專利名稱：用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥保健酒質(zhì)量檢測(cè)的方法，具體涉及用高效液相-氣相色譜指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)由多種中藥原料制備的中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法。
(二)現(xiàn)有技術(shù)中國(guó)勁酒是湖北勁牌公司生產(chǎn)的具有補(bǔ)氣、補(bǔ)腎、滋陰作用的保健酒，主要由黃芪、肉蓯蓉、仙茅、淫羊藿、枸杞、山藥、當(dāng)歸、丁香、肉桂等幾種中藥材制備而成。在產(chǎn)品質(zhì)量控制方面，2000年以前，主要控制指標(biāo)是顏色、固形物、酒精度、口感，2000年以后，在原有基礎(chǔ)上增加了淫羊藿苷、總黃酮、總皂甙、生物堿等定性或定量指標(biāo)。但作為一個(gè)中藥復(fù)方保健酒，其保健功能作用機(jī)理及功能因子非常復(fù)雜，不可能通過控制幾個(gè)指標(biāo)來完全控制產(chǎn)品質(zhì)量，而必須對(duì)它的物質(zhì)群整體予以控制。所以除了微觀分析外，還需要用某種宏觀分析方法，從整體上有效的來表征產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。中藥指紋圖譜系指某種或某產(chǎn)地的中藥材或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段得到的能夠標(biāo)示該中藥材或中成藥特征的色譜、光譜等圖譜。作為中藥質(zhì)量控制方法，國(guó)內(nèi)外對(duì)指紋圖譜的研究方興未艾。在國(guó)際上，圖譜作為中成藥、草藥提取物等含有混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法，已經(jīng)成為醫(yī)藥界共識(shí)。美國(guó)FDA(美國(guó)食品藥物管理局)對(duì)植物藥的質(zhì)量檢測(cè)要求必須制訂指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，所以在申報(bào)IND(Investigational New Drug)的CMC(Chemistry，Manufacture and Control)資料時(shí)，植物物質(zhì)(Botanical DrugSubstance)和植物藥產(chǎn)品(Botanical Drug product)的質(zhì)量控制要采用指紋圖譜。歐共體對(duì)草藥的質(zhì)量控制也采用了指紋圖譜技術(shù)。日本把地道藥材飲片配方煎煮得到的煎汁作為標(biāo)準(zhǔn)提取物，標(biāo)準(zhǔn)提取物的指紋圖譜即為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以此對(duì)生產(chǎn)的原料、配方和工藝作嚴(yán)格控制，使成品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜一致。此外，法國(guó)、德國(guó)、英國(guó)、印度以及WHO等都采用指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行植物藥(草藥)的質(zhì)量評(píng)價(jià)。國(guó)家藥監(jiān)局于2000年下發(fā)《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術(shù)要求》，要求對(duì)中藥注射劑推行指紋圖譜質(zhì)控辦法。而其他中成藥制劑采用中藥指紋圖譜質(zhì)控技術(shù)作為質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也是中藥發(fā)展的必然趨勢(shì)。因此，采用指紋圖譜質(zhì)控技術(shù)，在中藥及相關(guān)產(chǎn)品的真?zhèn)舞b別、質(zhì)量控制、產(chǎn)品創(chuàng)優(yōu)以及生產(chǎn)過程控制等方面將發(fā)揮重要作用。
(三)技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的就是利用中藥指紋圖譜的整體性、特征性和可量化性，提出一種能從宏觀上、整體上檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法。同時(shí)，也為我國(guó)保健酒產(chǎn)業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制提供示范。
本發(fā)明包括下述步驟第一步，建立中國(guó)勁酒對(duì)照指紋圖譜1.中國(guó)勁酒的制備取下述重量份的中藥原料黃芪10-15、肉蓯蓉10-15、仙茅10-15、淫羊藿10-15、枸杞10-15、山藥10-15、當(dāng)歸10-15、丁香3-5、肉桂3-5以總藥材量50倍的30-50°小曲白酒滲漉12-15天得滲漉液，取滲漉液70-75份，分別加入40％糖漿20份、純凈水5-10份、焦糖色適量，調(diào)配，過濾，置常溫下陳釀3-6個(gè)月，過濾除雜，濾膜精濾，灌裝，即得；2.中國(guó)勁酒液相部分對(duì)照品溶液的制備a.乙醚部位取中國(guó)勁酒100ml，以大孔吸附色譜柱去糖，用水飽和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，濾膜過濾，即得；b.5％異戊醇的乙酸乙酯部位將乙醚部位供試品溶液用水飽和的5％異戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，濾膜過濾，即得；3.中國(guó)勁酒氣相部分對(duì)照品溶液的制備直接取中國(guó)勁酒5ml于10ml頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋密封，即得；4.標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備a.液相部分取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.氣相部分用玻璃毛細(xì)管蘸取乙酸龍腦酯、丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品適量于頂空進(jìn)樣瓶中，密封，即得；5.色譜條件a.液相部分色譜柱乙醚部位Hypersil C18柱，5％異戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，流動(dòng)相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫；5％異戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫；流速0.8ml/分鐘檢測(cè)波長(zhǎng)280nm柱溫30℃b.氣相部分色譜柱Agilent HP-5載氣為N2進(jìn)樣器G1888A頂空自動(dòng)進(jìn)樣器；
6.對(duì)照品檢測(cè)a.液相部分乙醚部位分別精密吸取中國(guó)勁酒液相部分乙醚部位對(duì)照品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，即得中國(guó)勁酒乙醚部位對(duì)照指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；5％異戊醇的乙酸乙酯部位分別精密吸取中國(guó)勁酒液相部分5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，即得5％戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照異指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；b.氣相部分分別將氣相部分對(duì)照品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液按頂空進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣進(jìn)行分析測(cè)定，即得氣相部分對(duì)照指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；所述中國(guó)勁酒對(duì)照指紋圖譜中，液相部分乙醚部位的對(duì)照指紋圖譜中共有特征峰10個(gè)，其中7號(hào)峰為阿魏酸，5％戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照指紋圖譜中共有特征峰9個(gè)，其中11號(hào)峰為淫羊藿苷，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；所述氣相部分對(duì)照指紋圖譜中共有特征峰8個(gè)，其中7號(hào)峰為乙酸龍腦酯，8號(hào)峰為丁香酚，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；所述中國(guó)勁酒液相部分乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液制備的具體方法是，取中國(guó)勁酒100ml，40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，上樣于裝有AB-8的大孔吸附層析柱上(12mm×300mm)，用水洗脫至無糖反應(yīng)，(即Molish反應(yīng)為陰性)，后用80ml95％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干。加入20ml水，超聲使溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。先用水飽和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45μ微孔濾膜過濾，即得乙醚部位對(duì)照品溶液；再將此溶液用水飽和的5％異戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，減壓蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45μ微孔濾膜過濾，即得5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液；所述液相部分乙醚部位以乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，其洗脫梯度為在保留時(shí)間為0min、45min、80min、90min、105min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％異戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，其洗脫梯度為在保留時(shí)間為0min、50min、80min、100min、110min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0；所述計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)系指藥典委員會(huì)推薦的由湖南中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心開發(fā)的計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)；中國(guó)勁酒對(duì)照指紋圖譜的建立，使產(chǎn)品的質(zhì)量控制有了非常明確、直觀、易于操作的標(biāo)準(zhǔn)，使用時(shí)只需將檢測(cè)結(jié)果與之進(jìn)行比較即可。
第二步，建立中國(guó)勁酒指紋圖譜共有模式圖譜按中國(guó)勁酒的制備方法、中國(guó)勁酒液相部分和氣相部分對(duì)照品溶液的制備方法、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備方法制備10個(gè)批次的中國(guó)勁酒和標(biāo)準(zhǔn)品、供試品溶液，并逐一按相同方法檢測(cè)，分別得到各批次中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜、5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜、氣相部分指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；分別輸入計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，即可得出中國(guó)勁酒乙醚部位、5％異戊醇的乙酸乙酯部位及氣相部分的指紋圖譜共有模式圖譜；建立共有模式圖譜的作用一是可以將檢測(cè)結(jié)果輸入計(jì)算機(jī)計(jì)算供試品與共有模式圖譜之間的相關(guān)系數(shù)，從理論上考察供試品與共有模式圖譜之間的相似度，從而達(dá)到控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的；二是方便多個(gè)批次的產(chǎn)品之間進(jìn)行比較，以考察生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性，產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以確保為消費(fèi)者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。
第三步，供試品檢測(cè)1.供試品溶液的制備以上述相同方法分別制備液相部分乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯供試品溶液及氣相部分供試品溶液；2.以上述相同方法分別制備液相部分和氣相部分標(biāo)準(zhǔn)品溶液；3.以上述相同方法測(cè)定待測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品和供試品；4.結(jié)果分析判定乙醚部位供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的10個(gè)特征峰，其中7號(hào)峰為阿魏酸，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的9個(gè)特征峰；其中11號(hào)峰為淫羊藿苷，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；兩個(gè)部分的指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.9000；氣相部分供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的8個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為乙酸龍腦酯，8號(hào)峰為丁香酚，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；其指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.9000；本發(fā)明的原理是基于中國(guó)勁酒中含有大量非揮發(fā)性成分和部分原料中含有揮發(fā)性成分，而且非揮發(fā)性成分在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，由于中國(guó)勁酒是由多位藥材制備而成，化學(xué)成分復(fù)雜，根據(jù)其主要化學(xué)成分的性質(zhì)，將成品分離成乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯部位，分別采用液相和氣相色譜對(duì)非揮發(fā)性成分和揮發(fā)性成分進(jìn)行檢測(cè)；在研究過程中還分別對(duì)提取方法、檢測(cè)方法、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性、精密性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性等進(jìn)行考察，根據(jù)10批以上中試產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果，建立了產(chǎn)品對(duì)照指紋圖譜和共有模式圖譜；并確定供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜之間的相關(guān)系數(shù)為0.9000；因此，從色譜的整體面貌特征上能把握中國(guó)勁酒的質(zhì)量情況。
下面是對(duì)本方法進(jìn)行考察的部分結(jié)果(1)重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一樣品溶液，按供試品制備方法及檢測(cè)方法操作6次，計(jì)算相似度，結(jié)果表明，中國(guó)勁酒乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯部位的液相指紋圖譜和氣相部分指紋圖譜6次檢測(cè)結(jié)果的相似度均大于0.9000，方法重現(xiàn)性較好；(2)十批樣品指紋圖譜相似度考察對(duì)隨機(jī)收集的10個(gè)批次中國(guó)勁酒指紋圖譜進(jìn)行相似度考察，計(jì)算結(jié)果顯示，10個(gè)批次的相似度均大于0.9000，提示本方法不僅能從整體上控制勁酒產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，還能對(duì)生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行有效的監(jiān)控；(3)市售同類產(chǎn)品比較用本方法對(duì)市售8種同類產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，比較各產(chǎn)品指紋圖譜，可以明顯的看出這8種保健酒的乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯部位的液相指紋圖譜與本公司生產(chǎn)的中國(guó)勁酒均有很大的差異，說明本發(fā)明的檢測(cè)方法具有較好的專屬性和特征性；不僅能控制產(chǎn)品質(zhì)量，還能對(duì)本公司產(chǎn)品進(jìn)行有效識(shí)別；四

圖1是中國(guó)勁酒乙醚部位對(duì)照指紋圖譜圖2是中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照指紋圖譜圖3是中國(guó)勁酒成品氣相部分對(duì)照指紋圖譜圖4是中國(guó)勁酒乙醚部位共有模式圖譜圖5是中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位共有模式圖譜圖6是中國(guó)勁酒氣相部分共有模式圖譜圖7是批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜圖8是批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜
圖9是批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒氣相部分指紋圖譜圖10是批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜圖11是批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜圖12是批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒氣相部分指紋圖譜圖13是批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜圖14是批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜圖15是批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒氣相部分指紋圖譜圖16是20041220、20050425、20050723三個(gè)批號(hào)中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果17是20041220、20050425、20050723三個(gè)批號(hào)中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果18是20041220、20050425、20050723三個(gè)批號(hào)中國(guó)勁酒氣相部分指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果19是阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜圖20是淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜圖21是乙酸龍腦酯標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜圖22是丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜具體實(shí)施例方式實(shí)施例1批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒的質(zhì)量檢測(cè)1、樣品來源 勁牌公司倉(cāng)庫(kù)2、樣品批號(hào) 200412203、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備a.液相部分取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.氣相部分用玻璃毛細(xì)管蘸取乙酸龍腦酯、丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品適量于頂空進(jìn)樣瓶中，密封，即得；4、供試品溶液的制備取批號(hào)為20041220的中國(guó)勁酒100ml，40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，上樣于裝有AB-8的大孔吸附層析柱上(12mm×300mm)，用水洗脫至無糖反應(yīng)，(即Molish反應(yīng)為陰性)，后用80ml 95％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干。加入20ml水，超聲使溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。先用水飽和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45μ微孔濾膜過濾，即得乙醚部位供試品溶液；再將此溶液用水飽和的5％異戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，減壓蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45μ微孔濾膜過濾，即得5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品溶液；5、主要儀器與試藥a.儀器色譜儀 瓦里安公司儀器(230泵330檢測(cè)器7725i手動(dòng)進(jìn)樣器AT-830柱溫箱)及Agilent6890日本EYELA1000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀b.試藥乙醚 天津產(chǎn) 分析純異戊醇 天津產(chǎn) 分析純乙酸乙酯 北京產(chǎn) 分析純乙腈USAJ.T.Baker色譜純磷酸 北京產(chǎn) 分析純水樂百氏純凈水一次蒸餾N2高純氮?dú)?，純?9.999％中國(guó)勁酒樣品 湖北勁牌公司生產(chǎn)
6.色譜條件a.液相部分色譜柱乙醚部位Hypersil BDS C18，4.6×250mm，5μm5％異戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，4.6×250mm，5um流動(dòng)相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，在保留時(shí)間為0min、45min、80min、90min、105min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％異戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，在保留時(shí)間為0min、50min、80min、100min、110min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0；流速0.8ml/分鐘檢測(cè)波長(zhǎng)280nm柱溫30℃b.氣相部分色譜柱Agilent HP-5，30m×320m×0.25μm進(jìn)樣口溫度230℃FID檢測(cè)器溫度260℃升溫程序初始60℃，保持12min，6℃/min升至210℃，保持3min載氣為N2，流速1.0ml/min，恒流方式，分流比5∶1進(jìn)樣器G1888A頂空自動(dòng)進(jìn)樣器，頂空瓶溫度85℃，進(jìn)樣閥溫度100℃，傳輸線溫度115℃，頂空瓶平衡時(shí)間15min，頂空瓶充壓時(shí)間0.5min，定量環(huán)填充時(shí)間0.2min，定量環(huán)平衡時(shí)間0.5min，進(jìn)樣時(shí)間1.0min；7、檢測(cè)
a.液相部分乙醚部位分別精密吸取乙醚部位供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μl注入液相色譜儀，照《中國(guó)藥典》2000版一部附錄高效液相色譜法測(cè)定，得乙醚部位指紋圖譜及標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜5％異戊醇的乙酸乙酯部位分別精密吸取5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品及標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μ1，注入液相色譜儀，照《中國(guó)藥典》2000版一部附錄高效液相色譜法測(cè)定，得5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜及標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；b.氣相部分直接取上述批號(hào)的中國(guó)勁酒于頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋密封；按頂空進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣進(jìn)行分析測(cè)定，得氣相部分指紋圖譜及標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；8、結(jié)果分析判定a.所得批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒乙醚部位供試品指紋圖譜中檢出了與相照指紋圖譜相同的10個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為阿魏酸，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9899，大于0.9000，符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
b.所得批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的9個(gè)特征峰；其中11號(hào)峰為淫羊藿苷，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致，供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)應(yīng)為0.9617，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
c.所得批號(hào)為20041220中國(guó)勁酒氣相部分供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的8個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為乙酸龍腦脂，8號(hào)峰為丁香酚，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9746，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
實(shí)施例2批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒的質(zhì)量檢測(cè)1、樣品來源 勁牌公司倉(cāng)庫(kù)2、樣品批號(hào) 200504253、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 同實(shí)施例14、供試品溶液的制備 同實(shí)施例15、主要儀器與試藥同實(shí)施例16、色譜條件 同實(shí)施例17、檢測(cè) 按實(shí)施例1相同步驟和方法分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液、本批號(hào)供試品溶液的液相部分和氣相部分進(jìn)行檢測(cè)，分別得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品、乙醚部位、5％異戊醇的乙酸乙酯部位、氣相部分指紋圖譜；8、結(jié)果分析判定a.所得批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒乙醚部位供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的10個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為阿魏酸，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9890，大于0.9000，符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
b.所得批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的9個(gè)特征峰；其中11號(hào)峰為淫洋藿苷，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9837，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
c.所得批號(hào)為20050425中國(guó)勁酒氣相部分供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的8個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為乙酸龍腦脂，8號(hào)峰為丁香酚，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9953，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
實(shí)施例3批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒的質(zhì)量檢測(cè)1、樣品來源 勁牌公司倉(cāng)庫(kù)2、樣品批號(hào) 200507233、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 同實(shí)施例14、供試品溶液的制備 同實(shí)施例15、主要儀器與試藥同實(shí)施例16、色譜條件 同實(shí)施例17、檢測(cè) 按實(shí)施例1相同步驟和方法分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液、本批號(hào)供試品溶液的液相部分和氣相部分進(jìn)行檢測(cè)，分別得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品、乙醚部位、5％異戊醇的乙酸乙酯部位、氣相部分指紋圖譜；8、結(jié)果分析判定a.所得批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒乙醚部位供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的10個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為阿魏酸，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9972，大于0.9000，符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
b.所得批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的9個(gè)特征峰；其中11號(hào)峰為淫洋藿苷，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9427，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
c.所得批號(hào)為20050723中國(guó)勁酒氣相部分供試品指紋圖譜中檢出了與對(duì)照指紋圖譜相同的8個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為乙酸龍腦脂，8號(hào)峰為丁香酚，與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；供試品指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)為0.9930，大于0.9000；符合本公司制定的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
實(shí)施例4三批中國(guó)勁酒(批號(hào)20041220、20050425、20050723)指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3所測(cè)得的20041220、20050425、20050723三個(gè)批號(hào)的各部位指紋圖譜分別輸入計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，其相關(guān)系數(shù)分別為乙醚部位0.9899 0.9890 0.9972，5％異戊醇的乙酸乙酯部位0.9617 0.9837 0.9427氣相部分0.9746 0.9953 0.9930，均大于0.9000，說明三個(gè)批次之間質(zhì)量差異不大，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1.用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法，包括以下步驟第一步，建立中國(guó)勁酒對(duì)照指紋圖譜(1)中國(guó)勁酒的制備取下述重量份的中藥原料黃芪10-15、肉蓯蓉10-15、仙茅10-15、淫羊藿10-15、枸杞10-15、山藥10-15、當(dāng)歸10-15、丁香3-5、肉桂3-5，以總藥材量50倍的30-50°小曲白酒滲漉12-15天得滲漉液，取滲漉液70-75份，分別加入40％糖漿20份、純凈水5-10份、焦糖色適量，調(diào)配，過濾，置常溫下陳釀3-6個(gè)月，過濾除雜，濾膜精濾，灌裝，即得；(2)中國(guó)勁酒液相部分對(duì)照品溶液的制備a.乙醚部位取中國(guó)勁酒100ml，以大孔吸附色譜柱去糖，用水飽和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，濾膜過濾，即得；b.5％異戊醇的乙酸乙酯部位將乙醚部位對(duì)照品溶液用水飽和的5％異戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，濾膜過濾，即得；(3)中國(guó)勁酒氣相部分對(duì)照品溶液的制備直接取中國(guó)勁酒5ml于10ml頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋密封，即得；(4)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備a.液相部分取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.氣相部分用玻璃毛細(xì)管蘸取乙酸龍腦酯、丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品適量于頂空進(jìn)樣瓶中，密封，即得；(5)色譜條件a.液相部分色譜柱乙醚部位Hypersil C18柱，5％異戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，流動(dòng)相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫；5％異戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫；流速0.8ml/分鐘檢測(cè)波長(zhǎng)280nm柱溫30℃b.氣相部分色譜柱Agilent HP-5載氣為N2進(jìn)樣器G1888A頂空自動(dòng)進(jìn)樣器；(6)對(duì)照品檢測(cè)a.液相部分乙醚部位分別精密吸取中國(guó)勁酒液相部分乙醚部位對(duì)照品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，即得中國(guó)勁酒乙醚部位對(duì)照指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；5％異戊醇的乙酸乙酯部位分別精密吸取中國(guó)勁酒液相部分5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液各4μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，即得5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；b.氣相部分分別將氣相部分對(duì)照品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液按頂空進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣進(jìn)行分析測(cè)定，即得氣相部分對(duì)照指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；第二步，建立中國(guó)勁酒指紋圖譜共有模式圖譜按中國(guó)勁酒的制備方法、中國(guó)勁酒液相部分和氣相部分對(duì)照品溶液的制備方法、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備方法分別制備10個(gè)批次的中國(guó)勁酒和待測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品、供試品溶液，并逐一按相同方法檢測(cè)，分別得到各批次中國(guó)勁酒乙醚部位指紋圖譜、5％異戊醇的乙酸乙酯部位指紋圖譜、氣相部分指紋圖譜和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜；分別輸入計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，即可得出中國(guó)勁酒乙醚部位、5％異戊醇的乙酸乙酯部位及氣相部分的指紋圖譜共有模式圖譜；第三步，供試品檢測(cè)1.供試品溶液的制備以上述相同方法分別制備液相部分乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯供試品溶液及氣相部分供試品溶液；2.以上述相同方法分別制備液相部分和氣相部分標(biāo)準(zhǔn)品溶液；3.以上述相同方法測(cè)定待測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品和供試品；4、結(jié)果分析判定乙醚部位供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的10個(gè)特征峰，其中7號(hào)峰為阿魏酸，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；5％異戊醇的乙酸乙酯部位供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的9個(gè)特征峰；其中11號(hào)峰為淫洋藿苷，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；兩個(gè)部分的指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.9000；氣相部分供試品指紋圖譜中應(yīng)檢出與對(duì)照指紋圖譜相同的8個(gè)特征峰；其中7號(hào)峰為乙酸龍腦脂，8號(hào)峰為丁香酚，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品指紋圖譜一致；其指紋圖譜與相應(yīng)的共有模式圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.9000；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法，其特征在于所述中國(guó)勁酒液相部分乙醚部位和5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液制備的具體方法是，取中國(guó)勁酒100ml，40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，上樣于裝有AB-8的大孔吸附層析柱上(12mm×300mm)，用水洗脫至無糖反應(yīng)，(即M0lish反應(yīng)為陰性)，后用80ml95％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干。加入20ml水，超聲使溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。先用水飽和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45微孔濾膜過濾，即得乙醚部位對(duì)照品溶液；再將此溶液用水飽和的5％異戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，減壓蒸干，用四氫呋喃定容至2ml，搖勻，用0.45微孔濾膜過濾，即得5％異戊醇的乙酸乙酯部位對(duì)照品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法，其特征在于所述液相部分乙醚部位以乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，其洗脫梯度為在保留時(shí)間為0min、45min、80min、90min、105min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％異戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，其洗脫梯度為在保留時(shí)間為0min、50min、80min、100min、110min時(shí)，乙腈與0.01％磷酸水溶液的體積比分別為15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法，其特征在于所述計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)系指藥典委員會(huì)推薦的由湖南中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心開發(fā)的計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)中國(guó)勁酒質(zhì)量的方法，該方法包括下述步驟第一步，建立中國(guó)勁酒對(duì)照指紋圖譜；第二步，建立中國(guó)勁酒指紋圖譜共有模式圖譜；第三步，供試品檢測(cè)；將所測(cè)得的供試品圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，并輸入計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行相似度計(jì)算，得出相關(guān)系數(shù)，便可作出檢測(cè)結(jié)論；本方法具有以下特點(diǎn)(1)可以從整體上、宏觀上控制中國(guó)勁酒的質(zhì)量；(2)明確、直觀，具有較好的專屬性和特征性，重現(xiàn)性好；可操作性強(qiáng)；(3)可用于生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性和產(chǎn)品穩(wěn)定性的考察；(4)可用于鑒別中國(guó)勁酒的真?zhèn)危?5)為我國(guó)保健酒行業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量的監(jiān)控提供示范。
文檔編號(hào)G01N1/28GK1991361SQ200510120579
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月28日
發(fā)明者劉勝華, 李波, 李先芝, 屠鵬飛, 鮑忠 申請(qǐng)人:勁牌有限公司