專利名稱：色譜排阻凝集測(cè)定及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總地涉及凝集測(cè)定領(lǐng)域，具體涉及色譜排阻測(cè)定及其使用方法。
背景技術(shù)：
可購(gòu)得各種空氣凝集測(cè)定。這些凝集測(cè)定可用于各種目的，如通過(guò)分析樣品中感興趣的痕量分析物診斷病癥或監(jiān)測(cè)治療。某些凝集測(cè)定完全在溶液中進(jìn)行，溶液中出現(xiàn)可見(jiàn)的分析物誘導(dǎo)的聚集體說(shuō)明是陽(yáng)性結(jié)果。采用使反應(yīng)樣品通過(guò)小洞以濃縮分析物誘導(dǎo)的聚集體的流通系統(tǒng)進(jìn)行其它凝集測(cè)定。在干燥的多孔性條帶上進(jìn)行其它凝集測(cè)定，條帶上出現(xiàn)分析物誘導(dǎo)的聚集體說(shuō)明是陽(yáng)性結(jié)果。
許多可用的凝集測(cè)定都有缺少靈敏度和易于產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果的缺點(diǎn)。采用干燥多孔性條帶的凝集測(cè)定尤其易于產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，因?yàn)殡y以通過(guò)觀察和檢測(cè)區(qū)分出在多孔性條帶上或多孔性條帶中凝集的真實(shí)凝集體和凝集測(cè)定組分的隨機(jī)聚集。大多數(shù)凝集測(cè)定，尤其是流通凝集測(cè)定，易于產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，因?yàn)樵跍y(cè)試樣品中存在非特異性顆粒物質(zhì)。上述凝集測(cè)定通常需要高級(jí)技術(shù)人員準(zhǔn)確地確定最終結(jié)果是陽(yáng)性或陰性，或決定再次進(jìn)行測(cè)試以獲得更確定的結(jié)果。雖然趨勢(shì)是產(chǎn)生更靈敏的凝集測(cè)定，但也需要改進(jìn)家用或臨床用凝集測(cè)定的靈敏度、有效性和簡(jiǎn)便性，本發(fā)明提出了現(xiàn)有問(wèn)題并提供了相關(guān)優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及凝集測(cè)定，具體涉及色譜排阻測(cè)定及其使用方法。本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻或分離在測(cè)試裝置的特定和非隨機(jī)位置上聚集的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的聚集體來(lái)確定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種感興趣分析物的新方案。當(dāng)測(cè)試樣品中不存在感興趣的分析物時(shí)，不形成特異性可檢測(cè)結(jié)合試劑聚集體，因此不從產(chǎn)生明顯且容易區(qū)分的事件的色譜介質(zhì)中排除。然而，也可能通過(guò)保留非聚集顆粒(如在大小排阻色譜中)從單顆粒中分離聚集體。本發(fā)明特別適合用作在醫(yī)生辦公室或家中檢測(cè)疾病或監(jiān)測(cè)治療的簡(jiǎn)單測(cè)試裝置。
本發(fā)明認(rèn)識(shí)到可用色譜排阻或分離由可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與感興趣分析物結(jié)合形成的聚集體使凝集測(cè)定更靈敏、更有效、更簡(jiǎn)單。陽(yáng)性測(cè)試結(jié)果中的經(jīng)色譜排阻或分離的聚集體優(yōu)選能產(chǎn)生明顯事件，如在色譜介質(zhì)上形成可見(jiàn)條帶，它容易與未從色譜介質(zhì)中排除或分離到聚集體的陰性測(cè)試結(jié)果區(qū)分。
本發(fā)明的第一個(gè)方面包括檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括第一多孔性部件，該部件含有能夠被檢測(cè)并能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的感興趣分析物的一種或多種特異性結(jié)合試劑。本發(fā)明也包括第二多孔性部件，該部件與第一多孔性部件流體相連、并基本上能夠使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)、但基本上保留了所有結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。當(dāng)將樣品引入本發(fā)明第一多孔性部件時(shí)，樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的接界面上出現(xiàn)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明測(cè)試樣品中存在感興趣分析物。
本發(fā)明的第二方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括互相流體相連的第一多孔性部件和第二多孔性部件，在第一和第二多孔性部件的連接處形成檢測(cè)區(qū)。位于第一多孔性部件上的反應(yīng)區(qū)包括能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的感興趣分析物并形成聚集體的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。反應(yīng)區(qū)上存在的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑能夠溶解并借助毛細(xì)流動(dòng)移動(dòng)到第二多孔性部件中。第二多孔性部件基本上能夠使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上阻止了任何結(jié)合和聚集的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)。當(dāng)將樣品引入本發(fā)明第一多孔性部件中時(shí)，樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的連接處形成結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體的積聚說(shuō)明測(cè)試樣品中存在所述一種或多種感興趣分析物，而在第一多孔性部件與第二多孔性部件連接處不出現(xiàn)或缺少結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體的積聚說(shuō)明測(cè)試樣品中不存在所述一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第三方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟提供第一多孔性部件，該部件包括能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的分析物或感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；提供第二多孔性部件，該部件與第一多孔性部件流體相連并形成連接，以使第二多孔性部件基本上使任何未結(jié)合的可檢測(cè)結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；將測(cè)試樣品引入第一多孔性部件，以使測(cè)試樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件并使第一多孔性部件中的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；其中在第一多孔性部件與第二多孔性部件的連接處出現(xiàn)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第四方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括加入樣品時(shí)能夠被檢測(cè)且能夠結(jié)合一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。本發(fā)明也包括互相流體相連的第一多孔性部件和第二多孔性部件，其中第二多孔性部件基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上保留了結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。其中將一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑引入樣品以形成混合物，然后將該混合物引入第一多孔性部件，借助毛細(xì)管作用通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的接界面上出現(xiàn)結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第五方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟將能夠結(jié)合樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合以形成混合物；提供第一多孔性部件；提供與第一多孔性部件流體相連并形成連接的第二多孔性部件。第二多孔性部件基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件，但基本上阻止了結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)第二多孔性部件；將該混合物引入第一多孔性部件，其中毛細(xì)管作用使該混合物通過(guò)第一和第二多孔性部件；其中，在第一和第二多孔性部件連接處出現(xiàn)結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第六方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括第一多孔性部件，該部件含有在加入樣品時(shí)能夠被檢測(cè)且能夠結(jié)合一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。本發(fā)明也包括第二和第三多孔性部件，其中第三多孔性部件與第二多孔性部件流體相連，第三多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第三多孔性部件，但當(dāng)所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合于一種或多種感興趣分析物時(shí)基本上保留一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；采用該裝置，將樣品引入第一多孔性部件，使第一多孔性部件與第二多孔性部件流體接觸，樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一、第二和第三多孔性部件，其中第二多孔性部件與第三多孔性部件的接界面上出現(xiàn)結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第七方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟提供第一多孔性部件；提供第二多孔性部件；提供與第二多孔性部件流體相連形成連接的第三多孔性部件，該第三多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第三多孔性部件，但基本上防止結(jié)合于一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)第三多孔性部件；將能夠結(jié)合樣品中一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合以形成混合物；將該混合物引入第一多孔性部件；使第一多孔性部件接觸第二多孔性部件，其中混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)第一、第二和第三多孔性部件；其中，在第二和第三多孔性部件連接處出現(xiàn)結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第八方面包括檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。本發(fā)明也包括具有第一端和第二端的多孔性部件，該部件基本上能夠使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上排除任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。當(dāng)樣品與一種或多種可檢測(cè)結(jié)合劑混合并引入本發(fā)明多孔性部件的第一端時(shí)，樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)多孔性部件，在多孔性部件第二端基本上不出現(xiàn)在多孔性部件第一端從多孔性部件中排除的結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明測(cè)試樣品中存在所述一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明的第九方面包括檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟將能夠結(jié)合樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合以形成混合物；提供具有第一端和第二端的多孔性部件，它基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該多孔性部件，但基本上防止結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)該多孔性部件；將混合物引入多孔性部件的第一端，其中混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)多孔性部件；其中，在多孔性部件第二端基本上不出現(xiàn)在多孔性部件第一端從多孔性部件中排除的結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中通篇所用名稱“第一”、“第二”或“第三”僅為方便目的，用于避免任何混淆。這些術(shù)語(yǔ)不用于且不暗示優(yōu)先性、元件結(jié)構(gòu)、反應(yīng)活性等的任何特定順序或排列。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1A是本發(fā)明一實(shí)施方式的頂視圖。
圖2B是本發(fā)明一實(shí)施方式的頂視圖。
發(fā)明詳述介紹本發(fā)明認(rèn)識(shí)到可通過(guò)層析排阻或分離在測(cè)試裝置的具體指定和非隨機(jī)位置上由一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與感興趣分析物的結(jié)合形成的聚集體來(lái)使聚集測(cè)定更靈敏、更有效、更簡(jiǎn)單。陽(yáng)性測(cè)試結(jié)果的色譜排阻聚集體優(yōu)選產(chǎn)生明顯事件，如在色譜介質(zhì)上形成可見(jiàn)條帶，它容易與未從色譜介質(zhì)中排除出聚集體的陰性測(cè)試結(jié)果區(qū)分。
作為本發(fā)明范圍的非限制性介紹，本發(fā)明包括幾個(gè)總的和有用的方面，包括1)檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括第一多孔性部件，它包括能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種特異性結(jié)合試劑；與第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件。第二多孔性部件基本上能夠使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上保留任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將樣品引入第一多孔性部件并借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的接界面上存在結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明測(cè)試樣品中存在所述一種或多種感興趣分析物。
2)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括互相流體相連的第一多孔性部件和第二多孔性部件，在該第一和第二多孔性部件的連接處形成檢測(cè)區(qū)；位于第一多孔性部件上的反應(yīng)區(qū)，該部件包括能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。反應(yīng)區(qū)上存在的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑能夠溶解并借助毛細(xì)流動(dòng)移動(dòng)到第二多孔性部件。第二多孔性部件基本上能夠使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上阻止了任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；其中，將樣品引入第一多孔性部件并借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的連接處形成結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體的積聚說(shuō)明測(cè)試樣品中存在所述感興趣分析物，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的連接處不存在結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體的積聚說(shuō)明測(cè)試樣品中不存在所述感興趣分析物。
3)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)提供第一多孔性部件，它包括能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；b)提供第二多孔性部件，它與第一多孔性部件流體相連形成連接，以使第二多孔性部件基本上使任何未結(jié)合的可檢測(cè)結(jié)合試劑自由通過(guò)，但基本上阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；c)將測(cè)試樣品引入第一多孔性部件，以使測(cè)試樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，使第一多孔性部件的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；其中在第一多孔性部件與第二多孔性部件的連接處存在結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
4)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括加入樣品時(shí)能夠被檢測(cè)且能夠結(jié)合一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；第一多孔性部件；與第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件，第二多孔性部件基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第二多孔性部件，但當(dāng)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合于所述感興趣分析物時(shí)基本上保留所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑引入樣品形成混合物，將所述混合物引入所述第一多孔性部件，并借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一和第二多孔性部件，在第一多孔性部件與第二多孔性部件的接界面上存在結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
5)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)將能夠結(jié)合樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合形成混合物；b)提供第一多孔性部件；c)提供與第一多孔性部件流體相連形成連接的第二多孔性部件，第二多孔性部件基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第二多孔性部件，但基本上防止結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)該第二多孔性部件；d)將混合物引入第一多孔性部件，其中混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)第一和第二多孔性部件；其中，在第一和第二多孔性部件連接處存在結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
6)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括第一多孔性部件，它包括在加入樣品時(shí)能夠被檢測(cè)且能夠結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；第二多孔性部件；與第二多孔性部件流體相連的第三多孔性部件，第三多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第三多孔性部件，但當(dāng)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物時(shí)基本上保留一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；采用該裝置，將樣品引入第一多孔性部件，使第一多孔性部件與第二多孔性部件流體接觸，樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一、第二和第三多孔性部件，其中在第二多孔性部件與第三多孔性部件的接界面上存在結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
7)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)提供第一多孔性部件；
b)提供第二多孔性部件；c)提供與第二多孔性部件流體相連形成連接的第三多孔性部件，第三多孔性部件基本上使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第三多孔性部件，但基本上防止結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)該第三多孔性部件；d)將能夠結(jié)合樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合形成混合物；e)將該混合物引入第一多孔性部件；f)使第一多孔性部件接觸第二多孔性部件，其中混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)第一、第二和第三多孔性部件；其中，在第二和第三多孔性部件連接處存在結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
8)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括在加入樣品時(shí)能夠被檢測(cè)且能夠結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；具有第一端和第二端的多孔性部件，該多孔性部件基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該多孔性部件，但當(dāng)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合于感興趣分析物時(shí)基本上排除一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑引入樣品形成混合物，將該混合物引入多孔性部件第一端，借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)多孔性部件，在多孔性部件第二端基本上不存在在多孔性部件第一端從多孔性部件中排除的結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
9)檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)將能夠結(jié)合樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與樣品混合形成混合物；b)提供具有第一端和第二端的多孔性部件，它基本上能夠使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該多孔性部件，但基本上排除結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑通過(guò)多孔性部件；
d)將混合物引入多孔性部件的第一端，其中混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)多孔性部件；其中，在多孔性部件第二端基本上不存在在多孔性部件第一端從多孔性部件中排除的結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
本發(fā)明涉及凝集測(cè)定，具體涉及色譜排阻測(cè)定及其使用方法。本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻或分離在測(cè)試裝置的確定檢測(cè)區(qū)域上結(jié)合一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑而形成的聚集體來(lái)確定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種分析物的新方案。本發(fā)明色譜介質(zhì)的具體安排用于提高靈敏度和消除對(duì)測(cè)試結(jié)果的主觀解釋。本發(fā)明提供了樣品中存在感興趣分析物時(shí)，對(duì)確定可檢測(cè)到的聚集體的排阻，測(cè)試樣品中不存在感興趣分析物時(shí)，在測(cè)試裝置的檢測(cè)區(qū)域不形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體，因此，不從色譜介質(zhì)中排除，這就產(chǎn)生了明顯和容易區(qū)分的事件。本發(fā)明特別適合用作在醫(yī)生辦公室或家中檢測(cè)疾病或監(jiān)測(cè)治療的簡(jiǎn)單快速的測(cè)試裝置。
在繼續(xù)說(shuō)明并與附圖結(jié)合時(shí)可明顯看出本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點(diǎn)。為了全面理解本發(fā)明范圍，還認(rèn)識(shí)到可組合本發(fā)明的各個(gè)方面以實(shí)現(xiàn)所需的本發(fā)明實(shí)施方式。
除非另有定義，本文所用的所有科技術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的涵義相同。通常，本文所用術(shù)語(yǔ)和下述生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)室方法是本領(lǐng)域熟知和常用的。本文所用技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有其應(yīng)用領(lǐng)域中的通常涵義，如各種技術(shù)詞典所列舉。當(dāng)術(shù)語(yǔ)是單數(shù)形式時(shí)，本發(fā)明者也考慮了該術(shù)語(yǔ)的復(fù)數(shù)形式。本文所用術(shù)語(yǔ)和下述方法是本領(lǐng)域熟知和常用的。
流體相連形成連接的多孔性部件的描述本發(fā)明包括第一多孔性部件，它可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠借助毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。這種材料包括但不限于玻璃纖維、硝酸纖維素、紙、石英、硅、硅氧化物、陶瓷、聚合塑料、環(huán)烯烴及其共聚物、纖維素聚合物、金屬、或由這些材料的組合構(gòu)成的復(fù)合材料。
本發(fā)明第一多孔性部件的重要方面是它基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第一多孔性部件，無(wú)論可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑是否結(jié)合于感興趣分析物。而且，第一多孔性部件的孔和通道應(yīng)足夠大，以便基本上不阻止或阻滯結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的任何凝結(jié)體或聚集體自由流過(guò)該第一多孔性部件。第一多孔性部件可具有任何大小的孔和通道，這很大程度上取決于所用特異性結(jié)合試劑或者可用作標(biāo)記的任何顆?；驑?biāo)記的大小。第一多孔性部件的孔徑可以是(例如)約10微米-500微米，優(yōu)選約50微米-200微米。
本發(fā)明也包括與本發(fā)明第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件。優(yōu)選地，第一多孔性部件的一端接觸并連接第二多孔性部件的一端，形成連接，在該連接處第一多孔性部件終止而第二多孔性部件開(kāi)始與流體接觸。接觸第一多孔性部件的任何水性樣品或液體樣品將借助毛細(xì)管作用向第二多孔性部件移動(dòng)，它先通過(guò)第一和第二多孔性部件連接處并繼續(xù)向第二多孔性部件移動(dòng)。本發(fā)明第二多孔性部件可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠借助毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。這種材料包括但不限于玻璃纖維、硝酸纖維素、紙、石英、硅、硅氧化物、陶瓷、聚合塑料、環(huán)烯烴及其共聚物、纖維素聚合物、金屬、或由這些材料的組合構(gòu)成的復(fù)合材料。
本發(fā)明第二多孔性部件的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，該部件基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件。如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，本發(fā)明一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與測(cè)試樣品中所述一種或多種感興趣分析物之間發(fā)生結(jié)合事件，形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑和分析物的復(fù)合物。優(yōu)選地，該第二多孔性部件基本上停止或阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑復(fù)合物的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。第二多孔性部件可具有任何大小的孔或通道，這很大程度上取決于所用特異性結(jié)合試劑或者可用作標(biāo)記的任何顆粒或標(biāo)記的大小。因?yàn)榈诙嗫仔圆考仨毣旧鲜刮唇Y(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由流過(guò)第二多孔性部件，所以第二多孔性部件的孔徑可以是(例如)約0.1微米-100微米，優(yōu)選約1微米-20微米。
毛細(xì)管作用提供使液體通過(guò)該裝置的驅(qū)動(dòng)力或抽運(yùn)力。該裝置通常以水平位置應(yīng)用，從而使液體樣品毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)該裝置通常是側(cè)向流動(dòng)，這樣不受重力的影響。然而，本發(fā)明某些實(shí)施方式可包括施加驅(qū)動(dòng)力，例如重力或離心力。
本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的描述在溶解或含水狀態(tài)下，本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選是基本上可自由移動(dòng)的。第一多孔性部件的各類可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選能夠結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的單一感興趣分析物，形成聚集體，且各類可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可互相區(qū)分?？蓹z測(cè)特異性結(jié)合試劑可以是任何抗-分析物，即能夠特異性結(jié)合感興趣分析物以形成聚集體的化合物。感興趣分析物可包括例如，能夠被特異性結(jié)合試劑檢測(cè)的任何物質(zhì)，包括任何細(xì)胞或病毒或其任何組件。感興趣分析物也可包括任何有機(jī)小分子，如藥物、激素、類固醇、神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子、代謝物或其它化學(xué)物質(zhì)。感興趣分析物可包括例如，任何有機(jī)大分子，如核酸、蛋白質(zhì)、多糖或其它大分子。
本發(fā)明的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可以是(例如)完整抗體，如多克隆或單克隆抗體?？蓹z測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選為抗體，如人或其它哺乳動(dòng)物的IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、IgY、SigA或IgE。本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑也可以是抗體片段，如抗原結(jié)合片段或Fab、F(ab′)2片段、或抗體的抗原-結(jié)合位點(diǎn)(如抗體的互補(bǔ)決定區(qū))。
在一些實(shí)施方式中，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選為特異性結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的感興趣分析物的純化、高親和單克隆抗體。在其它實(shí)施方式中，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可以是抗原、配體或受體?？蓹z測(cè)特異性結(jié)合試劑可結(jié)合一種以上類型的分析物，但優(yōu)選僅結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的一種類型的分析物。可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可由一種以上試劑組成；例如，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可包含一種以上類型的單克隆抗體或抗體片段，各片段特異性結(jié)合懷疑存在于測(cè)試樣品中的相同類型感興趣分析物。本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可包括但不限于肽、多肽、抗體、Fab片段、融合蛋白、嵌合或雜交分子、核酸、核酸模擬物(如肽核酸)、碳水化合物、細(xì)胞表面抗原、受體、配體或其組合?？蓹z測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選包括抗體(單克隆或多克隆、天然、修飾或重組抗體)或抗體片段(如Fab片段或單鏈抗體可變區(qū)片段)。制備、修飾和使用這些抗體或抗體片段的方法是本領(lǐng)域已知的(參見(jiàn)例如，《抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(AntibodiesA Laboratory Manual)，E.Harlow和D.Lane編，ColdSpring Harbor Laboratory，1988，726頁(yè)；《單克隆抗體實(shí)踐方法》(MonoclonalAntibodiesA Practical Approach)，P.Shepherd和C.Dean編，Oxford University Press，2000，479頁(yè)；《雞蛋黃抗體、生產(chǎn)和應(yīng)用IgY技術(shù)》(Chicken Egg Yolk Antibodies，Production and ApplicationIgY-Technology)(Springer Lab Manual)，R.Schade等編，Springer-Verlag，2001，255頁(yè)，將其全文納入本文作為參考)。
可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可包括抗原，如能夠特異性結(jié)合識(shí)別感興趣分析物的抗體的抗原?？蓹z測(cè)結(jié)合試劑可包括結(jié)合靶標(biāo)(如肽或小分子)的核酸或核酸模擬適體，或結(jié)合配體的受體，或結(jié)合受體的配體。可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑能夠結(jié)合模擬感興趣分析物的模擬表位，如肽(參見(jiàn)例如，Kieber-Emmons(1998)Immuno1.Res.，1795-108；Shin等(2001)Infect.Immun.，693335-3342；Beenhouwer等(2002)J.Immunol.，1696992-6999；Hou和Gu(2003)J.Immunol.，1704373-4379；和Tang等(2003)Clin.Diagn.Lab.Immunol.，101078-1084，將其全文納入本文作為參考)。
可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑也包括可被檢測(cè)的能力(capacity)，各類型可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選可互相區(qū)別檢測(cè)。可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可被檢測(cè)的能力可以是能夠被檢測(cè)的任何能力，包括例如，用標(biāo)記如顏色標(biāo)記包括染料、金屬溶膠和膠乳顆粒檢測(cè)，或用標(biāo)記如熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、磁性標(biāo)記或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記檢測(cè)的能力?？蓹z測(cè)特異性結(jié)合試劑可被檢測(cè)的能力也可以是(例如)用大小、電荷、極性、疏水性、親水性、親脂性或粘度檢測(cè)。為了在測(cè)試樣品中鑒定一種或多種感興趣分析物，對(duì)某種感興趣分析物特異的各可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑可包括不同的檢測(cè)能力，例如，不同顏色標(biāo)記、不同熒光標(biāo)記或待區(qū)分的任何區(qū)別能力，或其任何組合。
根據(jù)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑選擇的檢測(cè)能力，可將不同檢測(cè)方法用于不同方案。目前可用的檢測(cè)方法各種各樣，可根據(jù)方案使用任何檢測(cè)方法。檢測(cè)方法可包括例如，通過(guò)直接觀察或顯微鏡觀察的方式直接檢測(cè)標(biāo)記如金屬溶膠、著色標(biāo)記、著色珠、著色顆?；驘晒鈽?biāo)記。本發(fā)明的標(biāo)記可以是任何大小，這主要取決于準(zhǔn)備進(jìn)行的測(cè)定和本發(fā)明多孔性部件的孔尺寸或通道尺寸。本發(fā)明標(biāo)記的大小范圍可以是，例如，直徑約0.01微米-50微米，優(yōu)選直徑約0.02微米-2微米。檢測(cè)方法也可包括例如間接檢測(cè)可檢測(cè)標(biāo)記如磁性標(biāo)記、放射性標(biāo)記或測(cè)量散射光以測(cè)定尺寸群(sizepopulation)的改變。
I.檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置和方法(內(nèi)部混合物)本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻在測(cè)試裝置的確定檢測(cè)區(qū)域上結(jié)合一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑而形成的聚集體來(lái)確定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種分析物的新方案。
本發(fā)明包括第一多孔性部件，它包含在檢測(cè)樣品中各自能夠被檢測(cè)和各自能夠結(jié)合測(cè)試樣品中感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。優(yōu)選使第一多孔性部件的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑干燥到第一多孔性部件的反應(yīng)區(qū)或部位上、或暫時(shí)固定到其中，以使干燥的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑充滿第一多孔性部件反應(yīng)區(qū)。在含水或溶解狀態(tài)下，第一多孔性部件中充滿的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑優(yōu)選是基本上可自由移動(dòng)的。
本發(fā)明第一多孔性部件的重要方面是它基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第一多孔性部件，無(wú)論可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑是否結(jié)合于感興趣分析物。而且，第一多孔性部件的孔應(yīng)足夠大，以便基本上不阻止結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的任何凝結(jié)體或聚集體自由流過(guò)第一多孔性部件。
本發(fā)明包括與本發(fā)明第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件。優(yōu)選地，第一多孔性部件的一端接觸并連接第二多孔性部件的一端，形成連接，在該連接處第一多孔性部件終止而第二多孔性部件開(kāi)始與流體接觸。接觸第一多孔性部件的任何水性樣品或液體樣品將借助毛細(xì)管作用向第二多孔性部件移動(dòng)，它先通過(guò)第一和第二多孔性部件連接處并繼續(xù)向第二多孔性部件移動(dòng)。
本發(fā)明第二多孔性部件的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第二多孔性部件。優(yōu)選地，第二多孔性部件基本上保留和阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。
通過(guò)將測(cè)試樣品與本發(fā)明第一多孔性部件接觸測(cè)定測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種分析物。測(cè)試樣品借助毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)第一多孔性部件，第一多孔性部件的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑溶解并與測(cè)試樣品混合形成混合物。如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合這一種或多種感興趣分析物形成復(fù)合物，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物借助毛細(xì)流動(dòng)自由通過(guò)第一多孔性部件流向本發(fā)明第二多孔性部件。在第一和第二多孔性部件連接處，如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，則第二多孔性部件基本上保留結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，該第二多孔性部件基本上不使結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物自由通過(guò)第二多孔性部件。測(cè)定到存在基本上在第一和第二多孔性部件連接處聚集的結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物聚集體說(shuō)明樣品中存在一種或多種感興趣分析物。而且，如果根據(jù)(例如)為該檢測(cè)指定的不同標(biāo)記的顏色或不同標(biāo)記的熒光區(qū)分開(kāi)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑并與特定感興趣分析物相關(guān)聯(lián)，就揭示了懷疑存在于測(cè)試樣品中的一種或多種感興趣分析物各自的身份?；蛘?，如果測(cè)試樣品中不存在一種或多種感興趣分析物，則基本上沒(méi)有形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，因此第二多孔性部件沒(méi)有保留復(fù)合物，這使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件。除了凝結(jié)、凝集、沉淀、聚集、形成凝塊或形成栓塞外，還可將用任何方法或適當(dāng)?shù)靥岣哒扯扔米鳈z測(cè)方案的一部分。
除了上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如位于第二多孔性部件以保證測(cè)試已完成的控制區(qū)(control zone)。該控制區(qū)優(yōu)選位于第二多孔性部件上，離開(kāi)第一和第二多孔性部件的連接處一段距離。該控制區(qū)可包括第二多孔性部件上離開(kāi)第一和第二多孔性部件的連接處一段距離的一塊區(qū)域，它可說(shuō)明測(cè)試樣品已通過(guò)檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件的連接處?？刹捎每刂苹衔锶缰芤海膳c測(cè)試樣品混合并在控制區(qū)檢測(cè)，說(shuō)明測(cè)試樣品已通過(guò)該裝置的第一和第二多孔性部件連接處?？刂苹衔镆部梢允?例如)控制性可檢測(cè)標(biāo)記如控制膠乳。該控制區(qū)可包括固定的能夠檢測(cè)控制化合物的特異性結(jié)合試劑?？刂苹衔锟砂?例如)不結(jié)合第一多孔性部件的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的已知物質(zhì)?？刂苹衔锟膳c樣品混合，通過(guò)第一和第二多孔性部件，不在第一和第二多孔性部件的連接處保留，到達(dá)控制區(qū)，在這里結(jié)合控制區(qū)中固定的特異性結(jié)合試劑，說(shuō)明測(cè)試樣品已經(jīng)通過(guò)測(cè)試裝置并通過(guò)第一和第二多孔性部件連接處。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括用于特定目的的其它添加劑，例如緩沖液、酶抑制劑、酶底物或輔因子、防腐劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、去污劑、糖、促進(jìn)劑(facilitator)、激活劑、氧化劑、還原劑或用于特定目的所需的任何其它添加劑。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，例如與本發(fā)明第一多孔性部件流體相連的吸收墊。吸收墊可由能夠保持水性樣品或液體樣品與第一多孔性部件流體相連以使樣品可借助毛細(xì)管作用均勻地流過(guò)第一多孔性部件的任何材料制成。本發(fā)明也可包括與第二多孔性部件遠(yuǎn)端流體相連的吸收墊，它具有足夠的液體吸收容量，用作測(cè)試裝置末端的遠(yuǎn)端吸收器(sink)以去除本發(fā)明組件中多余的液體樣品。
本發(fā)明也可包括例如，位于第一多孔性部件和第二多孔性部件之間并與第一和第二多孔性部件連續(xù)流體相連的濾器。該濾器的作用可以是濾除或捕集測(cè)試樣品中可能存在的超過(guò)某所需范圍的較大組分。例如，如果測(cè)試樣品包括血樣，則該濾器可用于濾除血細(xì)胞或大于所需尺寸的其它血液組分。
可使本發(fā)明適合以多個(gè)相似的如上所述流體相連的第一多孔性部件和第二多孔性部件的形式應(yīng)用?？捎眠@些多個(gè)多孔性部件(例如)在同一測(cè)試樣品上同時(shí)進(jìn)行不同所需測(cè)試?？梢云叫薪Y(jié)構(gòu)或彼此堆積在頂部的形式使用這些多個(gè)多孔性部件。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如外殼。該外殼可由能夠罩住本發(fā)明組件的任何剛性材料制成。該外殼可優(yōu)選由防滲材料組成，所述材料將液體樣品和本發(fā)明的組件容納于設(shè)備內(nèi)部而不允許任何滲漏物透過(guò)。該外殼可由(例如)塑料、玻璃、金屬、橡膠或任何其它防滲材料組成。該外殼可優(yōu)選包括一個(gè)或多個(gè)孔隙。該外殼可包括(例如)位于第一多孔性部件區(qū)域上方用作將測(cè)試樣品引入第一多孔性部件的入口、離開(kāi)第一和第二多孔性部件連接處一段距離的孔隙。該外殼也可包括位于檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件連接區(qū)域上方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試結(jié)果是陽(yáng)性或陰性。該外殼也可包括位于控制區(qū)上方、位于第二多孔性部件上方離開(kāi)檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件連接處一段距離的地方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試是否完成。
II.檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置和方法(外部混合物)本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻在測(cè)試裝置的確定檢測(cè)區(qū)上一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合形成的聚集體來(lái)測(cè)定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種分析物的新方案。
本發(fā)明包括當(dāng)加入測(cè)試樣品時(shí)各自能夠被檢測(cè)并且各自能夠結(jié)合測(cè)試樣品中感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑。可將本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑單獨(dú)與懷疑含有一種或多種感興趣分析物的測(cè)試樣品混合形成混合物，孵育足以使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合測(cè)試樣品中一種或多種感興趣分析物的時(shí)間。適當(dāng)?shù)胤跤?，用測(cè)試樣品和可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的混合物運(yùn)行通過(guò)本發(fā)明測(cè)試裝置。
本發(fā)明包括第一多孔性部件，它可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠通過(guò)毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。
本發(fā)明第一多孔性部件的重要方面是它基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第一多孔性部件，無(wú)論可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑是否結(jié)合感興趣分析物。而且，第一多孔性部件的孔應(yīng)足夠大，以便基本上不阻止結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的任何凝結(jié)體或聚集體自由流過(guò)第一多孔性部件。
本發(fā)明包括與本發(fā)明第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件。優(yōu)選地，第一多孔性部件的一端接觸并連接第二多孔性部件的一端，形成連接，在該連接處第一多孔性部件終止而第二多孔性部件開(kāi)始與流體接觸。接觸第一多孔性部件的任何水性樣品或液體樣品將借助毛細(xì)管作用向第二多孔性部件移動(dòng)，它先通過(guò)第一和第二多孔性部件連接處并繼續(xù)向第二多孔性部件移動(dòng)。
本發(fā)明第二多孔性部件的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件。優(yōu)選地，第二多孔性部件基本上保留或阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。
可通過(guò)以下方法測(cè)定測(cè)試樣品將懷疑含有一種或多種感興趣分析物的測(cè)試樣品與本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑單獨(dú)混合形成混合物，孵育足以使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合測(cè)試樣品中一種或多種感興趣分析物的時(shí)間。通過(guò)使測(cè)試樣品和可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑混合物接觸本發(fā)明第一多孔性部件確定測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種分析物。如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，那么一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合一種或多種感興趣分析物，在測(cè)試混合物中形成復(fù)合物，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物借助毛細(xì)流動(dòng)自由通過(guò)第一多孔性部件流向本發(fā)明第二多孔性部件。在第一和第二多孔性部件連接處，如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，則第二多孔性部件基本上保留結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，該第二多孔性部件基本上不允許結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物自由通過(guò)它。測(cè)定到存在基本上在第一和第二多孔性部件連接處聚集的結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物聚集體能夠說(shuō)明樣品中存在一種或多種感興趣分析物。而且，如果根據(jù)(例如)為該檢測(cè)指定的不同標(biāo)記的顏色或不同標(biāo)記的熒光區(qū)分開(kāi)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑并與特定感興趣分析物相關(guān)聯(lián)，就揭示了懷疑存在于測(cè)試樣品中的一種或多種感興趣分析物各自的身份?；蛘撸绻麥y(cè)試樣品中不存在一種或多種感興趣分析物，則基本上沒(méi)有形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，因此第二多孔性部件沒(méi)有保留復(fù)合物，這使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件。除了凝結(jié)、凝集、沉淀、聚集、形成凝塊或形成栓塞外，還可將用任何方法或適當(dāng)?shù)靥岣哒扯扔米鳈z測(cè)方案的一部分。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如位于第二多孔性部件以保證已完成測(cè)試的控制區(qū)。該控制區(qū)優(yōu)選位于第二多孔性部件上，離開(kāi)第一和第二多孔性部件的連接處一段距離。該控制區(qū)可包括第二多孔性部件上離開(kāi)第一和第二多孔性部件的連接處一段距離的一塊區(qū)域，它可說(shuō)明測(cè)試樣品己通過(guò)檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件的連接處。可采用控制化合物如著色溶液，它可與測(cè)試樣品混合并在控制區(qū)檢測(cè)，說(shuō)明測(cè)試樣品已通過(guò)該裝置的第一和第二多孔性部件連接處?？刂苹衔镆部梢允?例如)控制性可檢測(cè)標(biāo)記如控制膠乳。該控制區(qū)可包括固定的能夠檢測(cè)控制化合物的特異性結(jié)合試劑?？刂苹衔锟砂?例如)不結(jié)合用于測(cè)定測(cè)試樣品的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的已知物質(zhì)?？刂苹衔锟膳c樣品混合，通過(guò)第一和第二多孔性部件，不在第一和第二多孔性部件的連接處保留，到達(dá)控制區(qū)，在這里結(jié)合控制區(qū)中固定的特異性結(jié)合試劑，說(shuō)明測(cè)試樣品已經(jīng)通過(guò)測(cè)試裝置并通過(guò)第一和第二多孔性部件連接處。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括用于特定目的的其它添加劑，例如緩沖液、酶抑制劑、酶底物或輔因子、防腐劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、去污劑、糖、促進(jìn)劑、激活劑、氧化劑、還原劑或用于特定目的所需的任何其它添加劑。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，例如與本發(fā)明第一多孔性部件流體相連的吸收墊。吸收墊可由能夠保持水性樣品或液體樣品與第一多孔性部件流體相連以使樣品可借助毛細(xì)管作用均勻地流過(guò)第一多孔性部件的任何材料制成。本發(fā)明也可包括與第二多孔性部件遠(yuǎn)端流體相連的吸收墊，它具有足夠的液體吸收容量，用作測(cè)試裝置末端的遠(yuǎn)端吸收器以去除本發(fā)明組件中多余的液體樣品。
本發(fā)明也可包括例如，位于第一多孔性部件和第二多孔性部件之間并與第一和第二多孔性部件連續(xù)流體相連的濾器。該濾器的作用可以是濾除或捕集測(cè)試樣品中可能存在的超過(guò)某所需范圍的較大組分。例如，如果測(cè)試樣品包括血樣，則該濾器可用于濾除血細(xì)胞或大于所需尺寸的其它血液組分。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如外殼。該外殼可由能夠罩住本發(fā)明組件的任何剛性材料制成。該外殼優(yōu)選由防滲材料組成，所述材料將液體樣品和本發(fā)明的組件容納于設(shè)備內(nèi)部而不允許任何滲漏物透過(guò)。該外殼可由(例如)塑料、玻璃、金屬、橡膠或任何其它防滲材料組成。該外殼可優(yōu)選包括一個(gè)或多個(gè)孔隙。該外殼可包括(例如)位于第一多孔性部件區(qū)域上方用作將測(cè)試樣品引入第一多孔性部件的入口、離開(kāi)第一和第二多孔性部件連接處一段距離的孔隙。該外殼也可包括位于檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件連接區(qū)域上方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試結(jié)果是陽(yáng)性或陰性。該外殼也可包括位于控制區(qū)上方、位于第二多孔性部件上方離開(kāi)檢測(cè)區(qū)或第一和第二多孔性部件連接處一段距離的地方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試是否完成。
III檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置和方法(內(nèi)部混合物-3多孔性部件)
本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻在測(cè)試裝置的確定檢測(cè)區(qū)上一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合形成的聚集體來(lái)測(cè)定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種分析物的新方案。感興趣分析物可包括能夠被檢測(cè)的任何分析物。
本發(fā)明包括第一多孔性部件，它可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠保留液體并允許液體通過(guò)毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送走的任何類型的材料。這種材料包括但不限于玻璃纖維、硝酸纖維素、紙、石英、硅、硅氧化物、陶瓷、聚合塑料、環(huán)烯烴及其共聚物、纖維素聚合物、金屬、或由這些材料的組合構(gòu)成的復(fù)合材料。
本發(fā)明包括第二多孔性部件，它可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠借助毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。這種材料包括但不限于玻璃纖維、硝酸纖維素、紙、石英、硅、硅氧化物、陶瓷、聚合塑料、環(huán)烯烴及其共聚物、纖維素聚合物、金屬、或由這些材料的組合構(gòu)成的復(fù)合材料。
本發(fā)明第二多孔性部件的重要方面是它基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第一多孔性部件，無(wú)論可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑是否結(jié)合于感興趣分析物。而且，第一多孔性部件的孔應(yīng)足夠大，以便基本上不阻止結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的任何凝結(jié)體或聚集體自由流過(guò)第一多孔性部件。
本發(fā)明包括與本發(fā)明第二多孔性部件流體相連的第三多孔性部件。優(yōu)選地，第二多孔性部件的一端接觸并連接第三多孔性部件的一端，形成連接，在該連接處第二多孔性部件終止而第三多孔性部件開(kāi)始與流體接觸。接觸第二多孔性部件的任何水性樣品或液體樣品將借助毛細(xì)管作用向第三多孔性部件移動(dòng)，它先通過(guò)第二和第三多孔性部件連接處并繼續(xù)向第三多孔性部件移動(dòng)。本發(fā)明第三多孔性部件可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠借助毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。
本發(fā)明第三多孔性部件的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該第三多孔性部件。優(yōu)選地，第三多孔性部件基本上保留或阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。
通過(guò)將測(cè)試樣品與本發(fā)明第一多孔性部件接觸測(cè)定測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種分析物。然后，第一多孔性部件保留測(cè)試樣品，此時(shí)第一多孔性部件的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑溶解并與測(cè)試樣品混合形成混合物。如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合一種或多種感興趣分析物形成復(fù)合物。當(dāng)含有測(cè)試樣品混合物的本發(fā)明第一多孔性部件接觸本發(fā)明第二多孔性部件時(shí)，可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物從第一多孔性部件通過(guò)毛細(xì)流動(dòng)自由移動(dòng)到第二多孔性部件中，流向本發(fā)明第三多孔性部件。在第二和第三多孔性部件連接處，如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，則第三多孔性部件基本上保留結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，該第三多孔性部件基本上不允許結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物自由通過(guò)它。測(cè)定到存在基本上在第二和第三多孔性部件連接處聚集的結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物聚集體能夠說(shuō)明樣品中存在一種或多種感興趣分析物。而且，如果根據(jù)(例如)為該檢測(cè)指定的不同標(biāo)記的顏色或不同標(biāo)記的熒光區(qū)分開(kāi)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑并與特定感興趣分析物相關(guān)聯(lián)，就揭示了懷疑存在于測(cè)試樣品中的一種或多種感興趣分析物各自的身份。或者，如果測(cè)試樣品中不存在一種或多種感興趣分析物，基本上沒(méi)有形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，因此第二多孔性部件沒(méi)有保留復(fù)合物，這使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第二多孔性部件。除了凝結(jié)、凝集、沉淀、聚集、凝塊或形成栓塞外，還可將用任何方法或適當(dāng)?shù)靥岣哒扯扔米鳈z測(cè)方案的一部分。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如位于第三多孔性部件以保證已完成測(cè)試的控制區(qū)。該控制區(qū)優(yōu)選位于第三多孔性部件上，離開(kāi)第二和第三多孔性部件的連接處一段距離。該控制區(qū)可包括第三多孔性部件上離開(kāi)第二和第三多孔性部件的連接處一段距離的一塊區(qū)域，它可說(shuō)明測(cè)試樣品已通過(guò)檢測(cè)區(qū)或第二和第三多孔性部件的連接處?？刹捎每刂苹衔锶缰芤海膳c測(cè)試樣品混合并在控制區(qū)檢測(cè)，說(shuō)明測(cè)試樣品已通過(guò)裝置的第二和第三多孔性部件連接處?？刂苹衔镆部梢允?例如)控制性可檢測(cè)標(biāo)記如控制膠乳。該控制區(qū)可包括固定的能夠檢測(cè)控制化合物的特異性結(jié)合試劑?？刂苹衔锟砂?例如)不結(jié)合第一多孔性部件的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的已知物質(zhì)。控制化合物可與樣品混合，接觸第二多孔性部件后從第一多孔性部件流向第二多孔性部件，通過(guò)第二和第三多孔性部件，不在第二和第三多孔性部件的連接處保留，到達(dá)控制區(qū)，在這里結(jié)合控制區(qū)中固定的特異性結(jié)合試劑，說(shuō)明測(cè)試樣品已經(jīng)通過(guò)測(cè)試裝置并通過(guò)第二和第三多孔性部件連接處。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括用于特定目的的其它添加劑，例如緩沖液、酶抑制劑、酶底物或輔因子、防腐劑、穩(wěn)定劑、去污劑、糖、促進(jìn)劑、激活劑、氧化劑、還原劑或用于特定目的所需的任何其它添加劑。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，例如與本發(fā)明第一多孔性部件或第二多孔性部件流體相連的吸收墊。吸收墊可由能夠保持水性樣品或液體樣品與第一多孔性部件或第二多孔性部件流體相連的任何材料制成。如果吸收墊與第一多孔性部件流體相連，樣品可均勻地通過(guò)第一多孔性部件保留并在接觸第二多孔性部件后均勻地轉(zhuǎn)移到第二多孔性部件上，并借助毛細(xì)管作用均勻流過(guò)第一多孔性部件。如果吸收墊與第二多孔性部件流體相連，樣品可借助毛細(xì)管作用均勻地流過(guò)第二多孔性部件和流入第二多孔性部件。本發(fā)明也可包括與第三多孔性部件遠(yuǎn)端流體相連的吸收墊，它具有足夠的液體吸收容量，用作測(cè)試裝置末端的遠(yuǎn)端吸收器以去除本發(fā)明組件中多余的液體樣品。
本發(fā)明也可包括例如，位于第二多孔性部件和第三多孔性部件之間并與第一和第二多孔性部件連續(xù)流體相連的濾器。該濾器的作用可以是濾除或捕集測(cè)試樣品中可能存在的超過(guò)某所需范圍的較大組分。例如，如果測(cè)試樣品包括血樣，則該濾器可用于濾除血細(xì)胞或大于所需尺寸的其它血液組分。
可使本發(fā)明適合以多個(gè)相似的流體相連的第二多孔性部件和第三多孔性部件的形式應(yīng)用?？捎眠@些多個(gè)多孔性部件(例如)在同一測(cè)試樣品上同時(shí)進(jìn)行不同所需測(cè)試。可以平行結(jié)構(gòu)或彼此堆積在頂部的形式使用這些多個(gè)多孔性部件。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如外殼。該外殼可由能夠罩住本發(fā)明組件的任何剛性材料制成。該外殼優(yōu)選由防滲材料組成，所述材料將液體樣品和本發(fā)明的組件容納于設(shè)備內(nèi)部而不允許任何滲漏物透過(guò)。該外殼可由(例如)塑料、玻璃、金屬、橡膠或任何其它防滲材料組成。該外殼可優(yōu)選包括一個(gè)或多個(gè)孔隙。該外殼可包括(例如)位于第二多孔性部件區(qū)域上方用作將測(cè)試樣品引入第二多孔性部件的入口、離開(kāi)第二和第三多孔性部件連接處一段距離的孔隙。該外殼也可包括位于檢測(cè)區(qū)或第二和第三多孔性部件連接區(qū)域上方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試結(jié)果是陽(yáng)性或陰性。該外殼也可包括位于控制區(qū)上方、位于第三多孔性部件上方離開(kāi)檢測(cè)區(qū)或第二和第三多孔性部件連接處一段距離的地方的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試是否完成。
IV.檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置和方法(外部混合物-單個(gè)多孔性部件)本發(fā)明包括通過(guò)色譜排阻在測(cè)試裝置的確定檢測(cè)區(qū)上一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合形成的聚集體測(cè)定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種分析物的新方案。感興趣分析物可包括能夠被檢測(cè)的任何分析物。
本發(fā)明包括當(dāng)加入測(cè)試樣品時(shí)各自能夠被檢測(cè)并且各自能夠結(jié)合測(cè)試樣品中感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑?？蓪⒈景l(fā)明檢測(cè)特異性結(jié)合試劑單獨(dú)與懷疑含有一種或多種感興趣分析物的測(cè)試樣品混合形成混合物，孵育足以使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合測(cè)試樣品中一種或多種感興趣分析物的時(shí)間。適當(dāng)?shù)胤跤?，用測(cè)試樣品混合物和可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑運(yùn)行通過(guò)本發(fā)明測(cè)試裝置。
本發(fā)明包括具有第一端和第二端的多孔性部件，它可由以下類型的材料組成或包括以下類型的材料能夠通過(guò)毛細(xì)管作用、毛細(xì)流動(dòng)、芯吸作用或液體樣品的簡(jiǎn)單濕潤(rùn)傳送液體樣品的任何類型的材料。這種材料包括但不限于玻璃纖維、硝酸纖維素、紙、石英、硅、硅氧化物、陶瓷、聚合塑料、環(huán)烯烴及其共聚物、纖維素聚合物、金屬、或由這些材料的組合構(gòu)成的復(fù)合材料。
毛細(xì)管作用提供使液體通過(guò)該裝置的驅(qū)動(dòng)力或抽運(yùn)力。該裝置通常以水平位置應(yīng)用，從而使液體樣品毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)該裝置通常是側(cè)向流動(dòng)，這樣不受重力的影響。
本發(fā)明多孔性部件的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該多孔性部件。優(yōu)選地，多孔性部件基本上從多孔性部件中排除任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。
毛細(xì)管作用提供使液體通過(guò)該裝置的驅(qū)動(dòng)力或抽運(yùn)力。該裝置通常以水平位置應(yīng)用，從而使液體樣品毛細(xì)流動(dòng)通過(guò)該裝置通常是側(cè)向流動(dòng)，這樣不受重力的影響。然而，本發(fā)明某些實(shí)施方式可包括施加驅(qū)動(dòng)力，例如重力或離心力。
可通過(guò)以下方法測(cè)定測(cè)試樣品將懷疑含有一種或多種感興趣分析物的測(cè)試樣品與本發(fā)明可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑單獨(dú)混合形成混合物，孵育足以使一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合測(cè)試樣品中一種或多種感興趣分析物的時(shí)間。通過(guò)使測(cè)試樣品和可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑混合物接觸本發(fā)明多孔性部件的第一端確定測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種分析物。如果測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物，那么一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合一種或多種感興趣分析物，在測(cè)試混合物中形成復(fù)合物，多孔性部件中基本上排除了可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，該多孔性部件基本上不允許結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物自由通過(guò)第二多孔性部件。測(cè)定到存在基本上在多孔性部件第一端聚集的結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物聚集體能夠說(shuō)明樣品中存在一種或多種感興趣分析物?；蛘撸诙嗫仔圆考诙嘶旧喜淮嬖谠诙嗫仔圆考谝欢藦亩嗫仔圆考信懦慕Y(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明測(cè)試樣品中存在一種或多種感興趣分析物。而且，如果根據(jù)(例如)為該檢測(cè)指定的不同標(biāo)記的顏色或不同標(biāo)記的熒光區(qū)分開(kāi)一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑并與特定感興趣分析物相關(guān)聯(lián)，就揭示了懷疑存在于測(cè)試樣品中的一種或多種感興趣分析物各自的身份?；蛘?，如果測(cè)試樣品中不存在一種或多種感興趣分析物，則基本上沒(méi)有形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑分析物復(fù)合物，因此多孔性部件沒(méi)有排除復(fù)合物，這使任何未結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)該多孔性部件。除了凝結(jié)、凝集、沉淀、聚集、凝塊或形成栓塞外，還可將用任何方法或適當(dāng)?shù)靥岣哒扯扔米鳈z測(cè)方案的一部分。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括用于特定目的的其它添加劑，例如緩沖液、酶抑制劑、酶底物或輔因子、防腐劑、穩(wěn)定劑、去污劑、糖、促進(jìn)劑、激活劑、氧化劑、還原劑或用于特定目的所需的任何其它添加劑。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，例如與本發(fā)明多孔性部件第一端、第二端或兩端流體相連的吸收墊。吸收墊可由能夠保持水性樣品或液體樣品與多孔性部件流體相連以使樣品可借助毛細(xì)管作用均勻地流過(guò)多孔性部件的任何材料制成。
除上述本發(fā)明組件外，本發(fā)明還可包括其它組件，如外殼。該外殼可由能夠罩住本發(fā)明組件的任何剛性材料制成。該外殼可優(yōu)選由防滲材料組成，所述材料將液體樣品和本發(fā)明的組件容納于設(shè)備內(nèi)部而不允許任何滲漏物透過(guò)。該外殼可由(例如)塑料、玻璃、金屬、橡膠或任何其它防滲材料組成。該外殼可優(yōu)選包括一個(gè)或多個(gè)孔隙。該外殼可包括(例如)位于多孔性部件第一端用作將測(cè)試樣品引入多孔性部件的入口的孔隙。該外殼也可包括位于控制區(qū)區(qū)域上方、位于多孔性部件第二端附近的孔隙，以允許檢測(cè)測(cè)試是否完成。
實(shí)施例實(shí)施例1檢測(cè)金黃色葡萄球菌本實(shí)施例提供了檢測(cè)二甲氧基苯青霉素(methycillin)抗性金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus)(“MRSA”)的裝置。用Pastorex Staph Plus(Biorad，編號(hào)#65356)證明了本發(fā)明的可行性和實(shí)用性。作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照，根據(jù)廠商說(shuō)明書(shū)對(duì)MRSA漿液進(jìn)行玻片凝集測(cè)定。在含有測(cè)試膠乳和MRSA混合物的孔中觀察到中度凝集，在含有MRSA和對(duì)照膠乳混合物的孔中沒(méi)有觀察到凝集。
為鑒定合適的色譜介質(zhì)，將紅色膠乳測(cè)試顆粒的懸液施加于幾種類型的介質(zhì)，包括硝酸纖維素和多孔性聚乙烯。選擇具有合適的色譜特性的多孔性聚乙烯膜(Porex，編號(hào)#181071)。當(dāng)將未處理的顆粒施加在該膜上時(shí)，顆粒均勻地填充到孔隙體積中，使整個(gè)膜產(chǎn)生暗紅色。用雙面膠將18毫米寬的膜帶層疊在透明聚碳酸酯支持物上，然后切成6毫米寬的測(cè)試條帶。
下一步，將25微升測(cè)試顆粒和25微升對(duì)照膠乳顆粒分散到單獨(dú)的新管中。各管中加入0.5毫升黃色食用色素，以賦予清澈溶液對(duì)比色。將5毫升熱殺的MRSA加入各管，混合并在室溫下孵育1分鐘。將12毫升測(cè)試混合物或?qū)φ栈旌衔锛尤雴为?dú)膜條帶近端，通過(guò)毛細(xì)管作用快速浸潤(rùn)該膜。如同上述未處理的膠乳，沒(méi)有從膜上排除對(duì)照膠乳，在樣品施用區(qū)域遠(yuǎn)端的條帶末端暗紅色/橙色清晰可見(jiàn)。然而，聚集的測(cè)試膠乳被排阻而不能進(jìn)入膜，僅在條帶遠(yuǎn)端可見(jiàn)溶液的黃色對(duì)比色。
為測(cè)試該測(cè)定系統(tǒng)的相對(duì)靈敏度，用上述色譜方法和載片凝集測(cè)定測(cè)試10倍稀釋的MRSA漿液。稀釋樣品產(chǎn)生相同的明顯黃色說(shuō)明在色譜介質(zhì)上通過(guò)凝集進(jìn)行了分離。然而，在玻片凝集測(cè)定中僅觀察到微弱和由此確定的聚集。這說(shuō)明從一開(kāi)始就增強(qiáng)了本發(fā)明內(nèi)在的靈敏度，即使用單一色譜系統(tǒng)。
實(shí)施例II檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌本實(shí)施例提供了檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)(“StrepA”)的裝置。
構(gòu)建凝集分離條帶構(gòu)建凝集分離條帶的材料-Millipore硝酸纖維膜長(zhǎng)18毫米，寬6毫米(Millipore，Inc.，編號(hào)#PK002057；100％硝酸纖維素膜)-橋墊(Ahlstrom 1281；90％纖維素纖維，10％人造纖維，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂和聚丙烯酰胺干強(qiáng)樹(shù)脂)-吸收墊(Ahlstrom 939；100％纖維素，含有痕量聚酰胺(polymide)濕強(qiáng)樹(shù)脂)-Lexan墊板(Lexan#8010)構(gòu)建抗體捕獲條帶的材料-Millipore硝酸纖維膜長(zhǎng)18毫米，寬6毫米(Millipore，Inc.，編號(hào)#PK002057)
-橋墊(Ahlstrom 1281)-偶聯(lián)墊(conjugate pad，Hollingsworth & Vose，H&V 7304無(wú)紡材料；聚酯)-Lexan墊板(Lexan#8010)凝集步驟-從結(jié)構(gòu)1中去除金偶聯(lián)墊，加入12×75毫米玻璃管。
-將100微升Strep A溫和對(duì)照加在墊上，孵育所需時(shí)間。孵育后將可得液體轉(zhuǎn)移到較低的橋墊上，進(jìn)行所需時(shí)間的層析。
-在橋墊連接硝酸纖維膜的接界面上讀出患者線或結(jié)果；如果樣品中存在分析物，將產(chǎn)生與金顆粒形成的凝集物并沉積在接界面上。
抗體捕獲步驟-將100微升Strep A溫和對(duì)照加入結(jié)構(gòu)2的底部橋墊-進(jìn)行所需時(shí)間的側(cè)向?qū)游?在抗體捕獲線上讀出結(jié)果結(jié)果(實(shí)驗(yàn)1)對(duì)于非特異性結(jié)合(“NSB”)，用溫和Strep A陽(yáng)性對(duì)照緩沖液條件15分鐘預(yù)孵育15分鐘層析對(duì)照溫和Strep A陽(yáng)性凝集 抗體捕獲目測(cè)信號(hào)強(qiáng)度 2+ 2NSB- -結(jié)果(實(shí)驗(yàn)2)預(yù)孵育動(dòng)力學(xué)研究-溫和Strep A陽(yáng)性對(duì)照-NSB，如上述實(shí)驗(yàn)1-在15分鐘時(shí)全部進(jìn)行層析預(yù)孵育時(shí)間(分鐘)凝集 捕獲抗體5 1.57 1.510 1.512 1.515 1.517 1.520 1.5在20分鐘時(shí)的NSB --實(shí)施例III檢測(cè)測(cè)試樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置的詳述實(shí)施方式參照?qǐng)D1A，本發(fā)明包括在其一端與第一多孔性部件12流體相連的任選的吸收墊11。第一多孔性部件與第二多孔性部件14流體相連，形成連接13。本發(fā)明第一多孔性部件12的重要方面是僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)第一多孔性部件12。第二多孔性部件14的重要方面是它基本上能夠捕獲或阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑從第二多孔性部件14流出，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。本發(fā)明可任選地包括與第二多孔性部件14流體相連的吸收墊14。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明可包括第三多孔性部件16，它包含可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑并用于連接測(cè)試裝置以運(yùn)行測(cè)試。
參照?qǐng)D1B，本發(fā)明包括多孔性部件16，僅當(dāng)可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑未結(jié)合任何分析物時(shí)，它才基本上能夠使任何可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)多孔性部件16，而且它基本上能夠捕獲或阻止任何結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑從多孔性部件16流出，尤其當(dāng)結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑形成結(jié)合的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的凝結(jié)物、凝集物、凝塊或聚集體時(shí)。
實(shí)施例IV檢測(cè)人絨毛膜促性腺素(圖2)本實(shí)施例參考圖2A和圖2B，提供了檢測(cè)人絨毛膜促性腺素(“hCG”)的裝置。
1-吸收墊
2-硝酸纖維膜或其它膜3-橋墊4-偶聯(lián)墊5-樣品墊4，5指該墊是一起或單獨(dú)地用于偶聯(lián)應(yīng)用和樣品應(yīng)用的。
6-透明塑料墊板材料背景hCG(人絨毛膜促性腺素)系統(tǒng)是由于在尿中的激素特征，而用于開(kāi)發(fā)凝集方法的出色候選系統(tǒng)。
在濃度非常低時(shí)激素水平有意義，所以需要有效檢測(cè)10-60mIU。
步驟首先，如上所示構(gòu)建測(cè)試條，并貯存在干燥的容器中。
其次，獲得測(cè)試試劑，其包括-含有hCG濃度為10mIU和60mIU的尿的2個(gè)小瓶。
-用山羊抗hCG抗體吸附包被的440nm膠乳顆粒的1％PEG/PBS緩沖溶液樣品。
第三，通過(guò)在試管中混合液體膠乳-抗體溶液與靶抗原、孵育0-10分鐘，進(jìn)行測(cè)試-將膠乳/抗體加入含有不同水平(mIU)hCG或陰性對(duì)照的試管。
-將該混合物加入上述凝集裝置之一的樣品墊位置。
-在各種測(cè)試中，在零時(shí)刻或稍后時(shí)刻用合適緩沖液(PBS或Malaria緩沖液)“推動(dòng)”樣品。
-然后讀出樣品，注出讀數(shù)時(shí)間和讀出的信號(hào)強(qiáng)度，或無(wú)信號(hào)。
結(jié)果1.-5μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl 60mIU hCG-在試管中混合-孵育10分鐘
-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用于膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用PBS“推動(dòng)”樣品。
-10分鐘后信號(hào)為1+。
2.-5μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl 60mIU hCG-在試管中混合-孵育1分鐘-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用于膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用PBS“推動(dòng)”樣品。
-10分鐘后信號(hào)為0.25+3.-3μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl PBS-在試管中混合-孵育1分鐘-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用于膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用PBS“推動(dòng)”樣品。
-10分鐘后信號(hào)為0，無(wú)NSB。
4.-2μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl(a)PBS，(b)10mIU hCG，(c)60mIU hCG-在試管中混合-孵育10分鐘-采用上述凝集裝置“A”，將ST型硝酸纖維素用于膜(2)。
-將全部42μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用Malaria緩沖液“推動(dòng)”樣品。
-5分鐘后信號(hào)為(a)0，無(wú)NSB；(b)1-；和(c)1。
5.-5μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl(a)陰性尿，(b)10mIU hCG，(c)60mIU hCG-在試管中混合-孵育2分鐘-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用于膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用Malaria緩沖液“推動(dòng)”樣品。
-5分鐘后信號(hào)為(a)0，(b)1，(c)l+。
6.-5μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl(a)陰性尿，(b)10mIU hCG，(c)60mIU hCG-在試管中混合-孵育3分鐘-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用作膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用Malaria緩沖液“推動(dòng)”樣品。
-5分鐘后信號(hào)為(a)0，(b)1/1+，(c)1/1+。
7.-5μl 440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體-40μl(a)陰性尿，(b)60mlU hCG-在試管中混合-無(wú)孵育-采用上述凝集裝置“A”，將SR硝酸纖維素用作膜(2)。
-將全部45μl施加在樣品應(yīng)用墊(4，5)上-用Malaria緩沖液“推動(dòng)”樣品。
-5分鐘后信號(hào)為(a)0.5+，(b)2+/3-。
8.-與等量的干燥緩沖液(2％吐溫-20)混合的440nm膠乳+山羊抗hCG-β抗體，然后干燥在樣品/偶聯(lián)墊上。
-40μl(a)陰性尿，(b)60mIU hCG
-采用上述凝集裝置“B”，將SR硝酸纖維素用作膜(2)。
-將40μl施加在樣品/偶聯(lián)墊(4，5)上-注沒(méi)有孵育時(shí)間，此系統(tǒng)立即混合并運(yùn)行。
-用Malaria緩沖液“推動(dòng)”樣品。
-5分鐘后信號(hào)為(a)0.5，(b)1/1+。
實(shí)施例V用于雙抗原測(cè)定的凝集裝置(圖3)本實(shí)施例參考圖3A和圖3B，并提供了用于雙抗原檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的裝置。
基于卡片的測(cè)定是以標(biāo)準(zhǔn)ICT卡片實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為基礎(chǔ)，外加上位于相反方向的額外測(cè)試條(圖3A)1-觀察抗原A結(jié)果的窗口2-觀察抗原B結(jié)果的窗口3-吸收墊(Ahlstrom 939；100％纖維素，含有痕量聚酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂)4-Millipore硝酸纖維膜長(zhǎng)18毫米，寬6毫米(Millipore，Inc.，編號(hào)#PK002057)或Porex Corp.膜研究AB(membrane research AB，高流速)和膜研究ACB(低流速)，含有Porex專賣(mài)的化學(xué)粒度排阻障礙物。
5-橋墊(Ahlstrom 1281；90％纖維素纖維，10％人造纖維，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂和聚丙烯酰胺干強(qiáng)樹(shù)脂)6-偶聯(lián)墊(Hollingsworth & Vose，H&V 7304無(wú)紡材料；聚酯)7-樣品墊(Ahlstrom 1281；90％纖維素纖維，10％人造纖維，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂和聚丙烯酰胺干強(qiáng)樹(shù)脂)8-樣品插入孔(基于藥簽)基于盒的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)具有類似(圖3B)的測(cè)試條結(jié)構(gòu)9-觀察抗原A結(jié)果的窗口10-樣品端口11-觀察抗原B結(jié)果的窗口構(gòu)律凝集雙抗原測(cè)定的材料-Millipore硝酸纖維膜長(zhǎng)18毫米，寬6毫米(Millipore，Inc.，編號(hào)#PK002057100％硝酸纖維素膜)或Porex Corp.膜研究AB(高流速)和膜研究ACB(低流速)
-橋墊(Ahlstrom 1281；90％纖維素纖維，10％人造纖維，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂和聚丙烯酰胺干強(qiáng)樹(shù)脂)-吸收墊(Ahlstrom 939；100％纖維素，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂)-偶聯(lián)墊(Hollingsworth & Vose，H&V 7304無(wú)紡材料；聚酯)Lexan墊板(Lexan#8010)-樣品墊(Ahlstrom 1281；90％纖維素纖維，10％人造纖維，含有痕量聚丙烯酰胺濕強(qiáng)樹(shù)脂和聚丙烯酰胺干強(qiáng)樹(shù)脂)步驟對(duì)于圖3A和圖3B的系統(tǒng)而言，將100微升體積的樣品加在樣品墊上。
-如果需要偶聯(lián)物進(jìn)一步流動(dòng)，將1×PBSA(pH7.4)加在樣品墊上。
-運(yùn)行15分鐘-根據(jù)不同系統(tǒng)，可以在橋墊和硝酸纖維素膜之間的接界點(diǎn)讀出結(jié)果，或者在施加于Porex膜的300納米排阻化學(xué)障礙物處讀出結(jié)果。
本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中通篇所用名稱“第一”、“第二”或“第三”僅為方便目的，用于避免混淆。這些術(shù)語(yǔ)不用于、不暗示優(yōu)先性、元件結(jié)構(gòu)、反應(yīng)活性等的任何特定順序或排列。
所有標(biāo)題都是為了便于讀者閱讀，不應(yīng)用于限制標(biāo)題后正文的含義，除非另有說(shuō)明。可對(duì)本發(fā)明作出各種變化和改變，而不背離本發(fā)明精神和范圍。因此，本發(fā)明不應(yīng)受限于說(shuō)明書(shū)或附圖所述的內(nèi)容，僅受限于權(quán)利要求書(shū)所列權(quán)利。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括第一多孔性部件，它包括能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；與所述第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件，所述第二多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第二多孔性部件，但當(dāng)所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與所述感興趣分析物結(jié)合時(shí)，所述第二多孔性部件基本上保留所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將所述樣品引入所述第一多孔性部件，借助毛細(xì)流通過(guò)所述第一和第二多孔性部件，在所述第一多孔性部件與所述第二多孔性部件的接界面上出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
2.如權(quán)利要求1所述的裝置，其還包括與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊。
3.如權(quán)利要求2所述的裝置，其還包括位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器。
4.如權(quán)利要求1所述的裝置，其還包括控制區(qū)。
5.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
6.如權(quán)利要求5所述的裝置，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
7.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
8.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
9.如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
10.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
11.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
12.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
13.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
14.如權(quán)利要求9所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
15.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括互相流體相連的第一多孔性部件和第二多孔性部件，在所述第一和第二多孔性部件連接處形成檢測(cè)區(qū)；反應(yīng)區(qū)，其包含能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑，所述反應(yīng)區(qū)位于所述第一多孔性部件上，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑能夠溶解并借助毛細(xì)流移動(dòng)到所述第二多孔性部件中，所述第二多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第二多孔性部件，但基本上阻止了結(jié)合于所述一種或多種感興趣分析物的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)所述第二多孔性部件；其中，將所述樣品引入所述第一多孔性部件并借助毛細(xì)流通過(guò)所述第一和第二多孔性部件，在所述連接處形成所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體積聚說(shuō)明所述樣品中存在所述一種或多種感興趣分析物，在所述連接處不出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體的所述積聚說(shuō)明所述樣品中不存在所述一種或多種感興趣分析物。
16.如權(quán)利要求15所述的裝置，其還包括與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊。
17.如權(quán)利要求16所述的裝置，其還包括位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器。
18.如權(quán)利要求15所述的裝置，其還包括控制區(qū)。
19.如權(quán)利要求15所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
20.如權(quán)利要求19所述的裝置，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
21.如權(quán)利要求15所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
22.如權(quán)利要求15所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
23.如權(quán)利要求15所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
24.如權(quán)利要求23所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
25.如權(quán)利要求23所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
26.如權(quán)利要求23所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
27.如權(quán)利要求23所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
28.如權(quán)利要求23所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
29.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)提供包含能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的第一多孔性部件；b)提供與所述第一多孔性部件流體相連形成連接的第二多孔性部件，所述第二多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第二多孔性部件，但基本上阻止了結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)所述第二多孔性部件；c)將所述樣品引入所述第一多孔性部件，其中所述樣品借助毛細(xì)管作用通過(guò)所述第一和所述第二多孔性部件，使所述第一多孔性部件的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流動(dòng)；其中，在所述第一和第二多孔性部件的所述連接處出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其還包括提供與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊的步驟。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其還包括提供位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器的步驟。
32.如權(quán)利要求29所述的方法，其還包括控制區(qū)以保證測(cè)試的完成。
33.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
35.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
36.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
37.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
39.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
40.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
41.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
42.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
43.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括加入所述樣品時(shí)，能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；第一多孔性部件；與所述第一多孔性部件流體相連的第二多孔性部件，所述第二多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第二多孔性部件，但當(dāng)所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合所述感興趣分析物時(shí)，所述第二多孔性部件基本上保留所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑引入所述樣品形成混合物，將所述混合物引入所述第一多孔性部件并借助毛細(xì)流通過(guò)所述第一和第二多孔性部件，在所述第一多孔性部件與所述第二多孔性部件的接界面上出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
44.如權(quán)利要求43所述的裝置，其還包括與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊。
45.如權(quán)利要求44所述的裝置，其還包括位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器。
46.如權(quán)利要求43所述的裝置，其還包括控制區(qū)。
47.如權(quán)利要求43所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
48.如權(quán)利要求47所述的裝置，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
49.如權(quán)利要求43所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
50.如權(quán)利要求43所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
51.如權(quán)利要求43所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
52.如權(quán)利要求51所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
53.如權(quán)利要求51所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
54.如權(quán)利要求51所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
55.如權(quán)利要求51所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
56.如權(quán)利要求51所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
57.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，所述方法包括以下步驟a)將能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與所述樣品混合形成混合物；b)提供第一多孔性部件；c)提供與所述第一多孔性部件流體相連形成連接的第二多孔性部件，所述第二多孔性部件基本上使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第二多孔性部件，但基本上阻止了結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)所述第二多孔性部件；d)將所述混合物引入所述第一多孔性部件，其中所述混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)所述第一和所述第二多孔性部件；其中，在所述第一和第二多孔性部件的所述連接處出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
58.如權(quán)利要求57所述的方法，其還包括提供與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊的步驟。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其還包括提供位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器的步驟。
60.如權(quán)利要求57所述的方法，其還包括控制區(qū)以保證測(cè)試的完成。
61.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
62.如權(quán)利要求61所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
63.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
64.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
65.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
66.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
67.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
68.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
69.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
70.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
71.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括包含在加入所述樣品時(shí)能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的第一多孔性部件；第二多孔性部件；與所述第二多孔性部件流體相連的第三多孔性部件，所述第三多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第三多孔性部件，但當(dāng)所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物時(shí)，所述第三多孔性部件基本上保留所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；將所述樣品引入所述第一多孔性部件，使所述第一多孔性部件與所述第二多孔性部件流體接觸，其中所述樣品借助毛細(xì)流通過(guò)所述第一、第二和第三多孔性部件，其中在所述第二多孔性部件與所述第三多孔性部件的接界面上出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
72.如權(quán)利要求71所述的裝置，其還包括與所述第二多孔性部件流體相連的吸收墊。
73.如權(quán)利要求72所述的裝置，其還包括位于所述吸收墊和所述第二多孔性部件之間的濾器。
74.如權(quán)利要求71所述的裝置，其還包括控制區(qū)。
75.如權(quán)利要求71所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
76.如權(quán)利要求75所述的裝置，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
77.如權(quán)利要求71所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
78.如權(quán)利要求71所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
79.如權(quán)利要求71所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
80.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
81.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
82.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
83.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
84.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
85.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，所述方法包括以下步驟a)提供第一多孔性部件；b)提供第二多孔性部件；c)提供與所述第二多孔性部件流體相連形成連接的第三多孔性部件，所述第三多孔性部件基本上使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述第三多孔性部件，但基本上阻止結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑流過(guò)所述第三多孔性部件；d)將能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與所述樣品混合形成混合物；e)將所述混合物引入所述第一多孔性部件；f)使所述第一多孔性部件接觸所述第二多孔性部件，其中所述混合物借助毛細(xì)管作用通過(guò)所述第一、第二和第三多孔性部件；其中，在所述第二和第三多孔性部件的所述連接處出現(xiàn)所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
86.如權(quán)利要求85所述的方法，其還包括提供與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊的步驟。
87.如權(quán)利要求86所述的方法，其還包括提供位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器的步驟。
88.如權(quán)利要求85所述的方法，其還包括控制區(qū)以保證測(cè)試的完成。
89.如權(quán)利要求85所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
90.如權(quán)利要求89所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
91.如權(quán)利要求85所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
92.如權(quán)利要求85所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
93.如權(quán)利要求85所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
94.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
96.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
97.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
98.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
99.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
100.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的裝置，該裝置包括加入所述樣品時(shí)，能夠被檢測(cè)和能夠結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；具有第一端和第二端的多孔性部件，所述多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述多孔性部件，但當(dāng)所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑結(jié)合于所述感興趣分析物時(shí)，所述多孔性部件基本上排除所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；其中，將所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑引入所述樣品形成混合物，將所述混合物引入所述多孔性部件第一端并借助毛細(xì)流通過(guò)所述多孔性部件，在所述多孔性部件的所述第二端基本上不出現(xiàn)在所述第一端從所述多孔性部件中排除的所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
101.如權(quán)利要求100所述的裝置，其還包括與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊。
102.如權(quán)利要求101述的裝置，其還包括位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器。
103.如權(quán)利要求100所述的裝置，其還包括控制區(qū)。
104.如權(quán)利要求100所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
105.如權(quán)利要求104述的裝置，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
106.如權(quán)利要求100所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
107.如權(quán)利要求100所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
108.如權(quán)利要求100所述的裝置，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
109.如權(quán)利要求108所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
110.如權(quán)利要求108所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
111.如權(quán)利要求108所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
112.如權(quán)利要求108所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
113.如權(quán)利要求108所述的裝置，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
114.一種檢測(cè)樣品中存在或不存在一種或多種感興趣分析物的方法，該方法包括以下步驟a)將能夠結(jié)合所述樣品中所述一種或多種感興趣分析物的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑與所述樣品混合形成混合物；c)提供具有第一端和第二端的多孔性部件，所述多孔性部件基本上能夠使所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑自由通過(guò)所述多孔性部件，但從所述多孔性部件中基本上排除結(jié)合所述一種或多種感興趣分析物的所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑；d)將所述混合物引入所述多孔性部件的所述第一端，其中所述混合物通過(guò)毛細(xì)管作用通過(guò)所述多孔性部件；其中，在所述多孔性部件的所述第二端基本上不出現(xiàn)在所述第一端從所述多孔性部件中排除的所述結(jié)合的一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑聚集體說(shuō)明存在所述一種或多種感興趣分析物。
115.如權(quán)利要求114所述的方法，其還包括提供與所述第一多孔性部件流體相連的吸收墊的步驟。
116.如權(quán)利要求115所述的方法，其還包括提供位于所述吸收墊和所述第一多孔性部件之間的濾器的步驟。
117.如權(quán)利要求114所述的方法，其還包括控制區(qū)以保證測(cè)試的完成。
118.如權(quán)利要求114所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗體或抗體片段。
119.如權(quán)利要求118所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括Fab片段。
120.如權(quán)利要求114所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括抗原。
121.如權(quán)利要求114所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑包括受體。
122.如權(quán)利要求114所述的方法，其特征在于，所述一種或多種可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑各自包含不同的可檢測(cè)標(biāo)記。
123.如權(quán)利要求122所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括顏色標(biāo)記。
124.如權(quán)利要求122所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括熒光標(biāo)記。
125.如權(quán)利要求122所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記。
126.如權(quán)利要求122所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括磁性標(biāo)記。
127.如權(quán)利要求122所述的方法，其特征在于，所述可檢測(cè)標(biāo)記包括化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。
全文摘要
本發(fā)明涉及凝集測(cè)定，具體涉及色譜排阻測(cè)定及其使用方法。本發(fā)明包括通過(guò)層析排阻在測(cè)試裝置的特定和非隨機(jī)位置上聚集的可檢測(cè)特異性結(jié)合試劑的聚集體來(lái)確定測(cè)試樣品中是否存在一種或多種感興趣分析物的新方案。當(dāng)測(cè)試樣品中不存在感興趣的分析物時(shí)，不形成特異性可檢測(cè)結(jié)合試劑聚集體，因此不從產(chǎn)生不同且容易區(qū)分的事件的色譜介質(zhì)中排除。本發(fā)明特別適合用作在醫(yī)生辦公室或家中檢測(cè)疾病或監(jiān)測(cè)治療的簡(jiǎn)單測(cè)試裝置。
文檔編號(hào)G01N21/78GK101019023SQ200580010581
公開(kāi)日2007年8月15日 申請(qǐng)日期2005年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月17日
發(fā)明者N·特納, R·皮亞西奧, E·皮亞西奧 申請(qǐng)人:比南股份有限公司