專(zhuān)利名稱：有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新穎的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法和器具，屬于食品安全，環(huán)境監(jiān)測(cè)、測(cè)領(lǐng)域，更確切的說(shuō)是涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
農(nóng)藥是當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用于防治病，蟲(chóng)，雜草對(duì)農(nóng)作物危害不可缺少的物質(zhì)。目前，全國(guó)農(nóng)業(yè)使用農(nóng)藥為23萬(wàn)噸左右，每公頃使用農(nóng)藥24.2公斤。其中，殺蟲(chóng)殺螨劑占62％；殺菌劑占21％；除草劑占17％；殺鼠劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑所占比例很小。至今農(nóng)藥每畝用量約2公斤；其防治面積達(dá)23億畝左右，約占總面積的85％；每年可挽回糧食損失200-300億公斤。農(nóng)藥對(duì)于農(nóng)業(yè)增產(chǎn)可謂功不可沒(méi)。與此同時(shí)，農(nóng)藥的大面積使用也帶來(lái)了嚴(yán)重的食品安全與環(huán)境問(wèn)題一是農(nóng)藥殘留污染環(huán)境、污染農(nóng)產(chǎn)品，影響我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品出口，引起人、畜中毒事故；二是有害生物對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，使防治效果下降，不得不加大用量，造成防治難度加大；三是被控制的有害生物再度猖獗和次要對(duì)象上升為主要對(duì)象。但是就目前形式而言，人類(lèi)仍然面臨饑餓，貧窮的困擾，全面禁止農(nóng)藥的使用是不現(xiàn)實(shí)的，為了滿足日益增加的糧食需求，在一定時(shí)期內(nèi)農(nóng)藥的使用還將維持在一個(gè)較高的水平內(nèi)，它的地位也是無(wú)法取代的。
隨著我國(guó)加入WTO，國(guó)際間農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易往來(lái)更加頻繁，我國(guó)對(duì)歐美以及日韓的農(nóng)產(chǎn)品的出口呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)。隨之而來(lái)，歐美，日韓發(fā)達(dá)國(guó)家針對(duì)我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的綠色貿(mào)易壁壘也日益增加，每年農(nóng)副產(chǎn)品因農(nóng)藥殘留超標(biāo)而造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就多達(dá)70多億美元，進(jìn)出口對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)能力提出了更高要求。目前我國(guó)蔬菜，水果和糧食農(nóng)藥超標(biāo)率平均值分別達(dá)到22.15％，18.79％和6.2％，由此導(dǎo)致我國(guó)每年農(nóng)藥中毒者達(dá)幾十萬(wàn)人次，而其中有機(jī)磷農(nóng)藥中毒占70％以上。這些都迫使我國(guó)發(fā)展相關(guān)的檢測(cè)農(nóng)藥殘留的技術(shù)，以有效控制農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)藥的合理使用，并對(duì)其殘留進(jìn)行監(jiān)控，特別是需要發(fā)展針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)技術(shù)。
目前有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留分析方法主要是通過(guò)提取，凈化后，再配以高效液相色譜或氣相色譜。這些檢測(cè)方法費(fèi)用相對(duì)昂貴，樣品前處理過(guò)程復(fù)雜，對(duì)儀器設(shè)備要求較高，而且需要消耗大量的有機(jī)溶劑，還會(huì)造成對(duì)環(huán)境的二次污染。
已有免疫分析是一種快速、靈敏、操作簡(jiǎn)單的、較為新穎的檢測(cè)方法，其具有較為低的檢測(cè)線。但是農(nóng)藥多為小分子化合物，需要通過(guò)與大分子蛋白類(lèi)物質(zhì)偶連后才可用于免疫動(dòng)物，刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)來(lái)產(chǎn)生針對(duì)小分子農(nóng)藥的抗體。而大多數(shù)農(nóng)藥本身不具備直接同蛋白大分子物質(zhì)偶連的位點(diǎn)，因此需要對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行改造，前期研發(fā)費(fèi)用較高。另外蛋白質(zhì)的低穩(wěn)定性，也使得免疫分析法在實(shí)際檢測(cè)中難以推廣與應(yīng)用。
而分子印跡技術(shù)是近年來(lái)集高分子合成、分子設(shè)計(jì)、分子識(shí)別、仿生生物工程等眾多學(xué)科優(yōu)勢(shì)發(fā)展起來(lái)的一門(mén)邊緣學(xué)科分支。分子印跡聚合物(Molecularly Imprinted Polymers，MIPs)既具有與天然抗體同樣的識(shí)別性能，又具有和高分子同樣的高穩(wěn)定性，因而廣泛應(yīng)用于生物工程、臨床醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品工業(yè)等眾多領(lǐng)域，已經(jīng)成為新世紀(jì)最有潛力的新材料之一。
熒光分析法是一種較為常見(jiàn)的分析方法，它是利用分子的光致發(fā)光現(xiàn)象進(jìn)行分析的。熒光分析法具有靈敏度高的特點(diǎn)(比紫外、可見(jiàn)分光光度法高2～3個(gè)數(shù)量級(jí))，可借此實(shí)現(xiàn)高靈敏度(低檢測(cè)線)的試劑盒。
已有技術(shù)所制備的試劑盒中，常規(guī)無(wú)機(jī)顯色試劑盒靈敏度太低；免疫類(lèi)試劑盒使用條件苛刻，限制了試劑盒的推廣和普及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)和普通試劑盒的不足。即以分子印跡聚合物對(duì)模板分子的特異性吸附實(shí)現(xiàn)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的仿生識(shí)別，并擴(kuò)展試劑盒的使用范圍；以熒光表達(dá)實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析。
本發(fā)明是根據(jù)分子印跡的原理制備對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)和檢測(cè)功能的分子探針，分子探針直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，并將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板裝配于試劑盒內(nèi)，制得對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別、檢測(cè)的試劑盒。當(dāng)分子探針與有機(jī)磷農(nóng)藥相結(jié)合，則進(jìn)行仿生識(shí)別。由于對(duì)有機(jī)磷的特異性吸附，使得稀土金屬元素與功能單體的配位發(fā)生變化，發(fā)出特異性的熒光，進(jìn)而將結(jié)果表達(dá)出來(lái)，達(dá)到對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)的目的。因此試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)是制備各種有機(jī)磷農(nóng)藥分子探針。
本發(fā)明是將分子印跡技術(shù)與熒光分析法相結(jié)合，利用分子印跡技術(shù)的仿生識(shí)別特性，完成對(duì)模板分子的主動(dòng)吸附和仿生識(shí)別，其后將分析結(jié)果以熒光的形式表達(dá)出來(lái)，使制得的試劑盒同時(shí)賦有靈敏度高、使用范圍廣、限制條件少的優(yōu)點(diǎn)。
因此，本發(fā)明方法是首先用稀土金屬硝酸鹽與功能單體制備出配位復(fù)合物，然后在配位復(fù)合物周?chē)l(fā)生分子印跡聚合反應(yīng)，形成包含模板分子的聚合物分子探針粘稠液，涂布在酶聯(lián)板上，經(jīng)模板分子洗脫裝于試劑盒即可。
a.制備配位復(fù)合物(1)在反應(yīng)器中將稀土金屬氧化物溶于水中，按照反應(yīng)比例加入濃度為28％～65％的硝酸，得到相應(yīng)的稀土元素的硝酸鹽澄清溶液；(2)模板分子溶于30mL甲醇/水體積比為10/1～1/10的混合溶液中，攪拌至完全溶解后加入稀土金屬氧化物三倍量的苯甲酸烯酯類(lèi)功能單體，待功能單體完全溶解后加入前述硝酸鹽溶液，得到溶液A；(3)用1～2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液A的pH值為8～10，之后攪拌此混合溶液1～72小時(shí)，至有絮狀物出現(xiàn)；(4)然后將(3)中反應(yīng)器蓋上玻璃蓋置于暗室中，過(guò)夜結(jié)晶；過(guò)濾并干燥結(jié)晶得到制備分子探針用的配位復(fù)合物；b.印跡模板分子(1)將1～5mol％上述配位復(fù)合物置于反應(yīng)器中，加入90～98mol％苯乙烯，待配位復(fù)合物完全溶解后，加入引發(fā)劑，交聯(lián)劑，攪拌均勻得到半透明狀溶液；(2)密封(1)中反應(yīng)器，通氮?dú)?～60分鐘，去除氧氣以及水分，得到待反應(yīng)溶液B；(3)將上述溶液B置于50～80℃水浴槽中，超聲反應(yīng)1～12小時(shí)，得到粘稠液，即為含有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針粘稠液；(4)將分子探針粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，在紫外燈下老化1～24小時(shí)，待粘稠液硬化變?yōu)楣虘B(tài)，即得到涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板；c.洗脫模板分子(1)將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板浸泡在水中，振蕩、溶脹1～12小時(shí)；(2)用甲醇與水混合液振蕩洗滌，逐漸增加甲醇含量至2/3，去除未反應(yīng)的功能單體，得到不含功能單體的酶聯(lián)板；(3)之后浸泡在0.1～1mol/L的硝酸溶液中1～24小時(shí)，洗去未配位的金屬離子，干燥后裝入試劑盒。
其中上述配位金屬為稀土元素，如銪；模板分子為各種需要檢測(cè)的有機(jī)磷農(nóng)藥，如乙基對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷等；功能單體為苯甲酸烯酯類(lèi)，如苯甲酸乙烯酯、苯甲酸丙稀酯等；交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)、二乙烯基苯(DVB)；引發(fā)劑為偶氮化合物類(lèi)、過(guò)氧化物類(lèi)引發(fā)劑。
由此構(gòu)筑的本發(fā)明有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，結(jié)合了分子印跡技術(shù)的仿生識(shí)別原理和熒光的低檢出線性質(zhì)，具有試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便、診斷準(zhǔn)確率高、敏感性好、適應(yīng)性廣、成本低的特點(diǎn)，易于推廣和普及，適用于食品安全與環(huán)境監(jiān)測(cè)、檢測(cè)等相關(guān)領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.
以乙基對(duì)硫磷為模板分子，制備對(duì)乙基對(duì)硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，并制備相對(duì)應(yīng)的試劑盒。
a.制備配位復(fù)合物(1)反應(yīng)器中將0.2mmol Eu2O3溶于水中，加入反應(yīng)比例的65％硝酸，得到澄清的硝酸銪溶液；(2)選取模板分子為乙基對(duì)硫磷0.2mmol溶于30mL甲醇/水體積比為1/1的混合溶液中，攪拌至完全溶解后加入反應(yīng)比例的功能單體苯甲酸乙烯酯0.6mmol，功能單體完全溶解后加入前述硝酸銪溶液，得到溶液A；(3)用2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液A至pH值為9，之后攪拌4小時(shí)，溶液變?yōu)槲ⅫS色，并有絮狀物出現(xiàn)；(4)將(3)中反應(yīng)器蓋上玻璃蓋置于暗室中，過(guò)夜結(jié)晶；過(guò)濾并干燥結(jié)晶得到制備分子探針用的黃色配位復(fù)合物；b.印跡模板分子(1)在反應(yīng)器中將所制得的配位復(fù)合物溶解在1.5mL苯乙烯中，待完全溶解后依次加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)2.5mg，交聯(lián)劑二乙烯基苯(DVB)40μL，搖勻得到黃色半透明狀溶液；(2)封閉(1)中反應(yīng)器，通氮?dú)?0分鐘去除氧氣以及水分，得到待反應(yīng)溶液B；(3)將溶液B的反應(yīng)器置于60℃水浴中，超聲反應(yīng)4小時(shí)，得到一黃色粘稠液，即為含有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的粘稠液；(4)將分子探針粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，在紫外燈下老化2小時(shí)；得到涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板，酶聯(lián)板表面為黃色；c.模板分子洗脫(1)將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板浸泡在水中，振蕩溶脹2小時(shí)；(2)用甲醇與水混合液洗滌、震蕩，逐漸增加甲醇含量至2/3，去除未反應(yīng)的功能單體，至酶聯(lián)板表面變?yōu)榘咨?3)之后浸泡在1mol/L的硝酸溶液中，震蕩2小時(shí)，洗去未配位的金屬離子，干燥后裝入試劑盒。
所制得的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，是以乙基對(duì)硫磷為模板分子制備對(duì)乙基對(duì)硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，本試劑盒對(duì)乙基對(duì)硫磷的檢出限為1ppb(1ng/L)。
實(shí)施例2.
以甲基對(duì)硫磷為模板分子，制備對(duì)甲基對(duì)硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，并制備相對(duì)應(yīng)的試劑盒。
a.制備配位復(fù)合物(1)在反應(yīng)器中將0.2mmol Eu2O3溶于水中，加入反應(yīng)比例的28％硝酸，得到澄清的硝酸銪溶液；(2)模板分子甲基對(duì)硫磷0.2mmol溶于30mL甲醇/水體積比為5/1的混合溶液中，攪拌至完全溶解后加入功能單體苯甲酸丙烯酯0.6mmol，功能單體完全溶解后加入前述硝酸銪溶液，得到溶液A；(3)1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液A的pH值至10，得到澄清溶液；攪拌混合溶液60小時(shí)，至溶液變?yōu)槲ⅫS色，并有絮狀物出現(xiàn)；(4)將(3)中反應(yīng)器蓋上玻璃蓋置于暗室中，過(guò)夜結(jié)晶；過(guò)濾并干燥結(jié)晶得到制備分子探針用的黃色配位復(fù)合物；b.印跡模板分子(1)在反應(yīng)器中將所制得的配位復(fù)合物溶解在1.5mL苯乙烯中，待完全溶解后依次加入引發(fā)劑過(guò)氧化二苯甲酰(BPO)6mg，交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)40μL，搖勻得到黃色半透明狀溶液；(2)封閉(1)中反應(yīng)器，通氮?dú)?0分鐘除氧氣以及水分，得到待反應(yīng)的溶液B；(3)上述溶液B的反應(yīng)器于60℃水浴超聲10小時(shí)，得到一黃色粘稠溶液，即為含有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的粘稠液；(4)將分子探針粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，在紫外燈下老化12小時(shí)；得到涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板，酶聯(lián)板表面為黃色；c.模板分子洗脫(1)將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板浸泡在水中，振蕩溶脹12小時(shí)；(2)用甲醇與水混合液洗滌、震蕩，逐漸增加甲醇含量至2/3，去除未反應(yīng)的功能單體，至酶聯(lián)板表面變?yōu)榘咨?3)之后浸泡在0.1mol/L的硝酸溶液中24小時(shí)，洗去未配位的金屬離子，干燥后裝入試劑盒。
所制得的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，是以甲基對(duì)硫磷為模板分子制備對(duì)甲基對(duì)硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，本試劑盒對(duì)甲基對(duì)硫磷的檢出限為1ppb(1ng/L)。
實(shí)施例3.
以馬拉硫磷為模板分子，制備對(duì)馬拉硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，并制備相對(duì)應(yīng)的試劑盒。
a.制備配位復(fù)合物(1)反應(yīng)器中將0.2mmol Eu2O3溶于水中，加入反應(yīng)比例的35％硝酸，得到澄清的硝酸銪溶液；(2)選取模板分子為馬拉硫磷0.2mmol溶于30mL甲醇/水體積比為1/1的混合溶液中，攪拌至完全溶解后加入反應(yīng)比例的功能單體苯甲酸乙烯酯0.6mmol，功能單體完全溶解后加入前述硝酸銪溶液，得到溶液A；(3)用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液A的pH值為8.5，之后攪拌24小時(shí)，溶液變?yōu)槲ⅫS綠色，并有絮狀物出現(xiàn)；(4)將(3)中反應(yīng)器蓋上玻璃蓋置于暗室中，過(guò)夜結(jié)晶；過(guò)濾并干燥結(jié)晶得到制備分子探針用的黃綠色配位復(fù)合物；b.印跡模板分子(1)在反應(yīng)器中將所制得的配位復(fù)合物溶解在1.5mL苯乙烯中，待完全溶解后依次加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)2.5mg，交聯(lián)劑二乙烯基苯(DVB)40μL，搖勻得到半透明狀黃綠色溶液；(2)封閉(1)中反應(yīng)器，通氮?dú)?0分鐘去除氧氣以及水分，得到待反應(yīng)溶液B；(3)將溶液B的反應(yīng)器置于50℃水浴中，超聲反應(yīng)10小時(shí)，得到一黃綠色粘稠液，即為含有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的粘稠液；(4)將分子探針粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，在紫外燈下老化5小時(shí)；得到涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板，酶聯(lián)板表面為黃綠色；c.模板分子洗脫(1)將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板浸泡在水中，振蕩溶脹10小時(shí)；(2)用甲醇與水混合液洗滌、震蕩，逐漸增加甲醇含量至2/3，去除未反應(yīng)的功能單體，至酶聯(lián)板表面變?yōu)榘咨?3)之后浸泡在0.5mol/L的硝酸溶液中，震蕩5小時(shí)，洗去未配位的金屬離子，干燥后裝入試劑盒。
所制得的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，是以馬拉硫磷為模板分子制備對(duì)馬拉硫磷具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針，本試劑盒對(duì)馬拉硫磷的檢出限為1ppb(1ng/L)。
權(quán)利要求
1.一種有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，由盒體內(nèi)96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板、相應(yīng)的檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥用的分子探針、標(biāo)準(zhǔn)濃度的有機(jī)磷農(nóng)藥溶液構(gòu)成，其特征在于所述的分子探針是利用分子印跡方法制備的對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針。
2.如權(quán)利要求1所述的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的分子探針的制備方法，包括以下步驟a.制備配位復(fù)合物(1)在反應(yīng)器中將稀土金屬氧化物溶于水中，按照反應(yīng)比例加入濃度為28％～65％的硝酸，得到相應(yīng)的稀土元素的硝酸鹽澄清溶液；(2)模板分子溶于30mL甲醇/水體積比為10/1～1/10的混合溶液中，攪拌至完全溶解后加入稀土金屬氧化物三倍量的苯甲酸烯酯類(lèi)功能單體，待功能單體完全溶解后加入前述硝酸鹽溶液，得到溶液A；(3)用1～2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液A的pH值為8～10，之后攪拌此混合溶液1～72小時(shí)，至有絮狀物出現(xiàn)；(4)然后將(3)中反應(yīng)器蓋上玻璃蓋置于暗室中，過(guò)夜結(jié)晶；過(guò)濾并干燥結(jié)晶得到制備分子探針用的配位復(fù)合物；b.印跡模板分子(1)將1～5mol％上述配位復(fù)合物置于反應(yīng)器中，加入90～98mol％苯乙烯，待配位復(fù)合物完全溶解后，加入引發(fā)劑，交聯(lián)劑，攪拌均勻得到半透明狀溶液；(2)密封(1)中反應(yīng)器，通氮?dú)?～60分鐘，去除氧氣以及水分，得到待反應(yīng)溶液B；(3)述溶液B置于50～80℃水浴槽中，超聲反應(yīng)1～12小時(shí)，得到粘稠液，即為含有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針粘稠液；(4)將分子探針粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上，在紫外燈下老化1～24小時(shí)，待粘稠液硬化變?yōu)楣虘B(tài)，即得到涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板；c.洗脫模板分子(1)將涂布有分子探針的96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板浸泡在水中，振蕩、溶脹1～12小時(shí)；(2)用甲醇與水混合液振蕩洗滌，逐漸增加甲醇含量至2/3，去除未反應(yīng)的功能單體，得到不含功能單體的酶聯(lián)板；(3)之后浸泡在0.1～1mol/L的硝酸溶液中1～24小時(shí)，洗去未配位的金屬離子，干燥后裝入試劑盒。
3.如權(quán)利要求2所述的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征是所述的稀土金屬為銪。
4.如權(quán)利要求2所述的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征是所述的功能單體為苯甲酸乙烯酯、苯甲酸丙稀酯。
5.如權(quán)利要求2所述的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征是所述的交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯。
6.如權(quán)利要求2所述的有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征是所述的引發(fā)劑為偶氮化合物類(lèi)、過(guò)氧化物類(lèi)引發(fā)劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥仿生識(shí)別檢測(cè)試劑盒。試劑盒由盒體內(nèi)96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板、相應(yīng)有機(jī)磷農(nóng)藥的仿生識(shí)別分子探針、標(biāo)準(zhǔn)濃度的有機(jī)磷溶液構(gòu)成。其特征是在96孔聚苯乙烯酶聯(lián)板上涂布有對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有仿生識(shí)別和檢測(cè)功能的分子探針。制備方法是首先用稀土金屬硝酸鹽與功能單體制備出配位復(fù)合物，然后使配位復(fù)合物發(fā)生分子印跡聚合反應(yīng)，形成包含模板分子的分子探針粘稠液，涂布在酶聯(lián)板上，經(jīng)模板分子洗脫裝于試劑盒即可。本發(fā)明充分利用了分子印跡技術(shù)，并與其后的熒光分析相結(jié)合，大大提高了對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出能力，該試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便、診斷準(zhǔn)確率高、敏感性好、適應(yīng)性廣、成本低，易于推廣和普及。
文檔編號(hào)G01N21/76GK1773287SQ20051001806
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者楊黃浩, 周文輝, 尹曉斐 申請(qǐng)人:國(guó)家海洋局第一海洋研究所