專利名稱：快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測(cè)大麻的試紙。
背景技術(shù)：
大麻(Cannabis)，又名火麻等，大麻的化學(xué)成份錯(cuò)綜復(fù)雜，主要有以下幾種化學(xué)構(gòu)成類脂物、黃酮類化合物、萜烯、碳?xì)浠衔?、非環(huán)形大苯酚、生物堿，檸檬酸銀和環(huán)形大麻酚(如四氫大麻酚)。每個(gè)化學(xué)構(gòu)成的含量在不同植物中，甚至在同一植物里也是變化無常的。
大麻吸食途徑通常是吸食、飲用、吞服，加工后注射。吸食大麻，對(duì)人體器官有很大的影響。在生殖系統(tǒng)方面，會(huì)產(chǎn)生精液數(shù)量下降，精子數(shù)量下降，質(zhì)量差或不正常，造成產(chǎn)生不正常新生兒或死胎；腦活動(dòng)方面，產(chǎn)生記憶下降或錯(cuò)覺，感覺遲鈍；心血管方面，會(huì)產(chǎn)生心動(dòng)過速；視力方面，會(huì)產(chǎn)生對(duì)光敏感，對(duì)弱光的適應(yīng)力和辨別色彩的能力減弱；呼吸器官方面，大麻吸食者常感染支氣管炎、咽喉疼痛、鼻竇炎、哮喘、鼻炎、慢性支氣管炎等疾病。長期吸食大麻，造成人體免疫能力下降，特別易感染流行性傳染病。吸食大麻后，感到興奮，舒適，接下來就是心理上處于混亂；再接下來第三階段出現(xiàn)夢(mèng)幻般的心醉神迷；最后突然情緒下降，心情壓抑導(dǎo)致沉睡。長期吸食大麻者生理上失調(diào)，對(duì)大麻產(chǎn)生依賴，一旦停用，即出現(xiàn)失眠、食欲減退、性情急躁、易怒、嘔吐、顫抖等狀。國家相關(guān)部門將其列為毒品行列。
大麻中的有毒成分是四氫大麻酚及大麻酚、大麻酚類衍生物，主要毒性成分(即有效成分)是四氫大麻酚(THC)。
對(duì)四氫大麻酚(THC)的檢測(cè)方法如氣相色譜(GC)，氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)，高效液相色譜(HPLC)等已有報(bào)道。高效毛細(xì)管電泳是近年來發(fā)展起來的分析方法，它具有分離能力強(qiáng)、分離效率高、分析時(shí)間短，所需的樣品及溶劑量小等特點(diǎn)。國外已有利用膠束毛細(xì)管電動(dòng)色譜法等，但是所需的時(shí)間較長，因此需要一種快速、方便的檢測(cè)方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上準(zhǔn)確的顯示測(cè)試的結(jié)果，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測(cè)快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測(cè)四氫大麻酚(THC)的試紙。
為了達(dá)到所述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的在四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條四氫大麻酚(THC)合成免疫原反應(yīng)線和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
本試紙的控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成，反應(yīng)線是由四氫大麻酚合成免疫原包被制成，單克隆抗體金標(biāo)墊是由大麻單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記，吸水板用雙層吸水紙。
把四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙的樣品吸液層放入被檢測(cè)尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細(xì)管作用樣品將沿著試紙條向吸水板端移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體金標(biāo)墊時(shí)，樣品中的四氫大麻酚(THC)與抗四氫大麻酚(THC)金標(biāo)探針發(fā)生特異反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有四氫大麻酚(THC)合成免疫原反應(yīng)線時(shí)，由于抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體金標(biāo)墊中的抗體會(huì)與樣品中四氫大麻酚(THC)結(jié)合而失去其與四氫大麻酚(THC)合成免疫原結(jié)合位點(diǎn)，因此其膠體金不能滯留于試驗(yàn)線上；相反，如果樣品中沒有與抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體金標(biāo)墊中的抗體結(jié)合的四氫大麻酚(THC)，抗四氫大麻酚(THC)單抗金標(biāo)探針就會(huì)與試驗(yàn)線上的四氫大麻酚(THC)合成免疫原發(fā)生特異結(jié)合，使膠體金滯留于試驗(yàn)線上，這就是免疫競爭法原理。所以反應(yīng)線的顏色深淺與樣品中四氫大麻酚(THC)含量高低成反比。設(shè)定最低檢出量應(yīng)不高于50ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線代表尿樣中THC低于50ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線表示尿樣中THC超過界限值50ng/ml，為陽性。
當(dāng)移動(dòng)至羊抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無論樣品中四氫大麻酚(THC)含量多少，金標(biāo)探針都會(huì)與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測(cè)時(shí)，樣品液面超過MAX線)或試紙已經(jīng)過期。
在用試紙檢測(cè)尿液后，將其試驗(yàn)線與檢測(cè)色標(biāo)進(jìn)行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進(jìn)而確定所測(cè)尿液中四氫大麻酚(THC)含量是否超標(biāo)。用含四氫大麻酚(THC)對(duì)照品得尿液檢測(cè)，設(shè)定的最低檢出量應(yīng)不高于50ng/ml。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的檢測(cè)四氫大麻酚(THC)的試紙及其檢測(cè)方法具有這樣的有益效果，即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，無須專門技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖1為四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖2為四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。
圖3為四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙應(yīng)用于測(cè)試時(shí)顯示為陽性結(jié)果圖。
圖4為四氫大麻酚(THC)檢測(cè)試紙應(yīng)用于測(cè)試時(shí)顯示為陰性結(jié)果圖。
圖中1、吸水板，2、硝酸纖維素膜，3、控制線，4、反應(yīng)線，5、單克隆抗體金標(biāo)墊，6、樣品吸液層，7、底板，8、MAX線。
具體實(shí)施方式
由圖1可見，本實(shí)用新型是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、單克隆抗體金標(biāo)墊(5)、樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條反應(yīng)線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
1.選用與四氫大麻酚分子相類似物(具有羧基或氨基)，與大分子蛋白縮和反應(yīng)得到具有免疫反應(yīng)的合成免疫原。
2.抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體的制備。
(1)用制備的四氫大麻酚(THC)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體的結(jié)合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+去離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗四氫大麻酚(THC)單克隆抗體→抗四氫大麻酚(THC)單抗膠體金。
(3)抗四氫大麻酚(THC)單抗膠體金+吸水紙→金標(biāo)記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細(xì)管原理使膠體金朝向底物處移動(dòng)。
5.特種制膜機(jī)制膜機(jī)器特制，利用電腦控制傳動(dòng)速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml反應(yīng)線選用四氫大麻酚(THC)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。
如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時(shí)觀察結(jié)果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線為陽性；如在檢測(cè)區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線，則為陰性?？刂茀^(qū)未出現(xiàn)紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(xiàng)(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當(dāng)，均可產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
(3)密封保存，在有效期12個(gè)月內(nèi)使用。
權(quán)利要求1.一種快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、單克隆抗體金標(biāo)墊(5)、樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條反應(yīng)線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙，其特征在于反應(yīng)線是由四氫大麻酚合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙，其特征在于單克隆抗體金標(biāo)墊是由大麻單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)大麻的膠體金試紙，其特征在于吸水板用雙層吸水紙。
專利摘要本發(fā)明涉及一種快速檢測(cè)大麻的試紙，屬于膠體金免疫檢測(cè)領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標(biāo)墊、樣品吸液層組成，是一種用于檢測(cè)大麻的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有四氫大麻酚(THC)合成免疫原反應(yīng)線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結(jié)果。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測(cè)快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。
文檔編號(hào)G01N33/544GK2935156SQ200620007248
公開日2007年8月15日 申請(qǐng)日期2006年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月2日
發(fā)明者萬志靜, 萬志強(qiáng) 申請(qǐng)人:萬華普曼生物工程有限公司