一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域，具體涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法。旨在解決傳統(tǒng)的酶抑制法快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥中存在的因含P=S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥對膽堿酯酶抑制能力較弱，從而造成的對含P=S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥檢測靈敏度和準(zhǔn)確性都較低的問題。本發(fā)明通過在樣品前處理中增加與酶反應(yīng)兼容的氧化增敏處理過程，并在酶反應(yīng)中加入氨基甲酸酯類底物和顯色劑，根據(jù)吸光度的變化，進(jìn)而判定樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量是否超過限量值。與現(xiàn)有的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測方法相比，本發(fā)明通過獨特的增敏處理方法將有機(jī)磷農(nóng)藥中的P=S基團(tuán)轉(zhuǎn)化為P=O基團(tuán)，從而顯著的提高了酶抑制法檢測含P=S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測能力。
【專利說明】
一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速増敏檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域，具體涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 有機(jī)磷農(nóng)藥(OPs)是指含C-P、C-0-P、C-S-P或C-N-P鍵的用于防治植物病、蟲、害得 有機(jī)化合物，多數(shù)為油狀液體，少數(shù)為固體(樂果、敵百蟲等），顯色為淡黃色至棕色，具有大 蒜氣味。大多數(shù)OPs不溶于水，而溶于有機(jī)試劑，在堿性條件下易水解失效。除了少數(shù)用作除 草劑、殺菌劑和植物生長調(diào)節(jié)劑外，大多數(shù)都用作農(nóng)業(yè)殺蟲劑。OPs具有高效、快速、廣譜的 優(yōu)點，在農(nóng)藥中是極其重要的一類化合物，但是累積過多會對人和動物有一定毒性危害，使 用中需要對安全特別注意。1941年Adrian等首次提出磷酸酯對膽堿酯酶具有抑制作用的推 斷。隨后，1949年Balls證實這種抑制作用是由于?；课坏牧柞；瘜?dǎo)致的。（蔬菜中有機(jī)磷 殺蟲劑多殘留分析方法研究）目前，OPs中毒機(jī)理是公認(rèn)的OPs對體內(nèi)膽堿酯酶的抑制性學(xué) 說，即OPs與體內(nèi)的膽堿酯酶(大量存在于神經(jīng)末梢突觸間隙，水解膽堿進(jìn)行神經(jīng)遞質(zhì)傳遞） 結(jié)合形成磷?；憠A酯酶，使膽堿酯酶失去活性，神經(jīng)遞質(zhì)膽堿大量積累，導(dǎo)致神經(jīng)功能嚴(yán) 重?fù)p傷，產(chǎn)生急性中毒現(xiàn)象，嚴(yán)重者甚至死亡。
[0003] 當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，以有機(jī)磷農(nóng)藥為主的農(nóng)藥得到了廣泛的使用，也造成了環(huán)境和 食品方面嚴(yán)重安全隱患。選擇高效、快速、簡單、有效的農(nóng)殘檢測方法，對農(nóng)藥殘留實施有效 的監(jiān)控，具有巨大的實際價值和潛在的經(jīng)濟(jì)價值。在目前的農(nóng)殘快檢方法中，酶抑制法是應(yīng) 用最廣泛的農(nóng)殘快速檢測方法，但該方法也存在很大的弊端:如在傳統(tǒng)前處理技術(shù)的基礎(chǔ) 上進(jìn)行的酶抑制檢測方法，對部分酶敏感性偏低的農(nóng)藥（如樂果、毒死蜱等含P = S基團(tuán)的 OPs)其檢出限往往高于國家限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。使得這類農(nóng)藥超標(biāo)的食品不易通過酶抑制法快 速檢出，或檢出量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于農(nóng)藥實際含量，導(dǎo)致樣品假陰性，從而使得超標(biāo)產(chǎn)品直接流入市 場中，造成潛在的食品安全風(fēng)險。因此，為了提高酶抑制法的靈敏度和準(zhǔn)確性，需要對樣品 前處理方法和檢測方法進(jìn)行改進(jìn)，以提高對這部分乙酰膽堿酯酶敏感度偏低的農(nóng)藥的檢測 靈敏度和準(zhǔn)確性，從而提高食品中的農(nóng)殘含量監(jiān)控能力，更好的保證食品安全。
[0004] 本發(fā)明在結(jié)合有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)差異性的基礎(chǔ)上從原理認(rèn)真分類、探究了含P = S基 團(tuán)和含P = 0基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥對酯酶抑制能力的差異，通過獨特的增敏處理方法將含P = S基 團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 〇的有機(jī)磷農(nóng)藥，以提高酶抑制法檢測P = S的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢 測能力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于解決以上技術(shù)問題，提供一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方 法，利用膽堿酯酶催化水解的功能被有機(jī)磷農(nóng)藥抑制，其抑制效果與農(nóng)藥的濃度存在良好 的相關(guān)性，在酶反應(yīng)實驗中加入氨基甲酸酯類底物和顯色劑，觀察測定顏色的變化，進(jìn)而判 斷有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量是否超過限量值。與現(xiàn)有的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測方法相比，本發(fā)明通 過獨特的增敏處理方法將含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 0基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥，以提高酶 抑制法檢測含P=s基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥的檢測能力。
[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0007] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，具體制備步驟如下：
[0008] (1)樣品提取，取勻漿破碎后的樣品和丙酮混合，渦旋震蕩浸提，過濾除雜，然后吹 干丙酮濾液，加入磷酸鹽緩沖液定容，得到樣品提取液；
[0009] (2)增敏處理，向樣品提取液中，加入次氯酸鈣溶液，氧化反應(yīng)10-40min，再加入亞 硝酸鈉溶液，還原反應(yīng)l〇-40min，得到待測液；
[0010] ⑶酶抑制檢測，取蒸餾水與待測液，加入工作酶液，30-40 °C恒溫抑制3-30min，再 加入反應(yīng)底物和顯色劑，30-40°C反應(yīng)5-30min，采用酶標(biāo)儀檢測在410nm處的吸光度值，按 以下公式計算抑制率：
[0012]其中，A Ao為無農(nóng)藥抑制時反應(yīng)體系的吸光度；A心為有農(nóng)藥抑制時反應(yīng)體系的吸 光度。
[0013] 進(jìn)一步地，所述步驟（1)中，樣品的用量為5-20g，丙酮用量為20-30mL，加入磷酸鹽 緩沖液定容至lOOOuL;所述步驟(2)中次氯酸鈣溶液用量為50-500uL，亞硝酸鈉溶液用量為 50-500uL;所述步驟(3)中，蒸餾水的用量為50-200uL，樣品提取液的用量為50-100uL，工作 酶液的用量為30-80uL，反應(yīng)底物的用量為30-80uL，顯色劑的用量為15-40uL;
[0014]更進(jìn)一步地，所述次氯酸鈣溶液為質(zhì)量濃度0.02 % -0.10 %的次氯酸鈣溶液;所述 亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度5 % -20 %的亞硝酸鈉溶液；
[0015] 更進(jìn)一步地，所述次氯酸鈣溶液為質(zhì)量濃度0.05 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸 鈉溶液為質(zhì)量濃度10%的亞硝酸鈉溶液。
[0016] 進(jìn)一步地，所述工作酶液為乙酰膽堿酯酶;所述反應(yīng)底物為質(zhì)量濃度0.5 % -5 %碘 化硫代乙酰膽堿;所述顯色劑由0.03-0.05g的5，5-二硫代-2，2-二硝基苯甲酸，加pH值為 7.71磷酸緩沖液溶解并定容至1 OOmL配制而成。
[0017] 進(jìn)一步地，所述磷酸鹽緩沖液pH值為7.71。
[0018] 進(jìn)一步地，所述步驟(1)中，吹干丙酮濾液是通過30-40 °C的氮氣吹干丙酮濾液。
[0019] 進(jìn)一步地，所述步驟(2)中，增敏處理的操作溫度為20-40°C。
[0020] 本發(fā)明一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，其突出的特點和 優(yōu)異的效果在于：
[0021] 1.本發(fā)明通過獨特的增敏處理方法將含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 0基團(tuán) 的有機(jī)農(nóng)藥，以提尚酶抑制法檢測含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥的檢測能力。
[0022] 2.本發(fā)明的檢測方法操作簡單，靈敏度高，便于快速檢測。
【附圖說明】
[0023] 圖1為12種有機(jī)磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制曲線；
[0024]圖2為通過增敏處理對混合加標(biāo)樣品檢測的影響。
【具體實施方式】
[0025] 以下通過【具體實施方式】和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為 本發(fā)明的范圍僅限于以下的實施例。在不脫離本發(fā)明上述方法思想的情況下，根據(jù)本領(lǐng)域 普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0026] 實施例1
[0027] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法：
[0028] 樣品提取，分別稱取10g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和25mL丙酮混合，渦 旋震蕩浸提l〇min，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL；
[0029] 增敏處理，1000此樣品提取液中，加入300此的0.05%次氯酸鈣溶液，30°(：氧化反 應(yīng)15min，再加入300uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反應(yīng)15min，得到待測液；
[0030]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取100uL的蒸餾水與75uL的待測液，再加入50uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35 °C恒溫抑制15min，再加入50uL的反應(yīng)底物ATChl和25uL的 顯色劑5，5-二硫代-2，2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°C反應(yīng)10min，采酶標(biāo)儀檢測在410nm 處的吸光度值。
[0031] 實施例2
[0032] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法：
[0033]樣品提取，分別稱取5g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和20mL丙酮混合，渦 旋震蕩浸提5min，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL；
[0034] 增敏處理，1000uL樣品提取液中，加入50uL的0.05 %次氯酸鈣溶液，30°C氧化反應(yīng) 10min，再加入50uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反應(yīng)10min，得到待測液；
[0035]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取50uL的蒸餾水與50uL的待測液，再加入30uL的工作酶 液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35°C恒溫抑制3min，再加入30uL的反應(yīng)底物ATChl和15uL的顯 色劑5，5-二硫代-2，2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35 °C反應(yīng)5min，采用酶標(biāo)儀檢測在410nm處 的吸光度值。
[0036] 實施例3
[0037] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法：
[0038] 樣品提取，分別稱取20g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和30mL丙酮混合，渦 旋震蕩浸提30min，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL；
[0039] 增敏處理，1000此樣品提取液中，加入500此的0.05%次氯酸鈣溶液，30°(：氧化反 應(yīng)40min，再加入500uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反應(yīng)40min，得到待測液；
[0040]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取200uL的蒸餾水與100uL的待測液，再加入80uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35 °C恒溫抑制30min，再加入80uL的反應(yīng)底物ATChl和40uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°C反應(yīng)30min，采用酶標(biāo)儀檢測在 410nm處的吸光度值。
[0041 ] 實施例4
[0042] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法：
[0043]樣品提取，分別稱取15g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和24mL丙酮混合，渦 旋震蕩浸提15min，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至 lOOOuL；
[0044] 增敏處理，lOOOuL樣品提取液中，加入200uL的0.05 %次氯酸鈣溶液，30°C氧化反 應(yīng)20min，再加入200uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反應(yīng)20min，得到待測液；
[0045]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取120uL的蒸餾水與80uL的待測液，再加入55uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35°C恒溫抑制20min，再加入55uL的反應(yīng)底物ATChl和28uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°C反應(yīng)15min，采用酶標(biāo)儀檢測在 410nm處的吸光度值。
[0046] 實施例5
[0047] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法：
[0048]樣品提取，分別稱取12g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和23mL丙酮混合，渦 旋震蕩浸提l〇min，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL；
[0049] 增敏處理，1000uL樣品提取液中，加入400uL的0.05 %次氯酸鈣溶液，30°C氧化反 應(yīng)25min，再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反應(yīng)25min，得到待測液；
[0050]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取150uL的蒸餾水與80uL的待測液，再加入60uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35 °C恒溫抑制10min，再加入60uL的反應(yīng)底物ATChl和33uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°C反應(yīng)12min，采用酶標(biāo)儀檢測在 410nm處的吸光度值。
[0051 ] 實施例6
[0052]樣品提取，分別稱取10g勻漿破碎后的樣品（分別加入相同濃度樂果、毒死蜱、敵百 蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷、氧化樂果、敵敵畏、乙酰甲胺磷、丙溴磷、馬拉氧磷 等有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品，以及一個無農(nóng)藥的樣品）和25mL丙酮混合，渦旋震蕩浸提10min，然后 過濾除雜，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至lOOOuL;
[0053]樣品不經(jīng)增敏處理直接酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取100uL的蒸餾水與75uL的樣品 提取液，再加入50uL的工作酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35 °C恒溫抑制15min，再加入50uL 的反應(yīng)底物ATChl和25uL的顯色劑5，5-二硫代-2，2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35 °C反應(yīng) 10min，采用酶標(biāo)儀檢測在410nm處的吸光度值，計算其抑制率。
[0054]實驗檢測結(jié)果如圖1，其中，含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥包括:樂果、毒死蜱、敵百蟲、 辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷，含P=0基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥包括:氧化樂果、敵敵畏、乙 酰甲胺磷、丙溴磷、馬拉氧磷。實驗結(jié)果表明在相同濃度下含P = 〇基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對乙酰 膽堿酯酶的抑制率顯著高于含P = s基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥，如若不采取改進(jìn)措施存在部分含P =S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥不易被檢出的可能。
[0055] 實施例7
[0056] 樣品提取，分別稱取10g勻漿破碎后的樣品分別加入不同濃度的樂果、毒死蜱、敵 百蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷等含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥，與25mL丙酮混合， 渦旋震蕩浸提l〇min，然后過濾除雜，合并丙酮濾液，用35°C的氮氣吹干丙酮，加入磷酸鹽緩 沖液定容至lOOOuL;
[0057] 樣品等分為兩份，一份進(jìn)行增敏處理，即lOOOuL樣品提取液中，加入400uL的 0 ? 05 %次氯酸鈣溶液，30 °C氧化反應(yīng)25min，再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反 應(yīng)25min;另一份不進(jìn)行增敏處理，作為對照。
[0058]酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取100uL的蒸餾水與75uL的待測液，再加入50uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35 °C恒溫抑制15min，再加入50uL的反應(yīng)底物ATChl和25uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°C反應(yīng)lOmin，采用酶標(biāo)儀檢測在 410nm處的吸光度值。通過計算其抑制率曲線方程和IC 5Q值。比較含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥 經(jīng)增敏處理后，對乙酰膽堿酯酶敏感度的變化。
[0059] 實驗結(jié)果見表1，表明經(jīng)氧化處理后含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的 敏感度普遍提高了 2~4個數(shù)量級，顯著的提高了酶抑制法檢測含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥的 靈敏度。
[0060]表1含P = S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥氧化處理前后抑制曲線方程和1(：50值
[0062] 其中y為抑制率，x為抑制時間，R2為相關(guān)系數(shù)，IC5Q(M)為半抑制率。
[0063] 實施例8
[0064]樣品提取，分別稱取10g勻漿破碎后的樣品（分別加入總濃度為0.02mg/kg和2mg/ kg的樂果、毒死蜱、敵百蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷等含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng) 藥的混合標(biāo)準(zhǔn)品）和25mL丙酮混合，渦旋震蕩浸提lOmin，然后過濾除雜，用35°C的氮氣吹干 丙酮，加入磷酸鹽緩沖液定容至1000uL;
[0065] 樣品等分為兩份，一份進(jìn)行增敏處理，即1000UL樣品提取液中，加入400uL的 0 ? 05 %次氯酸鈣溶液，30 °C氧化反應(yīng)25min，再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液，30 °C還原反 應(yīng)25min;另一份不進(jìn)行增敏處理，作為對照；
[0066]再將樣品進(jìn)行酶抑制檢測，在酶標(biāo)板中，取100uL的蒸餾水與75uL的待測液，再加 入50uL的工作酶液乙酰膽堿酯酶，混合均勻，35°C恒溫抑制15min，再加入50uL的反應(yīng)底物 ATChl和25uL的顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸，混合均勻，35°(：反應(yīng)1〇111111，采用酶 標(biāo)儀檢測在41 Onm處的吸光度值，計算抑制率。
[0067] 檢測結(jié)果如圖2,結(jié)果表明不論在高濃度(2mg/kg)還是低濃度(0.02mg/kg)下，經(jīng) 氧化處理后，含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率均有顯著提高。
【主權(quán)項】
1. 一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于，具體檢測步驟如下： (1) 樣品提取，取勻漿破碎后的樣品和丙酮混合，渦旋震蕩浸提，過濾除雜，然后吹干丙 酮濾液，加入磷酸鹽緩沖液定容，得到樣品提取液； (2) 增敏處理，向樣品提取液中，加入次氯酸鈣溶液，氧化反應(yīng)10-40min，再加入亞硝酸 鈉溶液，還原反應(yīng)10-40min，得到待測液； (3) 酶抑制檢測，取蒸餾水與待測液，加入工作酶液，30-40°C恒溫抑制3-30min，再加入 反應(yīng)底物和顯色劑，30-40°C反應(yīng)5-30min，采用酶標(biāo)儀檢測在410nm處的吸光度值，按以下 公式計算抑制率：其中，A Ao為無農(nóng)藥抑制時反應(yīng)體系的吸光度；A Ai為有農(nóng)藥抑制時反應(yīng)體系的吸光 度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述步驟 (1)中，樣品的用量為5_20g，丙酮用量為20-30mL，加入磷酸鹽緩沖液定容至1000uL;所述步 驟(2)中次氯酸鈣溶液用量為50-500uL，亞硝酸鈉溶液用量為50-500uL;所述步驟(3)中，蒸 餾水的用量為50-200uL，樣品提取液的用量為50-100uL，工作酶液的用量為30-80uL，反應(yīng) 底物的用量為30-80uL，顯色劑的用量為15-40uL。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述次氯 酸鈣溶液為質(zhì)量濃度〇. 02 % -0.10 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度5 % -20%的亞硝酸鈉溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述次氯 酸鈣溶液為質(zhì)量濃度〇. 05 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度10 %的亞硝酸 鈉溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述 工作酶液為乙酰膽堿酯酶;所述反應(yīng)底物為質(zhì)量濃度〇. 5 % -5 %碘化硫代乙酰膽堿;所述顯 色劑由0.03-0.05g的5，5-二硫代-2，2-二硝基苯甲酸，加pH值為7.71磷酸緩沖液溶解并定 容至100mL配制而成。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述 磷酸鹽緩沖液pH值為7.71。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述步驟 (1) 中，吹干丙酮濾液是通過30-40 °C的氮氣吹干丙酮濾液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測方法，其特征在于:所述步驟 (2) 中，增敏處理的操作溫度為20-40°C。
【文檔編號】G01N21/78GK106053454SQ201610370322
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】陳祥貴, 楊瀟, 馬敏
【申請人】西華大學(xué)