物進一步用80piP/。強度SDS溶液調(diào)節(jié)至SDS含量0.03%。經(jīng)由10kDaCentriprep管將所述反應(yīng)混合物濃縮至大約0.25ml。將所述濃縮物與0.625ml緩沖液(20mMNaH2PO4，140mMNaCl，pH7.4)混合并再次濃縮至0.25ml。6.A卩(17-42)單體制備在0.1%NaOH中的5mg/ml溶液(AnaspecInc.)并在-20。C下儲存。7.Ap(20-42)球寡聚體所述Ap(20-42)寡聚體(在下面稱為A(3(20-42)球寡聚體)的制備描述于WO2004/067561中。8.Ap(20-42)單體制備在0.1%NaOH中的5mg/ml溶液(AnaspecInc.)并在-20。C下儲存。9.A卩(l-40)單體在Eppendorff管中將lmg人類Ap(l-40)，(BachemInc，Cat.No.H-1194)懸浮在0.25mlHFIP中(4mg/ml混懸液)。將所述管在37。C下振搖(例如，在EppendorffThermo混合器中，1400rpm)1.5小時從而得到透明溶液，然后在speedvac濃縮器中干燥(1.5h)。將所述樣品溶解在46^1DMSO(21.7mg/ml溶液=5mM)中，振搖IO秒，接著超聲處理20秒。10分鐘振搖(例如，在EppendorffThermo混合器中，1400rpm)之后，將所述樣品在-20'C下儲存，用于進一步的應(yīng)用。10.A卩(l-42)原纖維將lmg人類A卩(l畫42)(Bachemlnc.產(chǎn)品目錄Nr.:H-1368)溶解于500W0.1%含水NH40H(Eppendorff管)中并將所述樣品在室溫下攪拌1分鐘。將100^1該新鮮制備的A卩(l-42)溶液用300pl20mMNaH2P04;140mMNaCl,pH7.4中和。將pH用1%HC1調(diào)節(jié)至pH7.4。將所述樣品在37匸下孵育24小時并離心(在10'000g下10分鐘)。排出所述上清液并通過渦流1分鐘而將所述原纖維小球用400nl20mMNaH2P04;140mMNaCl,pH7.4再懸浮。斑點印跡材料Aj3-標(biāo)準(zhǔn)品A卩-抗原在20mMNaH2P04,140mMNaCl，pH7,4+0.2mg/mlBSA中的系列稀釋100pmol小l10pmol/|iil1pmol/jal0.1pmol/pl0.01pmol/|il硝酸纖維Trans-BlotTransfer介質(zhì),純硝酸纖維膜(0.45pm);Fa.BIO-RAD抗-小鼠-AP:AQ330(Fa.Chemicon)沖企測i式劑NBT/BCIP片(Roche)牛血清白蛋白，(BSA):A-7888(SIGMA)阻斷試劑在TBS中的5%低脂牛奶緩沖溶液TBS25mMTris/HC1-緩沖液pH7.5+150mMNaClTTBS25mMTris/HCl-緩沖液pH7.5+150mMNaCl+0.05%吐溫20PBS+0.2mg/mlBSA20mMNaH2P04緩沖液pH7.4+140mMNaCl+0.2mg/mlBSA抗體溶液I:來自以Ap(20-42)球寡聚體主動免疫研究的小鼠血漿樣品(l:400稀釋于20ml在TBS中的1%低脂牛奶中)4元體溶液II:1:5000稀釋在丁BS中的1。/o低脂牛奶中的抗-小鼠-AP斑點印跡歩驟將每種不同的AP-標(biāo)準(zhǔn)品(以它們的5倍系列稀釋液)的1pl點在所述硝酸纖維膜上，彼此間隔大約1cm的距離。允許所述Ap-標(biāo)準(zhǔn)品斑點在室溫(RT)下在空氣中在所述硝酸纖維膜上千燥至少10分鐘(=斑點印跡)阻斷將所述斑點印跡在室溫下用30ml在TBS中的5。/。低脂牛奶孵育1.5小時。洗滌排出所迷阻斷溶液并將所迷斑點印跡在振搖下用20mlTTBS在室溫下孵育IO分鐘。抗體溶液I:排出所述洗滌緩沖液并將所述斑點印跡用抗體溶液I在室溫下孵育過夜。洗滌排出所述抗體溶液I并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTTBS在室溫下孵育IO分鐘。排出所述洗涂溶液并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTTBS在室溫下孵育10分鐘。排出所述洗滌溶液并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTBS在室溫下孵育IO分鐘?？贵w溶液II:排出所述洗滌援沖液并將所述斑點印跡用抗體溶液II在室溫下孵育1小時。洗滌排出所述抗體溶液II并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTTBS在室溫下賻育10分鐘。排出所述洗滌溶液并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTTBS在室溫下孵育IO分鐘。排出所述洗滌溶液并將所述斑點印跡在振搖下用20mlTBS在室溫下孵育10分鐘。顯影排出所述洗滌溶液。將1片NBT/BCIP溶解于20mlH20中并將所述斑點印跡用該溶液孵育5分鐘。通過用H20密集洗滌而使所述顯影停止。光密度計分析使用所述強度的光密度分析(BioRad光密度計及軟件包Quantityone(BioRad))進行定量評價；對于圖24中的評價，將所述100pMo1折射密度值作為讀數(shù)。結(jié)果示于圖24a及b中。結(jié)論是人類阿爾茨海默病患者的血漿含有自體抗體，其對Ap(12-42)球寡聚體及Ap(20-42)球寡聚體具反應(yīng)性，以及人類阿爾茨海默病患者的腦脊液含有自體抗體，其對Ap(12-42)球寡聚體及AI3(20-42)球寡聚體具反應(yīng)性。這些結(jié)果證明通過評價抗球寡聚體抗體的存在而在體液中檢測球寡聚體的存在的可行性，所迷球寡聚體自身是難于檢測的，因為它們對其目標(biāo)具高度親合性。它們進一步確證球寡聚體作為病理-生理實體的情形。實施例8:主動免疫說明在Thyl啟動子控制下的攜帶及過度表達具有倫敦突變的人類APP的APP轉(zhuǎn)基因小鼠(APP/Lo;Moechars等人.，1999)的主動免疫在新的目標(biāo)識別任務(wù)中逆轉(zhuǎn)記憶缺失。發(fā)明人在以Ap(l-42)球寡聚體或A卩(20-42)球寡聚體免疫的APP/Lo小鼠中發(fā)現(xiàn)與它們在3小時之前遇到的已知目標(biāo)相比對于新目標(biāo)的調(diào)查指標(biāo)(investigationindex)增力口，而在以Ap(l-42)單體免疫的小鼠中沒發(fā)現(xiàn)。測量為首次相遇期間對目標(biāo)調(diào)查的時間的所述小鼠的好奇心在各組之間沒有變化。因此，以A卩(l-42)球寡聚體及Ap(20-42)球寡聚體的主動免疫選擇性地改善對于目標(biāo)的短期記憶。方法-APP轉(zhuǎn)基因小鼠的主動免疫將APP[V717I]C57B1xFVB雌性小鼠(n=36;6周大)用于該研究(Moechars等人.，1999)。所有的小鼠都安置且詞養(yǎng)在CatholicUniversityLeuven,CampusGasthuisberg的畜舍裝置中，遵循比利時關(guān)于安放、飼養(yǎng)及處理實驗動物的道德法。在3周大時，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)確定它們的基因型，并在研究開始時通過第二PCR進行雙重核對。對于處理，所有的小鼠都是盲法隨機化的、年齡-匹配的以及隨機分配的。在該研究開始前一天試驗組將動物們重新關(guān)進籠內(nèi)從而使得它們熟悉新的籠子環(huán)境。它們可自由取食經(jīng)預(yù)先過濾的且無菌的(紫外燈)水以及標(biāo)準(zhǔn)小鼠食物(Muracon-G,TrouwNutrition,Gent)。所述食物在干燥及涼爽的條件下儲存在通風(fēng)良好的貯存室中。每天檢查水及食物的量，必要時補給，以及標(biāo)準(zhǔn)每周更新兩次。將小鼠安置在顛倒的晝夜節(jié)奏下14小時照明/10小時黑暗，照明起始于7p.m.，在配備有實心地板以及籠底墊草的RVST2型標(biāo)準(zhǔn)金屬籠(面積540cm2)中。將小鼠用以下溶液的一種進行腹腔注射處理(每次注射200nL;每組n=7-9):磷酸鹽-緩沖鹽水(PBS;pH7.4);在0.25%NH4OH中的100pgAp(l-42)(Bachem,H1368),100ngA卩(l-42)球寡聚體，或30pgA卩(l-42)球寡聚體。首次注射含有50%(v/v)完全Freund，s佐劑(DifcoLaboratories,Detroit,Michigan,USA，refn0263810),而力口雖注射含有50%(v/v)不完全Freund，s佐劑(DifcoLaboratories,Detroit,Michigan,USA,refn°263910)。在3個月期間，每3周進行化合物的給藥(在第0/3/6/9/12周)。-在經(jīng)免疫的小鼠中的新目標(biāo)識別任務(wù)在最后的注射之后，所有小鼠經(jīng)歷新的目標(biāo)識別任務(wù)。所使用的流程遵循DewachterI.等人.，JournalofNeuroscience,2002,22(9):3445-3453所描述的方法。使小鼠對具有黑色豎墻及透明地板且由放置在所述箱下面的燈微暗照明的Plexiglas開場箱(52x52x40cm)熟悉一個小時。第二天將所述動物放置于相同的箱子中并接受10分鐘獲取試驗。在該試驗期間，將小鼠各個放置在存在目標(biāo)A(藍色球或紅色立方體，大小相似土4cm)的開放場中，由計算機化系統(tǒng)(Ethovision，NoldusinformationTechnology,Wageningen，荷蘭)i己錄i周查目沖示A的持纟賣時間(timeAA)及頻率(FreqAA)(當(dāng)所述動物鼻口部在<1cm的距離處朝向所述目標(biāo)以及所述小鼠主動嗅向所述目標(biāo)的方向時)。在3小時后進行的10分鐘記憶力試驗(第二試驗)期間，將新的目標(biāo)(目標(biāo)B,紅色立方體或藍色球)與熟悉的目標(biāo)(目標(biāo)A)—起放置入所述開放場。(FreqA和Freqb以及TimeA和Times,分另U地)。所述識別指標(biāo)(RI),定義為調(diào)查新目標(biāo)的持續(xù)時間占調(diào)查兩個目標(biāo)的持續(xù)時間的比例[TimeB/(TimeA+TimeB)x100],將其用于測量非空間記憶。在被用于測量好奇心的所述荻取試驗期間調(diào)查目標(biāo)A的持續(xù)時間及頻率(TimeAA及FreqAA)。-結(jié)果在所述主動免疫過程期間，在經(jīng)不同處理的小鼠組之間的體重增加是相同的，表明所述免疫過程沒有副作用。在所述目標(biāo)的首次相遇期間，所有組顯示相同的好奇心，即，在TimeAA及FreqAA上沒有統(tǒng)計上顯著的差異。在第二次相遇期間，用AP(l-42)球寡聚體及Ap(20-42)球寡聚體免疫的小鼠調(diào)查所述未知目標(biāo)的時間明顯增長，即，111超過50%(-因為無記憶造成的機會水平；P<0.01;斯氏t-檢驗)，而用Ap(l-42)單體或介質(zhì)免疫的小鼠則沒有。而且，用A卩(l-42)球寡聚體及Ap(20-42)球寡聚體免疫的小鼠的RI顯著高于用Ap(l-42)單體或介質(zhì)免疫的小鼠的RI(P<O.01;ANOVA,其后接著post-hocHolm-Sidakt-檢驗)。實施例9:凈皮動免疫說明在Thyl啟動子控制下的攜帶及過度表達具有倫敦突變的人類APP的APP轉(zhuǎn)基因小鼠(APP/Lo;Moechars等人.，1999)的被動免疫在新的目標(biāo)識別任務(wù)中逆轉(zhuǎn)記憶缺失。在用小鼠單克隆抗體6G1及8F5免疫的APP/Lo小鼠中，與PBS-處理的小鼠相比，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)與它們在3小時之前首次遇到的已知目標(biāo)相比對于新目標(biāo)的調(diào)查指標(biāo)增加。測量為首次相遇期間對目標(biāo)調(diào)查的時間的所述小鼠的好奇心在各組之間沒有變化。因此，以小鼠單克隆抗體6G1及8F5的被動免疫選擇性地改善對于目標(biāo)的短期記憶。方法小鼠及居住條件與實施例8中所使用的流程相同。將小鼠用針對A卩球寡聚體的在250nL磷酸鹽-緩沖鹽水(PBS)中的250pg單克隆抗體6B1及8F5或單獨用PBS進行腹腔注射(對于所有組n=8),每周一次，持續(xù)兩周(總共2次注射)。在最后注射的一天之后，進行如實施例8所述的目標(biāo)識別任務(wù)。結(jié)果在所迷目標(biāo)的首次相遇期間，所有組顯示相同的好奇心，即，在Fr叫AA上沒有統(tǒng)計上顯著的差異。在第二次相遇期間，用小鼠單克隆抗體6G1及8F5免疫的小鼠調(diào)查所述未知目標(biāo)的時間明顯增長，即，RI超過50%(-因為無記憶造成的機會水平；PO.05;斯氏t-檢驗)，而僅用PBS注射的小鼠則沒有。實施例10:脂肪酸對AB(l-42)球塞聚體形成的誘導(dǎo)檢測各種脂肪酸是否能夠替換SDS作為體外A卩(l-42)球寡聚體形成的誘導(dǎo)劑。結(jié)果示于圖14。如可見的，月桂酸、油酸、及花生四烯酸還誘導(dǎo)特征38/48kDaAJ3(l-42)球寡聚體，而二十碳五烯酸產(chǎn)生部分改變的寡聚體，以及亞油酸、二十二碳六烯酸及二十二碳四烯酸不能在所述檢測限之內(nèi)產(chǎn)生特征38/48kDaAp雙重語帶。這些數(shù)據(jù)表示體內(nèi)的球寡聚體形成不僅通過至今未表征的導(dǎo)致APP錯誤裂解且因此過度產(chǎn)生AP的因素促進，而且通過脂質(zhì)的直接催化作用促進，所述脂質(zhì)的直接催化作用可能是通過提供陰離子表面，以膠束或囊泡的形式，其在AP中誘導(dǎo)構(gòu)象變化和/或用作球寡聚體形成可發(fā)生處的支架。這具有特殊的興趣，因為其可顯示球寡聚體在某些脂質(zhì)代謝失調(diào)的癡呆型效果以及影響腦脂質(zhì)代謝的藥物或組合物對AD及相關(guān)病況的可能有益的效果中的作用。實施例11:A0O-42)球寡聚體的體內(nèi)結(jié)合進行大鼠顱內(nèi)注射從而檢測AP(142)球寡聚體體內(nèi)給藥的可行性。對于電生理學(xué)及組織學(xué)研究，雄性Sprague-Dawley大鼠得自Janvier(法國)，年齡大約8周。所有動物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)條件下(12小時白天/黑夜周期，22°C，50%濕度)，自由取食食物和飲用水，并且在其到達我們的動物群體之后允許恢復(fù)至少一周。根據(jù)Paxinos及Watson36，將所述大鼠(260-430g)用戊巴比妥麻醉(60mg/kgi.p.;Narcoren)并固定在立體定位器中。對于腦室內(nèi)施用，將0.8nmolAp(l-42)球寡聚體立體定位微量注射入18只大鼠的右腦室，使用以下坐標(biāo)(相對于前囟，以mm):尾部的1.0，側(cè)面的1.5以及腹部的3.9。在5分鐘期間通過連接至計量化微型泵(WPI,德國)的10Hamilton注射器注入4.3pL的總體積，且所述插管在原地保留另外2分鐘。對于皮層內(nèi)注射，8只大鼠接受Ap(l-42)球寡聚體(在1中的0.15nmol)的立體定位微量注射，使用以下坐標(biāo)(相對于前囟，以mm):尾部的2.0，側(cè)面的2.0以及腹部的2.0。在5分鐘期間所述輸注經(jīng)由10nLHamilton注射器實施，且所述插管在原地保留另外5分鐘。讓動物們恢復(fù)并在1、4及7天后處死從而通過免疫組織化學(xué)及生物化學(xué)的斑點印跡分析研究所述Ap(l-42)球寡聚體從所述腦室/注射部位向周圍組織的滲透。因此，將大鼠用Narcoren深度麻醉。為了分析A卩(l-42)globulmers是否從腦脊液(CSF)清除，在一些大鼠中，在暴露寰枕膜(atlanto-occipitalmembrane)及對枕大池(cisternamagna)穿刺之后用lml注射器及0.3mm插管抽出幾nLCSF。然后，將所述大鼠用10mMPBS(pH7.2)進行心臟灌注5分鐘，接著用在PBS中的4%多聚曱醛(PFA)進行心臟灌注。將所述腦移開，在含有30%蔗糖的PBS中的4%PFA中后固定過夜并轉(zhuǎn)移到在PBS中的30%蔗糖中，用于冷凍保存。對于A卩(l-42)球寡聚體的染色，在冷凍切片機上切割40pm的切片并將其自由漂浮在TBST中的5%驢血清(Serotec)中孵育20分鐘。然后，將所述切片轉(zhuǎn)移入所述單克隆初級抗體8F5在TBST中的1:1000稀釋液中持續(xù)24小時，所述單克隆初級抗體8F5對于Ap(l-42)球寡聚體是特異的。將Cy3-標(biāo)記的驢抗-小鼠抗體(JacksonLaboratories)用于熒光標(biāo)記，持續(xù)1小時。在各個步驟之間以及在最后，將切片在TBST中充分洗滌三次，持續(xù)5分鐘，此后，將它們安放到栽玻片上，空氣千燥并用含有DAPI的Vectashieldhardest封片劑(VectorLaboratories)封片從而顯現(xiàn)細胞核。所有的孵育過程都在室溫下進行。在嵌入Vectashield之前，還將一些切片用在50%乙醇中的0.05%硫黃素S(Sigma，德國)染色10分鐘，接著以00%乙醇漂洗兩次，持續(xù)5分鐘。標(biāo)記分析在共焦熒光顯微鏡(ZeissLSM510Meta，德國)下進行。注射入第三腦室導(dǎo)致所述Ap球寡聚體迅速且持久地結(jié)合所述腦室壁細胞(參見圖16(II)a),同時它們徹底從腦脊液消失(CSF;數(shù)據(jù)未示出)。所注射的A(3(l-42)球寡聚體沒有被腦脊液中的其它蛋白質(zhì)掩蔽，因為在體外以不同濃度施用入大鼠CSF導(dǎo)致劑量-依賴的回收率。所結(jié)合的A卩球寡聚體停留在腦室管膜(ependyme)中，而未檢出對下面的腦組織的擴散并且無明顯的細胞毒性，因為沿著所迷腦室壁的細胞密度無變化。通過腦內(nèi)注射還顯示差的組織滲透性，其中Ap球寡聚體染色限制在接近所述注射部位處并持續(xù)幾天不降低(參見圖16(II)b-c)。生化分析確定所注射的A(3(l-42)球寡聚體大多數(shù)仍存在于海馬中，持續(xù)至少7天(數(shù)據(jù)未示出)。相反，所注射的AJ3(l-42)單體染色較大的面積并且在7天之后標(biāo)記降低(參見圖16(II)c)，這表明比A|3(l-42)球寡聚體好的組織滲透性。實施例12:ABn-42)球篡聚體對海馬神經(jīng)元的特異結(jié)合球寡聚體的生理相關(guān)性?！?,在37°C,5%C02下，在含有B27添加物(Invitrogen,德國)的Neurobasal介質(zhì)中將來自大鼠腦的海馬細胞(QBMCellScience,Canada)在聚-L-賴氨酸涂覆的蓋玻片(BDBiosciences,德國)上的24-孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)。在DIV6時向一些培養(yǎng)物中加入有絲分裂抑制刑(35Hg/ml尿苷，15pg/ml5-氟-2，-脫氧尿苷)從而阻止長滿神經(jīng)膠質(zhì)。除非另有說明，在DIV13-14時使用海馬細胞。當(dāng)加入A卩-形式時，將750pL含有所述AI3-形式的新鮮的37'C溫?zé)峤橘|(zhì)與總體積lml交換。在37。C、5%C02下進行孵育15分鐘。A卩-單體(0.5mg/ml)儲備溶液在HFIP中以及A卩(l-42)球寡聚體在35mMNaCl，5mMNaH2P04，pH7.4中。用1ml介質(zhì)漂洗細胞三次并用3.7%緩沖曱酪固定(Accustain,Sigma,Germany)。非特異結(jié)合位點通過在室溫下用10%在PBS中的正常山羊血清(pH7.4)孵育90分鐘來阻斷，在細胞內(nèi)復(fù)染色的情況下，向其中加入0.1%TritonX-IOO。接著將初級抗體(抗A卩6E10(SignetLaboratories,USA),1:2000;4元GFAP(DakoCytomation，Germany),1:2500;抗MAP2(ChemiconInternational,Germany)，l:訓(xùn)0)及二級抗體(Alexa488，1:500;Alexa635,1:500;MolecularProbes,Germany)在室溫下在10%在PBS中的正常山羊血清(pH7.4)中孵育2小時。在每次抗體孵育之后，將細胞用PBS洗滌三次并最后固定在ProLong抗衰減試劑(MolecularProbes,Germany)中。與不含A卩(l-42)的或含有200nM單體A卩(l-42)的相反，所述Ap(l-42)球寡聚體在17nM的濃度下(相當(dāng)于200nM單體濃度)顯示對海馬神經(jīng)元的強結(jié)合(參見圖15a)。A卩(l-42)的單體結(jié)構(gòu)由HFIP儲備溶液確定。通過等效體積的HFIP與AI3(l-42)球寡聚體一起孵育而排除可能存在的HFIP對海馬神經(jīng)元結(jié)合A卩(l-42)的能力的負(fù)面作用，不存在Ap(l-42)球寡聚體單獨時的差異。被海馬神經(jīng)元結(jié)合的Ap(l-42)球寡聚體低至2nM(數(shù)據(jù)未示出)。Ap(l-42)球寡聚體對神經(jīng)突的結(jié)合是高度點狀的，表明特異結(jié)合突觸末端或樹突剌(參見圖15b，插圖)。觀察到AP(1-42)球寡聚體結(jié)合與所培養(yǎng)的神經(jīng)元的年齡強相關(guān)。在DIV8時，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)海馬結(jié)合(~1%)，而在DIV11及DIV15時，Ap(l-42)球寡聚體結(jié)合是顯著的(~90%)(參見圖15b)。通過有限制地結(jié)合神經(jīng)元且在該海馬制品中的神經(jīng)膠質(zhì)不結(jié)合AJ5(1-42)球寡聚體而進一步證實了A(3(l-42)球寡聚體結(jié)合的高度特異性(參見圖15c)。此外，多種神經(jīng)元細胞系對于A(3(l-42)球寡聚體結(jié)合是陰性的(數(shù)據(jù)未示出)。實施例13:A0(l-42)球塞聚體對長時程增強的完全抑制為了確定A|3(1-42)球寡聚體對突觸功能的效果，本發(fā)明人記錄了用或不用A(3(l-42)球寡聚體灌注的腦切片的CA1區(qū)域的細胞外電勢。從雄性Sprague-Dawley大鼠(7-8周大)制備切片。整理所分離的大腦半球，然后用振動切片機切割。將切片(400pM)直接轉(zhuǎn)入界面記錄小室并用氧化人工CSF(aCSF:118mMNaCl,1.24mMKH2P04,10mM葡萄糖，2mMMgS04，2，5mMCaCl2,5mMKCl，25.6mMNaHC03)以1.8ml/分鐘的流速在33。C下連續(xù)灌注。在記錄之前使新鮮制備的切片平衡至少一個小時。使用充滿aCSF的玻璃微電極(0,8-1.2MQ)從CA1的輻射層(stratumradiatum)獲得場電勢。通過雙極鵠電極(0.5Ml"2，ScienceProductsGmbH，Germany)刺激Schaffer側(cè)突。以獲得ffiPSP最大值30%的強度每分鐘施用恒壓雙相脈沖(0.1ms/相；范圍1-5V)—次。通過使用相同強度及脈沖寬度的2組100Hz(1秒/組(train)，組間間隔10秒)誘導(dǎo)LTP。在Ap-組中，在整個試驗期間灌注42nMA(3(l-42)球寡聚體，開始于強直前80-120分鐘。在基線記錄前確定輸入/輸出的相互關(guān)系(在Ap(l-42)球寡聚體洗入之后64-94分鐘)。通過PowerCED1401將信號數(shù)字化并使用軟件Signal2.14(CambridgeElectronicDesignLtd,，Cambridge)進行分析。對于統(tǒng)計比較，將數(shù)據(jù)使用SAS通過雙因素重復(fù)測量ANOVA分析。從AP(1-42)球寡聚體-處理的切片的CA1樹突層荻得的場EPSP在大小與形狀方面表現(xiàn)為正常的(參見圖17b)，表明興奮性突觸傳遞未受影響。所述場EPSP還未顯示缺乏突觸抑制(即，多重群峰值)，表示GABA-能傳遞是完整的。并且，A卩(l-42)球寡聚體-處理的切片與未經(jīng)處理的切片的平均輸入/輸出相互關(guān)系的對比(參見圖17c)表明基本突觸功能未被Ap(l-42)球寡聚體削弱。然而，當(dāng)試驗高頻刺激-誘導(dǎo)的LTP時，Ap(l-42)球寡聚體-處理(42nM)的切片顯示完全的阻斷(參見圖17a)。在強直刺激之后，所述增強在30分鐘內(nèi)衰減至基線水平。盡管短時程增強可在所述Ap(l-42)球寡聚體組容易地誘導(dǎo)，所述增強也早在強直后5分鐘被顯著削弱(p<0.05)。相反，對照切片顯示穩(wěn)定的LTP至少一個小時，至少30%的增強貫穿整個記錄時間。在一些試驗中，確定在所述記錄小室流出口處的Ap(l-42)球寡聚體濃度，并且可檢出50-70%的Ap(l-42)球寡聚體，表示在試驗期間相當(dāng)大量(雖然不是全部)的A(3(l-42)球寡聚體已經(jīng)到達所迷切片。因此，小于42nm的A卩(l-42)球寡聚體足以特異抑制LTP，而保持基本突觸傳遞未受影響。實施例14:A0(l-42)的抗體所述抗Ap(20-42)球寡聚體多克隆抗體5598從經(jīng)免疫的兔子產(chǎn)生，并進行抗經(jīng)固定的AP(l-42)球寡聚體的親合性純化。在本領(lǐng)域中已充分地記栽了所使用的方法。簡要地，將A卩(l-42)合成肽(CatNo.H-1368，Bachem，瑞士)以~6mg/ml懸浮在U，l,3，3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)中并在振搖下在37'C下孵育1.5小時以完全溶解。在SpeedVac中蒸發(fā)除去HFIP并將A卩(l-42)以5mM的濃度再懸浮在二曱亞砜(DMSO)中且超聲處理20秒。將經(jīng)HFIP預(yù)處理的A卩(卜42)在磷酸鹽緩沖溶液(PBS)(20mMNaH2P04，140mMNaCl,pH7.4)中稀釋至400并加入1/10體積2%SDS(在H20中)(最終濃度0.2%十二坑基硫酸鈉(SDS))。在37'C下孵育6小時得到16/20kDaA卩(l-42)球寡聚體中間體。通過進一步用三體積H20稀釋并在37。C下孵育18小時生成38/48kDaAp(l-42)球寡聚體。在3,000xg離心20分鐘之后，將所述樣品通過超濾(30kDa截止)濃縮，對5mMNaH2P04,35mMNaCl，pH7.4透析，在IO，OOOxg下離心10分鐘并將含有所述38/48kDaAp(l-42)球寡聚體的上清液抽出。對于脂肪酸誘導(dǎo)的38/48kDaAp(卜42)球寡聚體，將所述SDS替換為加入1/10體積的0.5%脂肪酸。對于交聯(lián)，所述38/48kDaA卩(l-42)球寡聚體在濃縮和透析前用1mM戊二醛在室溫處理2小時，接著用乙醇胺(5mM)在室溫(RT)處理30分鐘。所述38/48kDaA(3(l-42)球寡聚體的有限蛋白酶解使用1/50(mg/mg)相應(yīng)的蛋白酶進行并在室溫下賻育20小時。小鼠的免疫導(dǎo)致以高滴度(1:10，000-100,000)得到強有力的A卩(l-42)球寡聚體-特異的(8F5)及非特異性的單克隆抗體(6G1)。與非特異性的6G1及參照抗體6E10相反，所述特異性抗體8F5僅通過PAGE-Western印跡檢測A卩(卜42)球寡聚體，而不通過SDS-Western印跡分析(數(shù)據(jù)未示出)，表明結(jié)合在所述核心A(3(l-42)球寡聚體結(jié)構(gòu)中的更復(fù)雜的去垢劑可離解的亞單位間表位(參見圖12a)。對各種Ap(1-42)及Ap(l-40)標(biāo)準(zhǔn)制品的斑點印跡分析顯示Aj3(l-42)球寡聚體與非球寡聚體A卩-形式(標(biāo)準(zhǔn)Ap(l-40/42)單體制品，聚集的AJ3(l-42))相比較對于特異的8F5及5598的識別存在顯著差異，但對于同種型(isoform)非特異抗體6G1及6E10則不存在差異(參見圖12b)。通過量化在夾心式ELISA中結(jié)合的A卩(l-42)球寡聚體、A卩(l-42)單體、Ap(l-40)及sAPPot證實8F5及5598的球寡聚體特異性，而6G1及6E10則沒有。然而，可假定由于我們的合成標(biāo)準(zhǔn)制品與AJ3(1-42)球寡聚體表位的少量交叉污染而低估了抗體的選擇性，因為我們的特異抗體與CSF樣品中的A(3單體相比較在處于低至<0.5%的水平時未檢出Ap(l-42)球寡聚體表位(參見圖13中的數(shù)據(jù))。在合成A卩制品中的交叉污染程度由ELISA值的比例計算得到(參見圖12d)。在根據(jù)Lambert等人(Lambert,MP.等人，Diffusible,nonfibrillarligandsderivedfromAbetal-42arepotentcentralnervoussystemneurotoxins.Proc.Natl.Acad,SciU.S.A95，6448-6453(1998))制備的A卩(l-42)NH40H制品及A卩寡聚體中，測得5%A卩(l-42)球寡聚體表位及95。/。Ap(l-42)單體表位，而在本發(fā)明的Ap(l-42)球寡聚體制品具有95%純度且僅5%單體Ap(l-42)的交叉污染信號。在來自表達APP的具有V717F突變的CHO細胞的條件培養(yǎng)基(CM)中(根據(jù)Walsh等人(Walsh,D.M.等人.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo.Nature416,535-539(2002)),所述A卩(I-42)球寡聚體-表位水平低于檢測限。實施例15:在與球寡聚體選擇性抗-ApmAb8F5進行免疫沉淀反應(yīng)之后AD腦組織提取物中的內(nèi)源淀粉狀蛋白卩(1-38)、(l-40)及(1-42)水平在0。C下將154mg人類AD腦(來自Brain-net，Munich的樣品)用1.39ml提取緩沖液懸浮。通過用杵撞擊20次將所述樣品在玻璃罐中均化。將該經(jīng)均化的組織在IOO，OOOg離心1小時。取上清液作為人類AD腦提取物。材料基礎(chǔ)緩沖液50mMTris，150mMNaCl，2mMEDTA，0.01%TergitolNP-40,0.1%SDSpH7.6(用10MHC1調(diào)節(jié))提取緩沖液=100ml緩沖液+溶解于1mlH20中的1片完全蛋白酶抑制劑混合體(Fa.RocheNr.:1697498)+200pi250mMPMSF(溶解于曱醇)，直接在使用前制備?？?A卩mAbs固定至CNBr-活化的Sepharose4B:mAb8F5:將0.4gCNBr-活化的Sepharose4B(AmershamIncNo.:17-0430-01)加至10ml1mMHCl水溶液中并在室溫下孵育30分鐘。將該CNBr-活化的Sepharose4B用10ml1mMHC1洗滌三次，且最后用10ml100mMNaHC03;500mMNaCl;pH8.3洗涂兩次。對于每個經(jīng)固定的抗體，將lOOplCNBr-活化的Sepharose4B基質(zhì)加至950pi0.5mg/ml抗-A卩mAb8F5在100mMNaHCO3;500mMNaCl;pH8.3中的溶液。在室溫下振搖2小時后，將樣品在10，000g離心5分鐘。然后將500pl100mM乙醇胺；100mMNaHCO3;500mMNaCl;pH8,3,緩沖液加至所述珠粒并將樣品在室溫下振搖1小時。將所述抗-A(3mAb8F5-Sepharose樣品在10，000g離心5分鐘并用500pl20mMNaH2P04;140mMNaCl;pH7.4洗滌5次。在冷凍儲存之前，通過加入疊氮化鈉至0.02%的最終濃度將樣品穩(wěn)定。免疫沉淀反應(yīng)mAb8F5-Sepharose:將150pl人類AD腦提取物用150pl20mMNaH2P04;140mMNaCl;0.05%吐溫20;pH7.4稀釋。將這些樣品加至2pl抗-A卩mAb8F5-Sepharose基質(zhì)中并在室溫下攪拌1.5小時。將該樣品在10'000g離心5分鐘。排出上清液并將所述抗-A卩mAb8F5-Sepharose用50plPBS洗滌兩次，攪拌1分鐘并離心(在0，000g下5分鐘)。排出上清液并將所述Sepharose珠粒懸浮在50pl2mMNaH2P04;14mMNaCl;pH7.4中；接著在室溫下攪拌1分鐘并在10，000g離心5分鐘。在下一步中，將所述抗-A卩mAb-Sepharose珠粒用10pi50%CH3CN;0.2%TFA的水溶液處理。在室溫下振搖10分鐘后，將樣品在IO，OOOg離心5分鐘。收集所述上清液。用Seld"MS測定A卩(l-xx):將2pi抗-A(3mAb8F5-S印haroseIP-洗脫液點在H4ProteinChipArmy構(gòu)件A-HFa.Ciphergen零件號碼C553-0028的斑點上。將所述芯片在空氣中干燥。此后，將2…3.33mg/mlCHCA于50%CH3CN;0.5%TFA的水溶液中點在所述斑點上。將該芯片再次在空氣中干燥并在SELDImassspecCiphergen,Inc中分析。條件強度200靈敏度6質(zhì)量范圍800-10，000Da校準(zhǔn)7Fa.Ciphergen零件號碼C100-0005的全合一肽標(biāo)準(zhǔn)混合物(All-in-1P印tideStandardMix)。權(quán)利要求1.一種非擴散球狀A(yù)β(X-38..43)寡聚體或其衍生物，其中X選自數(shù)字1..24。2.權(quán)利要求1所述的寡聚體或衍生物，其中所述寡聚體是非擴散球狀A(yù)卩(X-40)寡聚體。3.權(quán)利要求1所述的寡聚體或衍生物，其中所述寡聚體是非擴散球狀A(yù)卩(X-42)寡聚體。4.權(quán)利要求1至3任一項所述的寡聚體或衍生物，其中X選自數(shù)字8..24。5.權(quán)利要求1至3任一項所述的寡聚體或衍生物，其中X選自數(shù)字12..24。6.權(quán)利要求1至3任一項所述的寡聚體或衍生物，其中X選自數(shù)字12..20。7.權(quán)利要求1至6任一項所述的寡聚體或衍生物，其是可溶的。8.權(quán)利要求1至7任一項所述的寡聚體或衍生物，其中所述衍生物是以促進檢測的基團共價標(biāo)記的寡聚體。9.權(quán)利要求8所述的寡聚體或衍生物，其中所述促進檢測的基團選自熒光團、生色團、化學(xué)發(fā)光團、酶活性基團、電子密集基團、半抗原、強抗原性結(jié)構(gòu)、適體、螯合基團、特異蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用介體、磁性基團以及放射性基團。10.權(quán)利要求1至9任一項所述的寡聚體或衍生物，其中所述衍生物是以促進體內(nèi)降解的基團附加標(biāo)志的寡聚體。11.權(quán)利要求10所述的寡聚體或衍生物，其中所迷促進體內(nèi)降解的基團是泛素。12.權(quán)利要求1至11任一項所述的寡聚體或衍生物，其是經(jīng)純化的。13.在包含非擴散球狀A(yù)J3(X-38..43)寡聚體或其衍生物的制品中富集所述非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物的方法，該方法包括捕荻所述寡聚體或衍生物以及以富集的形式獲得所述寡聚體或衍生物。14.權(quán)利要求13所述的方法，其中捕荻所述寡聚體或衍生物包括將所述制品與結(jié)合所述寡聚體或衍生物的試劑接觸。15.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述試劑被固定。16.權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述試劑是對所述寡聚體或衍生物具有特異性的抗體。17.權(quán)利要求13至16任一項所述的方法，其中以富集的形式獲得所述寡聚體或衍生物包括將所捕荻的寡聚體或衍生物解除吸附。18.權(quán)利要求17所述的方法，其中將所捕獲的寡聚體或衍生物解除吸附包括將所捕荻的寡聚體或衍生物與高鹽緩沖液或酸性溶液接觸。19.權(quán)利要求13至18任一項所述的方法，其中所述方法進一步包括確定所述非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或衍生物在所述制品中的量。20.在包含非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物的制品中富集所述非擴散球狀A(yù)P(X-38..43)寡聚體或其衍生物的方法，該方法包括從所述制品除去至少一種不是所述寡聚體或衍生物的物質(zhì)。21.權(quán)利要求20所述的方法，其中不是所述寡聚體或衍生物的物質(zhì)是A0單體或Ap原纖寡聚體。22.權(quán)利要求21或22所述的方法，其中除去所述物質(zhì)包括將所述制品與特異結(jié)合所述物質(zhì)的試劑接觸。23.權(quán)利要求22所迷的方法，其中所述試劑被固定。24.權(quán)利要求22或23所述的方法，其中所述試劑是特異結(jié)合所迷物質(zhì)的抗體。25.權(quán)利要求20至24任一項所述的方法，其中除去所述物質(zhì)包括包括將所述制品與結(jié)合所述物質(zhì)的抗體接觸，然后將已結(jié)合所述抗體的所迷物質(zhì)進行蛋白A親合色謙法處理。26.所述方法，其中所述方法進一步包括確定所述制品中非擴散球狀A(yù)(3(X-38..43)寡聚體或其衍生物的量。27.可通過權(quán)利要求13-26任一項所定義的方法獲得的包含非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物的組合物。28.包含權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)|3(X-38..43)寡聚體或其衍生物的組合物，其中所迷寡聚體或衍生物的量以重量計是所述組合物的至少99%。29.權(quán)利要求28所迷的組合物，其中所述寡聚體或衍生物的量以重量計是所述組合物的至少99.9%。30.權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述寡聚體或衍生物的量以重量計是所迷組合物的至少99.99%。31.權(quán)利要求27至30任一項所述的組合物，其中所述組合物是疫苗。32.權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物用于制備對所述寡聚體或衍生物具有特異性的抗體的用途。33.制備對權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)(3(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的抗體的方法，該方法包括提供包含所述寡聚體或衍生物的抗原；將抗體譜或潛在的抗體譜暴露于所述抗原；以及從所述語選擇特異結(jié)合所述寡聚體或其衍生物的抗體。34.權(quán)利要求33所述的方法，其中通過用所述抗原使生物體免疫而將所述抗體語在體內(nèi)暴露于所迷抗原。35.對權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的抗體。36.權(quán)利要求35所述的抗體，其中所述抗體是可通過權(quán)利要求33或34的方法獲得的。37.權(quán)利要求35或36所述的抗體，其中所迷抗體對所迷寡聚體或衍生物的親合力是對單體八p(l-42)的至少IO倍。38.權(quán)利要求35至37任一項所述的抗體，其中所迷抗體對所迷寡聚體或衍生物的親合力是對單體AJ3(l-40)的至少10倍。39.權(quán)利要求35至38任一項所述的抗體，其中所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是對原纖寡聚的A(5(l-42)的至少10倍。40.權(quán)利要求35至39任一項所述的抗體，其中所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是對原纖寡聚的AP(l-40)的至少10倍。41.權(quán)利要求35至40任一項所迷的抗體，其中所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是對初原纖寡聚的Ap(l-42)的至少10倍。42.權(quán)利要求35至41任一項所述的抗體，其中所述抗體對所述寡聚體或衍生物的親合力是對初原纖寡聚的Ap(l-40)的至少10倍。43.權(quán)利要求35至42任一項所述的抗體，其中所述抗體結(jié)合位于所述寡聚體或衍生物的大約20至大約30的氨基酸位置之間的表位。44.權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38，.43)寡用途。45.制備對權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的適體的方法，該方法包括提供包含所述寡聚體或衍生物的結(jié)合目標(biāo)物；將適體i普或潛在的適體i普暴露于所述結(jié)合目標(biāo)物；以及從所述語選擇特異結(jié)合所述寡聚體或其衍生物的適體。46.對權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的適體，該適體是可通過權(quán)利要求45的方法獲得的。47.權(quán)利要求46所述的適體，其中所述適體是被標(biāo)記的和/或被附力口木亍志的。48.權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)P(X-3S..43)寡聚體或其衍生物用于制備治療或預(yù)防淀粉樣變性病的藥物組合物的用途。49.權(quán)利要求48所述的用途，其中藥物組合物是用于主動免疫的疫苗。50.權(quán)利要求48或49所述的用途，其中所述寡聚體不能進入CNS。51.權(quán)利要求48至50任一項所述的用途，其中所述組合物能夠誘導(dǎo)抗球寡聚體的強的、抗體-介導(dǎo)的、非炎性響應(yīng)。52.權(quán)利要求48至51任一項所述的用途，其中所述藥物組合物經(jīng)由選自靜脈內(nèi)、肌內(nèi)以及皮下的途徑給藥。53.在需要的受試者中治療或預(yù)防淀粉樣變性病的方法，包括向所述受試者給藥權(quán)利要求1至12任何一項所定義的非擴散球狀A(yù)|3(X-38..43)寡聚體或衍生物。54.權(quán)利要求53所述的方法，其中給藥非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物是用于主動免疫。55.權(quán)利要求35至43任一項所定義的抗體用于制備治療或預(yù)防淀粉樣變性病的藥物組合物的用途。56.權(quán)利要求55所述的用途，其中所述藥物組合物是用于被動免疫。57.在需要的受試者中治療或預(yù)防淀粉樣變性病的方法，包括向所述受試者給藥權(quán)利要求35至43任何一項所定義的抗體。58.權(quán)利要求57所述的方法，其中給藥所迷抗體是用于主動免疫。59.權(quán)利要求35至43任一項所定義的抗體用于檢測制品中的所述寡聚體或衍生物的用途。60.權(quán)利要求35至43任一項所定義的抗體用于確定制品中的所述寡聚體或衍生物的量的用途。61.檢測制品中的非擴散球狀A(yù)J3(X-38..43)寡聚體或其衍生物的方法，包括將所述制品與權(quán)利要求35至43任一項所定義的抗體接觸以及檢測由所述抗體與所述寡聚體或衍生物形成的復(fù)合物，所述復(fù)合物的存在表示所述寡聚體或衍生物的存在。62.權(quán)利要求61所述的方法，其中該方法進一步包括確定存在于所迷制品中的寡聚物或衍生物的量。63.權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)|3(X-38..43)寡聚體或其衍生物用于制備用于在受試者中檢測對所述寡聚體或衍生物具有特異性的自體抗體的組合物的用途。64.權(quán)利要求63所述的用途，其中所述受試者被懷疑患有淀粉樣變性病并且檢測自體抗體是用于在所迷受試者中診斷阿爾茨海默氏病。65.權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)j3(X-38..43)寡聚體或其衍生物用于在樣品中檢測對所述寡聚體或衍生物具有特異性的自體抗體的用途。66.權(quán)利要求65所迷的用途，其中所迷樣品來自懷疑患有淀粉樣變性病的受試者并且檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所述淀粉樣變性病。67.在受試者中檢測對非擴散球狀A(yù)|3(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的自體抗體的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物給藥給所述受試者以及檢測由所述抗體與所述寡聚體或衍生物形成的復(fù)合物，所述復(fù)合物的存在表示所述自體抗體的存在。68.權(quán)利要求67所述的方法，其中所述受試者被懷疑患有淀粉樣變性病并且檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所述淀粉樣69.在樣品中檢測對非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物具有特異性的自體抗體的方法，該方法包括將所述樣品與權(quán)利要求1至12任一項所定義的非擴散球狀A(yù)p(X-38..43)寡聚體或其衍生物接觸以及檢測由所述抗體與所述寡聚體或衍生物形成的復(fù)合物，所述復(fù)合物的存在表示所述自體抗體的存在。70.權(quán)利要求69所述的方法，其中所述樣品來自懷疑患有淀粉樣變性病的受試者并且檢測所述自體抗體是用于在所述受試者中診斷所述淀粉樣變性病。71.權(quán)利要求69或70所述的方法，其中所述懷疑患有淀粉樣變性病的受試者是患有淀粉樣變性病或具有增加的罹患淀粉樣變性病的風(fēng)險的受試者。72.權(quán)利要求48至71任一項所述的方法或用途，其中所述淀粉樣變性病選自阿爾茨海默氏病以及唐氏綜合癥的淀粉樣變性病。全文摘要本發(fā)明涉及非擴散球狀A(yù)β(X-38..43)寡聚體(“球寡聚體”)或其衍生物、富集所述球寡聚體或衍生物的方法、包含所述球寡聚體或衍生物的組合物、對所述球寡聚體或衍生物具有特異性的抗體及適體、制備這種抗體及適體的方法、所述球寡聚體或衍生物或者所述抗體或適體用于診斷、治療及其他目的的用途、以及使用所述球寡聚體或衍生物或者所述抗體或適體的相應(yīng)方法。文檔編號G01N33/68GK101365717SQ200680015381公開日2009年2月11日申請日期2006年3月3日優(yōu)先權(quán)日2005年3月5日發(fā)明者A·斯特里賓格,H·希倫,P·凱勒,S·巴戈爾恩,U·埃伯特申請人:艾博特股份有限兩合公司